吸水链霉菌17997产生的4，5-双氢格尔德霉素的鉴别与检测

本文对从吸水链霉菌17997发酵提取获得的格尔德霉素精制品进行了LC-MS-MS分析,发现其中含有4,5-双氢格尔德霉素组分.对吸水链霉菌17997摇瓶发酵产物的硅胶板薄层层析分析表明,4,5-双氢格尔德霉素组分在发酵中期有积累.已知4,5-双氢格尔德霉素的抗肿瘤活性比格尔德霉素差,因而需要限制其在格尔德霉素制品中的含量.本文研究结果对以吸水链霉菌17997等为产生菌研究格尔德霉素发酵,促进4,5-双氢格尔德霉紊转化为格尔德霉素以提高发酵液的品质,以及检测格尔德霉素制品中的4,5-双氢格尔德霉素组分具有实际意义.     

反相高效液相谱型分析检测吸水链霉菌17997变株发酵新产物

以吸水链霉菌17997为出发菌株。分别阻断格尔德霉索（geldanamycin，GA）生物合成酶基因簇中的Ⅰ型聚酮合酶（type Ⅰ polyketide synthase，pks）基因的第6模块，单加氧酶（monooxygenase，gdmM）基因和氨甲酰基转移酶（carbamoyltransferase，et）基因得到3种变株（pks^-）、（gdmM^-）和（ct^-）。比较变株与原株发酵产物的HPLC谱型，结合紫外吸收图谱分析。检测结果表明各变株的GA生物合成均被阻断。并产生3个不同于原始菌株的新物质。这证明基因操作所涉及的pks，gdmM和ct基因是GA生物合成的必需基因；这些基因的阻断可产生不同于原株的新物质。HPLC谱型比较可以在多样化代谢产物的产生菌中快速、准确地发现基因工程变株发酵产物的变化。指导新化合物的分离鉴定，样品用量甚微。是化学早期鉴别的有力工具。     

氨基酸对吸水链霉菌产生的rapamycin生物合成的影响

1 引言 对吸水链霉菌产生的rapamycin生物合成的碳源研究表明,同时使用果糖和D-甘露糖使 rapamycin产量提高。Rapamycin是一种含氮的非典型三烯类大环内酯,含氮环的直接前体是六氢吡啶羧酸。对吸水链霉菌(S.hygroscopicus)生长所需氮源的初步研究发现:同时加入天冬氨酸、精氨酸和组氨酸是有效的。在这样的碳、氮营养状态下,进一步添加铵离子能干扰rapamycin产生,但不影响生长。磷酸盐和镁必需保持在约束生长的状态,以便产生最多的rapamycin。本文考察进一步添加氨基酸对rapamycin形成的影响。     

黑暗链霉菌中安普霉素生物合成的阻断研究

以黑暗链霉菌Tt-49基因组为模板,利用PCR方法,扩增安普霉素生物合成关键基因aprH～M的上、下游序列,作为同源交换臂,并以温敏复制型质粒pKC1139为基础,构建用于阻断黑暗链霉菌Tt-49中安普霉素生物合成的重组质粒pHM106.质粒经接合转移进入黑暗链霉菌Tt-49,并筛选得到发生同源双交换工程菌,命名为黑暗链霉菌HM106.通过PCR鉴定,证明工程菌HM106中的aprH～M被tetr替换.对工程菌HM106进行发酵产物分析,结果是其发酵效价下降明显,仅为出发菌株的40％左右.采用薄层层析(TLC)对其组分分析,其安普霉素组分消失,因此,初步判断已成功阻断安普霉素的生物合成.     

吸水链霉菌FIM-38-24产子囊霉素的发酵条件优化

目的 优化S.hygroscopicus FIM-38-24菌株产子囊霉素发酵条件.方法 采用单因素试验和正交试验研究发酵培养基组成,探讨摇瓶发酵的主要影响因子初始pH值、装液量、转速等发酵参数的影响.结果 确定了适宜发酵培养基和发酵参数:糊精4.5%,葡萄糖1.0%,黄豆粉3.0%,玉米浆粉0.5%,氯化钠0.2%,磷酸氢二钾0.1%,精氨酸0.25%,碳酸钙0.05%,莽草酸0.2%,初始pH 6.5,装液量60mL/500mL,种子菌龄59h,接种量10%,摇床转速250r·min-1,发酵温度28℃,发酵时间5d.优化后的发酵水平较原生产工艺提高50%以上.结论 子囊霉素的优化发酵工艺为其工业化生产奠定了基础.     

吸水链霉菌M—22产生的除草剂的研究

利用竞争性抑制谷氨酰胺生物合成的方法，从福州郊区土壤中分离到除草活性物质产生菌Ｍ－２２，其特征与除草剂双丙磷（ｂｉａｌａｐｈｏｓ）产生菌吸水链霉菌ＳＦ－１２９３相近，Ｍ－２２代谢产物ＦＭ－２２经光谱分析证明与双丙磷同质。     

不吸水链霉菌中沉默基因簇的激活和产物结构鉴定

不吸水链霉菌S.ahygroscopicus S91(CGMCC4.7082)的次级代谢产物中含有多种抗真菌组分，目前已发现的组分有四霉素、制霉菌素、丰加霉素、白诺菌素和茴香霉素。通过生物信息学分析，不吸水链霉菌S91基因组中含有云南霉素和谷氏菌素的生物合成基因簇，但目前在该菌株发酵产物中并没有检测到这两种抗生素的存在。对四霉素、制霉菌素、丰加霉素生物合成阻断株Streptomyces ahygroscopicus ΔttmS1ΔnysBΔtymH进行发酵培养，发现其发酵液中具有水溶性的抑制黑曲霉的活性组分。以抑菌活性跟踪目标未知抑菌化合物，发酵液经离心、草酸酸化后，上清液经大孔吸附树脂DM-2脱色，脱色液经732阳离子交换、中性氧化铝柱柱层析和Sephadex LH-20色谱分离，最终得到两个具有抗真菌的化合物A和B。化合物经紫外、质谱和核磁进行结构鉴定，化合物A为云南霉素，B为谷氏菌素或宁南霉素。生物信息学分析与分离纯化技术相结合，进一步证实该菌株具有产生云南霉素和谷氏菌素抗生素的能力。     

链霉菌抗生素生物合成基因簇的克隆分析

自60年前发现青霉素以来,已报道的抗生素有5000多种,其中60%以上由放线菌产生,并且大部分来自链霉菌。现已证明链霉菌的基因组大小约为10~4 kb,是大肠杆菌的2倍多,染色体为环形,许多菌中有从4kb 到20kb 大小不同,拷贝数也不同的质     

链霉菌抗生素生物合成基因的克隆策略

链霉菌具有许多不同于其它原核生物(如大肠杆菌等)的生物学特性,它们在生长过程中常伴有营养菌丝、气生菌丝和顶端结成孢子等形态分化类似霉菌的特性。链霉菌含有一个单环染色体,其基因组大小约10~4kb(近似大肠杆菌的3倍),在DNA组成中G+C含量高达70mol%以上,接近自然界中所观察到的上限。这些生物学上的差异使得链霉菌不能用其它遗传上了解得很清楚的原核系统进行研究,而必须自成研究体系。近年来,链霉菌自身的质粒和噬菌体载体系统的开发进展迅速。利用这些体系统已经分离获得了包括抗生素抗性基因、初级代谢方面的基因、各种输出酶基因、形态分化基因以及许多抗生素(如红霉素、四环素、放线紫红     

黑暗链霉菌安普霉素生物合成基因aprG的克隆和功能研究

从安普霉素产生菌S．tenebrarius H6总DNA中已克隆得到8．2kb的安普霉素抗性基因连锁片段。对距离抗性基因下游4．5kb的SacI-Sau3AI片段进行测序分析，发现了一个新的891bp开放阅读框架。推测其编码为296个氨基酸的蛋白质。经BLASTX程序分析，没有发现与之同源的基因，是一个新基因，该基因命名为aprG。构建基因阻断穿梭载体pSPU58，经接合转移导入S．tenebrarius H6，筛选单交换阻断变株，并用Southern blot验证阻断变株的aprG已经被破坏。经发酵分析，阻断变株不再合成安普霉素，表明aprG与安普霉素生物合成直接相关。     

Geldanamycin产生菌生物合成相关基因的克隆与分析

目的：从geldanamycin产生菌吸水链霉菌（S.hygroscopicus)中克隆生物合成基因，为阐明生物合成机制及改造其结构奠定基础。方法：以链霉菌／大肠埃希氏菌穿梭cosmids pKC505为载体构建了插入片段为20－30kb的S.hygroscopicus总DNA文库，以利福霉素中与3－氨基－5－羟基苯甲酸（AHBA）合成相关基因为探针，经菌落杂交，Southern杂交筛选同源基因片段，测序结果与Genbank进行同源性比较分析，并以attp-噬菌体载体KC515利用基因阻断实验对克隆的基因片段进行功能鉴定。结果：构建的基因文库含重组基因比率高，基因组覆盖率高，稳定性好，经同源基因探针杂交，从文库中筛选出9个阳性cosmids克隆pCGB20,pCGB26,pCGB28,pCGB29,pCGB36,pCGB45,pCGB49,pCGB63,pCGB75，测序分析表明，cosmid pCGB20中BamHI-BamHI 8kb片段两端的不完整ORF编码蛋白与竹桃霉素（oleandomycin)PKS Module 5,Module 6(一致性为79％）和红霉内酯合成酶ORF2（一致性为75％），ORF1（一致性为73％），ORF3（一致性为70％），高度同源；BamHI-BamHI 3kb片段一端与编码类结核分枝杆菌的磷酸吡哆醛依赖的氨基转移酶家族中半胱氨酸脱硫酶的DNA有同源性，该家族与AHBA合成酶关系密切，Cosmid pCGB20的BamHIBamHI 8kb及BamHI-BamHI 3kb基因片段已通过基因阻断实验初步鉴定，证明它们参与geldanamycin生物合成，而其他cosmids阳性克隆的序列分析及功能研究尚在进行中。     

吸水链霉菌NND-52产尼日利亚菌素发酵条件的改进

通过正交实验和单因子实验对吸水链霉菌NND－52产尼日利亚菌素的发酵条件进行了研究。确定最佳培养基组分（％）为葡萄糖1．5、淀粉5、酵母膏0．5、NaCl0．2、黄豆粉0．3，含Na2MoO4 5mmol/L，装液量50ml/250ml,接种量10％，发酵时间96h，可使菌体在每毫升培养液中产尼日利亚菌素318μg，比原配方提高了150％。     

新抗生素波拉霉素A,B的分离,性质及鉴别

从1株吸水链霉菌StreptomyceshygroscopicusLP－93的培养物中，经溶媒萃取、正相及反相硅胶柱层析、凝胶过滤、制备TLC等方法分离到2个新多羟基大环内配类抗生素．即被拉霉素A和B。波拉霉素具有较强的抗真菌活性，对许多引起植物病害的真菌有较好的抑制活性。波拉霉素A、B均属于多羟基大环内酯类抗生素，但理化性质及结构不同于已知结构的多羟基大林内酯类抗生素。     

吸水链霉菌NND—52菌株胞内抗生素M1分离、纯化及结构确定

吸水链霉菌NND－52菌丝体,经溶媒浸提,粗结晶,梯度洗脱的硅胶柱层析分离,纯化,得到主要组分M1,通过对基本理化性质分析和UV,IR,1H－NMR,13C－NMR,DEPT等波谱分析,确定其结构与阿扎霉素B相同,为一具有双重旋转对称的不饱和的非典型大环内酯抗生素。     

前体对吸水链霉菌NND-52抗生素合成的调控

研究了不同前体对吸水链霉菌NND—52所产三种抗生素阿扎霉素B，除莠菌素A及nigericin的调控作用。且考察了NH4^ 对前体生成的影响，进一步探索了NH4^ 在NND—52抗生素合成中的调控作用，结果表明NH4^ 存在着阻遏与抑制缬氨酸脱氢酶的合成和活性的作用，从而抑制前体物质的合成，使抗生素产量降低。     

Pseudoverticin B,a novel geldanamycin analog obtained as new cell cycle inhibitor from Streptomyces pseudoverticillus YN17707

Pseudoverticin B (1), a novel naturally occurring geldanamycin analog with cell cycle inhibitory activity, was isolated from the fermentation broth of Streptomyces pseudoverticillus YN17707, together with the known ansamycin antibiotic, hydroquinone geldanamycin (2), through bioassay-guided fractionation procedures. The structure of compound 1 was elucidated by spectroscopic methods, being characterized by an ansa bridge, same as that in geldanamycin and a novel hydroquinone-derived moiety. Compounds 1 and 2 arrested the cell cycle of tsFT210 cells at the G0/G1 phase with the minimum inhibitory concentration values of 10.1 and 20.2 μmolL^?1, respectively.     

棒状链霉菌甘油耐受量与克拉维酸合成的关系

在克拉维酸产生菌的菌种选育过程中,应用甘油耐受量作为选择压力能有效地除去低效价菌株,提高高产变株的检出率,较传统筛选法优越。试验表明,甘油耐受量高的菌株克拉维酸效价也高。在高甘油含量（１１％）的甘油－精氨酸琼脂（ＡＧＳ）平板挑取的菌株基本上无负变株,与对照菌株相比,有的菌侏效价提高２０％～３０％。耐甘油量低（６％）的变株,其效价比对照菌株降低了９５％。     

链霉菌种内融合重组子产生新活性物质的分离和初步鉴别

从农抗５１０２产生菌（吸水链霉菌应城亚种）的种内融合中筛选到１株融合重组子ＦＲ－００５，它除了产生亲本所产生的３种抗生素外，尚能产生亲本没有的一种新活性物质。通过正丁醇萃取从发酵滤液中分离到这种对苏云金芽孢杆菌和啤酒酵母有抑制活性的物质，再经过硅胶柱、氧化铝柱和微晶纤维素柱依次连续分离，进一步又用硅胶Ｇ薄层层析分离，即得到纯度相当高的只对苏云金芽孢杆菌有活性的精制品。精制品经过稳定性、呈色反应、紫外可见光谱、纸层析谱、氨基酸组成等检测，表明该物质是一种多肽类抗生素