常染色体显性遗传RP患者视紫红质基因突变的检测分析

目的研究常染色体显性遗传视网膜色素变性（ADRP）患者视紫红质（RHO）基因的突变特征及其在视网膜色素变性（RP）发病机制中的作用。方法应用变性高效液相色谱分析（DHPLC）技术和直接及克隆测序方法对RHO基因进行突变检测。结果一家系4例ADRP患者RHO基因的第297密码子存在杂合的两种类型密码子（AGC和AGT）。该家系的另3名患者未检测到该突变，对照组发现1例此类型沉默型突变。该家系在第3外显子3’端下游第4个碱基处发生C—T转换，其11个成员中该位点呈T纯合子1例，呈杂合子状态8例。对照组发现2例该位点的杂合子状态。结论视紫红质基因Ser-297-Ser突变与RP疾病未出现“共分离”现象，因此该沉默型突变不是该ADRP家系的致病原因，系RHO基因的多态现象。     

常染色体显性遗传视网膜色素变性患者视紫红质基因突变的研究

目的探讨常染色体显性遗传型视网膜色素变性(autosomal dominant retinitis pigmentosa,ADRP)患者视紫红质(rhodopsin,RHO)基因是否存在突变。方法应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增RHO第1、5外显子基因片段，以限制性核酸内切酶酶切消化技术检测38个ADRP家系的57名患者和60名正常对照者RHO第58、347密码子的突变。结果1个ADRP家系的4名患者第58密码子发生点突变，另2个ADRP家系的6名患者第347密码子也出现点突变，而对照者未发现上述两种突变。结论ADRP存在分子水平的遗传异质性，某些ADRP是由于RHO基因突变所致。(中华眼底病杂志,1998,14:108-110)     

常染色体显性视网膜色素变性家系视紫红质基因突变的检测分析

目的 观察一个常染色体显性视网膜色素变性(autosomal dominant retinitis pigmentosa,ADRP)家系的视紫红质(rhodopsin,RHO)基因突变特征。 方法 抽取20个ADRP家系成员外周血3～5 ml并提取DNA；聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增RHO基因第1～5外显子基因片段, 用直接测序法对20个DNA样本进行RHO基因突变检测。 结果 该家系中10例ADRP患者的RHO基因的第182密码子发生G→A置换突变(Gly-182-Asp)，而在2例患者和8个未患病家系成员中均未发现此突变。 结论 Gly-182-Asp突变不一定是ADRP家系的致病原因;在RHO基因附近可能存在新的基因, 但还需要进一步研究证明。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 256-258)     

常染色体显性视网膜色素变性家系基因定位的研究与视紫红质基因突变的检测分析

对一常染色体显性视网膜色素变性 (autosomaldominantretinitispigmentosa ,ADRP)大家系进行基因定位 ,并检测该家系12名患者的视紫红质基因是否存在突变。方法 :采用多个已知位点的遗传标记对该ADRP家系进行连锁分析 ,确定致病基因的大致染色体位置 ;在所定位的染色体区域将RHO基因作为侯选基因进行直接测序检测突变。结果 :连锁分析结果发现遗传标记D3S12 92 ,当θ =0 1时有最大Lod值 =2 732 85 2 ,因此考虑该家系致病基因位于D3S12 92附近。直接测序结果发现该家系中大部分患者在RHO基因的第 3外显子序列 ,第 182密码子的第 2个碱基发生G→A置换突变 ,导致甘氨酸 (Gly)变为天冬氨酸 (Asp) ,命名为Gly -182 -Asp突变 ,而在 2例患者中则未发现突变 ;同时 ,在该家系正常成员以及正常对照者中均未发现此突变。结论 :ADRP存在分子水平的遗传异质性 ,某些ADRP是由于RHO基因突变所致。但是由于本研究所涉及的ADRP家系中尚有2名患者未找到RHO基因突变 ,故不能将Gly -182 -Asp突变认为是该家系的致病原因。在D3S12 92与RHO基因之间可能存在新的基因 ,还需进一步研究证明。     

常染色体隐性遗传视网膜色素变性家系视紫红质基因突变的检测分析

目的 观察一个近亲婚配常染色体隐性遗传视网膜色素变性（ARRP）家系中视紫红质基因（RHO）的突变特征，并探讨其视网膜色素变性(RP)发病机制。 方法 抽取8例该ARRP家系成员及10例正常对照者的外周静脉血5~8 ml；提取基因组DNA；采用聚合酶链反应（PCR）方法扩增RHO基因第1~5外显子和第1内含子基因 片段 ，用直接DNA测序法筛查RHO基因突变。 结果 来自同一家系3例患者RHO 基因的第5外显子第344密码子发生了A→G碱基的错义突变，导致了谷氨酰胺变成了精氨酸(G ln344Arg)，3例患者为该突变的纯合子。患者近亲婚配父母及1例未患病家庭成员为该突变 的杂合子。2例未患病家庭成员及10例正常对照者均未发现RHO基因突变。 结论 Gln344Arg突变可能是该ARRP家系的致病原因；在近亲婚配ARRP家系中RHO基因突变频率可能增加。 （中华眼底病杂志，2004，20：145-148）     

汉族常染色体显性视网膜色素变性一家系的连锁分析及突变筛查

背景 原发性视网膜色素变性(RP)有明显的遗传异质性和表型异质性,目前已确定的致病基因较多,确定患病家系的致病基因是进行基因治疗的基础. 目的 对患常染色体显性遗传性RP(ADRP)的一个汉族家系进行致病基因的定位和基因突变分析.方法 此家系的5代21名成员纳入研究,包括12例ADRP患者和9名表型正常者.12例患者进一步接受中心视野、间接检眼镜、眼电图(EOG)、视网膜电图(ERG)检查.对22个已知的ADRP致病基因所在染色体位点进行连锁分析,以确定该家系与疾病连锁的染色体区域,随后对该区域附近的候选基因视紫红质(RHO)进行直接测序评估其突变情况. 结果 间接检眼镜检查该家系先证者眼底表现符合原发性RP表现,EOG和ERG表现为波形记录不到,视野呈向心性缩小.两点连锁分析结果显示,该家系致病基因位点与遗传标记D3S1292连锁,在θ=0.0时得到最大优势对数(LOD)值为3.6671.候选的RHO基因直接测序结果发现,该家系所有患者第53位密码子的第2个核苷酸均出现了C→G的突变,致其氨基酸由脯氨酸变为精氨酸(Pro53Arg),而该家系正常成员中未发现此突变. 结论 RHO基因的错义突变Pro53Arg与RP疾病出现共分离现象,可确定为该ADRP家系的致病基因.     

视网膜色素变性1基因在常染色体显性遗传视网膜色素变性家系中的突变分析

目的:研究常染色体显性遗传视网膜色素变性(autosomal dominant retinitis pigmentosa,ADRP)家系中视网膜色素变性1(retinitis pigmentosa-1,RP1)基因的突变特征及其在RP发病机制中的作用。方法:运用聚合酶链反应和直接测序方法,对6个ADRP家系的47例成员和50例对照者进行了RP1基因全编码区和邻近剪切位点的内含子区域序列突变的筛选与检测。运用单因素分析、多因素Logistic回归分析研究RP1基因点突变在RP发病中的作用。结果:ADRP家系成员和对照组RP1基因第4外显子上检测出2个变异位点。在1691和1725密码子存在杂合的两种类型的密码子(S1691P,Ser-Pro,TCT→CCT;Q1725Q,Gln-Gln,CAA→CAG)。ADRP家系成员中Ser-1691-Pro及Gln-1725-Gln位点突变率显著高于正常对照组(χ2=11.202,P<0.05)。结论:RP1基因Ser-1691-Pro及Gln-1725-Gln位点多态性可增高RP的危险性,具有潜在的致病性,考虑为ADRP家系的易感基因。     

一视紫红质基因突变常染色体显性遗传视网膜色素变性家系的临床特征及其与基因型的关系

视网膜色素变性(RP)是以夜盲、进行性视野损害、视网膜色素沉着、视盘呈蜡黄色萎缩和视网膜电图(ERG)呈熄灭型为主要临床特征的遗传性致盲眼病[1,2].RP遗传方式复杂,以常染色体显性遗传RP(ADRP)为多见[3].在已成功克隆出15个ADRP致病基因中,视紫红质(RHO)基因是引起ADRP的主要致病基因,大约20%的ADRP患者存在RHO基因突变[4-6].RHO突变位点很多,表型各异.为探讨RHO基因型与RP的关系,我们观察了1个RHO基因突变的ADRP家系中RP患者的临床特征.现将结果报道如下.     

先天性无虹膜症家系的基因突变位点研究

目的探讨先天性无虹膜症家系的基因突变位点。方法抽取家系成员的外周血2~5ml,提取DNA;先合成2个多态性微卫星遗传标记(D11S904和D11S935)的引物进行聚合酶链反应(PCR),PCR产物变性后用变性聚丙烯酰胺(PAGE)胶分离,根据带型和家系成员间的关系进行单体型连锁分析,判断家系无虹膜表型是否与PAX6基因相关;PCR扩增PAX6基因的所有外显子,所有PCR产物分别进行单链构象多态性(SSCP)分析,通过患者与正常人带型的差异确定突变发生的外显子,对有差异SSCP带型的PCR产物进行直接DNA测序,找到突变位点。结果该家系先天性无虹膜表型明显与PAX6基因连锁;SSCP分析PAX6基因第9外显子PCR产物,显示患者均有异常带型出现,而家系正常人均无此异常带;测序结果显示突变位点为PAX6基因第9外显子c1080核苷酸C突变为T,使编码精氨酸的密码子突变为终止密码子。结论PAX6基因突变可导致先天性无虹膜。     

视网膜色素变性患者的相关致病基因PDE6B突变及其临床表型分析

目的：了解磷酸二酯酶β亚单位（phosphodiesterase β subunit,PDE6B）基因突变在我国视网膜色素变性（retinitis pigmentosa,RP）患者中的突变形式及其临床表型特征。方法：应用聚合酶链反应-异源双链-单链构像多态性及DNA序列分析技术,对收集的35个常染色体隐性家系和55例散发RP患者进行PDE6B基因的22个外显子和5′-端非编码区（5′-UTR）全基因扫描,并行眼部检查及家系分析。结果：检测出1例散发性RP患者第6外显子第2492位点T→C碱基突变异致其编码氨基酸由甘氨酸变为丝氨酸,第10外显子5′-端上游（第9内含子内）第27与28碱基之间有2个碱基（TG）插入突变。以上两种突变在100例正常人中均未检测出。RP患者表现为视乳头萎缩、血管变细及色素散布。多焦视网膜电图检测提示视杆细胞受损较重。1例常染色体隐性家系患者PDE6B基因第11外显子5′-端上游第19位碱基（第10内含子内）发生G→A颠换。另2例散发RP患者分别发现第4外显子5′-端上游30与31碱基间2个碱基（GT）插入和第18外显子3′-端下游第15个碱基发生G→C转换。结论：PDE6B基因的复合杂合突变可能是我国散发性RP患者的致病基因,通常以视杆细胞受累较重,其眼部临床表现符合典型的RP患者特征,我国RP患者的PDE6B基因内含子变异呈多种形式。     

Lims A:一个新的LIM同源域基因的克隆和初步分析

目的:克隆与分析大鼠不同剪切的Lims基因。方法:应用巢式RT-PCR,以SD大鼠cDNA为模板,扩增Lims基因不同剪切子,构入PinPointTMXa-1T质粒,测序鉴定。结果:测序表明克隆了新的Lims基因变异剪切体Lims A,该变异剪切体编码区为1014bp,编码338个氨基酸。结论:比较基因组学分析显示,成功地克隆了一新的大鼠Lims基因剪切子Lims A,为进一步探索Lims基因在增生性玻璃体视网膜病变中的功能奠定基础。     

遗传相关的先天性白内障基因突变的研究进展

白内障是由于各种原因引起晶状体代谢紊乱,导致蛋白质变性而发生混浊的一种眼部疾病。先天性的白内障尤为严重,它是影响婴幼儿视力发育的常见眼病,可以抑制视觉通路的发育,造成永久性失明。大约1/3病例与遗传相关,其中常染色体显性遗传为最多见的遗传方式,其发生发展与参与晶状体发育的基因均可能有关系。迄今为止,已经发现40多个基因上百个突变位点与先天性白内障相关。本综述将对先天性白内障的基因学研究进展进行讨论。     

双眼视网膜母细胞瘤Rb基因缺失研究

利用Ｒｂ基因ＣＡＤ探针，采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ方法，检测５例双眼视网膜母细胞瘤患者及家系中相关人员共１９例外周血白细胞ＤＮＡ。２例患者体细胞出现Ｒｂ基因半合缺失，其中１例Ｒｂ基因半合缺失来自亲代生殖细胞，另１例Ｒｂ基因半合缺失可能发生于配子形成期。这一结果为以分子水平为基因的“二次突变论”提供了依据，并表明此方法在临床上有推广应用价值。文中还讨论了第二恶性肿瘤问题。     

我国角膜营养不良的基因研究现状

角膜营养不良是一组原发性、遗传性疾病。现代分子遗传学研究的发展使我们对角膜营养不良的认识产生了深远的影响，其在角膜营养不良的诊治中发挥了越来越重要的作用。角膜营养不良的基因研究可使我们从分子水平探讨其发病机理，明确角膜营养不良的诊断和分类。本文概述了近年来我国角膜营养不良分子遗传学的研究状况。     

Rb1基因第16内含子内21个碱基缺失1例

目地研究双眼视网膜母细胞瘤患者Rb1基因杂合性突变的分子生物学特性。方法应用PCR—SSCP直接测序技术检测双眼视网膜母细胞瘤患者白细胞DNA中Rb1基因杂合性突变。结果50例证实有Rb1基因杂合性突变的病例中有1例发生于第16内含子中可以用3种定位方法解释、具有相同序列的21个碱基缺失。结论这种极为少见的Rb1基因突变方式可能是由于破坏了正常拼接位点的结构而激活了“隐蔽拼接位点”，导致异常的Rb1基因mRNA产生或由此影响整个拼接过程。     

青少年型开角型青光眼的遗传特征和基因研究进展

青少年型开角型青光眼(JOAG)是原发性开角型青光眼(POAG)的一个亚型,具有较高的致残率,严重影响年轻患者的生活质量。研究发现JOAG有着多样化的遗传方式,虽然JOAG通常被认为是一种常染色体显性遗传疾病,但在特定人群中,常染色体隐性遗传同样存在。而JOAG的多变遗传倾向可能是由多个关键致病基因共同调控的结果,其中包括MYOC、CYP1B1和CPAMD8等代表性基因。这些基因的突变通常与眼部组织的多种生物学过程密切相关,主要包括细胞代谢调控、氧化应激反应以及程序性死亡的异常诱导。因此,深入研究JOAG相关的致病基因至关重要,这将为揭示该疾病的发生、发展及临床表型的具体遗传背景,并且为早期识别和筛查高风险人群提供有力依据。文章旨在重点关注JOAG的遗传特征和基因研究。通过系统性回顾相关文献,总结了与JOAG疾病相关的致病基因及其突变,并探讨其在JOAG研究领域未来发展中的潜在应用和价值,为JOAG的诊断和治疗提供有益的见解。     

两个Waardenburg综合征家系致病基因突变和临床特征分析

目的 分析两个Waardenburg综合征家系中先证者和2例患病家系成员的临床表现和致病基因突变特征。设计 回顾性病例系列。研究对象 2018年北京同仁医院两个Waardenburg综合征家系4例患者。方法 记录两个家系中先证者和患病成员以及可疑患病成员的病史以及毛发和皮肤色素异常的情况，并对先证者和2例患病成员进行详细眼科检查和耳科听力检测。采集先证者、其父母及患病成员的外周血样。对先证者进行Waardenburg综合征的6个已知的致病基因Sanger测序检测，应用多种在线生物信息学分析软件对检出的突变进行致病性预测，并对致病性突变进行家系共分离验证，最后根据美国医学遗传学与基因组学学会致病性分级指南对突变进行分级。主要指标 致病基因突变、眼部及全身色素异常情况、眼底情况、听力。结果 在两个Waardenburg综合征家系中分别检出EDNRB 基因p.G186E和PAX基因p.C70R 两个杂合错义突变，分别导致Waardenburg综合征IV型和Waardenburg综合征I型。两个家系的先证者均有虹膜色素异常、听力差、头发变白和鼻根部宽的表现，但程度和部位有所不同。两个家系内所有确诊或可疑患病的成员均有头发变白或额前白发，而无皮肤色素异常表现。结论 本研究确定了两个Waardenburg综合征家系的致病基因，扩大了PAX3和EDNRB基因突变谱，基因检测是可疑Waardenburg综合征患者鉴别诊断及分型的重要手段。     

Absence of ocular manifestations in autosomal dominant Alport syndrome associated with haematological abnormalties

Most patients with Alport syndrome have X-linked or autosomal recessive disease that is characterised by renal failure, hearing loss, and, in nearly 75% of the cases, a dot-and-fleck retinopathy and anterior lenticonus. There are only case reports of individuals with the rare autosomal dominant form, who can have haematuria or renal failure, deafness, and, in addition, low platelet counts and neutrophil inclusions. The ocular features of autosomal dominant inheritance have not been described. We have examined the eyes in the members of two families where Alport syndrome was diagnosed on the basis of the clinical features and family history, and where autosomal dominant inheritance was confirmed by father-to-son disease transmission, the associated haematological abnormalities, and haplotypes that segregated with the recently described locus at chromosome 22q. In Family A, the eyes of two individuals with haematuria, hearing loss, and haematological abnormalities and of nine unaffected family members were examined. In Family B, the eyes of two individuals with renal failure, normal hearing, and haematological abnormalities were examined. None of the affected or unaffected members in either family had a dot-and-fleck retinopathy, anterior lenticonus, a history suggesting recurrent corneal erosions, or corneal dystrophy. These results indicate that the protein abnormality in autosomal dominant Alport syndrome does not produce the retinopathy and lenticonus typical of X-linked and autosomal recessive disease. This may be because the abnormal protein is not present or is less important in the ocular basement membranes than elsewhere, or because the presence of a normal allele in autosomal dominant disease compensates for the defective allele.     

外源基因在角膜中表达及基因治疗

外源基因向角膜的转移是角膜基因表达和基因治疗的基础。基因枪、电脉冲和微量注射都可用于角膜基因转移。脂质体的脂组成、日本凝血病毒衣壳蛋白包囊、与腺病毒的结合物及DNA核靶向序列影响其基因转移的效果。另外,腺病毒、逆转录病毒、单纯疱疹病毒和lenti病毒可做为基因转移的载体。基因治疗在角膜遗传病、病毒感染、雾状混浊和角膜移植排斥中发挥作用。     

长链非编码RNA在眼部疾病中的作用

长链非编码RNA(LncRNAs)是指长度大于200个核苷酸且不能编码蛋白质的RNA。随着新一代高通量测序技术的应用,对全基因组分析表明,LncRNAs可以调节免疫应答、表观遗传、基因转录及转录后水平的基因表达,从而参与维持细胞的增殖与凋亡、组织内稳态等生理过程。近年来研究发现LncRNAs与人体多种疾病的发生发展相关。本文主要就LncRNAs在眼科常见疾病中的研究进展进行综述,以期对相关眼科疾病进行早期诊断与治疗。