丙酮酸乙酯对宫内感染致脑损伤新生仔鼠12-脂氧合酶表达和细胞凋亡的影响

目的研究丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)对宫内感染致新生仔鼠脑损伤12-脂氧合酶表达和细胞凋亡的影响。方法 36只孕鼠随机分为LPS组、EP组、NS组,每组各12只。LPS组:于孕17天、18天孕鼠连续两天腹腔注射脂多糖380μg/kg;EP组:相同的方法制备孕鼠宫内感染模型,并于孕鼠腹腔注射LPS后立即给予腹腔注射EP 40mg/kg;NS组:给予等量生理盐水腹腔注射。孕鼠分娩后,取胎盘进行HE染色,以观察宫内感染情况。剔除早产鼠,随机选取各组仔鼠36只,分别于出生后1d、3d、7d进行检测,观察脑组织12-脂氧合酶(12-lipoxygenase,12-LOX)的表达和神经细胞凋亡情况。结果与NS组比较,LPS组孕鼠胎盘组织可见明显的炎性细胞浸润,血管充血等病理改变;与LPS组相比较,EP组仔鼠出生后1、3、7d脑组织12-LOX的表达量均低于LPS组(P0.05)、神经细胞凋亡指数均也均低于LPS组(P0.05)。结论 EP对宫内感染致脑损伤新生仔鼠的脑组织具有保护作用,可能与12-LOX表达水平和细胞凋亡降低相关。     

宫内注射内毒素对早产子代大鼠学习记忆能力影响的研究

目的 探讨内毒素(LPS)宫内注射构建大鼠早产模型的有效性及其对早产仔鼠学习记忆能力的影响,为后期研究奠定基础。方法 建造SD孕鼠宫内感染早产模型,30只孕鼠随机分为两组(实验组和对照组),两组于孕17日分别宫内注射100 μl 25% LPS溶液或100 μl生理盐水,观察妊娠结局;仔鼠于生后1月进行Morris水迷宫的定位航行实验及空间探索实验,检测子代空间学习记忆能力的改变。结果 实验组早产率(100%)和死产率(2.9%)均显著高于对照组(6.7%和0.9%)(χ²分别为11.46,8.82, P<0.05);平均每窝活产仔鼠数(t=4.83,P=0.02)、仔鼠平均体重(t=3.75,P=0.03)、1月仔鼠存活率(χ²＝3.68,P=0.03)均显著低于对照组。在水迷宫任务中实验组更多采取非有效策略,对照组更多地采取有效策略,两组间差异有统计学意义(χ²=4.27,P＝0.02)。实验组1月龄仔鼠的平均潜伏期较对照组明显延长(t=6.92,P＝0.001)。空间探索实验中,实验组1月龄仔鼠站台停留时间较对照组明显缩短(t=5.28,P＝0.005)。结论 宫内LPS注射法是一种可行性较高、成功率较高的造模方法,该方法所致早产仔鼠学习记忆能力受损,可用于宫内炎症所致早产的相关研究。     

干细胞来源外泌体对早产仔鼠运动影响的研究

目的 研究人脐血间充质干细胞(Hu-MSCs)来源的外泌体对宫内感染仔鼠运动能力的影响及其机制,为治疗宫内感染及早产儿运动功能损害提供新思路。方法 90只孕鼠随机分为3组[实验组、内毒素(LPS组)和对照组,每组各30只]。孕15日,实验组孕鼠腹腔注射0.5 ml 1×10⁶ng/μl 外泌体悬液、LPS组与对照组腹腔注射等量生理盐水溶液;孕17日,实验组、LPS组宫内注射100 μl 内毒素(LPS,25 μg/μl)溶液,对照组宫内注射等量生理盐水。孕18日时3组孕鼠中分别随机选取15只孕鼠断颈处死, ELISA法检测孕鼠羊水、仔鼠血清中IL-4、IL-10、IL-12的改变;每组剩余的15只孕鼠等待自然分娩,观察妊娠结局;随机选取10只仔鼠待其15日龄、30日龄时使用悬吊实验、改良BBB运动评分(BBB Scale)评估仔鼠运动能力。结果 1)实验组孕鼠羊水、仔鼠血清中IL-4及IL-10较LPS组明显升高,两组之间差异有统计学意义(t=8.26、3.97、7.66、4.81,P<0.05),实验组孕鼠羊水、仔鼠血清中IL-12较LPS组明显降低,差异有统计学意义(t=3.14、6.68,P<0.05); 2)悬吊实验中,LPS组15日龄、30日龄仔鼠抓握时间较对照组明显缩短,差异有统计学意义(t=8.166、16.283,P<0.05);实验组较LPS组抓握时间显著延长,差异有统计学意义(t=4.867、6.994,P<0.05)。LPS组15日龄、30日龄仔鼠的改良BBB评分显著低于对照组,差异有统计学意义(t=7.394、16.283,P<0.05),实验组15日龄、30日龄仔鼠的改良BBB评分显著高于LPS组,差异有统计学意义(t=4.096、7.004,P<0.05)。结论 脐血间充质干细胞来源的外泌体可能通过降低孕鼠及仔鼠体内炎性反应改善早产仔鼠运动能力的损害,为宫内感染及早产儿运动功能损害的提供新的治疗思路。     

宫内炎症对仔鼠脑组织TLR4表达的影响

目的:探讨胎鼠及新生大鼠脑中TLR4及细胞因子TNF-α在宫内感染后脑损伤中的作用。方法:取孕龄17、18天(足月为22.5天)的SD大鼠,每次350μg/kg、连续2天腹腔注射,构建宫内感染大鼠模型(LPS组);对照组孕鼠腹腔注射同剂量的生理盐水(NS组)。观察胎盘和脑组织的病理改变。分别留取孕20、21天及生后1、3、7、14天(P1、P3、P7、P14)的新生大鼠脑标本,检测细胞因子TNF-α、TLR4的表达情况。结果:LPS组新生大鼠脑组织HE染色可见细胞水肿,组织疏松,细胞数减少。蛋白表达结果显示LPS组TLR4明显升高,较NS组差异有统计学意义,F=71.148,P=0.001;LPS组TNF-α较NS组差异有统计学意义,F=16.863,P=0.015。LPS组TLR4、TNF-αmRNA在G20、G21、P1、P3、P7的表达比NS组明显升高,差异有统计学意义(P0.05),而在P14两组差异无统计学意义(P0.05)。结论:宫内LPS感染后TLR4信号途径被激活,诱导炎性因子大量释放,最终导致脑损伤的发生。     

褪黑素对细菌脂多糖导致的宫内感染脑损伤的保护作用

目的:研究褪黑素(melatonin,MT)对宫内感染胎鼠脑组织自由基的影响,探讨MT对宫内感染胎鼠脑组织的保护作用。方法:通过给孕鼠腹腔注射细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),造成宫内感染脑瘫动物模型,并行MT干预。选用妊娠第19天SD大鼠随机分为空白对照组、宫内感染组和MT处理组,宫内感染组孕鼠缓慢腹腔注射LPS500μg/kg,MT处理组孕鼠腹腔注射LPS 500μg/kg+MT 10 mg/kg。将各大组孕鼠根据注药后观察时间不同,平均分为注药后2 h、6 h、12 h 3小组,各小组4只孕鼠。各小组于相应的时间点迅速处死,于冰盒上剖腹取胎鼠脑组织,分别测定脑组织匀浆的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量,HE染色观察组织病理变化,并比较各组之间的差异。结果:宫内感染组较空白对照组胎鼠脑组织中SOD、GSH-Px活力下降,MDA含量上升;同时随着感染时间的延长,上述改变亦趋于明显,差异有统计学意义。与宫内感染组相比,MT处理组能提高胎鼠脑组织中SOD、GSH-Px活力,降低MDA含量。结论:宫内感染胎鼠脑组织在宫内已出现自由基蓄积而自身清除力不足,导致胎鼠脑组织损伤,并随着感染时间的延长而脑损伤逐渐加重。褪黑素能对宫内感染胎鼠脑损伤有抗氧化和较强的自由基清除作用,有神经保护作用。     

褪黑素对细菌脂多糖致宫内感染胎鼠脑组织TNF-α表达的影响

目的:研究褪黑素(MT)对细菌脂多糖(LPS)致宫内感染胎鼠脑组织TNF-α的表达变化,探讨MT对宫内感染胎鼠脑损伤的保护作用。方法:选用妊娠第19天SD大鼠随机分组:对照(S)组、宫内感染(LPS)组和MT处理组,腹腔注射LPS建立大鼠宫内感染模型,LPS组和S组分别腹腔注射LPS 500μg/kg和等容积生理盐水,MT组同时腹腔注射LPS500μg/kg+MT 10 mg/kg。分别于注药后1、6、12、24、48和72 h剖腹取胎鼠,RT-PCR技术检测胎鼠脑组织中TNF-αmR-NA的表达水平。结果:LPS组各小组较S组胎鼠脑组织中TNF-αmRNA含量均明显上升,LPS组在6h达峰值之后缓慢下降;MT组各小组TNF-αmRNA含量均低于LPS组,随时间延长MT组各小组逐渐上升,48 h达峰值,后稍下降。结论:TNF-α表达增加是LPS致宫内感染胎鼠脑损伤的机制之一;MT抑制TNF-α表达,对胎鼠脑损伤有保护作用。     

重组人促红细胞生成素对宫内炎症致新生大鼠脑损伤髓鞘少突细胞糖蛋白表达变化与髓鞘修复关系的研究

目的 通过观察新生大鼠脑组织内髓鞘少突细胞糖蛋白(MOG) mRNA及MOG蛋白动态变化情况,探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)与宫内炎症致脑组织髓鞘损伤、修复的关系,为临床干预新生儿脑白质损伤提供依据。方法 1)选取孕15 d的Wistar大鼠分别经腹腔注射脂多糖及无菌生理盐水后分为脂多糖感染组和对照组,随机选取感染组经苏木素-伊红染色证实胎盘和新生大鼠脑组织存在炎性损伤的同胎新生大鼠64只,分为rhEPO治疗组和感染对照组,随机选取对照组中新生大鼠32只为空白对照组,分别于生后每日腹腔注射rhEPO(5 000 U/kg)或等量生理盐水。2)三组新生大鼠均分别于生后当日、3 d、7 d及14 d行左心室甲醛灌注取脑组织,利用RT-PCR检测脑组织中MOG mRNA,Western blot检测MOG蛋白水平变化。结果 1)空白对照组MOG mRNA水平在3 d[(2.05±0.75)倍]、7 d[(2.37±0.57)倍]及14 d[(3.36±0.81)倍]新生大鼠脑组织中均较当日组[(1.01±0.16)倍]明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);2) 感染对照组MOG mRNA水平在当日、3 d、7 d及14 d新生大鼠脑组织中均较同日龄空白对照组下降,且3 d和7 d组差异具有统计学意义(P＜0.05);3)rhEPO治疗组3 d[(2.18±0.89)倍]、7 d[(3.53±1.55)倍]及14 d[(3.30±1.12)倍]新生大鼠脑组织MOG mRNA水平较同日龄感染对照组均显著上升,差异有统计学意义(P＜0.05);4)rhEPO治疗组MOG蛋白水平在3 d(12.63±0.65 vs. 18.23±0.37)、7 d(13.59±1.10 vs. 22.72±2.77)及14 d(15.63±1.32 vs. 25.85±2.70)时均低于感染对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 宫内炎症致新生大鼠脑组织损害中存在通过抑制髓鞘MOG基因及蛋白表达的机制。早期应用rhEPO能够促进MOG基因及蛋白表达发挥神经修复保护作用,14 d的疗程目前为最佳疗程。     

ω-3多不饱和脂肪酸对脂多糖所致新生大鼠脑损伤Toll-NF-κB信号通路调节作用

目的 探讨ω-3 PUFAs在脂多糖(LPS)诱导的新生大鼠脑损伤中对TLR4、NF-κB信号通路的调节作用。方法 将96只SD新生大鼠按随机数字法分为对照组,ω-3组,ω-6组和LPS组。4组大鼠分别采用生理盐水或LPS腹腔注射后,立即注射生理盐水或不同的脂肪乳剂,使用时间分别为1天或5天,建立感染所致新生大鼠脑损伤模型;1天或5天后处死新生大鼠,检测TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和对应蛋白水平的变化。结果 LPS注射后的第1天、第5天,新生大鼠TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达及其对应的蛋白水平均明显高于对照组(P均＜0.05)。1 d 时ω-3组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达及其对应的蛋白水平均低于ω-6组和LPS组(P均＜0.05)。5 d时ω-3组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达及其对应的蛋白水平均低于ω-6组和LPS组(P均＜0.05)。不论第1 d和第5 d,ω-3 PUFAs均可明显降低TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达及其对应的蛋白水平(P均＜0.05);而ω-6 PUFAs能提高TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达及对应的蛋白水平(P均＜0.05)。结论 ω-3 PUFAs 能下调 TLR4、NF-κB活性,在LPS所致的脑损伤中具有抗炎作用。     

促红细胞生成素对宫内感染致脑损伤早产新生大鼠神经胶质酸性蛋白和S-100β表达的影响

目的 通过重组人促红细胞生成素(recombinant erythropoietin ,rhEPO)对早产新生大鼠宫内感染脑损伤后神经胶质酸性蛋白和S-100β表达的影响,探讨其神经保护作用。方法 妊娠18 d孕鼠随机分为对照组、感染组和EPO干预组,对感染组及干预组分别给予LPS剂量0.45 mg/(kg·d)腹腔内注射,连用2 d,对照组按同样方法注射生理盐水,24 h后随机取部分孕鼠胎盘组织行HE染色观察其病理变化,余孕鼠继续怀孕至自然分娩,干预组新生鼠腹腔注射重组人促红细胞生成素5 000 U/(kg·d),连续注射3 d,部分待新生鼠6日龄大取其大脑,免疫组织化学法检测其大脑神经胶质酸性蛋白(the glial fibrillary acidic protein,GFAP)及酶联免疫方法检测血清中S-100β在宫内感染情况下及EPO干预后的不同表达变化。结果 与对照组比较,宫内感染及EPO干预组孕鼠胎盘组织HE染色后镜下观察均可见大量中性粒细胞浸润,血管充血、水肿等病理改变,与对照组比较,感染组、干预组GFAP的表达变化(对照组115.27±3.651;vs感染组105.68±3.189和干预组113.92±3.967)及S-100β结果(对照组0.32±0.05 vs感染组0.63±0.04,和干预组0.33±0.06),两组数据结果均显示感染组高于对照组及干预组,干预组及对照组差异无统计学意义。结论 宫内感染可使早产新生大鼠脑组织中GFAP及S-100β的表达均增加,而重组人促红细胞生成素降低宫内感染致脑损伤后神经胶质酸性蛋白和S-100β表达,保护脑组织。     

宫内感染致肺损伤仔鼠血清IL-21与TNF-α及MMP-9表达水平

目的观察宫内感染引起的肺损伤仔鼠血清中白细胞介素-21(IL-21)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。方法选择健康的孕期SD大鼠,随机分为对照组和脂多糖(LPS)组,其中LPS组分为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mg/kg 6个浓度组,分别在妊娠第18天腹腔注射不同浓度的LPS溶液,对照组腹腔注射同等体积的无菌生理盐水。记录孕期流产率及胎儿死亡率,通过苏木精-伊红染色观察新生仔鼠肺部组织的损伤情况,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测新生仔鼠血清中IL-21、TNF-α和MMP-9的水平。结果与对照组相比,LPS组的新生仔鼠的肺部组织有明显的炎症损伤。与对照组相比,LPS组死亡率较高,差异具有统计学意义(P0.05),且LPS浓度升高,新生仔鼠的死亡率升高,各组间有统计学差异(P0.05)。LPS组的新生仔鼠血清中IL-21、TNF-α和MMP-9的水平高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。且LPS浓度升高,IL-21、TNF-α和MMP-9的血清水平升高,各组间有统计学差异(P0.05)。结论通过对孕期大鼠腹腔注射LPS可成功建立宫内感染模型,孕期宫内感染会导致新生仔鼠死亡率升高,肺部组织损伤,同时LPS组的新生仔鼠血清中IL-21、TNF-α和MMP-9的表达水平增加,与LPS呈剂量依赖性。     

急性肺损伤新生大鼠AQP5及CC16变化的临床意义

目的探讨肺组织水通道蛋白5（AQP5）、血及肺灌洗液Clara细胞蛋白（CC16）在急性肺损伤早期的动态改变及临床意义。方法将140只sD新生大鼠随机分两批（每批70只）,再随机分为正常对照组（NS组）及内毒素（LPS）组（LPS组,7个亚组）。LPS组予腹腔注射5mg／kgLPS制作新生大鼠急性肺损伤（ALI）模型。各亚组分别在注射后0．5、1、2、4、8、16h和24h处死后取材,第一批收集肺行组织病理和肺湿／干重比值检测,采集血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）,用双抗体夹心ELISA法检测CC16含量。第二批取肺组织,用免疫印迹法测肺组织AQP5的表达,观察其动态改变。结果 ①LPS注射0．5h后在病理上动物出现点状肺出血,随时间推延渐发展为片状肺出血;LPS2h、4h组肺湿／干重比（W／D）明显增高,P〈0．01有统计学意义;②LPS0．5h组大鼠肺组织AQP5表达开始下调,1-2h组达到最低,继而AQP5表达渐上升,8h组与正常水平接近,之后再次下调至24h。③LPS致伤后大鼠BALF中CC16水平迅速下降,LPS组各组均较对照组有显著性差异（P〈0．01）;LPS组血清CC16水平较对照组上升,从注射LPS2h后开始有差异,4h达高峰,以后呈下降趋势,但8h、16h组仍明显高于对照组（P〈0．01）。结论①新生大鼠AQP5、CC16的改变反映了I型肺泡上皮细胞受损及Clara细胞损伤,三者可作为早期反映AU的敏感实验室指标。②LPS组AQP5、BALF及血清CC16与对照组有差异的时间点有差别,早期发现干预ALI对前两者监测更好。③AQP5表达变化提示可能存在治疗窗口期。     

戊四氮致癫痫大鼠不同脑区神经肽Y和NSE表达及意义

目的 研究神经肽Y(NPY)和神经元特异性烯醇酶(NSE)在戊四氮(PTZ)致癫痫(EP)大鼠不同脑区中的变化,探讨NPY与EP的关系及其对大脑神经元的损坏.方法 以SD大鼠50只进行试验.对照组(A组)注射生理盐水.实验组腹腔注射PTZ 50 mg/kg.据EP发作分级,≤1级视为B组;2级以上于发作后0、6、24 ...     

醒脑静合生脉注射液下调大鼠脑出血后脑组织PAR1和AQP4表达

目的研究醒脑静合生脉注射液对大鼠脑出血后脑组织内凝血酶受体-1(PAR1)和水通道蛋白-4(AQP4)表达的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为脑出血组(ICH)、生理盐水组(NS)、醒脑静合生脉注射液治疗组(XNJSM)、水蛭素治疗组(HIR),每组10只。采用自体不凝血注入法制备脑出血模型。术后72 h取脑组织,HE染色观察各组血肿周围神经细胞形态学改变,免疫组化方法及Western Blotting法检测各组血肿周围脑组织PAR1和AQP4表达。结果脑出血后血肿周围脑组织PAR1、AQP4表达均明显增强,XNJSM组、HIR组脑组织病理形态明显改善,脑组织内PAR1、AQP4的表达减少,与ICH组相比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论脑出血后PAR1和AQP4两种蛋白的表达增加可能共同参与了脑出血后继发性脑损伤的过程,醒脑静合生脉注射液能够有效抑制大鼠脑出血后PAR1和AQP4蛋白的表达,对脑出血后神经损伤发挥保护作用。     

布拉氏酵母菌联合早期干预对高胆红素血症仔鼠脑组织NF-kB表达和学习记忆功能的影响

目的 分析布拉氏酵母菌联合早期干预对高胆红素血症仔鼠脑组织NF-kB表达和学习记忆功能的影响。 方法 将足月7日龄SD大鼠88只随机分为对照组(NS组)和试验组(T1、T2、T3组),每组22只。试验组于7日龄和10日龄分别腹腔注射胆红素50 μg/g,对照组注射等量生理盐水。于末次注射12 h后,各组随机选取6只,测定血清胆红素和脑组织胆红素含量。剩余仔鼠,T1组单纯给予布拉氏酵母菌,T2组给予布拉氏酵母菌和早期干预,T3组不干预,至28日龄。HE染色和免疫组化观察NF-kB表达情况,Morris水迷宫评测仔鼠逃避潜伏时间和穿过目标象限次数。 结果 10日龄NS组血清胆红素和脑组织胆红素浓度显著低于试验组(P<0.01),试验组间差异无统计学意义(P>0.05);28日龄NS组显著低于T1、T2、T3组(P<0.05),T2组显著低于T1、T3组(P<0.05)。HE染色:NS组神经元结构完整,T1、T2、T3组均观察到神经元数量减少,不同程度的胆红素沉积。免疫组化:NS组NF-kB阳性细胞数明显少于T1、T2、T3组(P<0.01),T2组明显少于T1组及T3组 (P<0.05) 。NS组逃避潜伏时间和穿过目标象限次数显著优于T1、T2、T3组(P<0.05),T2组显著优于T1组及T3组(P<0.05)。 结论 布拉氏酵母菌联合早期干预可有效地减少高胆红素血症仔鼠脑组织NF-kB表达,改善学习记忆功能。     

醉酒对大鼠重型颅脑创伤后水通道蛋白-4表达的影响

目的观察醉酒对大鼠重型颅脑创伤后脑组织水通道蛋白-4（AQP4）表达的影响。方法雄性Wistar大鼠70只,随机分为假手术（SO组）、颅脑创伤（TBI组）、乙醇预处理（ETH组）。ETH组给予白酒3g/kg灌胃。除SO组外,其余两组采用自由落体打击法制作颅脑创伤模型。分别于伤后不同时间点,采用干湿重法检测脑组织含水量,应用免疫组织化学法检测AQP4表达。结果与TBI组相比,ETH组脑组织含水量及AQP4表达水平显著升高（P〈0.05）,且通过相关性分析发现,大鼠脑损伤后脑组织AQP4表达水平与脑水肿呈正相关（r=0.684,P=0.001）。结论醉酒加重颅脑创伤后脑水肿与其升高AQP4表达有关。