颌骨骨纤维异常增殖症骨髓间充质干细胞Gsα基因突变分析

目的:探索对颌骨骨纤维异常增殖症(FD)患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)的Gsα蛋白编码基因位点进行突变分析的方法。方法:颌骨FD患者经X线及组织病理学确诊后,术中取组织标本进行骨髓间充质干细胞原代培养,提取细胞DNA,通过巢式PCR及酶切等方法,将突变基因扩增,并进行基因序列测定。结果:颌骨FD患者BMSCs中,Gsα第201位氨基酸的编码基因突变(G→A或C→T),造成第201位氨基酸由精氨酸→组氨酸或精氨酸→半胱氨酸突变。结论:颌骨FD患者BMSCs中Gsα蛋白第201位氨基酸编码基因位点存在特异性突变,巢式PCR是检测该突变的可靠方法之一。     

兔骨髓间充质干细胞的体外分离培养、鉴定及向成骨细胞分化诱导

目的:探讨体外分离培养、鉴定兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的方法,并观察其向成骨细胞分化的潜能。方法:采用贴壁分离法分离培养兔BMSCs,通过细胞形态学观察和细胞表面抗原检测对细胞进行鉴定,并向成骨细胞分化诱导培养,通过钙钻法检测碱性磷酸酶表达,茜素红染色观察钙结节形成能力。结果:分离培养3d,可见贴壁细胞呈三角形、成纤维形或多角形外观,培养10～12d细胞长满瓶底,传代后细胞增殖明显加快;使用条件培养基传代培养2周,细胞呈集落生长后开始形成钙结节,茜素红染色阳性。结论:全骨髓贴壁法是一种简单实用的分离培养方法,可获得纯度较高的兔BMSCs,经过诱导后可向成骨细胞分化。     

兔骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定

［摘要］ 目的 寻求一种安全高效的兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs )的体外分离培养和鉴定方法。方法 采集兔胫骨骨髓组织,采用全骨髓贴壁培养法体外分离培养和扩增BMSCs;倒置相差显微镜观察细胞,取生长良好的第5代细胞成骨,免疫细胞化学染色和流式细胞术检测细胞表面标志物。结果 原代和传代的 BMSCs 贴壁生长,呈漩涡状排列生长;诱导后碱性磷酸酶活性持续高,有钙结节形成并茜素红染色阳性;CD29、CD44、CD105分子呈阳性, CD45、C-kit、CD34分子呈阴性。结论 成功建立了兔BMSCs 体外分离纯化、培养的有效方法,扩增的 BMSCs 具有多向分化潜能,是理想的组织工程种子细胞。     

兔骨髓间充质干细胞的体外分离培养、低温冻存及复苏研究

目的寻求体外培养、冻存、复苏兔骨髓间充质十细胞（bone marrow mesenehymal stein cell,BMMSC）的方法,观察体外培养BMMSC的形态及生长特性,研究低温冻存对兔BMMSC生长的影响,为兔BMMSC进一步的实验研究打下基础。方法取新西兰白兔胫骨穿刺获取骨髓液,密度梯度离心法联合贴壁培养法体外纯化扩增,并行液氮冻存3个月。通过倒置显微镜观察其生物学表现,并进行细胞增殖活性分析．绘制生长曲线。结果兔BMMSC为贴壁生长,形态为均匀成纤维细胞样,增殖能力强,传代及冻存后细胞仍然保持其生物学特性。结论兔BMMSC可采取密度梯度离心法联合贴壁培养法进行较好地纯化和扩增,并町长期保存于液氮中,在一定的条件下可复苏存活,冻存不影响细胞的增殖能力。     

大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养与鉴定

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的体外培养方法及其生物学特性。方法:体外分离、培养大鼠BMSCs,进行细胞形态学观察、生长曲线测定、细胞表面标记物检测;并采用体外诱导分化方法对BMSCs多向分化潜能进行鉴定。结果:大鼠BMSCs传代后细胞生长状态相对稳定,呈梭形;流式细胞仪鉴定CD90阳性率为88.2%,CD29阳性率为98%,CD34阴性率为2.8%,CD45阴性率为2.7%。成骨诱导21 d后,茜素红染色后可在显微镜下观察到矿化结节形成。成脂诱导14 d,油红O染色后显微镜下可见红色脂滴形成。结论:BMSCs在体外培养中贴壁生长,增殖较快;表达骨髓组织来源干细胞的表面标记物CD29、CD90;诱导后能向成骨细胞、脂肪细胞分化。     

骨髓间充质干细胞

骨髓是一个复合体 ,它由红细胞、白细胞、它们的前体细胞及被称为基质 (ｓｔｒｏｍａｌ)的结缔组织网架组成。来自基质的细胞 ,在形态上分别与成纤维细胞、网状细胞、脂肪细胞和内皮细胞的形态相似[1] ,这些细胞被称为骨髓基质干细胞。它们在体外能被不同的诱导因子诱导 ,分化为骨、软骨、肌肉、脂肪等[2 ] 。干细胞的主要特点是结构比较简单 ,是不具有特定机能的原始细胞 ,能以自我复制的方式增生 ,在一定的条件下能向特定的方向分化 ,产生几个亚系的前体细胞[3 ] 。骨髓基质干细胞就能分化为不同的间充质细胞 ,如成骨细胞、软骨细胞、肌肉…     

上下颌骨骨纤维异常增殖症的手术治疗

目的：报道２８例颌骨骨纤维异常增殖症的鉴别诊断及治疗经验。方法：对我院自１９９３年－１９９９年２８颌骨骨纤维异常增殖症进行分析与讨论。结果：经口内切口２５例,脸缘下切口配合内切口２例,冠状切口１例。伤口均Ⅰ期愈合,畸形明显改善。结论：根据病情采用不同的术式,取得改善外部畸形的效果。     

人骨髓间充质干细胞的分离培养及向成骨细胞定向分化的实验研究

目的:建立人骨髓间充质干细胞(hMSCS)体外分离、培养体系,并将其向成骨细胞定向诱导分化。方法: 采用梯度离心法从人骨髓血中提取骨髓MSC,经体外培养扩增,观察其生物学特性。结果:在体外培养条件下,骨 髓MSC具有较强的增殖能力,并能被诱导向成骨细胞分化。结论:建立了骨髓MSC体外分离、培养的体系,探讨 了骨髓MSC的生物学特性,为进一步研究MSC作为骨组织工程的种子细胞打下了基础。     

颌骨骨纤维异常增殖症研究进展

骨纤维异常增殖症(fibrous dysplasia,FD)是一种以纤维一骨性间质组织取代骨内部正常组织为特征的骨良性病变,在组织学水平表现为不同程度的骨化生.目前的研究表明,骨纤维异常增生是由于Gsα仅基因突变引起的.骨纤维异常增生可以只侵犯单一骨(单骨型),也可以侵犯多数骨(多骨型).影像学检查以及病理检查是骨纤维异常增生症重要的诊断依据.对于骨纤维异常增生症的治疗仍存在争议,手术治疗难以确定统一的指征与手术范围,而保守的药物治疗疗效不尽人意.本文就本病的临床表现、诊断和治疗等方面的进展进行了综述.     

兔下颌骨来源骨髓间充质干细胞的体外培养及鉴定

目的:探讨兔下颌骨来源的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)体外分离、培养并对下颌骨来源的BMMSCs进行鉴定.为骨组织工程提供种子细胞.方法:取兔下颌骨中的骨松质,采用密度梯度离心法分离单个核细胞,贴壁培养,取P2或P3代BMMSCs进行检测.倒置显微镜下观察细胞形态;MTT法测定细胞增殖并绘制细胞生长曲线;克隆形成实验计算克隆形成率;向成骨细胞、脂肪细胞、骨骼肌细胞多向诱导分化;流式细胞仪检测细胞表面抗原标记.采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析.结果:细胞经传代后形态一致,呈梭形或三角形;细胞生长曲线显示,下颌骨BMMSCs经历潜伏期、对数生长期和平台期;克隆形成率为37％;成骨及成脂诱导形成钙结节及脂滴,茜素红及油红O染色呈阳性;成骨骼肌诱导desmin抗原标记阳性;流式细胞仪检测结果显示,所获得的下颌骨BMMSCs纯度较高.CD90和CD146表面标记阳性率分别为98.7％、98.1％.结论:从兔下颌骨分离的BMMSCs纯度较高,有强大的自我复制、增殖特性和体外多向诱导分化潜能,有望成为骨组织工程的种子细胞.     

人胎儿骨髓基质干细胞的分离、体外培养和鉴定

目的 分离培养并鉴定人胚胎骨髓基质干细胞。方法 抽取流产胎儿股骨骨髓，Percoll离心纯化分离，取界面有核细胞培养。不同培养基培养对比，观察细胞生长曲线，免疫细胞化学鉴定细胞膜表面分子。结果 得到纯化率较高的骨髓基质干细胞(MSCs)，用αMED比DMEM和RPM11640原代培养生长速度快，第二代MSCs在上述三种培养基中倍增时间分别为43h、54h、56h。免疫细胞化学结果99％CD4( )、98％Vim( )、所有细胞CD34(-)、CD29(-)。结论 Percoll离心法成功地分离纯度较高的MSCs。MSCs在αMEM中培养增殖率比在DMEM和M1640中培养为快。     

改良法分离培养人牙周膜干细胞

目的 改良法体外分离培养人牙周膜干细胞(PDLSC),并进行鉴定.方法采用酶消化组织块法获得人牙周膜细胞,通过有限稀释法克隆化培养、分离得到PDLSC,用含10%FBS的α-MEM培养液培养并传代:测定克隆形成率:免疫组织化学检测角蛋白及波形蛋白表达:流式细胞术分析细胞周期及表面标志物STRO-1、CD146的表达;并...     

人骨髓间充质干细胞分离培养及向软骨细胞定向分化的实验研究

目的：探讨人骨髓间充质干细胞体外分离培养和向软骨细胞定向分化的条件，为髁突软骨组织工程提供种子细胞。方法：采用Percoll分离液，根据细胞密度梯度原理，从健康人骨髓组织中分离骨髓间充质干细胞，对所获得的细胞进行体外培养和表面标志的流式细胞仪分析。对经过鉴定证实的骨髓间充质干细胞用含胰岛素、转铁蛋白、丙酮酸、地塞米松和TGF－β的诱导培养基处理7－14d。对诱导细胞进行蕃红花O－亮绿染色和Ⅱ型胶原染色，鉴定诱导后细胞的软骨细胞表型，结果：培养的人骨髓间充质干细胞均一表达CD29、CD44，而CD34、CD45和HLA－DR呈阴性。细胞经过诱导液作用14d后，蕃红花O－亮绿染色和Ⅱ型胶原染色阳性。结论：采用比重为1073g/L的Percoll能分离获得高纯度的人骨髓间充质干细胞（纯度大于95％）。该细胞经诱导液作用，可定向分化为软骨细胞。     

46例颌面部骨纤维异常增殖症临床分析

目的：分析颌面部骨纤维异常增殖症（fibrous dysplasia，FD）的临床特点、影像学表现以及血清碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）含量与临床相关因素的关系。方法：复习46例FD患者的临床资料并进行随访．测量分析FD患者单骨型、多骨型组和非FD患者对照组ALP的含量。采用SAS6．04软件包对数据进行方差分析。结果：46例患者，单骨型32例（69．6％），多骨型14例（30.4％）。FD在影像学上多无清晰边界，多见毛玻璃样型。复发病例11例．多发生于青春期之前。多骨型组术前血清ALP含量为（257．9±218.0）U／L，显著高于对照组的（58．5±31．3）U／L和单骨型组的（100．0±49．8）U／L。1例行上颌骨全切术＋赝复体修复，3例行下颌骨病变切除＋血管化腓骨肌瓣修复．1例行下颌骨病变切除＋血管化髂骨肌瓣修复，其余病例均行病变骨的修整术。术后随访4个月。4．9a，平均2．4a．所有伤口愈合良好，11例复发病例再次治疗后未见复发。结论：FD是一种纤维骨性病变，颌面部为其好发部位之一。此病无明显性别差异，血清ALP升高可能与FD病变的范围相关。可根据患者的具体情况选择不同术式，手术宜在青春期后进行。     

大白鼠骨髓间质干细胞体外培养体系的建立及分化研究

目的：建立大鼠骨髓间质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)体外培养体系，对大白鼠BMMSCs体外培养的条件，供体大白鼠鼠龄等进行了研究。对体外培养的大白鼠BMMSCs的形态学，增殖动力学，成骨的表面标记及体外钙化能力进行了系列研究，方法：取2月龄SD大鼠胫骨和股骨骨髓进行体外培养，取第二代BMMSCs,绘制生长曲线并计算群体倍增时间，对经成骨诱导剂诱导的BMMSCs的ALP表达及体外钙沉积进行了研究。结果：细胞呈长梭形或多角形，细胞表面有不规则的细胞突起，秀射电镜可见胞浆有大量的粗面内质网及线粒体，细胞表面可见突起，细胞生长曲线呈S形，群体倍增时间为72小时，经诱导分化的BMMSCs可见碱性磷酸酶的表达。von Kossa染色可见散在深染的钙沉积班块。结论：来源于年轻大鼠股骨骨髓的间质干细胞体外培养并经诱导后可分化为具有部分成骨特性的细胞，可以为体内骨组织工程提供组织细胞。     

外周神经胶质细胞：牙髓干细胞的新来源

来源于早期外胚间充质组织头部的神经嵴细胞迁移衍生出牙髓间充质干细胞,随后这些细胞产生牙髓细胞和成牙本质细胞。神经胶质细胞是另外一个神经嵴细胞衍生迁移而形成的细胞系。神经胶质细胞有广泛的分化发育潜能,研究发现神经胶质细胞可以分化为神经细胞和牙髓间充质干细胞,并且神经胶质细胞的不同分化发育阶段间可以互相转变。通常认为,大多数组织中的间充质干细胞来源于血管周细胞,但有研究发现相当一部分牙髓间充质干细胞来源于外周神经相关的神经胶质。本文通过对神经嵴细胞、牙髓间充质干细胞和神经胶质细胞的分化发育以及神经胶质细胞的衍生细胞的概述,介绍牙髓再生领域一种新的更有前景的牙髓间充质干细胞来源。     

Age of the donor affects the nature of in vitro cultured human dental pulp stem cells

ObjectivesThe dental pulp stem cells (DPSCs) of six donors (three young donors aged < 19 years and three adult donors aged > 25 and < 30 years) were characterized for their stem cell marker expression and differentiation potential to study the effect of donor age on DPSCs in vitro.MethodsDPSCs were cultured in αMEM supplemented with 20% fetal calf serum (conventional conditions) or on fibronectin-coated flasks with neurobasal medium supplemented with B27, bFGF and EGF (alternative conditions). DPSCs were characterized by immunofluorescence staining to detect the neural crest/mesenchymal stem cells markers P75 and CD146, respectively. The differentiation potential was tested by the induction of DPSCs into osteogenic, adipogenic and glial lineages and then by detecting the corresponding markers osteocalcin, lipidtox and S100ß, respectively.ResultsThe DPSCs of the young donors expressed CD146 only under the conventional conditions and expressed P75 regardless of the culture conditions. However, the DPSCs of adult donors expressed CD146 only under the alternative conditions and expressed P75 only under conventional conditions. Only the DPSCs of the young donors differentiated into the glial linage. The DPSCs of the adult donors differentiated more efficiently into the adipogenic linage. Osteogenic differentiation was comparable.ConclusionDonor age affects the expression of stem cell markers and differentiation potential of DPSCs. Moreover, the effect of culture conditions on DPSCs is age dependent.