异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Ca2+诱发神经元线粒体损伤的影响

目的 评价异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Ca2+诱发神经元线粒体损伤的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠84只,体重250～300 g,随机分为4组(n=21),假手术组(S组)仅暴露颈内动脉但不结扎颈总动脉;缺血再灌注组(IR组)、CaCl2组和异丙酚组(P组)采用结扎颈总动脉的方法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注24 h.缺血2 h时进行神经功能缺陷评分.再灌注24 h时处死大鼠,分离额叶皮质,提取神经元线粒体.CaCl2组加入CaCl2 200μmol/L于37 ℃下孵育5 min;P组加入异丙酚200 μmol/L于37℃下孵育2 min后,再加入CaCl2 200 μmol/L孵育5 min.透射电镜下观察线粒体超微结构.采用紫外分光光度法检测线粒体通透性转换孔(MPTP)的活性.结果 S组神经功能缺陷评分为0分,IR组、CaCl2组和P组神经功能缺陷评分为2～3分.CaCl2组线粒体明显肿胀,基质电子密度低,嵴大部分断裂,线粒体膜崩解;P组较CaCl2组病理学损伤减轻.与S组比较,IR组和CaCl2组MPTP活性升高,P组MPTP活性降低(P＜0.05);与IR组比较,CaCl2组MPTP活性升高,P组MPTP活性降低(P＜0.05);与CaCl2组比较,P组MPTP活性降低(P＜0.05).结论 异丙酚可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注后Ca2+诱发的神经元损伤,与其抑制MPTP的开放有关.     

Lewis大鼠慢性后肢缺血模型的制备与评价

目的通过线栓法制备大鼠慢性后肢缺血模型,将其与急性后肢缺血模型进行比较研究。方法采用线栓法制备Lewis大鼠慢性后肢缺血模型,分别于术后第7、14、28、42及49天进行激光多普勒血流分析及血管造影。每组动物在血管造影后处死,分别取其健侧和患侧股四头肌和腓肠肌行HE染色及α-actin免疫组织化学染色,并计算小动脉密度。结果慢性后肢缺血模型组动物术后未出现明显的跛行和肢体坏死。血流分析发现,慢性后肢缺血模型在术后第49天仍处于缺血状态。后肢肌肉组织病理学检查未发现急性坏死和肌肉纤维化的表现。术后第7天,慢性缺血组股四头肌的小动脉密度低于急性缺血组(0.015 2比0.036 4)。结论线栓法制备大鼠慢性后肢缺血模型与目前采用的急性动物后肢缺血模型制备方法有显著的不同,其缺血肢体较少受到代偿机制的影响且缺血时间维持较长,此为进一步研究缺血后血管新生的机理和治疗严重的下肢缺血提供了一种新的动物模型。     

应用激光多普勒血流仪对大鼠后肢缺血模型血流动力学的观察

目的应用激光多普勒血流探测仪(LDF)和激光多普勒血流成像仪(LDPI)监测Lewis大鼠后肢急性缺血模型血流和血压的动态变化,探讨大鼠后肢急性缺血后血流变化特点。方法切除大鼠左后肢股动脉制备急性后肢缺血模型,于术后2、7、14、28及49 d对手术侧和非手术侧肢体采用LDF进行血流、血压检测,于术后7 d采用LDPI进行血流检测。结果所有大鼠术后均成活,未发现后肢坏死;在术后14 d内手术侧后肢平均分为2分,在49 d平均分为1分。大鼠手术侧和非手术侧肢体血流比值在术后2 d由术前的1上升至1.31±0.439(P=0.021),术后7 d和14 d分别为0.82±0.538和0.93±0.294,两者比较差异无统计学意义(P=0.502),但均明显低于术后2 d的值(P=0.032和P=0.019);术后28 d下降到最低点(0.41±1.970),明显低于术后2、7和14 d值(P=0.004、P=0.007和P=0.006);在术后49 d手术侧后肢血流恢复到接近术前值(0.98±0.093),明显低于术后2 d(P=0.010)而高于术后28 d值(P=0.005),与术后7 d和14 d的差异无统计学意义(P=0.126和P=0.382)。大鼠手术侧和非手术侧肢体血压比值术后2 d由术前的1明显下降至0.47±0.375(P=0.031);术后7 d继续下降至0.44±0.118,与术后2 d比较差异无统计学意义(P=0.203);术后14 d下降到最低点(0.35±0.115),明显低于术后2 d和7 d值(P=0.001和P=0.036);术后28 d开始上升(0.54±0.146),明显高于术后14 d值(P=0.008),但与术后2 d(P=0.493)和7 d(P=0.551)的差异无统计学意义;术后49 d恢复接近术前值(0.97±0.094),明显高于术后2、7、14和28 d值(P=0.013、P=0.021、P=0.002和P=0.031)。结论切除大鼠后肢股动脉及分支的方法制备后肢急性缺血模型,在术后14~28 d患肢缺血处于最严重阶段。LDF和LDPI可以动态监测肢体血流及血压的变化,对监测大鼠后肢术后缺血的动态演变过程有着重要的作用。     

骨髓间充质干细胞治疗慢性后肢缺血机理的初步研究

目的利用细胞示踪技术探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）治疗慢性后肢缺血的相关机理。方法采用密度梯度离心法结合直接贴壁法分离和培养大鼠MSCs,并以5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记。采用线栓法制备8只Lewis大鼠慢性后肢缺血模型,将其随机均分为MSCs移植组和对照组,分别于患侧后肢肌肉注射MSCs和生理盐水。分别于移植术后第7天和第14天,对其进行临床观察、后肢血流量测定及后肢血管造影,再于相应时间点处死大鼠,取患侧后肢股四头肌和腓肠肌,行HE染色及BrdU免疫组化染色。结果移植术后14 d,8只大鼠全部成活,移植部位均无坏死和肿瘤形成;MSCs移植组大鼠患侧/健侧后肢的血流灌注比值明显增高（1.773比1.279）,而血管造影结果提示2组大鼠的侧支血管数量比值未见显著增加（0.908比0.835）。HE染色结果示2组大鼠的股四头肌及腓肠肌并未发生特殊的病理学变化。BrdU免疫组化结果显示,阳性颗粒定位为股四头肌及腓肠肌的间质细胞和血管内皮细胞;且MSCs的分布存在差异,移植术后7 d腓肠肌内阳性细胞所占比例明显高于股四头肌,而14 d时则相反。结论 MSCs移植在术后早期可以提高血流灌注量,但这并非为增加了侧支血管数量使然,MSCs移植后所引起的旁分泌效应可能在术后早期起着重要的作用。     

骨髓单个核细胞和骨髓源内皮祖细胞移植促进血流重建的比较研究

目的 比较骨髓单个核细胞(MNCs)和骨髓源内皮祖细胞(EPCs)移植促进血流重建的效果,探讨非内皮祖细胞在血流重建中的作用.方法 获取Lewis大鼠骨髓MNCs,部分MNCs在体外诱导分化为EPCs.采用Lewis大鼠建立单侧后肢缺血模型.建模后3 d,将模型鼠随机分为3组:(1)对照组(n=6),将0.8 mL D-Hank's液注入对照组大鼠缺血侧后肢;(2)MNC组(n=6),将8×10~6个骨髓MNC植入MNC组大鼠缺血侧后肢;(3)EPC组(n=6),将体外培养的8 × 10~6个EPC植入EPC组大鼠缺血侧后肢.细胞移植后3周行大鼠后肢动脉造影,检测缺血侧后肢侧支血管数;切取缺血侧后肢腓肠肌,分别行CD31和α-SMA免疫组化染色,计算毛细血管密度和小动脉密度.结果 MNC组毛细血管密度与EPC组差异无统计学意义[(31.67 ± 7.87)个/HP vs.(32.83±5.38)个/HP,P＞0.05].而均高于对照组(19.67 ± 4.80个/HP)(P＜0.05);MNC组侧支血管数与EPC组差异无统计学意义[(4.17±0.75)个vs.(4.50 4±1.38)个,P＞0.05],但均高于对照组[(2.50 ± 1.5)个](P＜0.05);MNC组小动脉密度与EPC组差异无统计学意义[(4.83 ± 1.47)个vs.(5.50 ± 2.35)个,P＞0.05],亦均高于对照组[(2.17±0.98)个](P＜0.05).结论 在骨髓干细胞移植治疗肢体缺血性疾病中,非内皮祖细胞在血流重建中所起的作用与EPC相似.     

pEGFP-C1/Akt体外转染骨髓间充质干细胞对后肢缺血大鼠血管生成的影响

目的 探讨经肌肉注射转染pEGFP-C1/Akt的鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对后肢缺血大鼠血管生成的影响.方法 Wistar大鼠30只,制成双后肢缺血模型,双盲法随机分为基因治疗组(肌注经pEGFP-C1/Akt转染的MSCs)、非基因治疗组(肌注MSCs)及对照组(肌注PBS液).造模前、造膜后即刻及MSCs移植后1～7 d内,每天用红外线皮温仪测定大鼠后肢皮温变化.28 d时经动脉造影观察后肢血管生成情况; 免疫组化染色检测后肢毛细血管密度; 逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测后肢肌肉组织中Akt及血管内皮细胞生长因子(VEGF)的 mRNA和蛋白的表达.结果 移植3 d后基因治疗组大鼠后肢皮温升高明显.28 d时经动脉造影观察基因治疗组后肢侧支血管生成明显; 荧光显微镜观察有绿色荧光细胞在基因治疗组的内收肌和半膜肌分布.毛细血管密度: 基因治疗组为(7.1±0.3)个/高倍镜,非基因治疗组为(4.2±0.4)个/高倍镜,对照组为(1.3±0.2)个/高倍镜,各组间差异均有统计学意义(P＜0.01).Akt及VEGF的 mRNA和蛋白的表达分析: 基因治疗组Akt mRNA(2.44±0.14)和蛋白(1.12±0.13)及VEGF mRNA(1.11±0.11)和蛋白(0.97±0.13)表达水平均明显高于非基因治疗组Akt mRNA(1.58±0.13)和蛋白(0.78±0.12)及VEGF mRNA(0.78±0.14)和蛋白(0.67±0.11)以及对照组Akt mRNA(0.64±0.11)和蛋白(0.36±0.12)及VEGF mRNA(0.56±0.11)和蛋白(0.33±0.13)的表达水平(P＜0.01),后2组间比较差异亦均有统计学意义(P＜0.01).结论 pEGFP-C1/Akt体外转染骨髓MSCs促进后肢缺血大鼠血管生成的效果优于单纯MSCs治疗,为基因转染MSCs治疗缺血性疾病提供可能.     

活性氧、线粒体通透性转化孔介导肌细胞凋亡在失神经骨骼肌萎缩中的相关性

目的 观察活性氧(ROS)、线粒体通透性转化孔(MPTP)在失神经骨骼肌萎缩后的表达变化且与肌细胞凋亡的相关性,探讨ROS、MPTP参与失神经骨骼肌萎缩的具体分子机制.方法 将30只Vistar大鼠随机分为对照组、失神经2d组、失神经7d组、失神经14d组、失神经28d组,每组6只.制作坐骨神经切断后失神经支配的腓肠肌Vistar大鼠模型.应用流式细胞术(FCM)检测失神经支配后腓肠肌细胞ROS的含量,激光共聚焦显微镜检测MPTP的开放,脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测肌细胞凋亡.结果 大鼠失神经支配后,肌细胞中的ROS、MPTP及凋亡率与正常对照组比较,表达随失神经支配时间的延长(<28d)而持续增加,且各组的表达均显著高于对照组(P<0.05),ROS的表达与MPTP的开放呈正相关(r=0.884,P<0.01),与肌细胞的凋亡率呈正相关(r=0.893,P<0.01),MPTP的开放与肌细胞凋亡率呈正相关(r=0.927,P<0.01)与肌细胞萎缩指标肌湿重比呈负相关(r=-0.907,P<0.01).结论 ROS、MPTP为调控失神经支配后骨骼肌萎缩的重要分子,其具体机制是通过线粒体介导的凋亡通路促进骨骼肌萎缩.

Abstract：

Objective To study the expression of reactive oxygen species (ROS) and mitochondrial permeability transition pore (MPTP) in denervated skeletal muscle atrophy and its correlation with cell apoptosis, and explore specific molecular mechanism in denervated skeletal muscle atrophy. MethodsThirty Vista rats were randomly divided into five group: control group, 2-days group, 7-days group, 14-days group, 28-days group. Standard model of denervated gastrocnemius muscle was established. The content of ROS and the opening of MPTP in the gastrocnemius were detected by flow cytometry (FCM) and fluorescence microscope respectively. The apoptotic cells in atrophic muscle were examined by TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL). Results As compared with the control group, the content of ROS, the opening of MPTP and the apoptosis of gastrocnemius were increased continuously (<28 days) in 2-days group, 7-days group, 14-days group, 28-days group (P<0.05). The content of ROS had a positive correlation with the opening of MPTP (r=0.884,P<0.01) and the apoptosis rate (r=0.893,P<0.01), and the opening of MPTP had a positive correlation with the apoptosis rate (r=0.927,P<0.01), but a negtive correlation with the ratio of muscle wet weight (r=-0.907,P<0.01). Conclusion ROS and MPTP are important elements in regulating skeletal muscle atrophy after denervation by the mitochondrial apoptosis pathway.     

碳光子治疗仪局部照射对大鼠腓肠肌闭合性急性损伤的影响

目的:观察碳光子治疗仪局部照射对大鼠腓肠肌闭合性损伤后急性炎症反应、肌细胞损伤及肌肉再生情况的影响.方法:70只9周龄雄性SD大鼠随机分为3组:空白对照组(n=5)、损伤组(n=35)及损伤后照光组(n=30).以500 g砝码从50 cm高度自由坠落击打大鼠腓肠肌,制备肌肉损伤模型.制模成功后损伤后照光组受损部位使用YW-0828A型碳光子治疗仪(波长320～5 000 nm,功率密度11.5 mW/cm2)每天光照20 min,连续10 d;损伤组及空白对照组同一部位接受相同机器的假性照射.在损伤后0(损伤后即刻)、1、2、3、5、7、14 d测量大鼠后肢损伤处的周径;取血进行中性粒细胞计数,磷酸肌酸底物法检测血清肌酸激酶,ELISA法检测血清C反应蛋白(CRP)水平;取肌肉组织进行组织病理学观察.结果:大鼠后肢在击打后即刻明显肿胀,伤后0、1、2、3、5、7d较对照组后肢腓肠肌周径明显增加(P＜0.01).损伤后照光组在损伤后第1、2、5、7天后肢腓肠肌周径较损伤组明显减小,损伤后照光组于伤后7、14 d,损伤组于伤后14 d达到空白对照组水平.损伤后照光组在损伤后1、3、5天中性粒细胞计数,损伤后1、2、3、5、7天的血清肌酸激酶含量及损伤后1、2、3、5天的血清CRP水平均明显减少(P＜0.01).损伤组腓肠肌于损伤后即刻出现出血、水肿、变性及部分腓肠肌断裂,第7天可见新生的肌纤维,水肿减轻,第14天肌肉可见纤维化;损伤后照光组第7天镜下可见排列整齐的肌纤维和较少的成纤维细胞,第14天可见新生肌纤维排列整齐.结论:碳光子治疗仪照射可促进炎症吸收、减轻炎症反应,减少肌细胞损伤,促进骨骼肌的恢复.     

大鼠慢性肢体缺血模型的建立及其与急性肢体缺血模型的比较

目的建立大鼠慢性后肢缺血模型并与其急性后肢缺血模型比较,分析两者术后血流灌注和基因表达的差异。方法 40只SD大鼠随机均分为2组,分别建立大鼠慢性(结扎、离断右侧髂股动脉分支,股动脉内置入抗凝硅胶管并固定)和急性后肢缺血模型(结扎、离断右侧髂股动脉分支后直接结扎并切除股动脉)。用激光多普勒血流检测仪记录术前至术后连续4周肢体血流灌注情况。用实时荧光定量PCR法检测术后24 h患肢股内收肌缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)基因的表达。结果术后24 h,急性缺血组患肢股内收肌HIF-1α和VEGF表达水平均明显高于慢性缺血组(均P<0.05)。急性缺血组血流灌注在术后即刻降至对侧肢体的24%,但恢复较迅速,至术后28 d达到并稳定在82%;慢性缺血组于术后7 d达到血流灌注谷值(48%),随后缓慢恢复,至术后28 d至最高值(67%)。两组血流灌注水平在各观察时间点均有统计学差异(均P<0.05)。结论大鼠慢性和急性后肢缺血模型的病变特点及基因表达存在差异,慢性后肢缺血模型更符合临床严重肢体缺血的病理过程。     

神经生长因子基因转染对缺血肢体血管生成和骨骼肌纤维重塑的影响

目的观察神经生长因子(NGF)对缺血肢体血管生成和骨骼肌纤维重塑的影响,探讨NGF与血管内皮生长因子(VEGF)在血管生成中的关系。方法 18只小鼠随机分为正常对照组、空白对照组和NGF治疗组,每组各6只。建立小鼠左后肢缺血模型,术后第7 d对NGF组进行基因转染。术后第21 d时对3组小鼠左后肢缺血进行评估,然后取腓肠肌组织进行HE染色、增殖细胞核抗原(PCNA)和CD34免疫组织化学染色,ELISA法检测腓肠肌组织中NGF、VEGF蛋白表达量,肌球蛋白ATP酶染色分析肌纤维类型。结果术后第21 d时,NGF组的左后肢肌肉萎缩程度弱于空白对照组,左后肢缺血评分明显低于空白对照组(P0.05),内皮细胞增殖指数、毛细血管密度、NGF和VEGF表达量均明显高于空白对照组(P0.05),Ⅰ型肌纤维比例也明显高于空白对照组(P0.05)。结论 NGF基因转染能够促进缺血肢体NGF、VEGF表达和血管生成,诱导肌纤维向Ⅰ型重塑,相关分子调控机制仍需进一步研究。     

失神经骨骼肌NF-kappa B的表达变化与线粒体通透性转换孔开放及细胞凋亡的关系

目的 通过研究去神经骨骼肌细胞核转录因子kappa B(nuclear factor of kappa B,NF-kappa B)p65与线粒体通透性转换孔(mitochondrion permeability transition pore,MPTP)及细胞凋亡的关系,探讨失神经肌萎缩的相关机制.方法 Wistar大鼠30只,随机分为健康对照组、去神经2 d组、去神经7 d组、去神经14 d组、去神经28 d组.建立右下肢腓肠肌失神经支配模型,对照组仅做假手术.采用Western Bloting检测大鼠腓肠肌NF-kappa B p65蛋白表达水平,共聚焦荧光显微镜观察MPTP的开放情况,脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(Tunnel)技术检测细胞凋亡情况,并结合肌湿重进行相关性分析.结果 大鼠失神经支配后随着肌湿重比的下降,NF-kappa B p65蛋白、MPTP的开放以及骨骼肌细胞的凋亡率在各个时间点持续增加,且明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),NF-kappa B与MPTP的开放(r=-0.896,P＜0.01)以及凋亡率(r=0.890,P＜0.01)密切相关,并且NF-kappa B和凋亡率的升高与肌湿重比呈负相关关系(r分别为-0.919、-0.924,P均＜0.01).结论 NF-kappa B在失神经肌萎缩中起重要作用,其作用机制与MPTP的开放及细胞凋亡有关.

Abstract：

Objective To analyze the relationship of nuclear factor of kappaB (NF-κB) p65 to mitochondrion permeability transition pore (MPTP) and apoptosis during denervation atrophy of the gastrocnemius muscle, and delineate their potential roles in skeletal muscle atrophy. Methods Thirty Wistar rats were randomly divided into 5 groups: control group, 2 day denervation group, 7 day denervation group, 14 day denervation group, and 28 day denervation group. The gastrocnemius muscle was denervated by transection of the sciatic nerve. Sham operation was done in the control group. Levels of NF-κB p65 protein and the opening of the mitochondrial permeability transition pore in the gastrocnemius muscle were detected respectively by Westem Bloting and confocal fluorescence microscopy. The apoptotic cells in atrophic muscles were quantitated with Tunel. Muscle wet weight was also measure for comparison. Results At different time points after denervation, the levels of NF-κB p65, the opening of MPTP and apoptosis of gastrocnemius were significantly higher than those in the normal group ( P ＜ 0.05). Furthermore NF-κB p65 had a positive correlation with the opening of MPTP (r= - 0.896, P ＜ 0.01) and with the ratio of apoptosis (r = 0.890,P ＜0.01 ), while the increase of NF-κB p65 and apoptosis was negatively correlated with the ratio of muscle wet weight ( r = - 0. 919,-0.924, P ＜ 0.01 ). Conclusion NF-κ3 plays an important role in denervation skeletal muscle atrophy.This effect is related to the opening of MPTP and apoptosis.     

丙泊酚在正颌外科控制性降压中的脑保护作用机理

目的:通过大鼠实验,研究丙泊酚在大鼠脑缺血再灌注损伤时对线粒体通透性转换孔活性的影响程度,及其抑制神经细胞凋亡坏死的作用机制。以探讨其在正颌外科控制性降压中的脑保护作用机理。方法:选取健康雄性大鼠30只,体重250～300g,采用"双侧颈总动脉阻断法"建立前脑缺血再灌注模型,左侧侧脑室于假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R)组注射生理盐水1ml/kg,丙泊酚干预组(P组)射注丙泊酚1mg/kg,24h后断头提取海马组织线粒体,加入CaCl2于37℃下形成钙超载后孵育5min。电镜观察其微观组织形态学改变,采用紫外分光光度计法来观察线粒体通透性转换孔开放程度。结果:电镜下C组线粒体结构完整,排列密集;I/R组可见线粒体明显肿胀、嵴断裂、膜破裂;P组可见线粒体部分肿胀,嵴部分断裂,但损伤程度轻于I/R组。与C组相比较,I/R组和P组线粒体吸光度值明显下降(P<0.05);与I/R相比,P吸光度值下降幅度减小(P<0.05)。丙泊酚组细胞肿胀坏死明显减轻,凋亡细胞及坏死细胞明显减少。结论:丙泊酚能够改善大鼠前脑缺血再灌注后线粒体形态,其机制可能与其抑制线粒体通透性转换孔(MPTP)开放有关,从而改善线粒体功能,抑制神经细胞凋亡坏死,减轻脑缺血再灌注损伤。这说明丙泊酚在正颌外科控制性降压中使用时对大脑有良好的保护作用,可以大幅度提高手术安全效果,具有重要的临床指导意义。     

自体骨髓干细胞移植治疗下肢缺血的研究

目的　为临床探索一种更简便安全的下肢动脉缺血性疾病的治疗途径。方法　建立鼠后肢缺血动物模型 ,将取于自体的骨髓细胞制成悬液注射于缺血部位 ,4周后行动脉造影并取标本 ,测定毛细血管密度。结果　动脉造影显示大鼠缺血肢体侧支动脉明显增多 ,毛细血管密度增加。结论　自体骨髓干细胞移植可望成为一种简单的、有效的治疗下肢缺血的方法     

基质细胞衍生因子联合外周血内皮祖细胞移植治疗裸鼠肢体缺血

目的 应用基质细胞衍生因子(SDF-1)结合外周血内皮祖细胞(EPCs)移植治疗裸鼠肢体缺血,探讨其促进血管新生的能力.方法 建立裸鼠后肢缺血模型,随机分为缺血对照组、EPCs移植组、SDF-1组、SDF-1联合EPCs移植组及SDF-1联合AMD3100处理后的EPCs移植组.移植第3、7天检测后肢腓肠肌CD34+VEGFR+细胞数,第28天检测缺血区新生血管密度.结果 移植第3天对照组、EPCs组、SDF-1组、SDF-1+EPCs组、SDF-1+AMD3100 EPCs组双阳性细胞数分别为0.00±0.00个/HP、5.30±0.65个/HP、0.00±0.00个/HP、10.31±0.63个/HP及1.86±0.17个/HP;第7天分别为0.00±0.00个/HP、7.05±0.18个/HP、0.00±0.00个/HP、11.81±0.53个/HP及2.83±0.48个/HP,第28天新生毛细血管数分别为3.00 ±0.13个/HP、6.15±0.04个/HP、6.20±0.10个/HP、10.65 ±0.08个/HP、6.21±0.08个/HP.SDF-1可增加缺血区CD34+ VEGFR+细胞浸润数量(P＜0.05),提高新生血管数量(P＜0.05),SDF-1联合外周血EPCs可进一步提高新生血管数量(P＜0.05).结论 SDF-1能够促进EPCs归巢,增强血管形成能力,促进血管新生;AMD3100能够阻断SDF-1的诱导迁移效应.

Abstract：

Objective To explore the effect of stromal cell-derived factor-1 ( SDF-1 ) in combination with transplantation of peripheral blood endothelial progenitor cells (EPCs) for the treatment of nude mice hindlimb ischemia. Methods Hindlimb ischemia model was established in nude mice, mice were then divided into five groups randomly: ischemic control group, peripheral blood EPCs transplantation group, SDF-1 local application group, SDF-1 combined with EPCs group, SDF-1 combined with AMD3100 treated EPCs group. Local CD34+VEGFR+ cells in the hind gastrocnemius were detected at day 3,7 after transplantation. The intensity of neovasculorization were evaluated at day 28. Results The double-positive cells number of control group, EPCs group, SDF-1 group, SDF-1 + EPCs group, SDF-1 + AMD3100 EPCs group were 0.00 ±0.00,5. 30 ±0.65,0.00 ±0.00,10. 31 ±0. 63,1. 86 ±0. 17 at day 3 and 0. 00 ±0. 00, 7.05 ±0. 18,0. 00 ±0. 00,11. 81 ±0. 53,2. 83 ±0. 48 at day 7. The number of new capillaries were 3. 00 ± 0.13,6.15 ± 0. 04,6. 20 ± 0. 10,10. 65 ± 0.08,6. 21 ±0. 08 at day 28. SDF-1 increased the CD34 + VEGFR+ cells (P ＜0. 05) and the number of new vessels (P ＜0.05). SDF-1 combined EPCs further increased the number of new vessels (P ＜ 0. 05 ). Conclusions SDF-1 enhances blood vessel formation and promotes angiogenesis by promoting EPCs homing, which could be blocked by AMD3100.     

GABAB受体mRNA在慢性神经痛大鼠脊髓中的表达

目的通过半定量法检测大鼠腰段脊髓GABAB受体各亚型mRNA的量,探讨GABAB受体在慢性神经痛中的作用.方法结扎大鼠左侧L5脊神经根建立慢性神经痛模型.SD大鼠24只随机分成4组,每组6例.A组假手术后观察7d;B组结扎后观察7d;C组假手术后观察14d;D组结扎后观察14d.于术前、术后1、3、7、10、14d测双后肢光热刺激性痛阈.分别于术后7、14d取出大鼠腰段脊髓,行冰冻切片,运用地高辛法原位杂交技术对脊髓中GABAB受体各亚型mRNA半定量检测.结果左L5脊神经根结扎术后7、10、14d大鼠的左后肢痛阈明显低于假手术大鼠(P＜0.01).B组大鼠脊髓GABAB受体各亚型mRNA量明显少于A组(P＜0.01),而D组的明显少于C组(P＜0.01).结论SD大鼠脊髓中GABAB受体各亚型基因表达有可塑性,在慢性神经痛时表达减少,提示GABAB受体各亚型可能参与慢性神经痛的调节.     

大鼠慢性皮肤溃疡创面愈合中转化生长因子-β1、胶原Ⅰ、胶原Ⅲ的蛋白表达

目的 观察大鼠慢性皮肤溃疡创面愈合过程中转化生长因子-β1( TGF-β1)、胶原Ⅰ和胶原Ⅲ的蛋白表达。方法 将24只8周龄雌性Wister大鼠分为单纯创面组(A组)和皮瓣+创面组即缺血模型组(B组),每组各12只;苏木素-伊红(HE)染色法观察创面1、3、7、10d上皮化率、收缩率及中性粒细胞;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定创面1、3、7、10 d TGF-β1、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的蛋白表达。结果 A组上皮化率在各个时间段均高于B组,且在第7天差异有统计学意义(P＜0.05)。A组收缩率明显低于B组。A组中性粒细胞第1、3天逐渐增加,第3天增加到最多,随后逐渐减少;B组在1、3、7d出现增加趋势,第7天增加到最多,第10天减少。TGF-31含量A组于术后1、3、7、10d呈曲线上升趋势,B组在术后1、3、7d逐渐减低,10 d较7d略有回升,且在第1天两组差异有统计学意义(P＜0.05)。胶原Ⅰ蛋白的含量两组随着术后时间的延长均呈减少趋势,在第10天两组差异有统计学意义(P＜0.05)。胶原Ⅲ蛋白的含量两组随术后时间的延长也呈减少的趋势,但在第3天A组比B组明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 在缺血的干预因素作用下TGF-β1、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达的减少可能延迟了慢性创伤的正常愈合。     

缺血后处理对大鼠肝缺血再灌注时肝细胞线粒体膜通透性转换和膜电位的影响

目的 评价缺血后处理对大鼠肝缺血再灌注时肝细胞线粒体膜通透性转换和膜电位(△Ψm)的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠40只,体重220～260 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=8):假手术组(S组)、苍术苷+假手术组(A+S组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后处理组(IPO组)和苍术苷+缺血后处理组(A+IPO组).采用阻断肝中叶和左叶60 min,恢复血流灌注6 h的方法 建立大鼠肝缺血再灌注模型.S组和A+S组仅游离肝门,不阻断血管;A+S组关腹前静脉注射苍术苷5 mg/kg;IR组制备肝缺血再灌注模型;IPO组于再灌注前行缺血后处理,再灌注1 min,缺血1 min,反复3次;A+IPO组于再灌注前静脉注射苍术苷5 mg/kg.于缺血前即刻和再灌注6 h时,采集左颈静脉血样,测定血清ALT和AST的活性.再灌注6 h时处死大鼠,取肝左叶组织,观察超微结构和细胞凋亡情况,计算凋亡指数,测定细胞色素c(Cyt c)的表达水平、△Ψm和线粒体通透性转换孔(MPTP)活性.结果 与S组比较,A+S组时血清ALT和AST的活性、凋亡指数、Cyt c表达、△Ψm和MPTP活性差异无统计学意义(P＞0.05),IR组、IPO组和A+IPO组再灌注6 h时血清ALT和AST的活性、凋亡指数升高,Cyt c表达上调,△Ψm降低,MPTP活性升高(P＜0.05);与IR组比较,IPO组血清ALT和AST的活性、凋亡指数降低,Cyt c表达下调,△Ψm升高,MPTP活性降低(P＜0.05),肝组织病理学损伤减轻,A+IPO组各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与IPO组比较,A+IPO组血清ALT和AST的活性、凋亡指数升高,Cyt c表达上调,△Ψm降低,MPTP活性升高(P＜0.05),肝组织病理学损伤加重.结论 缺血后处理可抑制肝细胞线粒体膜通透性转换,减少线粒体△Ψm的耗散,从而减轻大鼠肝缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effects of ischemic postconditioning on mitochondrial permeability transition and mitochondrial transmembrane potential(△Ψm)following hepatic ischemia-reperfusion(I/R)in rats.Methods Forty male SD rats weighing 220-260 g were randomly divided into 5 groups with 8 animals in each group:sham operation group(group S);atractyloside+sham operation group(group A+S);I/R group;ischemic postconditioning group(group IPO)and atractyloside+ischemic postconditioning group(group A+IPO).The animals were anesthetized with intramuscular injection of atropine 0.05 mg/kg.Hepatic I/R was produced by occlusion of hepatic blood flow for 60 min followed by 6 h reperfusion.In group A+S,atractyloside 5 mg/kg was injected intravenously before abdomen Was closed.In group IPO,the animals were subjected to 3 cycles of 1 min reperfusion interspersed with 1 min hepatic isehemia at the end of 60 min hepatic ischemia.In group A+IPO,atractyloside 5 mg/kg was injected intravenously before reperfusion. Venous blood samples were collected for determination of serum ALT and AST activities immediately before ischemia and at 6 h of reperfusion. The animals were then sacrificed.Their livers were removed for microscopic examination, detection of apoptosis and determination of cytochrome c (Cyt c) expression, △Ψm and mitochonerial permeability transition pore (MPTP)activity. Apoptosis index (AI) was calculated. Results There was no significant difference in serum ALT and AST activities, AI, Cyt c expression, △Ψm and MPTP activity between S and A + S groups (P＞0.05). Compared with group S, serum ALT and AST activities and AI were significantly increased, Cyt c expression was up-regulated, △Ψm was decreased and MPTP activity was increased in groups I/R, IPO and A+IPO(P＜0.05).Compared with group I/R, serum ALT and AST activities and AI were significantly decreased,Cyt c expression was down-regulated, △Ψm was increased and MPTP activity was decreased in group IPO(P＜0.05), while no significant change was found in group A+IPO(P＞0.05).Compared with group IPO,serum ALT and AST activities and AI were significantly increased, Cyt c expression was up-regulated, △Ψm was decreased and MPTP activity was increased in group A + IPO(P＜ 0.05).Microscopic examination showed that hepatic injury was reduced in group IPO compared with group I/R, while aggravated in group A+ IPO compared with group IPO. Conclusion Ischemic postconditioning can protect liver from I/R injury by attenuating the I/R-induced increase in MPTP opening and decrease in △Ψm in rats.     

甲状腺术中甲状旁腺原位损伤类型对甲状旁腺功能的影响

目的 通过模拟甲状腺全切除术中甲状旁腺不同类型的原位损伤情况建立动物模型,研究不同程度的甲状旁腺原位损伤对术后甲状旁腺功能恢复的影响.方法 以实验家兔为研究对象,随机分为A、B、C、D四组,每组8只,A组(假手术组):单纯暴露、探查甲状腺、甲状旁腺;B组(血供损伤组):双侧甲状腺全切除+双侧下甲状旁腺血供损伤保留被膜;C组(被膜损伤组)双侧甲状腺全切除+双侧下甲状旁腺被膜损伤保留血供;D组(复合损伤组)双侧甲状旁腺全切除+双侧下甲状旁腺被膜及血供的复合损伤.术前1d,术后第1天、第3天、第5天、第7天监测血钙、血PTH,术后第7天切取双侧下甲状旁腺行苏木精-伊红染色,观察甲状旁腺组织的存活及病理损害.结果 (1)各组动物术前血钙、血PTH差异无统计学意义(P＞0.05);(2)A组术后血钙下降,但在第5天恢复至术前水平(P＞0.05);B、C组术后血钙明显下降(P＜0.05),以术后第1天最低,逐渐恢复,但C组恢复较B组快(P＜0.05);D组术后血钙持续下降;(3)A组术后血PTH下降,但在第7天恢复至术前水平(P＞0.05);B、C组术后血PTH明显下降(P＜0.05),以术后1d最低,逐渐恢复,但3d后C组恢复较B组快(P＜0.05);D组术后血PTH持续下降;(4)病理结果:A组甲状旁腺以主细胞为主,少量空泡性改变(5％～10％);B组甲状旁腺出血、坏死(40％ ～50％),部分细胞空泡变性(30％ ～ 40％),中心伴纤维化,周边可见炎性肉芽肿及增生的甲状旁腺组织;C组甲状旁腺出血(10％ ～20％),部分细胞空泡变性(10％ ～ 20％);D组甲状旁腺坏死,几乎无正常甲状旁腺组织,明显纤维化,残存的甲状旁腺组织较少呈散在分布.结论 (1)甲状腺术中甲状旁腺原位损伤的类型影响术后甲状旁腺功能的恢复,其中甲状旁腺血供和被膜的复合损伤最严重,甲状旁腺缺血坏死,功能不能恢复;单纯血供损伤,部分能恢复功能;带血管蒂的甲状旁腺原位保留能较快的恢复功能;(2)对于甲状腺术中严重血供及被膜损伤,甚至游离的甲状旁腺应立即自体移植.