敲低Wnt7a抑制卡介苗诱导的小鼠肺泡上皮细胞自噬

目的 探究无翅基因7a(Wnt7a)对牛结核分枝杆菌卡介苗(BCG)感染的肺泡上皮细胞自噬水平的调控作用。方法使用干扰Wnt7a慢病毒及BCG单独作用或共处理TC-1小鼠肺泡上皮细胞,设置小干涉RNA对照(si-NC)组、 si-NC联合BCG组、 Wnt7a小干涉RNA(si-Wnt7a)组和si-Wnt7a联合BCG组。Western blot法检测Wnt7a、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、 P62及自噬相关基因5(ATG5)蛋白表达水平,利用免疫荧光细胞化学染色检测LC3的分布以确定细胞自噬情况。结果 与si-NC组相比,BCG感染的TC-1细胞Wnt7a、 LC3和ATG5蛋白表达均升高、 LC3绿色荧光斑点亮度与分布显著增加;与BCG组感染的TC-1细胞相比,si-Wnt7a联合BCG组Wnt7a、 LC3、 P62及ATG5蛋白表达均显著降低,LC3绿色荧光斑点亮度与分布显著降低。结论 敲低Wnt7a抑制BCG诱导的肺泡上皮细胞自噬。     

LncRNA MINCR靶向miR-223抑制LPS诱导的人肺泡上皮细胞系A549损伤和炎性反应

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MINCR靶向调节微小RNA(miR)-223对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系损伤和炎性反应的影响。方法 将人肺泡上皮细胞系A549随机分为对照组、LPS组、LPS+转染组(Si NC组、Si MINCR组、miR-223 NC组、miR-223 mimic组、Si NC+miR-223 NC组、Si NC+miR-223 antagomir组、Si MINCR+miR-223 NC组、Si MINCR+miR-223 antagomir组)。RT-qPCR检测MINCR、miR-223表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证MINCR与miR-223的靶向关系;Western blot检测细胞中活化的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果 MINCR和miR-223存在靶向关系。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率、TNF-α、IL-6水平、MINCR、...     

同型半胱氨酸通过激活beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)促进人肝细胞自噬

目的 探讨beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)在同型半胱氨酸(Hcy)引起肝细胞自噬中的作用。方法 体外培养肝细胞,分为对照组(0μmol/L Hcy处理)和100μmol/L Hcy处理组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3BⅡ、 LC3BⅠ)的表达水平;使用(0、 25、 50、 100)μmol/L氯喹(CQ)处理肝细胞,CCK-8法检测CQ对肝细胞增殖的抑制作用,Western blot法检测LC3B和AMBRA1的表达;采用AMBRA1小干扰RNA感染肝细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot法检测肝细胞AMBRA1表达干扰效率。敲低AMBRA1后肝细胞用Hcy处理,Western blot法检测LC3B蛋白表达水平,转染表达双荧光蛋白和LC3的腺病毒(mRFP-GFP-LC3),激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬流的变化。结果 与对照组相比较,Hcy处理组LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值升高;50μmol/L CQ对肝细胞增殖的抑制率接近于50%;与对照组相比,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值、 AMBRA1的表达明...     

敲低线粒体转录因子A(TFAM)抑制人宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞自噬及增殖、侵袭和迁移

目的 研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法 HeLa、 U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(MMP)、 MitoSOX^TM Red标记法检测线粒体活性氧(mtROS)水平、实时定量PCR检测线粒体DNA(mtDNA)的表达,免疫荧光细胞化学染色检测自噬体数量的变化。Western blot法检测TFAM、微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、自噬相关基因2A(ATG2A)、 ATG2B、 ATG9A、锌指转录因子Snail、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的表达。CCK-8法、平板集落形成实验检测细胞增殖,Transwell^TM实验、划痕愈合实验检测细胞侵袭、迁移的变化。结果 下调TFAM表达导致HeLa及U2OS细胞MMP减少,mtDNA拷贝数减少,mtROS产生量增加。LC3A/B蛋白含量较对照组明显下降,胞质内自噬体数量明...     

四川新康温石棉通过活性氧/c-Jun氨基末端激酶(ROS/JNK)通路诱导A549细胞凋亡北大核心CSCD

目的研究活性氧/c-Jun氨基末端激酶(ROS/JNK)途径在四川新康温石棉诱导A549人肺上皮细胞凋亡过程的作用。方法采用(12.5、25、50、100、200)μg/m L温石棉作用A549细胞24 h,MTT法检测细胞存活率;设置ROS抑制组,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡、JC-1标记检测线粒体膜电位、二氯二氢荧光黄乙酰乙酯(DCFH-DA)负载检测ROS水平,Western blot法检测磷酸化的c-JNK1(p-JNK1)、p-JNK2、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)蛋白水平。结果随着温石棉剂量增大,细胞存活率下降,温石棉半数抑制剂量为223.43μg/m L;细胞凋亡率呈现剂量-效应关系,胞内ROS水平升高,p-JNK1、p-JNK2、c-caspase-3蛋白水平明显上调,线粒体膜电位降低;与相同剂量温石棉组比较,ROS抑制剂能显著抑制细胞凋亡,降低ROS水平,减少线粒体膜电位的降低程度,并下调p-JNK1、p-JNK2和c-caspase-3蛋白的表达。结论四川新康温石棉可能通过ROS/JNK途径诱导A549细胞发生凋亡。     

尿石素A(urolithin A)通过激活Nrf2通路和自噬抑制高脂诱导的肝细胞炎症反应及氧化应激

目的 研究尿石素A(UA)对高脂诱导的肝细胞炎症以及脂肪堆积的作用及机制.方法 采用核因子E2相关因子2(Nrf2)短发夹RNA (shRNA)慢病毒感染,建立稳定敲减Nrf2的L02肝细胞系.空载体对照细胞及敲低Nrf2的L02细胞给予游离脂肪酸(FFA)建立高脂细胞模型、BODIPY493/503染色检测细胞内脂肪...     

二甲双胍对H2O2诱导的肺泡上皮细胞的炎症反应及增殖、凋亡的作用研究

目的 探究二甲双胍通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人肺泡上皮细胞炎症反应、增殖、凋亡的影响。方法 体外培养人肺泡上皮细胞A549并建立H₂O₂损伤细胞模型,分为对照组(不做干预)、H₂O₂组(以400μmol/L H₂O₂刺激A549细胞24 h构建体外急性肺损伤细胞模型)、1.25 mmol/L二甲双胍组(H₂O₂组基础上加入1.25 mmol/L二甲双胍)、2.50 mmol/L二甲双胍组(H₂O₂组基础上加入2.5 mmol/L二甲双胍)、5.00 mmol/L二甲双胍组(H₂O₂组基础上加入5.00 mmol/L二甲双胍)、SB 203580组(H₂O₂组基础上加入10 mmol/...     

下调PHLPP1表达通过激活PI3K/AKT/mTOR通路改善高糖诱导的人足细胞自噬抑制和凋亡促进作用

目的 研究富含亮氨酸重复序列的普列克底物蛋白同源结构域蛋白磷酸酶1(PHLPP1)在糖尿病肾病(DN)肾组织的表达及其对足细胞自噬、凋亡的影响并初步探究其相关作用机制.方法 采用免疫组织化学检测DN肾组织及非糖尿病肾组织PHLPP1表达,免疫荧光组织化学染色检测肾病蛋白(nephrin)、PHLPP1的共表达以确定PH...