多溴联苯醚BDE-3、BDE-47和BDE-209的体外遗传毒性评价

目的：对3种代表性多溴联苯醚（PBDEs）BDE-3、BDE-47和BDE-209进行体外遗传毒性评价。方法：采用TK6人淋巴母细胞进行彗星试验、微核试验和TK基因突变试验,同时检测DNA损伤、染色体改变和基因突变3个遗传学终点。每种PBDEs均设定5个剂量组：BDE-3为60、90、120、180和240 μmol/L;BDE-47为60、120、180、200和240 μmol/L;BDE-209为24、40、120、180和240 μmol/L;同时设定溶媒DMSO为阴性对照组。结果：与阴性对照组比较,3种PBDEs在各个剂量下均未能引起TK6细胞彗星的尾长、尾部DNA百分数和尾矩的增加（P > 0.05）,也均未引起TK6细胞微核率升高（P > 0.05）。TK基因突变试验显示,3种PBDEs均能引起TK基因突变频率升高,差异具有统计学意义（P < 0.05）,并呈剂量依赖性升高趋势（相关系数[R_BDE-3²]=0.85,[R_BDE-47²]=0.85,[R_BDE-209²]=0.90;P < 0.05）,但致突变作用BDE-47强于BDE-3和BDE-209。结论：多溴联苯醚BDE-3、BDE-47和BDE-209对TK6细胞具有致突变作用。     

基于TK6细胞的体外PIG-A基因突变检测方法的建立

目的：建立基于人成淋巴TK6细胞的体外磷脂酰肌醇聚糖A类（PIG-A）基因突变试验方法,研究甲基磺酸乙酯（EMS）与苯并芘（B[a]P）诱导TK6细胞PIG-A基因突变的能力,并探讨该方法用于药物开发初期遗传毒性筛选和评价的前景。方法：通过免疫磁珠分离清除TK6细胞株中预先存在的GPI （-）细胞（即PIG-A基因突变细胞）,然后连续40 d测定正常传代培养TK6细胞PIG-A基因的自发突变率。设不添加体外代谢活化系统长时处理组（24 h-S9）和添加体外代谢活化系统短时处理组（4 h+S9）,并分别采用3个不同浓度50、75、100 μmol/L的EMS和4、8、16 μmol/L的B[a]P处理TK6细胞10 d,在第11天收获细胞。使用CD19、CD55、CD59抗体和核酸染料7-AAD对细胞进行标记,然后用流式细胞仪分析CD19阳性细胞中,CD55和CD59表达阴性的细胞频率。结果：经过免疫磁珠分离,TK6细胞中预先存在的PIG-A基因突变细胞频率降低至2.5×10^-5。连续测定40 d TK6细胞的PIG-A基因自发突变率,计算得到其自发突变率为5.04×10^-7个/d。与阴性对照组比较,不同浓度EMS和B[a]P诱导产生的PIG-A基因突变细胞比例均呈剂量依赖性增加,并超过阴性对照组的2倍以上。结论：本研究初步建立了基于TK6细胞的体外PIG-A基因突变检测方法。该方法成本较低,简便、快速,具有应用于药物早期遗传毒性筛选和遗传毒性评价的潜力。     

遗传毒性基因突变评价方法的研究进展

基因突变是癌症发生与发展的重要物质基础,也是遗传毒性评价重要的检测终点之一。随着新型药物的涌现以及对药物评价试验要求的不断提高,传统的试验体系也历经了一系列优化。然而,不同的致突变新检测方法对不同检测品种的适用性及其优势和局限不尽相同。本文根据2018年国家食品药品监督管理总局颁布的《药物遗传毒性研究技术指导原则》,就临床前安全性评价领域常用的致突变性检测方法及研究进展进行总结,以期为相关科研及安全评价工作者提供有益借鉴。     

丙烯酸-2-乙基己酯的遗传毒性研究

目的： 检测丙烯酸-2-乙基己酯的遗传毒性,为其安全性评价提供资料。方法：采用鼠伤寒沙门菌回复突变试验 (Ames试验),小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠淋巴瘤细胞TK基因突变试验检测丙烯酸-2-乙基己酯的遗传毒性。Ames试验设每皿0.08、0.4、2.0、10.0和50.0 μL剂量组,另设空白、溶剂、阳性对照;微核试验设350、700和1 400 mg/kg剂量组,另设溶剂、阳性对照;TK基因突变试验设12.5、25、50和100 μmol/L剂量组,另设溶剂、阳性对照。 结果：Ames试验中,加或不加S9的情况下,丙烯酸-2-乙基己酯对TA97、TA98、TA100和TA102菌株均显示致突变作用。微核试验中,雌雄鼠微核率均呈现剂量-反应关系;雄鼠高剂量组微核率与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);雌鼠各剂量组微核率与溶剂对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。TK基因突变试验中高剂量组突变频率与对照组比较,差异具统计学意义(P<0.05)。结论：在本实验条件下,Ames试验和TK基因突变试验均显示阳性结果,微核试验显示可疑阳性。丙烯酸-2-乙基己酯遗传毒性需结合其他检测系统综合评定。     

Ames试验与MLA试验检测两味含马兜铃酸中药的致突变性

背景与目的:检测单味马兜铃及复方龙胆泻肝丸的遗传毒性.材料与方法:鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames test)检测含马兜铃酸的两味单、复方中药的细菌回复突变率;采用96孔微孔板接种法进行小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变试验(mouse lymphoma assay,MLA),经单、复方含马兜铃酸浓度5 μg/ml对L5178Y/tk(+/-)-3.7.2c细胞进行染毒,分别测定其接种效率(PE),相对总增长率(RTG)和突变频率(MF).结果:Ames试验结果为阴性,而小鼠淋巴瘤试验显示单味马兜铃具有一定细胞毒性并诱导tk基因突变,产生突变集落;而复方龙胆泻肝丸未诱发tk基因突变.结论:受试的单味马兜铃具有一定的遗传毒而复方龙胆泻肝丸具有对马兜铃的减毒效应.     

采用体内碱性彗星试验检测两种聚醚醚酮材料的遗传毒性

目的：采用哺乳动物体内碱性彗星试验,检测两种聚醚醚酮材料的遗传毒性,为医疗器械及其材料的遗传毒性体内碱性彗星试验方法的建立提供依据。方法：采用0.9%氯化钠注射液(SC)和棉籽油(CSO)两种介质制备聚醚醚酮材料的试验液,以SC和CSO作为阴性对照,甲基磺酸甲酯(MMS)作为阳性对照。选取 SD大鼠 70只,雌雄各半,大鼠连续两次(间隔 24 h)染毒,SC组和MMS阳性对照组按照 10 mL/kg的剂量由静脉途径染毒,CSO组按照 5 mL/kg的剂量由腹腔途径染毒,末次染毒后 3 h处死大鼠,称取肝脏和肾脏的质量并进行组织病理学检查。取肝脏、肾脏和外周血分别制备单细胞悬液进行碱性彗星试验,以尾部DNA百分比、尾矩和Olive尾矩为分析指标判断DNA损伤程度。结果：试验组的大鼠肝脏系数、肾脏系数分别与SC和CSO阴性对照组相比差异均无统计学意义(P >0.05),所有大鼠的肝脏和肾脏形态结构正常,未见明显的组织病理学改变。与 SC和 CSO阴性对照组相比,MMS阳性对照组尾部DNA含量百分比、尾矩和Olive尾矩的差异有统计学意义(P<0.01),两种聚醚醚酮材料组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论：应用体内碱性彗星试验的研究方法,在本研究条件下,两种聚醚醚酮材料的试验液不能诱导大鼠肝细胞DNA链断裂,未检测出遗传毒性。     

丙烯酰胺对F344大鼠肝毒性的分子机制研究

目的:通过检测丙烯酰胺对大鼠肝脏基因表达、DNA甲基化以及基因突变的影响,探讨其肝脏毒性的分子机制。方法:以含50 μg/mL丙烯酰胺的饮用水染毒7周龄F344雌性大鼠28 d;采用荧光定量PCR方法检测肝脏细胞增殖以及DNA甲基化调控相关基因的mRNA表达水平;结合重亚硫酸盐的限制性内切酶分析方法检测Cdkn1a/Cdkn2a基因启动子区和重复序列Line-1的DNA甲基化水平;PCR扩增测序方法检测H-ras基因突变。结果:丙烯酰胺引起大鼠肝脏中Dnmt3a、Cdkn1a、Cdkn2a、Jun和Line-1的mRNA水平表达下降;未检测到Cdkn1a/Cdkn2a基因启动子区DNA和重复序列Line-1甲基化的变化;测序结果发现丙烯酰胺未引起H-ras基因突变。结论:丙烯酰胺可引起大鼠肝脏中细胞增殖相关基因表达的变化,但无DNA甲基化改变和基因突变。     

三氯生的体外遗传毒性评价

目的：应用体外碱性彗星试验、体外胞质分裂阻滞微核细胞组学试验和细菌回复突变试验（Ames试验）评价三氯生（TCS）的体外遗传毒性。方法：采用TK6人淋巴母细胞进行体外彗星试验和体外微核试验,共设定5个剂量（3.5、8.8、17.5、26.3和35 μmol/L）组。同时,应用鼠伤寒沙门氏菌TA98、TA100和DNA修复酶缺陷型YG7108（Ogt^-/Ada^-）菌株对TCS进行Ames试验,共设定8个剂量（0.000 5、0.001 67、0.005、0.016 7、0.05、0.167、0.5和1.67 μg/皿）组。结果：与对照组比较,彗星试验结果显示,TCS在各个剂量下均能引起TK6细胞的尾长、尾部DNA强度和尾矩的增加,差异均具有统计学意义（P均 < 0.01）,且尾部DNA强度呈现剂量效应（r=0.943,P=0.017）;微核试验表明,TCS未引起TK6细胞微核率升高（P > 0.05）;Ames试验结果表明TCS未引起TA98、TA100和YG7108菌株的回复突变菌落数增加（P > 0.05）。结论：TCS主要引起细胞DNA损伤,但未对TK6细胞造成染色体损伤,对Ames试验菌株不具有致突变作用。     

适合纳米材料遗传毒性评价方法的选择

纳米材料独特的小尺寸和大的比表面积等物理化学性质,及其与生物体相互作用的高活性特性,为其在多种领域提供了广阔应用前景。与此同时,也可能带来潜在的安全风险。纳米材料的代谢和分布方式与普通化合物存在一定差异,如何科学地评价纳米材料对人体的潜在毒性风险,尤其是遗传毒性,是目前科学界及各相关监管部门亟需解决的问题。本文对现有常用遗传毒性评价方法用以评价纳米材料时存在的试验体系的局限性和灵敏度方面存在的优势与劣势进行回顾,总结了纳米材料遗传毒性评价时的关注点;并基于经济合作与发展（OECD）专家工作组的相关建议及相关遗传毒性评价指导原则,初步提出纳米材料遗传毒性试验组合优化方案。以期填补相关领域的空白,为纳米材料毒性评价和含纳米材料产品的上市前技术审评工作提供有益的借鉴。     

tk基因突变的分子机制研究

胸苷激酶(Thymidinekinase,tk)基因突变试验是对外源性化学物质进行遗传毒性检测的短期试验方法。该方法可检测出染色体tk位点的点突变、基因缺失以及染色体畸变等多种类型的遗传损伤。遗传毒性物质作用于tk位点产生大、小两种突变体,对应着不同的突变机制。杂合子丢失的产生机制和P53基因的作用机制是近年来研究的热点。     

遗传毒理学短期试验统计评价的要点

遗传毒理学短期试验统计评价的要点周宗灿，王纪宪北京医科大学卫生毒理学教研室，北京生物数学和生物统计学教研室１０００８３遗传毒理学短期试验（ＳＴＴ）的目的是检测化学品及环境样品的遗传毒性，评定对哺乳动物和人体细胞及性细胞的遗传危险性，以及，预测对哺乳动...     

大黄素和大黄酸的体外遗传毒性评价

目的：评价大黄素和大黄酸的体外遗传毒性。方法：使用不同浓度的大黄素和大黄酸（均分别为20、40、80、120μg/ml）处理人的类淋巴母细胞WTK1后,进行彗星实验、体外微核试验和TK基因突变试验。并设溶剂对照组和甲基甲烷磺酸（mthylmethane sulfonate,MMS）阳性对照组。结果：大黄素80和120μg/ml剂量组TK基因突变频率、细胞拖尾率及平均尾长均增高（P〈0.05）;大黄酸120μg/ml剂量组TK位点总突变频率增高（P〈0.05）。结论：在本实验条件下,大黄素和大黄酸均表现出弱致突变作用。     

淫羊藿水提取物的食用安全性研究

背景与目的:淫羊藿是一种传统的中药材,但是其安全性毒理学的资料相对缺乏,故我们对其安全性进行评价,以便为淫洋霍的综合利用提供依据。材料与方法:运用急性毒性试验、细胞毒性试验、遗传毒性试验(包括小鼠骨髓微核实验、Ames实验和TK基因突变实验)对淫羊藿进行了较系统的安全性评价。结果:淫羊藿的半数致死剂量(LD50)大于80g/kg,对中国仓鼠卵巢细胞CHO和中国仓鼠肺细胞CHL的半数致死浓度(IC50)分别为55.4mg/ml和19.53mg/ml,并且小鼠骨髓微核实验、Ames实验、TK基因突变实验的结果均为阴性。结论:淫羊藿属无毒物质,在较高剂量下对CHO和CHL均表现出一定的细胞毒性,本试验条件下无致基因突变和染色体畸变作用。     

大鼠多器官彗星试验方法的验证研究

目的：采用对氯苯胺、氯化钠、对乙酰氨基酚和庆大霉素4个不同作用机制的化合物，对已建立的大鼠多器官（肝、胃和肾）彗星试验方法进行验证。方法：SD雄性大鼠分别在0、24和45 h经口灌胃不同剂量的对氯苯胺[37.5、75和150 mg/（kg·d）]、氯化钠[500、1 000和2 000 mg/（kg·d）]、对乙酰氨基酚[20、100和500 mg/（kg·d）]，或肌肉注射庆大霉素[20、40和80 mg/（kg·d）]，各组均设置溶剂对照品，以及在24和45 h经口灌胃阳性对照甲基磺酸乙酯[EMS，200 mg/（kg·d）]，所有动物在末次给予受试物约3 h后经戊巴比妥钠麻醉放血处死，制备肝脏、胃和肾脏单细胞悬液后制片，再经裂解、解旋、电泳、中和、染色以进行彗星显像分析；对乙酰氨基酚处理的大鼠肝脏和庆大霉素处理的大鼠肾脏经10%福尔马林溶液固定后进行组织病理学检查。结果：与溶剂对照组比较，对氯苯胺处理组大鼠肝、胃和肾的尾部DNA百分率增加，并呈剂量-反应关系（P < 0.05）；氯化钠、对乙酰氨基酚和庆大霉素处理组大鼠肝、胃和肾的尾部DNA百分率与溶剂对照比较，差异均无统计学意义（P均 > 0.05）；对乙酰氨基酚各剂量组动物出现肝脏不同程度的肝脏细胞炎症反应或细胞坏死等病理学改变。结论：本研究采用已知遗传毒性化合物、有和无靶器官毒性的非遗传毒性化合物，验证了多器官（肝、胃和肾）彗星试验方法具有很好的灵敏度和特异性，有望为体内碱性彗星试验方法在新药遗传毒性评价领域的推广提供技术参考。     

茶树槲寄生“螃蟹脚”水提物的急性毒性和遗传毒性

目的：研究“螃蟹脚”水提物的经口急性毒性和遗传毒性。方法：采用大鼠经口急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精原细胞染色体畸变试验对“螃蟹脚”水提物的安全性进行评价。结果：经口急性毒性试验表明,大鼠灌胃给予“螃蟹脚”水提物,其半数致死量约为21.5 g/kg,因此“螃蟹脚”水提物属于实际无毒物。Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精原细胞染色体畸变试验结果均为阴性。结论：在本次实验条件下,“螃蟹脚”水提物属于实际无毒级别,而且未观察到遗传毒性。     

蔡司多功能护理液的遗传毒性研究

目的:检测医疗器械境外注册产品蔡司多功能护理液的遗传毒性。方法:以蔡司多功能护理液产品原液为供试液,采用细菌回复突变试验(Ames试验)和小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA),在代谢活化和非代谢活化(±S9)条件下检测其遗传毒性。Ames试验采用平板掺入法,检测每皿50、100、200μl 3个剂量组诱发鼠伤寒沙门氏菌TA98、TA100、TA1535、TA1537及大肠杆菌WP2uvrA的回变菌落数;MLA采用微孔法检测终浓度2.5%、5%、10%(V/V)3个浓度组,在+S9/3 h、-S9/3 h、-S9/24 h 3种处理条件下诱发的L5178Y细胞tk~(+/-)突变频率(MF)和小集落突变百分率,在-S9/24 h处理条件下追加检测0.5%、1%、2%(V/V) 3个浓度。结果:与氯化钠注射液阴性对照组相比,每皿50、100、200μl 3个剂量组诱发上述5株菌的回变菌落数,均无明显增加(P0.05);在-S9/24 h处理条件下,2.5%浓度组诱发的MF值远超出阳性判定数值,相对总生长率(RTG)仅为3%,2%浓度组的RTG升至16%,诱发的MF与阴性对照组比较虽有增加(P0.01),但未达到阳性判定标准。结论:蔡司多功能护理液对测试菌株his~-/trp~-无明显诱变作用,但在-S9/24 h处理条件下可导致tk~(+/-)基因突变频率增加,是否与其细胞毒性有关尚待进一步阐明。     

ENU致大鼠体内Pig-a基因突变的时-效关系和量-效关系研究

目的:建立大鼠体内Pig-a基因突变试验方法,研究N-乙基-N-亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)诱导的大鼠体内磷脂酰肌醇聚糖A类(phosphatidylinositol glycanclass-A,Pig-a)基因突变的时-效关系和量-效关系,探索该试验整合到重复剂量毒性试验中的可能性。方法:将15只雄性SD大鼠按照体质量随机分为3组:溶媒对照组(PBS,pH=6.0)、ENU低剂量组(20mg/kg)和ENU高剂量组(40mg/kg),灌胃给药,容量均按10mL/kg,每天1次,连续给药3d。分别于给药前1d、给药后第15、30和45天颈静脉取血,分离红细胞,经抗体和核酸染料标记后采用流式细胞仪分析网织红细胞(reticulocyte,RET)、总红细胞(redbloodcell,RBC)Pig-a基因突变率和RET百分率。结果:ENU低、高剂量组大鼠在给药后第15、30和45天的RBC和RETPig-a基因突变率平均值与对照组相比均明显升高(P均0.01),高剂量组约为低剂量组的2~3倍。第15~45天,大鼠体内Pig-a基因突变率保持在较高水平,且呈现剂量反应趋势。而在此期间,RET百分率与对照组的比值约为1。结论:本研究成功建立了大鼠体内Pig-a基因突变流式检测方法,提示该试验可整合至重复剂量毒性试验中。     

甘泰康的遗传毒性研究

目的与方法:采用Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形试验检测甘泰康的遗传毒性,为其食用安全性提供依据.结果与结论:3项遗传毒性试验均为阴性,甘泰康对所试菌株、小鼠体细胞及雄性生殖细胞无诱变性.     

紫荷植物固体饮料的急性毒性和遗传毒性试验研究

目的：对紫荷植物固体饮料的急性毒性和遗传毒性进行评价。方法：急性毒性试验,采用限量法,设雌雄2组,每组10只SPF级昆明小鼠,累积剂量为10 g/（kg·d）。Ames试验,采用平板掺入法,设5000、1000、200、40、8μg/皿共5个剂量组;小鼠精原细胞染色体畸变试验,设2000、1000、500 mg/（kg·d）剂量组;哺乳动物红细胞微核试验,设2000、1000、500 mg/（kg·d）剂量组。3个遗传毒性试验均另设置阴性对照组和阳性对照组。结果：在14 d观察期内受试动物未见任何急性毒性反应,根据急性毒性分级,属于实际无毒级。Ames试验结果显示,该固体饮料属无致突变性。小鼠精原细胞染色体畸变试验结果显示,各剂量组小鼠染色体畸变率（0～1.6%）,与阴性对照组（0.6%）比较,差异无统计学意义（P>0.05）。哺乳动物红细胞微核试验结果显示,各剂量组雌雄性小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。3项遗传毒性试验结果显示该固体饮料未见遗传毒性。结论：在本实验条件下,紫荷植物固体饮料无明显急性毒性反应和遗传毒性。     

烹调油烟的遗传毒性研究

本文选择了代表不同遗传终点,体外、体内两个水平的3个短期试验(Ames试验,SCE/V_(79)试验、小鼠骨髓微核试验)组成短测系统,研究居民烹调油烟的遗传毒性。结