重楼皂苷Ⅱ干预后肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力变化及其与miR-16-5p表达的关系

目的 探讨重楼皂苷Ⅱ对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及其可能的机制。方法 取对数生长期的肺癌A549细胞，分为高浓度组、中浓度组、低浓度组和对照组，分别加入3、2、1μmol/L重楼皂苷Ⅱ及等量二甲基亚砜溶液，干预24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖能力（以细胞增殖活力表示），细胞划痕实验检测细胞迁移能力（以细胞迁移率表示），Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力（以侵袭细胞数表示），Western blotting法检测凋亡相关蛋白[Cleave-Caspase-3、Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶2(MMP-2)]表达，实时荧光定量PCR法检测miR-16-5p表达。取对数生长期的A549细胞，分为miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组和阴性对照组，miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组分别转染含有绿色荧光标记的miR-16-5p inhibitor和miR-16-5p inhibitor NC，并加入2μmol/L重楼皂苷Ⅱ溶液，阴性对照组未进行细胞转染并加入等量二甲基亚砜溶液，干预24 h，参照上法检测...     

茯苓酸对结肠癌细胞增殖凋亡、迁移侵袭及PERK/ATF4信号通路蛋白表达的影响

目的 观察茯苓酸（PA）对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、迁移、侵袭和蛋白激酶RNA样ER激酶（PERK）/转录激活因子4(ATF4)信号通路表达的影响。方法 将SW480细胞分为四组，PA组加入8μmol/L的PA,PA+PERK抑制剂GSK2656157组加入8μmol/L的PA+2μmol/L的GSK2656157, PERK激活剂组加入8μmol/L的CCT020312，对照组用正常培养基培养。培养24 h时采用MTT法测算各组细胞存活率，培养24 h时采用细胞克隆形成实验测算各组细胞克隆数，培养24 h时采用流式细胞仪术测算各组细胞凋亡率，采用Transwell小室观察各组细胞侵袭、迁移情况，采用WESTERN Blotting法检测各组细胞细胞通路相关蛋白（PERK、ATF4）、内质网应激相关蛋白C/EBP同源蛋白（CHOP）、上皮间质转化（EMT）相关蛋白[E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）]。结果 与PA组比较，PA+GSK组细胞存活率及克隆形成数低、细胞凋亡率低、迁移细胞数及侵袭细胞数多（P均<0.05）；与对照组比较，PA组和...     

长链非编码RNA H19对缺血性脑卒中神经元SH-SY5Y细胞活力与自噬影响的探究

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)H19对缺血性脑卒中神经元系SH-SY5Y细胞活力和凋亡的影响,并探究其和神经元自噬过程的相关性。方法选用神经元SH-SY5Y细胞系,进行氧糖剥夺/复氧建模(OGD/R),依据缺氧时间的不同(4h,8h和12h),分为缺氧4h组、缺氧8h组和缺氧12h组,同时建立未经过缺氧处理的对照组(n=3),测定细胞活力,采用实时PCR检测LncRNA H19表达水平。另外,将细胞在普通培养液中培养24h,取对数生长期的SH-SY5Y细胞分为正常对照(N)组、OGD/R组、OGD/R+H19siRNA组以及OGD/R+对照siRNA(NC)组,OGD/R缺氧出时间为8h,采用Western blot检测微管相关蛋白1转链3(LC3)Ⅱ、Beclin1及P62蛋白定量。结果缺氧8h组和缺氧12h组细胞活力明显低于对照组和缺氧4h组,缺氧8h组LncRNA H19表达水平明显低于对照组(P<0.05)。与N组比较,OGD/R组、NC组和H19siRNA组LC3Ⅱ(0.88±0.13、0.90±0.15和0.48±0.05 vs 0.50±0.08,P<0.05)及OGD/R组和NC组Beclin1表达(0.91±0.11和0.86±0.11 vs 0.28±0.04,P<0.05)明显增加,OGD/R组和NC组P62蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(0.50±0.09和0.44±0.08 vs 0.88±0.12,P<0.05)。结论 LncRNA H19的表达上调;LncRNA H19的上调显著增加细胞活性,降低其死亡率;LncRNA H19参与神经元自噬过程,可能对于缺血性脑卒中起保护作用。     

miR-7靶向调控KLF4对结肠癌干细胞生物学行为的影响

目的 探讨微小核糖核酸7(miR-7)靶向调控Krüppe样因子4(KLF4)对结肠癌干细胞生物学行为的影响。方法 体外传代培养结肠癌干细胞。取传15代、对数生长期、生长状态良好的结肠癌干细胞,随机分为对照组、NC mimics组、miR-7 mimics组,NC mimics组和miR-7 mimics组分别转染空载质粒、miR-7 mimics质粒,对照组不予转染。采用RT-qPCR法验证转染效率。收集各组转染48 h结肠癌干细胞,采用CCK-8法检测细胞活力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用改良Boyden小室法检测细胞侵袭能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。通过TargetScan在线网站预测miR-7与KLF4的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-7对KLF4的靶向调控作用。收集各组转染48 h结肠癌干细胞,分别采用RT-qPCR法、Western blotting法检测KLF4 mRNA和蛋白表达。结果 miR-7 mimics组miR-7相对表达量高于对照组和NC mimics组（P均<0.05）,而对照组与NC mimics组比较差异无统计学意...     

卡维地洛通过PI3K/AKT/GSK3β信号通路对H9c2缺氧/复氧损伤的保护

目的:研究卡维地洛预处理对缺氧/复氧诱导的大鼠心肌细胞保护作用及其机制。方法:对大鼠心肌细胞株(H9c2)进行缺氧/复氧(6h/2h),模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,将H9c2细胞随机分成四组:正常对照组(control组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧/复氧+卡维地洛预处理组(H/R+CAR组)、缺氧/复氧+卡维地洛+PI3K/AKT阻滞剂LY294002组(H/R+CAR+LY294002组);分别采用MTT法检测心肌细胞活力,流式细胞仪法检测心肌细胞活性氧(ROS)水平,Western免疫印迹法检测心肌细胞Caspase-3、p-AKT、p-GSK3β蛋白表达情况。结果:与正常组相比,H/R组细胞活力下降,ROS水平升高,Caspase-3表达明显增多;经卡维地洛预处理后,细胞活力明显提高、p-AKT、p-GSK3β磷酸化水平较H/R组显著增加,ROS水平明显降低,而加入PI3K/AKT阻滞剂LY294002后卡维地洛的上述作用显著减弱。结论:卡维地洛预处理能显著减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤,对心肌细胞具有明显的保护作用,其可能的作用机制是通过激活PI3K/AKT/GSK3β通路而提高AKT、GSK3β磷酸化水平,减少ROS产生,增加细胞的活性而实现的。     

自噬及凋亡相关蛋白在PC12细胞缺糖缺氧过程中的表达及其意义

目的 探讨自噬及凋亡相关蛋白在PC12细胞缺糖缺氧(OGD)过程中的表达及其意义.方法 将PC12 细胞分为正常对照组、缺糖缺氧1、4和12 h组.MTT法检测细胞存活率,Western印迹法检测各组PC12细胞中BECN1、Bcl-2及Bax蛋白的表达水平.结果 与正常对照组相比,OGD 1及4 h组PC12细胞存活率下降(均P<0.05),BECN1蛋白表达升高,且Bcl-2/Bax比值升高;而与缺糖缺氧1和4 h组相比,OGD 12 h组细胞存活率明显下降(P<0.01),BECN1蛋白表达及Bcl-2/Bax比值亦明显降低.结论 自噬蛋白BECN1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax参与了PC12细胞OGD损伤过程.在OGD早期,自噬起主要作用,并对OGD PC12细胞起一定的保护作用,随着OGD时间的延长,凋亡在其中占主导地位,促进凋亡蛋白表达,引起PC12细胞的死亡.     

Toll样受体4信号通路在心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤中的变化

目的:探讨Toll样受体4(TLR-4)信号通路在心肌微血管内皮细胞(CMECs)缺氧-复氧(H-R)损伤过程中表达的变化。方法:采用体外培养的CMECs,分为正常组、H-R组,其中H-R组根据复氧时间又分为复氧2 h、12 h及24 h组,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测内皮细胞增殖的能力。取细胞上清液用ELISA法检测白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;用Western blot法检测各组细胞中TLR-4及核因子-κB(NF-κB)表达的水平。结果:与正常对照组相比,缺氧6 h复氧2 h、12 h、24 h后CMECs增殖分别降低48.6%(P0.01)、49.1%(P0.01)、63.2%(P0.01);TLR-4蛋白水平在复氧2 h以及12 h后明显升高(P0.05),24 h基本恢复正常;NF-κB表达水平在复氧2 h、24 h显著高于对照组(P0.05);而CMECs复氧2 h、12 h、24 h后分泌的IL-6、TNF-α水平均高于对照组(P0.05)。结论:在CMECs H-R损伤中,TLR-4及下游NF-κB的表达增加,炎性因子IL-6和TNF-α的分泌增加,说明H-R损伤可激活CMECs表面的TLR-4信号通路,这一过程可能参与了H-R诱导的CMECs损伤。     

EGCG单用/与CAR-T疗法联合应用对Raji细胞杀伤、THP-1细胞炎症因子mRNA表达抑制作用

目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）单用/与嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法联合应用对人Burkitt’s淋巴瘤细胞株Raji杀伤、人单核细胞白血病细胞系THP-1炎症因子mRNA表达抑制作用。方法 取对数生长期的Raji细胞，并分为4组，对照组为单纯Raji细胞，Raji+CAR-T组加入CAR-T,Raji+EGCG组加入EGCG,Raji+CAR-T+EGCG组加入CAR-T和EGCG，荧光素酶化学发光法和Annexin V-FITC染色法检测各组细胞相对活力及杀伤效率；取对数生长期的人单核细胞白血病细胞（THP-1细胞），并分为对照组、模型组、EGCG组，其中模型组和EGCG组加入LPS（终浓度1μg/mL）诱导炎症模型，同时EGCG组加入EGCG（浓度为100μmol/mL）干预，采用实时荧光定量PCR法检测COX-2、IL-6、IL-8、TNF-α mRNA相对表达量。结果 Raji+CAR-T+EGCG组、Raji+EGCG组、Raji+CAR-T组、对照组细胞相对活力分别为52.93±4.61、91.67±6.79、51.26±2.61、100.00±5....     

茯苓酸对人骨肉瘤细胞系MG-63的增殖凋亡、迁移侵袭影响及PERK/CCAAT信号通路调控作用

目的 观察茯苓酸（PA）对人骨肉瘤细胞系MG-63增殖、迁移、凋亡和侵袭的影响，并探讨PA对蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）信号通路的调控作用。方法 体外培养MG-63细胞，分为对照组、低浓度PA组（PA-L组）、中浓度PA组（PA-M组）、高浓度PA组（PA-H组）、高浓度PA+蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）抑制剂GSK2606414组（PA-H+GSK2606414组），PA-L组、PA-M组及PA-H组分别用含20、40及80μmol/L PA的培养基培养，PA-H+GSK2606414组用含80μmol/L的PA和5μmol/L的GSK2606414培养基培养，对照组用空白培养基培养。分别于培养24、48、72 h时采用MTT法观察各组细胞增殖情况；培养24 h时采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移情况；培养48 h时采用Transwell实验观察各组细胞侵袭情况；培养48 h时采用流式细胞术测算各组细胞凋亡率；培养48 h时，采用RT-qPCR法检测PERK及CHOP的mRNA表达，并采用WESTERN Blotting法检测P...     

富氢生理盐水对烟雾吸入所致大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 观察富氢生理盐水对烟雾吸入所致大鼠急性肺损伤的保护作用.方法 雄性Sprague-Dawlay大鼠72只,随机分为空白对照组18只,损伤对照组18只,生理盐水组（NS组）18只和富氢生理盐水组（HS组）18只.损伤对照组、NS组、HS组制作烟雾吸入性急性肺损伤模型,空白对照组不做特殊处理.造模成功后,损伤对照组不注射任何药物,NS组、HS组分别于造模后2、6、12 h各取6只大鼠腹腔注射5 mL/kg生理盐水和富氢生理盐水.造模24h后检测各组大鼠血清TNF-α,采用免疫组化法检测大鼠肺组织中的NF-κB p65,原位末端标记法（TUNEL）检测肺组织细胞凋亡情况,计算凋亡指数（AI）.光镜下观察大鼠肺组织病理改变,透射电子显微镜观察肺组织亚细胞结构改变.结果 大鼠血清TNF-α水平、肺组织中NF-κB p65阳性表达率、肺细胞AI在损伤对照组、NS组及HS组均高于空白对照组,HS组低于相应时点的NS组（P均＜0.05）;HS组造模后2h肺细胞AI＜造模后6h＜造模后12h（P均＜0.05）,光镜及电镜观察结果与之一致.结论 富氢生理盐水对大鼠烟雾吸入性急性肺损伤的肺组织有保护作用,应用越早,效果越好.     

维拉帕米对大鼠胰腺腺泡细胞内游离钙离子浓度的影响及对胰腺细胞保护作用的研究

目的对缺氧再复氧引起胰腺腺泡细胞损伤的机制及维拉帕米的保护作用进行研究.方法通过对离体胰腺腺泡细胞给予缺氧再复氧处理,观察不同阶段胰腺腺泡细胞的存活率,脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的变化.同时应用显微荧光分光光度计和图象分析系统检测被荧光标记物标记的细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的变化.结果对照组4h细胞存活率为78.09%,缺氧组4h细胞存活率54.50%(P<0.05),缺氧3h再复氧1h细胞存活率为35.90%(P<0.01),缺氧3h再复氧1h,细胞内[Ca]i较对照组明显升高(P<0.01).缺氧再复氧组MDA含量较对照组明显增多(P<0.01),且高于缺氧组(P<0.05).用药组细胞存活单比非用药组明显升高(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05),细胞内[Ca2+]i;含量明显减少(P<0.05).结论缺氧再复氧可引起大鼠胰腺腺泡细胞明显损伤,细胞死亡率上升.比单纯缺氧造成的急性损伤更为严重.脂质过氧化反应的增加和细胞内[CA2+]i超载是胰腺腺泡细胞损伤和死亡的重要原因.维拉帕米可以减少腺泡细胞脂质过氧化反应并减少细胞内[Ca2+]i超载.     

雷帕霉素对氧化应激引起脊髓损伤的作用及机制

目的研究雷帕霉素(Rap)对氧化应激引起脊髓损伤的作用及机制。方法选取对数生长周期的PC12细胞,分为正常组;PC12+过氧化氢(H_2O_2)组(损伤组);PC12+H_2O_2+Rap组(Rap组)。应用MTT法检测细胞存活率变化;MDC法观察细胞自噬泡改变;Western印迹法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达改变;活性氧簇(ROS)染色法观察细胞活性氧改变。结果与损伤组比较,Rap组细胞活力增强,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ高表达,细胞内自噬泡颗粒荧光强度增加,ROS荧光强度明显减弱。结论 Rap预处理的PC12细胞氧化应激损伤后,LC3-Ⅱ高表达,上调了细胞自噬水平,减少了线粒体的损伤,增加了细胞活力,具有神经细胞保护作用。     

迷迭香酸通过核转录因子-κB信号通路对抗谷氨酸诱导PC12细胞损伤

目的观察迷迭香酸(RA)对抗谷氨酸诱导的PC12细胞损伤发挥神经保护作用,探讨其机制是否与NF-κB信号通路相关。方法将培养细胞分为对照组、损伤组(16 mmol/L谷氨酸)、RA1组(30μmol/L RA+16 mmol/L谷氨酸)、RA2组(60μmol/L RA+16 mmol/L谷氨酸)。采用MTT法检测细胞活力;Hoechst33258荧光染色观察细胞核形态的改变,碘化丙啶染色流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达水平的变化。结果不同浓度谷氨酸(0、4、8、12、16、20 mmol/L)作用PC12细胞24 h后,细胞存活率呈剂量依赖性下降。与损伤组比较,RA1组和RA2组细胞存活率明显升高(P<0.05)。16 mmol/L谷氨酸作用PC12细胞1 h后,细胞质中IκBα蛋白和NF-κB p65蛋白表达明显减少,p-IκBα蛋白表达明显增加,NF-κB p65蛋白在细胞核中表达明显增加,2 h达到高峰;给予30、60μmol/L RA预处理1 h后,能抑制NF-κB p65蛋白活化进入细胞核。结论 RA通过抑制NF-κB信号通路的活化,对谷氨酸诱导损伤的PC12细胞有保护作用。     

刺囊酸对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究刺囊酸预处理对原代培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP 89 kDa)表达的影响.方法 实验随机分为6组:对照组,缺氧复氧损伤组,缺氧预处理组及低、中、高剂量刺囊酸组(0.5 μmol/L、5μmol/L和50 μmol/L),分别予以缺氧3h后再复氧2h,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western Blot杂交法检测心肌细胞Bcl-2、Bax及PARP(89 kDa)蛋白表达变化.结果 与对照组比较,缺氧复氧损伤组心肌细胞Bcl-2蛋白表达显著低于对照组(P＜0.01),Bax蛋白及PARP(89 kDa)表达显著高于对照组(P＜0.01),细胞存活率明显低于对照组(P＜0.05).与缺氧复氧损伤组比较,不同剂量的刺囊酸预处理能显著提高细胞存活率,降低LDH活性,呈剂量依赖性;中剂量刺囊酸显著增加Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),抑制Bax及PARP(89 kDa)蛋白表达(P＜0.05).结论 刺囊酸预处理可通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制PARP(89 kDa)及Bax蛋白表达,抑制细胞凋亡,对抗心肌细胞缺氧复氧损伤.     

α-硫辛酸通过mTOR通路抑制缺血再灌注诱导的PC12细胞自噬性凋亡

目的研究α-硫辛酸(LA)对PC12细胞缺血再灌注损伤的保护作用及其分子机制。方法传代培养PC12细胞,PC12细胞缺氧/复氧(氧糖剥夺4 h,复氧18 h)模拟缺血再灌注损伤模型。实验分为正常组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+α-LA、缺氧/复氧+自噬抑制剂巴弗洛霉素(Baf)A1组。CCK8筛选α-LA的有效作用浓度;流式细胞术检测细胞凋亡变化;Western印迹检测细胞促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、酶切caspase-3、自噬标志分子SQSTM-1/P62、LC3-Ⅱ/Ⅰ及mTOR通路的表达变化。结果缺氧/复氧显著降低PC12细胞的存活率(P<0.05),Western印迹结果显示Bax、酶切caspase-3、LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达水平均显著升高(P<0.05),P62和p-mTOR的表达水平降低(P<0.05);与缺氧/复氧组比较,给予α-LA和Baf A1均能显著降低缺氧/复氧诱导的凋亡水平(P<0.05)。结论α-LA通过抑制缺氧/复氧诱导的过度自噬进而减少过度自噬诱导的细胞凋亡。     

毛兰素对人肝癌细胞系HEPG2增殖、迁移、凋亡和上皮间质转化的影响及其机制

目的 观察毛兰素对人肝癌细胞系HEPG2增殖、迁移、凋亡和上皮间质转化的影响，并探讨其机制。方法取对数生长期HEPG2细胞分为对照组、毛兰素组、毛兰素+pc-DNA组、毛兰素+pc-Snail组：对照组仅为HEPG2细胞，毛兰素组加入40 nmol/L的毛兰素，毛兰素+pc-DNA组转染空白对照质粒pc-DNA并加入40 nmol/L的毛兰素，毛兰素+pc-Snail组转染Snail过表达质粒pc-Snail并加入40 nmol/L的毛兰素。各组细胞继续培养24 h后，采用平板克隆法观察各组细胞增殖能力，以细胞克隆个数表示；采用Transwell小室法观察各组细胞迁移能力，以细胞迁移个数表示；采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率；采用Western blotting法检测各组细胞Snail蛋白、凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2）、间质转化相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）。结果 对照组、毛兰素组、毛兰素+pc-DNA组、毛兰素+pc-Snail组细胞克隆个数分别为（109.17±6.98）、（47.50±5.04）、（41.67±4.92）、（82.3...     

白血病抑制因子对K62细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的 探讨白血病抑制因子(LIF)体外对K562细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法 取对数生长期K562细胞接种于96孔板中,随机分为对照组和观察1～3组,分别加入质量浓度为0、5、10、40μg/L的重组人LIF,继续培养6、12、24、48 h;应用MTT法、Hoechst染色法观察各组K562细胞增殖活性、凋亡率,采用免疫组化法检测观察3组和对照组p53蛋白表达情况.结果 观察1～3组不同时间细胞增殖活性均显著低于对照组,且观察1组＞观察2组＞观察3组、6 h＞12 h＞24 h＞48 h(P均＜0.05);观察1～3组不同时间细胞凋亡率均显著高于对照组,且观察1组＜观察2组＜观察3组、6 h＜12 h ＜24 h＜48 h(P均＜0.05);观察3组各时间点p53蛋白阳性表达率均明显高于对照组,且6 h＜12 h＜24 h＜48 h(P均＜0.05).结论 LIF能以浓度—时间依赖性抑制K562细胞 增殖并诱导其凋亡,机制可能为上调p53蛋白表达.     

川芎嗪对皮肤鳞癌A431细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察川芎嗪(TMP)对皮肤鳞状细胞癌(CSCC) A431细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将对数生长期A431细胞分为4组,对照组常规培养、不干预,TMP组予1 mg/mL TMP,博来霉素(BLM)组予8μg/mL BLM,联合组予1 mg/mL TMP+8μg/mL BLM,每组设6个平行孔,孵育48 h,MTF法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测A431细胞凋亡率,Western blot法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达.结果 与对照组比较,TMP组、BLM组、联合组细胞存活率降低(P均＜0.05);与BLM组比较,联合组细胞存活率降低(P均＜0.05);与对照组比较,TMP组、BLM组、联合组细胞凋亡率升高(P均＜0.05);与BLM组比较,联合组细胞凋亡率升高(P＜0.05);与对照组比较,TMP组、BLM组、联合组Caspase-3水平升高(P均＜0.05);与BLM组比较,联合组Caspase-3水平升高(P＜0.05);与对照组比较,TMP组、联合组P-gp水平降低(P均＜0.05);与BLM组比较,联合组P-gp水平降低(P均＜0.05).结论 TMP能抑制皮肤鳞癌A431细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与降低P-gp、升高Caspase-3表达水平有关.     

脂多糖诱导原代培养肝实质细胞与库普弗细胞表达和释放高迁移率族蛋白B1

目的观察LPS诱导HMGB1在肝实质细胞（HC）与库普弗细胞（KC）的表达和细胞外释放。方法培养瓶中分别培养原代HE和KC,24h后收获对照组和500μg/L LPS诱导组两种细胞,反复冻融,用半定量RT-PCR和Western blot法检测HMGB1 mRNA水平和HMGB1表达水平;接种原代HC和KC于24孔板中,继续培养6、12、24h和48h,Western blot法检测各时间点对照组和LPS诱导组培养液中HMGB1含量。结果LPS诱导24h后,与相应对照组比较,HC和KC中HMGB1 mRNA表达水平明显增强（t值分别为31.32和45.90,P值均〈0.05）,HMGB1表达水平也明显增强（t值分别为46.19和38.44,P值均〈0.05）;在6、12、24h和48h,对照组两种细胞及诱导组HC培养上清液中仅检测到少量HMGB1,延长培养时间,培养上清液中HMGB1含量无明显变化（F=1.61,P〉0.05）;与对照组比较,诱导组KC培养液中的HMGB1含量在6h无显著增加（t=1.48,P〉0.05）,但随培养时间延长,其含量明显增高（F=42.74,P〈0.05）,且在12、24h和48h均明显高于对照组（t值分别为21.95,32.39和44.16,P值均〈0.05）。结论LPS可诱导HC和KC中HMGB1表达增强,HC不主动释放HMGB1,而KC能主动释放HMGB1到细胞外。     

miR-181a调控海马神经元突触生长在癫痫发生中的作用及机制

目的探讨miR-181a调控海马神经元突触生长在癫痫发生中的作用及机制。方法从出生24 h内的SD大鼠分离海马神经元进行原代培养,将miR-181a-mimic、miR-181a-inhibitor及scramble miRNA转染到神经元细胞内,未转染组作为对照组,各组细胞培养24 h后,免疫荧光检测突触的长度及数目;将后续实验分为对照组、无镁组及无镁+miR-181a-mimic组,脱氧核苷酸转移酶介导三磷酸脱氧乌苷-生物素刻痕末端标记法(TUNEL)检测阳性细胞率;乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞毒性;根据标准曲线计算培养液中的NAD~+含量;Western印迹检测蛋白激酶B(Akt)和糖原合酶激酶(GSK3β)磷酸化蛋白及总蛋白的表达。结果 miR-181a-mimic组海马神经元细胞突触的长度及分支数均显著低于对照组,而miR-181a-inhibitor组海马神经元细胞突触的长度及分支数均显著高于对照组(P<0.01)。scramble miRNA不影响突触的生长;无镁+miR-181a-mimic组在1 h和24 h的阳性细胞率均显著低于无镁组(P<0.01)。无镁24 h组和无镁+miR-181a-mimic组细胞漏出率均显著高于对照组,NAD~+含量显著低于对照组(P<0.01),而无镁+miR-181a-mimic组细胞漏出率显著低于无镁24 h组,NAD~+含量显著高于无镁24 h组(P<0.01);无镁24 h组Akt和GSK3β磷酸化蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),无镁+miR-181a-mimic组Akt和GSK3β磷酸化蛋白表达显著高于对照组及无镁24 h组(P<0.01);Akt和GSK3β总蛋白表达在三组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-181a影响海马神经元突触生长,并通过调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路降低神经元细胞的凋亡及细胞漏出率,提高NAD~+含量对癫痫起保护作用。