负载肿瘤抗原的DC疫苗对小鼠体内膀胱肿瘤的抑制作用

目的 研究负载肿瘤抗原的DC疫苗对T739小鼠体内膀胱肿瘤的免疫学效应.方法 建立BTT 739荷瘤小鼠动物模型,随机分为实验组和实验对照组和空白对照组,于肿瘤细胞接种后第7、14天给予相应DC疫苗治疗,每组分2亚组,分别用于测量瘤质量、体积及用于观察荷瘤小鼠存活情况.结果 负载肿瘤抗原的DC疫苗实验组荷瘤鼠肿瘤平均体积和平均瘤质量均显著低于对照组(P＜0.01),生存期长于对照组,并且有2只小鼠无瘤长期存活.经DC疫苗实验组治愈的2只小鼠30 d后无肿瘤生长,再次皮下接种BTT739细胞观察30 d仍无肿瘤发生.结沦负载肿瘤抗原的DC疫苗对膀胱肿瘤荷瘤小鼠具有抑瘤效应和生存期延长作用.     

树突状细胞疫苗联合CpG-ODN对膀胱肿瘤细胞的免疫学效应研究

目的 探讨负载肿瘤抗原的树突状细胞(DC)疫苗联合含未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤(CpG)序列的寡脱氧核糖核苷酸(CpG-ODN)对膀胱肿瘤细胞的免疫学效应.方法 用小鼠BTT739细胞反复冻融抗原致敏培养第7天的DC,48h后分别加入CpG-ODN及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导DC成熟,制备负载肿瘤抗原的DC疫苗,灭活后用于刺激T淋巴细胞制备效应细胞(CTL),乳酸脱氢酶释放实验测定各组CTL对BTT739细胞的杀伤活性,ELISA法测定效应细胞培养上清液的干扰素-γ(IFN-γ)水平,同时检测了CTL对自体淋巴细胞的杀伤活性.结果负载肿瘤抗原的DC诱导的效应细胞分泌较高水平的IFN-γ,并对BTT739细胞具有较高的杀伤效应,CpG-ODN活化的DC疫苗诱导的效应细胞分泌IFN-γ水平及对肿瘤细胞的杀伤活性均高于TNF-α活化的DC疫苗诱导的效应细胞(P<0.01).DC疫苗对自体淋巴细胞无明显免疫杀伤活性.结论 CpG-ODN可增强负载肿瘤抗原的DC疫苗对膀胱肿瘤细胞的免疫杀伤效应,并且对自体淋巴细胞无免疫杀伤活性,为膀胱癌的免疫治疗提供了实验基础.     

负载辐射凋亡MB49肿瘤细胞抗原的树突状细胞(DC)疫苗对小鼠膀胱癌的抑制作用

 目的 研究辐射凋亡MB49肿瘤细胞诱导的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗的制备及对C57BL/6小鼠体内膀胱肿瘤的免疫学效应。方法 采用辐射法获取MB49细胞抗原并用其致敏骨髓来源的DC来制备DC疫苗。用MB49小鼠膀胱癌细胞建立荷瘤动物模型,随机分为实验组和对照组,于肿瘤细胞接种后第7、14天给予相应DC疫苗治疗或者PBS,每组分为2个亚组,分别用于测量瘤质量、体积及用于观察荷瘤小鼠存活情况。结果 负载辐射凋亡肿瘤细胞DC疫苗的实验组荷瘤小鼠,其肿瘤的平均体积和平均质量均显著低于对照组(P<0.01),生存期长于对照组。DC疫苗实验组中有2只小鼠30天内无肿瘤生长,再次皮下接种MB49细胞观察30天仍无肿瘤发生。结论 负载辐射凋亡肿瘤细胞的DC疫苗对膀胱肿瘤荷瘤小鼠具有抑瘤效应和延长生存期的作用。     

小鼠骨髓树突状细胞的诱导培养及抗CT-26肿瘤细胞的研究

目的：研究小鼠骨髓树突状细胞的诱导培养及其抗肿瘤特性。方法：用重组的鼠粒-巨噬细胞刺激因子(GM—CSF)及白细胞介素4(IL-4)从小鼠骨髓干细胞中诱导培养树突状细胞(DC),用流式细胞仪检测DC表型。肿瘤细胞CT-26冻融液负载DC后,治疗荷瘤BALB／c小鼠,测定DC抑瘤、消瘤作用及小鼠的生存期变化。结果：诱导的DC形态典型,表面高表达CD80、CD86、I—A^d等免疫分子。抗原负载的DC能明显抑制早期肿瘤的生长,治疗组与非治疗组生存期差异有统计学意义。结论：树突状细胞早期应用具有明显抗CT-26肿瘤细胞作用,可延长荷瘤小鼠的生存期。     

MDP-Cyclic与CpG-ODN 1826对小鼠膀胱瘤免疫治疗效应的初步研究

目的：研究卡介苗（BCG）有效成分MDP-Cyclic和细菌细胞核有效成分CpG-ODN 1826免疫治疗小鼠膀胱瘤效应.方法：用小鼠膀胱肿瘤细胞（BTT739）在T739小鼠皮下接种,肿瘤形成后,于瘤内多点注射MDP-Cyclic或CpG-ODN 1826共3次.ELISA检测IFN-γ和IL-4含量,3H-TdR掺入法和MTY法检测脾淋巴细胞增殖效应和对靶细胞杀伤效应.结果：（1）与生理盐水（NS）对照组相比,联合应用MDP-Cyclic和CpG-ODN 1826组小鼠肿块重量明显减轻,优于单独使用CpG-ODN 1826组;（2）联合用药能明显促进IFN-γ分泌,而对IL-4没有显著影响;（3）脾淋巴细胞对联合用药或单用MDP-Cyclic刺激均有增殖作用,与NS对照组相比差异有统计学意义;（4）脾淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤率联合用药组高于其它组.结论：联合应用免疫调节剂MDP-Cyclic和CpG-ODN 1826能抑制小鼠膀胱肿瘤生长.     

RNA致敏树突状细胞治疗胶质瘤的实验研究

目的:肿瘤RNA致敏树突状细胞(DC)治疗颅内荷瘤小鼠,观察DC疫苗对脑胶质瘤的治疗作用,探讨免疫反应的机理,为DC疫苗的临床应用提供实验基础。方法:用G422胶质母细胞瘤RNA冲击致敏DC制成DC疫苗,检测DC疫苗的CTL活性,瘤内和皮下两种途径注射荷瘤小鼠以进行免疫治疗,观察小鼠生存期,并与PBS、单纯DC组进行比较,同时检测血清IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-4等细胞因子,并行病理检查。结果:DC疫苗的CTL活性明显高于对照组(P<0.01)。两种途径注射DC疫苗,治疗组小鼠生存时间均明显延长(P<0.01),血清IFN-γ显著升高(P<0.01),IL-10明显下降(P<0.05),病理提示肿瘤出现坏死。两种注射途径间以上指标无明显差异。结论:肿瘤RNA冲击致敏DC注射荷瘤小鼠具有明显的免疫治疗作用,能显著延长动物生存期,并能诱导特异性抗肿瘤细胞免疫反应,其机理主要是Th1细胞介导的细胞免疫反应,且免疫反应的程度与注射途径无关。     

负载肿瘤抗原的树突状细胞疫苗诱导CTL的抗肿瘤效应

目的:探讨负载肿瘤抗原的树突状细胞(DC)疫苗诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的体外杀瘤作用及对荷瘤小鼠的治疗作用.方法:体外培养的小鼠骨髓树突状细胞用小鼠结肠腺癌细胞株CT26细胞抗原冲击致敏制备负载肿瘤抗原的DC疫苗;负载肿瘤抗原的DC疫苗激活同源T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL),采用乳酸脱氢酶(LDH) 4 h释放法检测CTL在体外对CT26细胞的杀伤活性;建立CT26荷瘤小鼠模型,应用CTL治疗荷瘤小鼠,观察肿瘤大小和小鼠存活期.结果:负载CT26肿瘤抗原的DC疫苗能够诱导T细胞增殖分化为肿瘤特异CTL,该CTL对CT26细胞有高效而强烈的杀伤作用,杀伤率为(83.95±11.25)%,而对B16细胞、3LL Lewis 细胞无明显杀伤作用,杀伤率分别为(12.75±5.36)%和(11.38±4.57)%.应用CTL治疗荷瘤小鼠能显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠存活期.结论:负载肿瘤抗原的DC疫苗能够诱导高效而特异的CTL杀瘤活性并能治疗荷瘤小鼠.提示负载肿瘤抗原的DC疫苗诱导的CTL可能在肿瘤的免疫治疗中发挥重要作用.     

DC-OVA疫苗在裸鼠体内的抗肿瘤效应

目的 构建靶向树突状细胞(dendritic cell, DC)的肿瘤疫苗DC-OVA系统,探讨DC-OVA肿瘤疫苗在祼鼠体内的抗肿瘤效应及相关机制。方法 构建表达肿瘤抗原OVA的树突状细胞。建立携带OVA的Lewis肺癌细胞(Lewis lung cancer cell-OVA, LLC-OVA)的皮下荷瘤裸鼠模型,瘤旁注射DC-OVA疫苗,通过记录肿瘤大小观察肿瘤生长抑制状况。以IHC方法观察肿瘤组织CD3、Nestin、CD133阳性细胞;观察脾DC相关分子(CD11c、OVA)的阳性表达以及T细胞(CD3⁺)的分布、数量和功能变化。同时,应用ELISA方法检测血清中IL-12的表达水平。结果 DC-OVA疫苗预防组与PBS对照组比较,呈现出明显的肿瘤生长抑制(P＜0.05)。与对照组相比,DC-OVA疫苗治疗组肿瘤明显缩小(P＜0.001)。疫苗治疗3次组与治疗1次组比较,效果更明显(P＜0.05)。于实验第4周,疫苗治疗1次组与对照组比较,CD3阳性表达高,Nestin、CD133阳性表达低(P＜0.05);治疗1次组血清IL-12含量较对照组升高(P＜0.001);第8周,治疗1次组血清IL-12含量较第4周治疗组及第8周对照组低。结论 DC-OVA疫苗特异性杀伤了LLC-OVA肿瘤细胞,使肿瘤干细胞表达Nestin、CD133减少。     

肿瘤干细胞样细胞RNA致敏树突状细胞治疗大鼠9L脑肿瘤

目的：利用大鼠9L肿瘤干细胞样细胞（cancer stem like cells,CSLCs）总RNA致敏树突状细胞（dendritic cells,DC）治疗9L/F344大鼠颅内胶质瘤,观察DC疫苗对脑胶质瘤的治疗作用,探讨其免疫反应的机制,为DC疫苗的临床应用提供实验基础。方法：40只颅内荷瘤F344大鼠随机分成4组,每组10只,作为实验组：（1）树突状细胞组（DC-9L）：注射转染贴壁9L细胞RNA的DC组;（2）DC-9LTS组：注射转染9L肿瘤球RNA的DC组;（3）DC组：注射未经转染RNA;（4）磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline,PBS）组：注射100 μL PBS。非荷瘤F344大鼠10只设为对照组,仅在右侧尾状核注射10 μL DMEM/F12培养基。利用大鼠9L肿瘤干细胞样细胞的总RNA致敏DC,制备DC-9LTS,采用皮下注射的方式,对9L/F344大鼠颅内胶质瘤模型进行免疫治疗,观察荷瘤大鼠生存期,同时检测血清干扰素-γ（interferon-gamma,IFN-γ）的浓度,免疫组织化学染色对各治疗组肿瘤组织CD4、CD8淋巴细胞浸润情况进行分析。结果：各实验组大鼠的中位生存期分别为：PBS组21 d,DC组为21 d,DC-9L组为31 d,DC 9LTS组为36 d。DC-9LTS组大鼠的中位生存期与其余各组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;DC-9L组与DC组、PBS组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;而DC组与PBS组之间差异无统计学意义(χ2＝0.071,P＝0.789),DC-9LTS组的IFN γ浓度为（157.08±7.25） ng/L,高于其余各组（P＜0.05）,且大鼠肿瘤组织内部及瘤周组织均有大量CD8淋巴细胞浸润。DC-9L组中,在肿瘤组织内部及瘤周也可见CD8淋巴细胞浸润, DC-9LTS组CD8的平均光密度值（D）明显高于DC-9L组（P＜0.001）,DC-9LTS组及DC-9L组均未见CD4淋巴细胞的表达。在DC组和PBS组中,肿瘤组织中未见CD4或CD8淋巴细胞浸润。结论：利用大鼠9L肿瘤干细胞样细胞总RNA体外致敏树突状细胞,制备树突状细胞疫苗,回输治疗9L/F344大鼠颅内胶质瘤,能明显延长荷瘤大鼠生存期,为靶向性杀伤脑肿瘤干细胞的胶质瘤免疫治疗提供了实验基础及理论依据。     

肿瘤抗原冲击的树突状细胞对小鼠肾细胞癌的治疗作用研究

目的 树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗是近年来肿瘤免疫治疗的热点,文中观察肿瘤冻融抗原体外冲击的DC对肾细胞癌(renal cell carcinoma, RCC)的治疗作用. 方法 反复冻融法制备肿瘤抗原,Lowry法测定肿瘤抗原蛋白浓度,小鼠重组巨噬细胞粒细胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)培养扩增小鼠DC,肿瘤抗原体外冲击制备DC瘤苗,DC瘤苗与淋巴细胞混合培养诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),LDH释放法测定CTL的杀伤活性,小鼠皮下接种Ranca细胞荷瘤后72 h皮下接种DC瘤苗,1次/周,共接种3次,荷瘤后4周取瘤体称重. 结果 小鼠RCC Ranca细胞冻融抗原体外冲击制备的DC瘤苗具有典型的DC形态特征与免疫表型特征,在体外能有效诱导肿瘤特异性CTL生成,对于小鼠RCC Ranca细胞具有较强的杀伤作用,体内接种DC瘤苗治疗组小鼠肿瘤体积较等渗盐水对照组及细胞因子激活的杀伤(lymphokine activated killev,LAK)细胞治疗对照组明显缩小, DC瘤苗治疗组小鼠的瘤体重较等渗盐水对照组(P<0.01)及LAK细胞治疗对照组(P<0.05)显著减小. 结论 肿瘤冻融抗原体外冲击的DC瘤苗对小鼠RCC具有明显的治疗作用,本研究为DC免疫治疗复发、难治性RCC提供了实验依据.     

MAGE-3抗原肽致敏DC疫苗抗膀胱癌细胞的体外实验

目的探讨黑色素瘤MAGE-3抗原肽致敏的树突状细胞(DC)疫苗体外抗膀胱癌细胞增殖作用及其分子机制。方法采用Ficoll法从HLA-A2型外周血中分离单核细胞,细胞因子GM-CSF和白细胞介素4(IL-4) 诱导扩增DC细胞后经MAGE-3抗原肽致敏,致敏DC细胞和同型T淋巴细胞共培养法诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。MTT法检测抗原肽致敏DC对T淋巴细胞增殖的影响,CTL对靶细胞BIU-87的杀伤作用。采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡和凋亡相关蛋白变化。结果MAGE-3抗原肽致敏的DC对T淋巴细胞增殖率具有明显提高作用,高于无关抗原致敏DC及未致敏DC。经MAGE-3九肽冲击的DC可有效诱导对MAGE-3阳性细胞BIU-87杀伤的CTL活性,而无关抗原肽及未经抗原肽致敏的DC则不具备其杀伤能力。结论MAGE-3九肽致敏DC能显著促进T淋巴细胞增殖并诱导有效杀伤靶细胞的CTL作用。     

Ad-Flk1-Fc抗膀胱肿瘤血管生成作用研究

目的：研究Ad-Flk1-Fc对膀胱肿瘤血管生成的抑制作用.方法：建立膀胱肿瘤皮下移植瘤模型,对照组及肿瘤组随机瘤内注射PBS及Ad-Flk1-Fc（2×10^9PFU）,2次/wk,共2wk.观察瘤内注射Ad-Flk1-Fc后肿瘤体积变化,并采用免疫组化法测定微血管密度（MVD）.结果：治疗组与对照组的肿瘤体积、质量、MVD值两组间差异有统计学意义.结论：Ad-Flk1-Fc能够有效抑制膀胱肿瘤的血管生成,并抑制肿瘤生长.     

小剂量环磷酰胺治愈荷膀胱癌小鼠动物模型的建立

[目的]建立单一剂量环磷酰胺（cyclophosphamide,CTX）治愈荷膀胱癌小鼠的动物模型。[方法]T739小鼠皮下接种小鼠可移植性膀胱移行细胞癌组织建立荷瘤小鼠模型。肿瘤接种后第7天,不同剂量的CTX单次腹腔内注射,观察荷瘤小鼠用药后体重和肿瘤结节直径的变化,找出CTX可治愈多数荷瘤小鼠的最低有效剂量。然后再取12只荷瘤T739小鼠随机分成两组,最低有效剂量的CTX单次腹腔内注射,等量生理盐水作对照,分别在治疗后第4、14天内眦静脉取血进行白细胞计数。[结果]接种2 mm^3的小鼠膀胱癌肿瘤组织可使T739小鼠肿瘤进行性生长,接种后第7天肿瘤直径约为2-4 mm。15-400 mg/kg的CTX单次腹腔内注射后1周内,荷瘤小鼠肿瘤结节缩小的速率和毒性反应均与所用CTX的剂量呈正相关。CTX治疗后2月,100-200 mg/kg CTX治疗组的荷瘤小鼠全部死亡;40 mg/kg CTX治疗后20%的荷瘤小鼠存活;15 mg/kg CTX治疗组60%的荷瘤小鼠存活,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）。15 mg/kg CTX治疗后第4天荷瘤小鼠外周血WBC为（11.36±0.30）×10^9/L,对照组为（11.14±2.14）×10^9/L,两组数据比较差异无统计学意义（P〉0.05）;治疗后第14天,治疗组小鼠WBC计数降为（8.46±0.76）×10^9/L,与CTX治疗后第4天WBC计数比较差异具有统计学意义（P〈0.05）,但与对照组（9.86±3.40）×10^9/L比较差异无统计学意义（P〉0.05）。[结论]15 mg/kg CTX单次腹腔内注射后荷瘤小鼠无明显毒性反应,并可使多数荷瘤小鼠肿瘤治愈,因此,小剂量CTX治愈荷膀胱癌小鼠模型成功建立。     

树突状细胞和小胶质细胞在脑胶质瘤自体免疫治疗中的作用机制

目的探讨树突状细胞（DC）和小胶质细胞（MG）在脑胶质瘤局部微环境＇中的关系及采用疫苗治疗后的变化。方法建立大鼠C6脑胶质瘤模型。采用C6细胞冻融抗原致敏DC制备疫苗，接种于造模第2天大鼠的皮下。以免疫组化法对大鼠脑内MG和DC的表达进行研究。结果治疗组DC表达均明显高于肿瘤组，而MG表达均明显低于肿瘤组。结论采用DC疫苗治疗可以增加局部微环境中的DC数量和改善免疫抑制状态，从而提高DC的功能。     

CpG-ODN促进小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟作用的实验研究

目的 改进目前体外扩增树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法,探讨含CpG序列的寡脱氧核糖核苷酸(CpG Oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)促进DC成熟的作用.方法 用500u/ml重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和200u/ml重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)诱导小鼠骨髓细胞体外分化成DC,采用相差显微镜、扫描电镜、FACS检测细胞表面分子和混合淋巴细胞反应(MLR)等方法比较CpG-ODN、TNF-α等不同培养方法促进DC成熟的作用.结果 培养10d,可获得大量典型的DC,经FACS检测细胞表面分子、MLR等证实,CpG-ODN具有较强的促进DC成熟的作用.结论 CpG-ODN可以有效促进DC的功能成熟,可应用于科研及临床中.     

肿瘤抗原脉冲致敏的树突状细胞疫苗抗肿瘤作用的实验研究

目的：进一步研究体外肿瘤抗原脉冲致敏的骨髓树突状细胞瘤苗主动免疫诱导小鼠体内抗肿瘤免疫应答,并观察其抵抗野生性肿瘤攻击的免疫保护作用及对荷瘤小鼠模型的免疫应答。方法：采用本室建立的骨髓树突状细胞分离与细胞因子体外扩增培养方法,并在体外经灭活ＮＳ１骨髓瘤细胞及其裂解产物脉冲刺激后直接作为疫苗,然后进行免疫预防与治疗的在体动物实验。结果：可从１只小鼠股骨中获得（３～５）×１０５个树突状细胞（ＤＣ）,其纯度为９５％以上,对混合Ｔ淋巴细胞具有强刺激活性。主动免疫同系健康ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的试验显示,ＤＣ疫苗能诱导抗原特异的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性,免疫１次的动物首次受到肿瘤攻击后诱发肿瘤形成率为０％,再次攻击的肿瘤形成率为２０％;而免疫３次的动物两次攻击的肿瘤形成率皆为０％。主动免疫治疗同种荷瘤动物的试验表明,ＤＣ疫苗也能抑制肿瘤生长,荷瘤动物存活率提高及生存期明显延长。结论：肿瘤抗原体外致敏的树突状细胞能诱导宿主体内的抗肿瘤免疫保护性反应,且对荷瘤模型动物具有明显的免疫治疗作用。     

白细胞介素-23基因修饰树突细胞获取凋亡癌细胞抗原诱导的抗胰腺癌免疫治疗

目的 探讨白细胞介素23（IL-23）基因转染的树突状细胞（DC）负载凋亡癌细胞抗原后诱导的免疫应答对小鼠胰腺癌的治疗作用。方法 克隆并构建IL-23基因真核双表达载体,转染DC后检测其表型及自分泌IL-23和IL-12的能力;观察各组脾脏T淋巴细胞γ干扰素（IFN-γ）和IL4的分泌量以及DC诱导的细胞毒T淋巴细胞（CTL）对胰腺癌细胞的杀伤作用。转染DC并负载肿瘤抗原后制备成疫苗对小鼠抗肿瘤的免疫保护作用和肿瘤抑制作用。结果基因测序证实IL-23基因克隆及双表达载体构建成功,转染后DC对共刺激分子MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ的表达增强;DC自分泌IL-23和IL-12的能力显著增强。DC介导的免疫应答促进了IFN-γ生成型Th1细胞的产生,IL-23转染组每24hIFN-γ的分泌（最高为535pg／ml／10^6）与其他各组比较（对照组每24h为60pg／ml／10^6）,P〈0．01;转染的DC疫苗在体内诱导出高水平的CTL活性（P〈0．05）。接种IL-23修饰DC疫苗后小鼠的免疫防御能力显著增强;对肿瘤的生长有明显抑制作用,治疗组荷瘤鼠生存期与其他各组比较差异有显著意义。结论IL-23使DC抗原递呈能力更强,IL-23修饰DC疫苗可强化宿主针对特异肿瘤的CTL免疫应答,使宿主不仅产生防御性免疫反应而且增强自动免疫能力。     

自杀基因引导的旁观者效应对鼠膀胱癌的作用

目的研究单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase, HSVtk)基因联合丙氧鸟苷(ganciclovir, GCV)治疗对膀胱癌的旁观者效应.方法用逆转录病毒载体HSVtk转染鼠源性膀胱癌细胞株T739,体外检测其对GCV的敏感性.将不同比例的T739和T739TK细胞共培养观察体外旁观者效应.在同基因鼠,将不同比例的T739和T739TK细胞混合建立膀胱癌腹腔肿瘤模型.当肿瘤B超显示0.5～0.8 cm,腹腔GCV给药6 d,然后观察肿瘤大小变化及动物存活时间.结果转染HSVtk基因的T739细胞对GCV的敏感性,RT-PCR分析证实TK基因mRNA的表达.细胞混合培养发现,当T739TK细胞占10%强时就可显示出明显的旁观者效应.在GCV的作用下,动物体内肿瘤生长受到显著抑制,动物存活时间明显延长,证明存在体内旁观者效应.结论转染HSVtk基因的鼠膀胱癌细胞可引导产生体内外旁观者效应,这种效应有助于加强 HSVtk/GCV系统对膀胱肿瘤的抗癌作用.     

黏蛋白1(MUC1)致敏的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤实验研究

目的 研究以CpG作为免疫佐剂,应用黏蛋白1（MUC1）致敏树突状细胞（DC）制备疫苗在体外诱导的特异性抗肿瘤作用。方法 健康人外周血采用密度梯度离心法,分离外周血单核细胞（PBMC）,应用GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子体外培养诱导DC,观察细胞形态,并通过流式细胞术检测成熟DC细胞标志物CD80、CD86。再应用CpG作为免疫佐剂,MUC1作为抗原致敏DC制备疫苗,致敏的DC与T细胞混合培养,观察其诱导T淋巴细胞增殖能力。诱导产生的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）与肿瘤靶细胞以5：1、10：1、20：1的效靶比共孵育,MTT法检测CTL杀伤活性。结果 DC表型检测结果为CD80+细胞占70.4％,CD86⁺细胞占72.0％,呈现成熟DC表型。MUC1致敏的DC疫苗与淋巴细胞混合培养显示,DC疫苗具有刺激T细胞增殖活化的作用,其中DC+CpG+MUC1组明显高于MUC1+DC或CpG+DC组,差异有统计学意义（P<0.01）。DC疫苗诱导产生的特异性CTL对肿瘤细胞的杀伤作用较单独T细胞组或DC组明显增强,差异有统计学意义（P<0.01）。并随着效靶比增大,其杀伤作用呈逐渐增强。结论 经CpG和MUC1致敏的DC疫苗在体外可诱导产生特异性抗肿瘤免疫效应。