lncRNA MALAT1靶向miR-150对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的:研究MALAT1对口腔鳞癌细胞SCC-25增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测人口腔鳞癌细胞SCC-25、人永生化口腔上皮细胞HIOEC中MALAT1和miR-150的mRNA表达;将si-con组（转染si-con）、si-MALAT1组（转染si-MALAT1）、miR-150组（转染miR-150 mimics）、miR-con组（转染miR-con）、si-MALAT1+anti-miR-con组（si-MALAT1和anti-miR-con共转染）、si-MALAT1+anti-miR-150组（si-MALAT1和anti-miR-150共转染）,均以脂质体法转染至SCC-25细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与人永生化口腔上皮HIOEC细胞（Normal组）相比,口腔鳞癌SCC-25细胞（Tumor组）中MALAT1表达显著上调,miR-150显著下调（P＜0.05）;敲减MALAT1、过表达miR-150均可抑制SCC-25细胞增殖,促进凋亡;MALAT1靶向miR-150。抑制miR-150逆转了敲减MALAT1对口腔鳞癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:MALAT1可促进口腔鳞癌细胞增殖并抑制凋亡,其机制可能与靶向miR-150有关,可为口腔鳞癌的治疗提供新靶点。     

鼻咽癌组织中微小RNA-328的表达及其对细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨鼻咽癌组织中微小RNA-328（miR-328）的表达及其对鼻咽癌CNE-2细胞侵袭和迁移的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测86例鼻咽癌组织和15例慢性鼻咽炎组织及鼻咽癌细胞系CNE-2、HK1和正常鼻咽上皮细胞NP69中的miR-328水平,分析miR-328水平与鼻咽癌临床病理特征（年龄、性别、临床分期、淋巴结转移、复发和生存状态）的关系;采用脂质体Lipofectamine 2000法向对数生长期CNE-2细胞转染miR-328模拟物（mimics）或阴性对照（NC）,采用QPCR检测转染48 h后的miR-328水平以评价转染效率,采用Transwell迁移和侵袭实验检测转染后CNE-2细胞的穿膜细胞数目。结果 QPCR检测结果 显示,鼻咽癌细胞CNE-2、HK1中miR-328水平低于正常鼻咽上皮细胞株NP69（P＜0.05）;86例鼻咽癌组织的miR-328水平亦低于15例慢性鼻咽炎组织,差异有统计学意义（P＜0.05）。miR-328水平与鼻咽癌患者的复发状态（P=0.037）、临床分期（P=0.005）和生存状态（P=0.012）有关,但与年龄、性别和淋巴结转移无关（P＞0.05）。转染mimics 48 h后的细胞中miR-328水平大幅升高,与转染NC的细胞比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。Transwell实验结果 显示,转染miR-328 mimics后,迁移和侵袭实验中CNE-2细胞的穿膜数目均降低,与转染NC的细胞比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 miR-328在鼻咽癌组织和细胞中低表达,且参与鼻咽癌的发生发展,上调其水平可抑制迁移侵袭过程,在鼻咽癌防治中有一定价值。     

MALAT1靶向微小RNA-206对乳腺癌细胞三苯氧胺敏感性的影响

目的探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)靶向调控微小RNA-206(miR-206)表达及对乳腺癌细胞三苯氧胺(TAM)敏感性的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测乳腺癌细胞MCF-7及其TAM耐药株MCF-7/TAM的MALAT1水平;脂质体法向MCF-7/TAM细胞转染3条靶向MALAT1的小干扰RNA(si-MALAT1),经QPCR筛选干扰效果最佳的si-MALAT1片段进行后续实验。将MCF-7/TAM细胞分为转染si-MALAT1片段的干扰组、转染无关序列的阴性对照(NC)组和未转染的空白对照(Blank)组,MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测5μg/ml TAM处理后的增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9水平,采用荧光素酶报告实验验证MALAT1对miR-206的靶向调控作用。结果MCF-7/TAM细胞的MALAT1水平高于其亲本MCF-7细胞(P<0.05)。与Blank组和NC组相比,干扰组的MALAT1水平降低至0.372±0.045(P<0.05)。干扰组MCF-7/TAM细胞转染48、72 h的增殖活力低于Blank组和NC组(P<0.05);干扰组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(28.399±2.032)%和(296.367±10.118)个,低于Blank组的(69.674±4.337)%和(463.062±18.159)个及NC组的(67.526±3.185)%和(472.675±20.941)个(P<0.05);与Blank组和NC组相比,干扰组的MMP-2和MMP-9水平均降低(P<0.05)。Blank组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶活性检测结果显示,miR-206 mimics能抑制MALAT1野生型荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型无影响(P>0.05)。结论MALAT1在乳腺癌TAM耐药株中表达升高,而下调MALAT1水平可增加耐药株的TAM敏感性并抑制侵袭和迁移,可能通过靶向miR-206来发挥促癌作用。     

miR-362靶向Six1抑制宫颈癌细胞增殖、迁移的作用机制研究

目的 探讨miR-362靶向Six1抑制宫颈癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法 选取本院宫颈癌患者142例,测定宫颈癌组织及癌旁组织中miR-362的表达水平;同时设Hela癌细胞组、miR-362mimics组、miR-362inhibitor组,测定各组癌细胞活力、癌细胞单克隆形成数目、癌细胞凋亡率、细胞周期、穿膜孔数以及Hela宫颈癌液miR-362、Six1 mRNA水平。结果 宫颈癌组织中miR-362 mRNA表达水平低于癌旁组织(P＜0.05)。有淋巴血管间隙浸润、病理学分期越高、TNM分期越高、有淋巴结转移、浸润深度越深,miR-362mRNA表达率越低(P＜0.05)。miR-362mimics组OD值、存活率水平低于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362inhibitor组OD值、存活率水平高于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。miR-362mimics组克隆形成数目低于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362inhibitor组克隆形成数目高于Hela癌细胞组、miR-362 mimics组(P＜0.05)。miR-362mimics组细胞凋亡率高于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362 inhibitor组细胞凋亡率低于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。miR-362mimics组G₁期高于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362inhibitor组G₁期低于Hela癌细胞组、miR-362 mimics组(P＜0.05)。miR-362 mimics组细胞穿膜数低于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362 inhibitor组穿膜数高于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。miR-362 mimics组miR-362 mRNA表达水平高于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362 inhibitor组miR-362 mRNA表达水平低于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。miR-362 mimics组Six1 mRNA表达水平低于Hela癌细胞组(P＜0.05),miR-362inhibitor组Six1 mRNA表达水平高于Hela癌细胞组、miR-362mimics组(P＜0.05)。结论 miR-362在宫颈癌的发生和发展过程中发挥了肿瘤抑制作用;其机制与miR-362通过负调节Six1抑制癌细胞增殖、迁移和侵袭有关。     

miR-106a下调MAP3K2抑制骨肉瘤细胞增殖的实验研究

目的:探讨miR-106a对骨肉瘤细胞增殖的影响及机制。方法:利用Real-time PCR比较了正常成骨细胞（hFOB11.9）及三种骨肉瘤细胞（MG-63、U-2OS和HOS）中miR-106a的表达情况;将NC（negative control)、miR-106a mimics及miR-106a inhibitor分别转染MG-63细胞;转染后通过CCK-8实验、平板克隆形成实验检测miR-106a对细胞增殖的影响;通过生物信息学软件预测miR-106a的靶基因-蛋白激酶2（MAP3K2）;分别构建MAP3K2 3'-UTR结合区野生型和突变型载体,通过荧光素酶报告基因实验检测miR-106a对MAP3K2的调控;在转染了NC以及miR-106a mimics的MG-63细胞中,利用Western blot检测MAP3K2的蛋白水平。结果:与正常成骨细胞相比,骨肉瘤细胞MG-63、U-2OS和HOS中miR-106a的表达明显降低（P＜0.05）;CCK-8生长曲线表明,转染48、72和96小时后,与NC相比,miR-106a mimics能够显著抑制MG-63细胞的生长（P＜0.05）,而miR-106a inhibitor则能促进肿瘤细胞的生长（P＜0.05）;平板克隆形成实验也表明miR-106a mimics能够抑制MG-63的生长,miR-106a inhibitor发挥相反作用;荧光素酶报告基因实验表明转染了克隆MAP3K2 3'-UTR的荧光素酶质粒组中,荧光素酶活性受到miR-106a mimics的明显抑制（P＜0.05）,而在MAP3K2 3'-UTR突变组中,荧光素酶活性与对照相比无显著差异（P=0.877）;与NC组相比,转染miR-106a mimics后,MAP3K2的表达明显降低（P＜0.05）。结论:miR-106a可能通过下调MAP3K2的表达抑制骨肉瘤细胞的生长。     

miR-106a负调控PTEN促进骨肉瘤细胞增殖并抑制凋亡

目的:研究miR-106a在骨肉瘤组织和MG-63细胞中的表达水平及其对MG-63细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:用荧光实时定量PCR法检测20对骨肉瘤和相邻正常组织及MG-63和成骨细胞hFOB 1.19中miR-106a的表达。用miR-106a mimics、miR-106a antagomir 及两者相应的对照物转染MG-63细胞,然后分别用CCK-8法检测四组细胞增殖活性和FCM法检测细胞凋亡率。miR-106a mimics和mimics control与野生型或突变型PTEN 3'-UTR 重组载体共转染后,应用荧光素酶基因报告系统检测miR-106a是否与PTEN基因3'-UTR 结合。利用Western blot技术检测PTEN蛋白在上述四组转染MG-63细胞和骨肉瘤标本中的表达水平。结果:与相邻正常组织（1.19±0.15）相比,肿瘤组织miR-106a的表达水平（2.60±0.86）显著升高;同时,miR-106a在MG-63中的表达水平（2.60±0.92）明显高于hFOB 1.19（1.19±0.39）,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。CCK-8和FCM检测结果显示,与mimics control组相比,miR-106a mimics组的增殖率明显增加,而细胞凋亡率下降;反之,miR-106a antagomir组与antagomir control组相比,增殖率前者低于后者,而凋亡率前者高于后者,上述差异均有统计学意义（P＜0.05）。荧光素酶报告实验显示,miR-106a mimics和wt PTEN 3'-UTR共转染组的荧光强度值明显低于mimics control和wt PTEN 3'-UTR组（P＜0.05）。Western blot发现,与对照组相比,miR-106a mimics组PTEN表达下调,而miR-106a antagomir表达上调;临床标本,肿瘤组织PTEN表达明显低于正常组织,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:miR-106a在骨肉瘤组织及细胞中过表达,并靶向负调控PTEN表达,促进骨肉瘤细胞增殖并抑制其凋亡,从而发挥促癌作用。因此,miR-106a可为骨肉瘤的诊治提供新的潜在分子靶点。     

沉默PGAM1基因对食管癌细胞生物学功能的影响

目的   探讨沉默磷酸甘油酸变位酶1（PGAM1）基因对食管癌细胞生物学功能的影响及可能机制。方法   收集2016年7月至2017年6月间在我院行手术切除的67例食管癌及对应癌旁正常组织,采用免疫组化SP法检测PGAM1表达并分析其表达与临床病理特征的关系。PGAM1 shRNA（shPGAM1组）或shRNA-NC（NC组）转染至食管癌Eca-109细胞,分析PGAM1基因沉默对Eca-109细胞凋亡和增殖的影响。采用实时荧光定量PCR（QPCR）和Western blotting法检测PGAM1对Akt／mTOR信号通路关键分子的影响。结果   食管癌组织中PGAM1高表达率为58.2％（39／67）,高于癌旁组织的31.3％（21／67）,差异有统计学意义（P＜0.05）。PGAM1表达与临床分期、分化程度、浸润深度有关（P＜0.05）,而与年龄、性别、淋巴结转移等无关（P＞0.05）。shPGAM1组和NC组中PGAM1 mRNA表达量分别为0.48±0.10和1.01±0.14,差异有统计学意义（P＜0.05）。MTT法检测结果 显示,培养24、48、72、96 h后,shPGAM1组Eca-109细胞增殖率分别为（87.65±7.42）％、（79.34±9.11）％、（70.17±6.84）％、（60.36±7.95）％,明显低于NC组,差异有统计学意义（P＜0.05）。48 h后shPGAM1组和NC组的Eca-109细胞凋亡率分别为（45.36±5.38）％和（24.81±4.67）％,差异有统计学意义（P＜0.05）;shPGAM1组和NC组Eca-109细胞培养上清的葡萄糖消耗量分别为（56.84±11.35）％和（99.87±10.48）％,shPGAM1组和NC组Eca-109细胞培养上清的乳酸含量分别为（48.02±10.18）％和（99.00±12.35）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。shPGAM1组细胞的PTEN表达量高于NC组（P＜0.05）,而p-Akt、p-mTOR表达量均低于NC组（P＜0.05）。结论   PGAM1高表达与食管癌的发生、发展有关,通过激活Akt／mTOR信号通路诱导的Warburg效应,促使肿瘤细胞增殖,抑制其凋亡。     

微小RNA-152对乳腺癌细胞增殖及阿霉素敏感性影响的实验研究

目的 探讨微小RNA-152（miR-152）对乳腺癌细胞阿霉素敏感性的影响及其作用机制。方法 采用实时定量PCR（QPCR）检测人乳腺上皮细胞株HBL-100、人乳腺癌MCF-7细胞及阿霉素耐药株MCF-7／ADR细胞中的miR-152水平,分别向MCF-7细胞和MCF-7／ADR细胞转染miR-152模拟物 mimics（过表达组）和阴性对照NC（阴性对照组）,以未行转染为空白对照组。采用QPCR检测转染后MCF-7细胞和MCF-7／ADR细胞中miR-152的表达情况,采用MTT法检测不同浓度阿霉素（10、50、100、200和500 ng/ml）处理后各组的增殖情况,流式细胞术检测转染后各组的凋亡率,Western blotting检测磷脂酰肌醇激酶-3催化亚基α基因（PIK3CA）的蛋白水平,双荧光素酶报告实验评价miR-152对PIK3CA的靶向调控作用。结果 QPCR实验结果 表明MCF-7细胞和MCF-7／ADR细胞中的miR-152水平均低于HBL-100细胞,且MCF-7／ADR细胞的miR-152水平均低于MCF-7细胞,差异有统计学意义（P＜0.05）;过表达组转染后的miR-152水平均高于阴性对照组和空白对照组（P＜0.05）。与其余两组比较,过表达组的存活率降低而凋亡率升高,且PIK3CA蛋白水平也降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。miR-152可抑制野生型PIK3CA 3’ UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型PIK3CA 3’UTR的荧光素酶活性无影响。结论 miR-152表达在乳腺癌细胞中降低,且与阿霉素耐药有关,参与乳腺癌细胞的增殖和凋亡过程,在逆转乳腺癌耐药中发挥重要作用,具有一定价值。     

p21活化酶5预测骨肉瘤化疗敏感性的实验研究

目的 探讨骨肉瘤组织p21活化酶5（PAK5）表达与新辅助化疗敏感性的关系,从细胞水平验证PAK5是否参与调节骨肉瘤细胞化疗敏感性。方法 采用免疫组化法检测74例骨肉瘤患者活检组织中PAK5表达,分析PAK5表达与骨肉瘤临床病理特征的关系。设计合成siRNA-PAK5,分别转染进入Saos-2和MG63细胞,QPCR和Westtem blotting分别检测PAK5 mRNA和蛋白的表达情况。以不同浓度梯度的阿霉素（ADM 50、25、5、05 μmol／L）、甲氨蝶呤（MTX 50、5、1、0.5、0.05 μmol／L）分别处理Saos-2和MG63细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算转染siRNA-PAK5后骨肉瘤细胞半数抑制浓度（IC50）的差异。结果 74例骨肉瘤组织中PAK5阳性57例,阴性17例,PAK5表达与新辅助化疗后肿瘤坏死率及肺转移有关（P＜0.05）。QPCR检测转染组PAK5 mRNA分别水平下降为未转染组29％和31％;Western blotting结果显示转染组PAK5蛋白表达较未转染组下调49％和42％。转染siRNA-PAK5后,ADM作用Saos-2和MG63细胞的IC50分别由（8.35±0.07）μmol／L、（7.35±0.07）μmol／L降至（0.54±0.004）μmol／L、（0.50±0.002）μmol／L （P＜0.05）;MTX作用Saos-2和MG63细胞的IC50分别由（1.255±0.021）μmol／L、（1.05±0.014）μmol／L降至（0.606±0.01）μmol／L、（0.72±0.014）μmol／L （P＜0.05）。结论 骨肉瘤PAK5表达与患者新辅助化疗敏感性相关,抑制骨肉瘤细胞PAK5表达可提高化疗敏感性。     

miR-21靶向Atg5对非小细胞肺癌A549细胞自噬调控促进细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的  探讨miR-21通过靶向作用自噬相关靶基因5（Atg5）调控非小细胞肺癌（NSCLC）自噬的作用机制及其在A549细胞增殖、迁移及侵袭中的作用。方法  无义核酸序列NC（NC组）、miR-21 模拟物（miR-21 mimics组）、miR-21抑制物（miR-21 抑制组）分别转染A549细胞, CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力; Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-21和Atg5之间的靶向关系。Western blotting检测LC3B-II、p62和Atg5蛋白的表达。结果  与NC组比较,miR-21 mimics组细胞增殖、迁移、侵袭能力均上调,miR-21 抑制组细胞增殖、迁移、侵袭能力均下调（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-21显著抑制野生型Atg5 3’-UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性（P＜0.05）,但对突变型Atg5 3’-UTR的基因报告质粒与miR-21 mimics共转染之后,并未对荧光素酶活性产生影响。NC组LC3B-II蛋白表达量为1.24±0.059,低于miR-21 mimics组的1.98±0.077,高于miR-21抑制组的0.52±0.021（P＜0.05）;NC组p62蛋白表达量为0.62±0.021,高于miR-21 mimics组的0.45±0.020,低于miR-21抑制组的0.79±0.031（P＜0.05）;NC组Atg5蛋白表达量为1.17±0.025,高于miR-21 mimics组的0.38±0.014,低于miR-21抑制组的1.40±0.039（P＜0.05）。与NC组比较, 3-MA处理降低miR-21 mimics转染诱导的A549细胞增殖能力（P＜0.05）;划痕实验和Transwell实验表明,3-MA处理抑制了miR-21mimics转染诱导的A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论  miR-21靶向Atg5调控NSCLC自噬促进细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-590靶向SIP1抑制胆管癌细胞上皮间充质转化的实验研究

目的 探讨miR-590在胆管癌细胞上皮间充质转化（EMT）中的作用及可能机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测人正常肝内胆管上皮细胞系HIBEC以及人胆管癌细胞系HUCCT1、HCCC-9810、RBE中miR-590的表达情况。双荧光素酶报告试验评价miR-590对SIP1的靶向调控作用。向HUCCT1细胞转染miR-590 mimics（转染组）和无义核苷酸序列（NC组）,Western blotting 检测两组EMT相关蛋白的表达。向HUCCT1细胞转染SIP1 siRNA,Western blotting 检测干扰SIP1后EMT相关蛋白的表达。结果 HUCCT1、HCCC-9810、RBE细胞系中miR-590水平分别为0.37±0.084、0.31±0.071和0.53±0.089,显著低于人正常肝内胆管上皮细胞系HIBEC的1.12±0.201,差异具有统计学意义（P＜0.05）。miR-590可抑制野生型SIP1 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型SIP1 3’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。转染miR-590 mimics可以下调HUCCT1细胞中Vimentin、N-cadherin、ZEB1、ETS1、SNAIL1及TWIST1蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达。SIP1沉默能上调上皮标志物E-cadherin蛋白表达,并下调间充质蛋白Vimentin和N-cadherin蛋白表达。结论 miR-590通过靶向SIP13’-UTR阻断其翻译,最终抑制胆管癌细胞上皮间充质转化。     

白藜芦醇逆转胃癌细胞对阿帕替尼耐药性的实验研究

目的 探讨白藜芦醇（RES）在胃癌细胞对阿帕替尼耐药性中的影响及可能机制。方法 体外培养胃癌SGC7901细胞和SGC7901／AR耐药细胞,MTT法和划痕实验检测单药不同浓度阿帕替尼或联合RES对SGC7901和SGC7901／AR细胞增殖和迁移的影响,分别计算SGC7901和SGC7901／AR细胞耐药指数、RES的逆转倍数（RF）和相对逆转率（RRR）。采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测上述处理细胞株中miR-122、p-VEGFR2、p-Akt mRNA表达。结果 阿帕替尼显著抑制SGC7901细胞的增殖和迁移能力,并呈浓度依赖性（P＜0.05）,但对SGC7901／AR细胞无影响,耐药指数为15.57;阿帕替尼联合50.0 μmol／L RES可显著抑制SGC7901和SGC7901／AR细胞的增殖和迁移能力,并呈浓度依赖性（P＜0.05）,耐药指数为2.13,RES的逆转倍数为7.91倍,相对逆转率为93.4％。未经处理SGC7901细胞中miR-122、p-VEGFR和p-Akt mRNA表达水平分别为0.74±0.11、0.76±0.13和0.67±0.09,显著高于SGC7901／AR细胞（P＜0.05）;经10 μmol／L阿帕替尼作用后,SGC7901细胞中p-VEGFR2和p-Akt mRNA表达水平显著下降（P＜0.05）。经10 μmol／L阿帕替尼+50.0 μmol／L RES处理后,SGC7901和SGC7901／AR细胞中miR-122表达显著升高（P＜0.05）,而p-VEGFR2和p-AktmRNA表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 RES能逆转胃癌细胞株对阿帕替尼的耐药性,其机制可能通过上调miR-122并抑制VEGFR2和Akt磷酸化水平来实现。     

miR-590靶向SIP1抑制胆管癌细胞上皮间充质转化的实验研究

目的 探讨miR-590在胆管癌细胞上皮间充质转化（EMT）中的作用及可能机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测人正常肝内胆管上皮细胞系HIBEC以及人胆管癌细胞系HUCCT1、HCCC-9810、RBE中miR-590的表达情况。双荧光素酶报告试验评价miR-590对SIP1的靶向调控作用。向HUCCT1细胞转染miR-590 mimics（转染组）和无义核苷酸序列（NC组）,Western blotting 检测两组EMT相关蛋白的表达。向HUCCT1细胞转染SIP1 siRNA,Western blotting 检测干扰SIP1后EMT相关蛋白的表达。结果 HUCCT1、HCCC-9810、RBE细胞系中miR-590水平分别为0.37±0.084、0.31±0.071和0.53±0.089,显著低于人正常肝内胆管上皮细胞系HIBEC的1.12±0.201,差异具有统计学意义（P＜0.05）。miR-590可抑制野生型SIP1 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型SIP1 3’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。转染miR-590 mimics可以下调HUCCT1细胞中Vimentin、N-cadherin、ZEB1、ETS1、SNAIL1及TWIST1蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达。SIP1沉默能上调上皮标志物E-cadherin蛋白表达,并下调间充质蛋白Vimentin和N-cadherin蛋白表达。结论 miR-590通过靶向SIP13’-UTR阻断其翻译,最终抑制胆管癌细胞上皮间充质转化。     

miRNA-93对结肠癌HT-29细胞株化疗敏感性的影响

目的 探讨miR-93与结肠癌HT-29细胞株对氟尿嘧啶（5-FU）敏感性的影响及可能机制。方法 miR-93抑制物转染HT-29细胞,同时设置空白对照组和阴性对照组（NC）,采用MTT法检测细胞增殖活性。流式细胞术、Transwell细胞侵袭实验和划痕实验分别检测miR-93抑制物组、空白对照组和NC组HT-29细胞凋亡、侵袭和迁移。双荧光素酶报告实验验证PTEN与miR-93的关系。采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测3组细胞miR-93表达,以及对p-VEGFR2、p-Akt、PTEN mRNA表达的影响。结果 miR-93抑制物组中miR-93的相对表达量为0.40±0.05,显著低于空白对照组和NC组的1.13±0.08、1.12±0.09,差异有统计学意义（P＜0.05）。经1、4、16、64、256 μg／ml的5-FU处理后,miR-93抑制物组HT-29细胞的增殖抑制率高于同浓度下NC组和空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。经16 μg／ml 5-FU处理后,miR-93抑制物组HT-29细胞凋亡率、侵袭率和愈合率分别为（52.75±7.44）％、（45.76±15.85）％、（12.64±3.29）％,与空白对照组和NC组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验分析PTEN可能是miR-93的下游靶基因。miR-93抑制物组p-VEGFR2、p-Akt和PTEN表达水平分别为1.28±0.09、0.85±0.08、1.22±0.09,与空白对照组和NC组比较,VEGFR2和Akt磷酸化水平下调,PTEN表达上调。结论 下调miR-93可以增加PTEN的表达,抑制VEGFR-2和Akt磷酸化水平,从而提高结肠癌细胞对5-FU的敏感性。