Ⅳ型胶原蛋白NC1片段在精子发生及血睾屏障中作用的研究进展

在哺乳动物睾丸中，位于生精上皮基底膜附近的血睾屏障(blood-testis barrier, BTB)对精子发生至关重要。BTB由相邻的支持细胞(Sertoli细胞)连接而成，将生精上皮分为靠近基底膜的“基底室”和靠近生精小管管腔的“近腔室”,为精子发生提供了免疫屏障。Ⅳ型胶原蛋白是基底膜的重要组成成分，啮齿类动物的睾丸中Ⅳ型胶原蛋白主要是由3条α3链组成的三螺旋结构。大鼠睾丸的Ⅳ型胶原蛋白α3链C端可以水解成大小为28 ku的蛋白片段，称为C端非胶原结构域(noncollagenous domain-peptide, NC1片段)。NC1片段作为一种基底膜源性多肽在参与精子发生与维系BTB功能方面发挥了重要作用。本文通过分析、总结近期研究结果，概述Ⅳ型胶原蛋白NC1片段在睾丸中的作用及其机制，尤其是其在精子发生与BTB中作用的研究进展。     

高脂饮食诱导小鼠血糖增高损伤睾丸微血管功能

目的观察高脂饮食诱导C57BL/6雄性小鼠血糖升高对睾丸微血管功能及雄性生殖的影响。方法将小鼠随机分为对照组(control)和高脂组(HFD),各20只。HFD组高脂饮食20周,每周测血糖及体质量;腹腔注射伊文思蓝观察血睾屏障通透性;激光多普勒检测睾丸微循环血流量及微血管自律运动频率和振幅;HE染色观察睾丸组织形态;免疫组化检测睾丸微血管血小板内皮细胞黏附分子-1(CD31)及生精细胞增殖细胞核抗原PCNA表达;TUNEL染色法观察生精细胞凋亡。结果 HFD组小鼠体质量及血糖均高于对照组(P<0.01);血睾屏障完整性破坏,生精小管通透性增高;睾丸平均血流灌注水平及微血管自律运动频率和振幅均低于对照组(P<0.01);生精上皮细胞数量减少、生精上皮变薄;微血管内皮细胞CD31及生精细胞PCNA表达水平均低于对照组(P<0.01);生精细胞凋亡水平高于对照组(P<0.01)。结论高脂饮食可诱导小鼠血糖水平增高致睾丸微血管损伤破坏血睾屏障完整性使小鼠生精上皮结构受损。     

吗啡依赖对小鼠睾丸组织的影响及其相关机制分析

为了解吗啡依赖对小鼠睾丸发育及其功能的影响 ,研究了吗啡依赖对睾丸生精细胞凋亡的影响及其可能机制。以剂量递增法皮下注射吗啡建立吗啡成瘾小鼠模型 ,用纳洛酮催促戒断 ,观察戒断症状 ,采用原子吸收、放射免疫分析和原位缺口平移 (ISNT)技术观察睾丸细胞锌和钙调素 (CaM)含量、睾丸超氧歧化酶 (SOD)、还原型谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)活性和睾丸组织中凋亡细胞数目。结果表明 ,与对照组相比 ,吗啡依赖组和纳洛酮催促戒断组躯体运动神经功能和植物神经功能亢进 ,睾丸锌和CaM含量减少 ,睾丸SOD、GSH Px活性降低 ,睾丸组织中生精细胞凋亡数目明显增多 (P <0 0 5或P <0 0 1)。吗啡依赖小鼠可诱导睾丸组织中细胞凋亡 ,这种变化可能与睾丸组织中锌和CaM含量减少、睾丸SOD和GSH Px活性降低有关。     

褪黑激素对小鼠睾丸生精细胞凋亡和睾丸间质细胞nNOS表达的影响

目的：观察外源性褪黑激素(MT)对睾丸生精细胞凋亡和nNOS表达的影响，探讨MT诱导生精细胞凋亡的可能机制。方法：20d和30d小鼠，应用化学发光法检测血清睾酮浓度，TUNEL测定生精细胞凋亡，免疫组化，SABC法观察nNOS在睾丸中的表达。结果：20d和30d实验组血清中睾酮水平明显下降，TUNEL阳性生精细胞数显著增多，TUNEL阳性生精细胞数与睾酮浓度呈负相关；20d实验小鼠中睾丸间质nNOS阳性细胞数与对照组相比明显减少，且与睾酮浓度呈正相关，而与TUNEL阳性生精细胞数呈负相关。结论：MT具有促进生精细胞凋亡的作用，与睾酮分泌受抑制有关；青春期前MT引起生精细胞凋亡可能还与nNOS表达有关。     

细胞色素C和波形蛋白在染锰大鼠睾丸表达及对精子发生的抑制作用

目的研究氯化锰对大鼠生精细胞细胞色素C(cyto-c)和支持细胞波形蛋白(VM)表达的影响及对生精功能的抑制效应。方法雄性SD大鼠随机分为空白对照组,低剂量(15 mg/kg Mn Cl2)和高剂量(30 mg/kg Mn Cl2)组,8只/组。Mn Cl2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,取睾丸免疫组织化学(SABC)法检测生精细胞cyto-c和VM表达,测定睾丸脏器系数,取附睾检测精子数量和精子畸形率。结果与空白对照组比较,各染锰组生精细胞cyto-c阳性细胞率和支持细胞VM阳性细胞率及各生精功能指标均显著降低,并呈一定的时间-效应关系和剂量-效应关系。各组大鼠精子数量与cyto-c阳性细胞率和VM阳性细胞率均呈正相关。结论锰可诱导大鼠生精细胞cyto-c和支持细胞VM表达,抑制生精细胞增殖,产生生殖毒性效应。     

睾丸支持细胞免疫豁免研究进展及其应用

由于独特的免疫豁免能力和有效的固有免疫调控作用,哺乳动物的睾丸拥有特殊的免疫环境。睾丸免疫豁免功能使具有免疫原性的生殖细胞免受免疫系统攻击,而局部固有免疫则在抵御病原微生物感染中发挥作用。睾丸免疫稳态遭到破坏可引起睾丸炎症,甚至男性不育。拥有复杂三维结构的睾丸支持(Sertoli)细胞是睾丸的重要组成细胞,除参与组建精原细胞生长微环境,还通过分泌多种细胞因子和免疫抑制因子调节免疫反应以维持免疫稳态。Sertoli细胞的免疫豁免特性为细胞、组织和器官的替代治疗提供了新思路。文章综述了Sertoli细胞免疫豁免机制的研究进展及其应用。     

睾丸支持细胞的骨架和功能

Sertoli细胞自1865年被发现以来,一直被认为是男性生殖系统的重要组成部分。形态及功能的研究表明,除对生殖细胞的支持和营养外,Sertoli细胞还具有构成血—睾屏障、形成睾丸内微环境调节精子发生,吞噬细胞残体,产生类固醇类物质及分泌多种肽类物质调节生殖的功能。这使对Sertoli细胞的认识远远超出了单纯支持的概念。近年来细胞生     

Dahl高血压大鼠睾丸中eNOS的表达

目的：研究高血压对Dahl高血压大鼠睾丸各细胞eNOS表达及生殖功能的影响。方法：应用免疫组化ABC法及细胞培养检测睾丸细胞中eNOS的表达情况。结果：在Dahl高血压大鼠睾丸中，eNOS定位于Sertoli细胞，Leyaig细胞和部分生精细胞的胞浆，其表达始终高于正常睾丸组织，并随着高血压病程的进展呈逐渐升高趋势。在体外培养的正常及高血压大鼠的Sertoli细胞中eNOS表达量无明显差异。睾酮水平随血压升高而下降。结论：高盐饮食及高血压使大鼠Serxoli细胞和Leydig细胞中eNOS高表达并使睾酮水平下降。两者作用对睾丸的生殖功能产生了影响。     

牦牛犊牛睾丸结构特征及细胞外基质相关蛋白的分布

目的观察9头健康牦牛犊牛睾丸结构特征及细胞外基质相关蛋白的分布特点。方法采用组织化学染色和透射电镜技术,观察睾丸显微及超微结构特点,免疫组织化学SP法及IPP图像分析技术,研究层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和硫酸乙酰肝素糖蛋白(HSPG)的分布特征。结果睾丸生精上皮由Sertoli细胞和生殖母细胞构成1~2层,未形成空腔。电镜下,Sertoli细胞异染色质丰富,相邻Sertoli细胞胞膜下分布有典型外质特化与肌动蛋白丝形成的胞膜下纤维束;生殖母细胞较大,胞质丰富。免疫组织化学显示,LN、ColⅣ和HSPG在生精小管基膜和肌样细胞表达较弱,LN在生殖母细胞内的表达量显著低于ColⅣ和HSPG(P0.05),而在Sertoli细胞及Leydig细胞均无表达;ColⅣ和HSPG在Sertoli细胞均为强阳性表达;HSPG在Leydig细胞的表达量显著高于ColⅣ(P0.05)。结论牦牛犊牛生精上皮以幼稚型Sertoli细胞为主,Leydig细胞处于胚胎型向成熟型过渡时期;细胞外基质(ECM)相关Ⅰ及Ⅳ型Col、LN及HSPG的分布适应于其在高原低氧环境中的发育。     

Caspase-3mRNA与PARP在染锰大鼠生精细胞中表达变化

目的研究氯化锰对生精细胞凋亡过程半胱氨酸酶3(caspase-3)mRNA和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达的影响,探讨氯化锰的生殖毒性效应及可能机制。方法雄性SD大鼠48只随机分为空白对照组,低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,8只/组。MnCl_2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡,原位杂交法和免疫组织化学(SABC)法检测生精细胞caspase-3mRNA和PARP和表达。结果随染锰时间延长和剂量增加,各染锰组生精细胞凋亡指数(AI)及caspase-3 mRNA表达水平显著升高,PARP表达水平显著降低,凋亡指数AI分别与caspase-3 mRNA和PARP表达呈正相关和负相关。结论锰可诱导大鼠生精细胞caspase-3 mRNA表达,促进PARP分解,导致生精细胞凋亡,产生生殖毒性效应。     

高原地区藏绵羊与小尾寒羊睾丸细胞外基质组织分布特征比较

目的探索细胞外基质相关蛋白在高原地区藏绵羊与小尾寒羊睾丸的分布及组织化学特征。方法应用组织化学方法、Image-Pro Plus(IPP)图像分析技术及电子显微镜,观察比较藏绵羊(4只)与小尾寒羊(5只)睾丸组织化学特点及层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和硫酸乙酰肝素糖蛋白(HSPG)的分布特征。结果与小尾寒羊睾丸相比,藏绵羊生精小管基膜及间质组织内胶原纤维及网状纤维丰富;过碘酸-雪夫(PAS)及阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色显示,藏绵羊睾丸间质血管及生精小管固有膜阳性反应更为丰富。免疫组织化学显示,ColⅣ在藏绵羊及小尾寒羊生精小管上皮均呈阳性表达,LN在藏绵羊Sertoli细胞及管周肌样细胞呈弱阳性表达,而在小尾寒羊Sertoli细胞、Leydig细胞及管周肌样细胞为中等阳性表达;HSPG在藏绵羊及小尾寒羊肌样细胞均呈强阳性表达,而在Sertoli细胞及Leydig细胞均为弱表达。免疫组织化学图像分析结果显示,藏绵羊睾丸组织中ColⅣ和LN的分布显著低于小尾寒羊睾丸组织(P0.01),HSPG检测结果则显著高于小尾寒羊睾丸组织(P0.01)。电子显微镜下观察,藏绵羊及小尾寒羊生精小管固有膜可见发育良好的生殖上皮基膜以及1层明显的Ⅰ型胶原纤维,藏绵羊固有膜胶原纤维层丰富且Leydig细胞内脂滴明显。结论高原环境下藏绵羊睾丸固有膜及间质结缔组织较为丰富,在一定程度上影响了生精上皮发育;藏绵羊睾丸间质血管壁及生精小管固有膜AB-PAS阳性反应增强与Leydig细胞分泌功能相关,小尾寒羊睾丸组织LN表达显著增加及HSPG显著降低与生精上皮发育程度关系密切。     

镉对睾丸的毒性作用研究进展

镉(Cd)作为一种重金属微量元素，可引起全身的毒性反应。睾丸更易招致镉等重金属元素的损害，如诱导睾丸退化，体积缩小，重量下降，质地变硬，充血、出血，生精上皮被破坏，从而引起睾丸组织坏死，严重危害着人类的性功能、生殖功能和后代的健康水平，必须引起人们足够重视。     

羊睾丸提取液对铅染毒小鼠睾丸生精细胞凋亡及超微结构的影响

目的:探讨羊睾丸提取液对铅染毒小鼠睾丸生精细胞凋亡及超微结构的影响.方法:雄性性成熟小鼠,随机分为对照组(蒸馏水灌胃),模型组(醋酸铅灌胃),给药组(醋酸铅灌胃+腹腔注射羊睾丸提取液),染毒2周.Tunel法观察睾丸生精细胞的凋亡,透射电镜观察生精细胞超微结构的变化. 结果:与对照组相比,模型组睾丸生精细胞凋亡指数明显增高,多数细胞胞质内出现空泡,核固缩,核膜结构模糊,线粒体数目减少、空泡化,溶酶体增多;与模型组相比,给药组睾丸生精细胞凋亡指数有所降低,细胞结构趋于正常,核膜结构清晰,线粒体数量增多.结论:羊睾丸提取液可抑制铅染毒小鼠睾丸生精细胞的凋亡,对精原细胞、精母细胞、精子细胞的超微结构具有显著的保护作用.     

锰诱导大鼠生精细胞凋亡过程中生殖激素和乳酸脱氢酶及PARP的作用

目的研究锰对大鼠体内生殖激素和乳酸脱氢酶(LDH)和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达的影响,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用。方法雄性SD大鼠48只,随机分为空白对照组,低剂量组和高剂量组,腹腔注射Mn Cl24周和6周,TUNEL法检测生精细胞凋亡,放射免疫测定血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)含量,化学比色测定血清和睾丸LDH含量。免疫组织化学法检测生精细胞PARP表达。结果各染锰组生精细胞凋亡指数、血清FSH、LH及LDH含量升高,血清T、睾丸LDH含量及PARP表达降低。结论锰可使大鼠T和睾丸LDH降低,FSH、LH和血清LDH活性升高,抑制大鼠生精细胞PARP表达,导致生精细胞凋亡。     

锰诱导大鼠生精细胞凋亡过程中半胱氨酸酶-3mRNA与增殖细胞核抗原表达变化

目的:研究氯化锰对生精细胞凋亡过程半胱氨酸酶3(caspase-3)mRNA和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨两者在生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为空白对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30mg/kg MnCl_2)组。MnCl_2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡,原位杂交和免疫组织化学(SABC)检测生精细胞caspase-3 mRNA和PCNA和表达。结果:与空白对照组比较,各染锰组生精细胞凋亡指数(AI)均升高,caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,染锰4周:PCNA阳性细胞率显著降低,染锰6周反而升高。染锰剂量相同,6周与4周组比较,生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率、PCNA阳性细胞率均显著升高。染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,PCNA阳性细胞率显著降低。各组大鼠生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率呈正相关,与PCNA阳性细胞率呈负相关,而caspase-3 mRNA阳性细胞率与PCNA阳性细胞率呈负相关。结论:锰可诱导大鼠生精细胞caspase-3mRNA表达,促使生精细胞凋亡并且抑制细胞增殖,产生生殖毒性效应。     

SB203580对大鼠隐睾生精细胞凋亡的影响

目的:探讨SB203580对大鼠隐睾所致生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为隐睾组、隐睾 SB203580(p38MAPK抑制剂)组、隐睾 溶媒组、假手术组。复制单侧隐睾模型,术后分别腹腔内注射溶媒或SB203580。7 d后快速断颈椎处死,TUNEL原位末端标记法结合流式细胞术(FCM)检测各组右侧睾丸生精细胞凋亡,免疫组化观察各组右侧睾丸磷酸化p38MAPK蛋白表达的变化。结果:FCM及TUNEL法均显示隐睾 SB203580组生精细胞凋亡指数低于隐睾组和隐睾 溶媒组,同时磷酸化p38MAPK蛋白表达减少。结论:SB203580能降低p-p38MAPK蛋白表达并抑制热压诱导的生精细胞凋亡。     

服棉酚后久未恢复者睾丸微细结构观察——对棉酚抗生育可逆性的探讨

本研究观察服用棉酚1560～5280毫克,停药2.5～6年多尚未恢复的志愿者睾丸活检6例,正常2例。光镜下睾丸结构损伤分:精原细胞减少(1例),仅见支持细胞(3例),混合性(2例)等三型,均属严重损伤。电镜下除生精细胞受损外,值得注意是支持细胞滑面内质网明显扩张,线粒体空化;基膜及血管壁增厚。结果表明这些服药者生精功能恢复困难。对其原因作了讨论。     

整合素α_5、β_1抗体对睾丸生精细胞凋亡的影响

目的观察整合素α_5、β_1抗体体内干预试验对Wistar大鼠睾丸生精细胞凋亡的作用。方法腹腔内注射α_5、β_1抗体,采用原位末端脱氧核糖核酸转移酶标记技术,分析Wistar大鼠生精细胞凋亡情况。结果α_5、β_1试验组大鼠睾丸生精细胞明显减少(P0.001)。结论α_5、β_1抗体具有阻止Wistar大鼠生精细胞凋亡的作用。     

砷染毒对大鼠睾丸凋亡诱导因子表达及生精细胞凋亡的影响

目的:探讨砷染毒对大鼠睾丸凋亡诱导因子(AIF)表达及生精细胞凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠被随机分为对照组和染砷组。采用自由饮用方式进行连续染毒6个月。采用免疫印迹及实时荧光定量PCR检测AIF表达水平;采用TUNEL法观察生精细胞凋亡的情况。结果:免疫印迹及实时荧光定量PCR结果显示,与对照组比较,染砷组大鼠睾丸内AIF蛋白及mRNA表达水平均显著增高。TUNEL法检测结果显示与对照组比较,染砷组生精上皮凋亡细胞平均灰度值显著增高。结论:砷染毒时AIF介导的非caspase依赖性凋亡途径可能参与了大鼠生精细胞凋亡。     

环磷酰胺对大鼠睾丸和附睾的影响

目的探讨抗肿瘤药物所致大鼠睾丸和附睾损害,为寻找男性不育症中药治疗的研究提供理论依据。方法选用16只15周龄SD大鼠随机分为对照组和实验组,每组8只;实验组腹腔注射环磷酰胺20mg·kg-1·d-1,连续5d,用药2个月后,应用HE染色法研究大鼠睾丸、附睾远期组织学变化,用原位缺口末端标记法(TUNEL方法)检测生精细胞凋亡。结果实验组大鼠体重、睾丸和附睾重量均显著减轻(P<0.01),睾丸生精小管直径缩小、间距增宽、生精上皮变薄、生精细胞层次和数量减少、生精小管腔多未见精子形成,实验组睾丸生精小管直径、面积、生精上皮细胞数、均显著低于对照组(P<0.01);实验组生精细胞凋亡增多,与对照组比较,生精细胞显著凋亡(P<0.01);附睾管管腔内腔内精子稀少,含有大量脱落细胞,管壁变薄。结论环磷酰胺对大鼠睾丸、附睾远期损害明显,促进生精细胞凋亡。