聚合酶链反应顺序特异性寡聚核苷酸探针反向杂交法在HLA—DRBl分型中的应用

目的：探讨聚合酶链反应顺序特异性寡聚核苷酸探针(polymerase chain reaction-sequence specific oligonucleotide probes,PCR-SSOP)反向杂交法应用于人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)—DRBl配型的可行性。方法：随机选取25例已行聚合酶链反应顺序特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primers,PCR-SSP)法HLA—DRB1配型的肾移植受者的血标本，采用PCR—SSOP反向杂交法再次配型，并与PCR—SSP法的结果比较。结果：两法的一致性达92％。2例不一致的患者经再次PCR—SSOP反向杂交法配型后，其中1例与PCR—SSP结果一致，PCR—SSOP反向杂交法的平均操作时间为4小时30分。结论：PCR—SSOP反向杂交法是一种能以中等分辨度进行等位基因分型的方法，操作较简单，结果解读客观，适用于临床肾移植配型。     

应用PCR-SSP和SSOP对HLA-Ⅰ类进行基因分型

目的：探讨序列特异性引物一聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence-specific primer, PCR-SSP)方法和多聚酶链反应序列特异性寡聚核苷酸探针(PCR-sequence-specific oligonucleotide probes, PCR-SSOP)技术在HLA-Ⅰ类基因分型的应用价值。方法：研究样本30份，为等待肾移植供、受者外周血。采用PCR-SSOP反向杂交技术对HLA-Ⅰ进行基因分型，并将两种方法分型结果进行比较研究。结果：所有样本进行HLA-Ⅰ分型均获得成功，分型结果PCR-SSOP与PCR-SSP相符率为93．3％，SSOP分辨率较SSP高。结论：PCR-SSP方法快捷简便，适用于少量标本。PCR-SSOP分型方法准确率与SSP接近，分辨率高，虽检测单份标本耗时较长，却可同时检测大批量的样本，适应临床器官移植组织配型短时高效的需要。     

HLA-DQB1 PCR-SSP基因分型技术

HLA-Ⅱ(DR,DQ,DP)配型对提高异基因骨髓移植存活率减少GVHD有重要意义。既往HLA-DQ采用血清学技术检定表型,近年国外转向基因分型,不少实验室已将其列为常规。国内近年来有人报告聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针杂交(PCR-SSOP),限制性片断长度多态性     

HLA-Ⅰ、Ⅱ类PCR-SSP基因分型与血清学抗原分型在移植配型中的比较应用

目的比较聚合酶链反应-序列特异引物法(PCR-SSP)基因分型与血清学抗原分型两种HLA分型方法的应用结果。方法对50例已进行HLA血清学分型的肾脏移植患者,应用PCR-SSP法对HLA-Ⅰ类(A、B位点)、Ⅱ类(DR、DQ位点)基因进行扩增,琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物并确定其基因型。结果基因分型结果与血清学分型一致者41例,基因分型能明显判断而血清学分型无法判断者有8例,其中B位点1例,DR位点6例,DQ位点1例,另外有1例两种分型方法结果HLA-Ⅱ类DR位点有不同。结论PCR-SSP方法具有操作简单、快速、结果可靠的特点,特别是对HLA-Ⅱ类的结果判定比血清学分型方法更准确,能满足组织配型的需要。     

人类血小板抗原基因分型

本文介绍了5个对人类影响最大且已被国际上公认的血小板抗原系统的分子生物学研究结果及其分型方法,包括最早采用的血清学方法、近几年发展起来的分子生物学方法:DNA序列分析、等位基因特异性寡核苷酸点杂交(PCR-ASO)、聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)及聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)。其中重点介绍了PCR-SSP方法的可靠性及实用性。     

反向PCR—SSOP技术行HLA—AB分型与临床应用

建立快速,准确的DNA分型技术并用于临床移植前HLA-AB配型,以弥补血清学分型技术的局限性。采用反向聚合酶链反应-序列特异寡核苷酸探针杂交技术（反向PCR-SSOP）进行DNA分型,可检出HLA-A（*0101-8001）和B（*07021-8201）等等位基因。结果表明,发现利用反向PCR-SSOP技术对所有样本分型均获成功,无假阳性和假阴性结果出现;美国洛杉矶加州大学（UCLA）质控细胞DNA分型结果与UCLA公布的测序结果一致。血清学与基因分型相比。血甭学结果HLA-A错检率6.4%和HLA-B错检率为7.4%。2例白血病病人分别有一个HLA抗原血清学方法不能检出。结论提示,反向PCR-SSOP技术用于HLA分型分辨率高,简单快速。结果直观、准确。分型结果较血清学方法更加精确,可适用于临床应用。     

应用PCR-SSP和SSOP对HLA-I类进行基因分型

目的 :探讨序列特异性引物 -聚合酶链反应 (polymerasechainreaction sequence specificprimer ,PCR SSP)方法和多聚酶链反应序列特异性寡聚核苷酸探针 (PCR sequence specificoligonucleotideprobes ,PCR SSOP)技术在HLA I类基因分型的应用价值。方法 :研究样本 3 0份 ,为等待肾移植供、受者外周血。采用PCR SSOP反向杂交技术对HLA I进行基因分型 ,并将两种方法分型结果进行比较研究。结果 :所有样本进行HLA I分型均获得成功 ,分型结果PCR SSOP与PCR SSP相符率为 93 3 % ,SSOP分辨率较SSP高。结论 :PCR SSP方法快捷简便 ,适用于少量标本。PCR SSOP分型方法准确率与SSP接近 ,分辨率高 ,虽检测单份标本耗时较长 ,却可同时检测大批量的样本 ,适应临床器官移植组织配型短时高效的需要     

聚合酶链反应杂交梳法鉴定结核杆菌

目的:探讨一种快速、简便、特异性较强的结核菌鉴定方法。方法:采用聚合酶链反应(PCR)结合反向探针膜杂交对痰液标本中的结核杆菌的特异性DNA片段进行检测。结果:32例阳性标本经过聚合酶链杂交结果与常规鉴定结果相符。结论:聚合酶链反应杂交梳法鉴定结核杆菌简便、快速、特异性强,有较高的临床应用推广价值。     

CDMA和PCR-SSP方法对HLA-B_(27)分型的探讨

目的了解补体依赖性微量淋巴细胞毒实验(CDMA)对人类白细胞抗原B27(HLA-B27)检测结果情况。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)实验作为参考实验,对用CDMA方法检测过的标本用PCR-SSP方法进行复检,比较2种检测结果。结果用2种方法对216例标本进行检测,其中212例标本结果一致,4例标本CDMA为阴性而PCR-SSP为阳性,经统计学分析,差异无统计学意义(χ2=2.25,0.1相似文献   

HLA分型基因微阵列的构建

目的建立HLA分型基因微阵列,并与聚合酶联反应-序列特异性引物(PCR-SSP)和聚合酶联反应-序列特异性寡核苷酸(PCR-SSO),及DNA测序(SBT)进行方法学比对。方法基于反向SSO原理设计引物和探针,其依据的原理和主要步骤为:1)PCR扩增;2)DNA杂交;3)酶联染色;4)结果判断。以此构建HLA-B27分型基因微阵列系统,并检测88例标本,将分型结果与PCR-SSO、PCR-SSP及SBT三种方法验证结果进行比对。结果成功构建了HLA-B27分型基因微阵列。与PCR-SSO、PCR-SSP及SBT方法相比总体一致率为98.86%;HLA-B27阳性标本结果的一致率为97.72%(86/88);HLA-B27阴性标本结果的一致率为100%(4/4)。结论与目前常用的PCR-SSO,PCR-SSP及SBT等方法相比,HLA-B27分型基因微阵列具有高效、快速、稳定等特点,为临床检测HLA-B27提供一种新方法。     

应用反向斑点杂交技术进行脐血HLA-DRB基因分型方法的建立

HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率，但操作过程复杂，仅适于大样本的HLA分型。PCR－SSP基因分型方法分辨率较低，但操作过程简单，适于临床要求。有必要建立一种简便、快速、价廉、高分辨率的基因分型方法。本研究取63份已知HLA－DRB型的脐血标本，经盐酸胍方法提取DNA用于反向斑点杂交（RDB）基因分型，同时采用SSOP和PCR－SSP方法进行比较。结果表明，所有样本用RDB方法基因分型均获得成功，可准确地分辨60个HLA－DRB等位基因，且结果与用SSOP和PCR－SSP方法的结果完全一致。结论提示，RDB方法可准确地分辨HLA－DRB等位基因，分辨率高，操作简单，适用于各种情况的HLA分型。     

HLA-DRB1基因分型在移植配型及亲子鉴定中的应用

应用聚合酶链反应－序列持异性引物（ＰＣＲ＿ＳＳＰ）方法对南京地区汉族人群ＨＬＡ－ＤＲＢ１位点基因特异性及骨髓移植配型、亲子鉴定等进行了分析。ＤＲＢ１基因频率范围在０．００３３～０．１８３３之间，以ＤＲ９１ＤＲ４占多数；骨髓移植通过配型移植成功３例，２例存活情况良好；ＤＲＢ１位点排除亲子关系５例，其中２例为ＨＬＡ－ＤＲＢ１单独排除亲缘关系。本法具有操作简单、快速、结果可靠的特点，不仅适用于移植配型、     

微量聚合酶链反应对人类白细胞抗原的基因分型

目的 探讨应用于移植的人类白细胞抗原（ＨＬＡ）二类基因（ＤＲＢ／ＤＱＢ）快速分型新技术。方法 采用快速ＤＮＡ抽提技术,建立了ＨＬＡ＿ＤＲＢ／ＤＱＢ微量序列特异性引物聚合酶链反应基因分型方法,对１４２份供受者ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型,并与单克隆抗体一叔法ＨＬＡ血清学分型技术进行对比研究。结果 应用微量ＰＣＲ－ＳＳＰ方法共检出１３种ＤＲＢ１等位基因和 ＤＱＢ１等位基因,与血清学分型结果     

中国南方汉族人群HLA-A、B、DRB1基因的序列分析和单体型分布

目的分析中国南方汉族人群HLA-A、-B、-DRB1基因的序列多态性和单体型的分布情况。方法PCR-测序分型方法(sequence-based typing,SBT)对421名随机南方汉族个体的HLA-A、-B、-DRB1基因进行序列分析,进而采用最大似然性方法计算等位基因和单体型的分布频率。结果26个HLA-A等位基因中,频率>0.05的6种常见等位基因A*1101、A*2402、A*0207、A*0201、A*3303和A*0203的频率总和为78.15%;53个HLA-B等位基因中,频率>0.05的5种常见等位基因B*4001、B*4601、B*5801、B*1502和B*1301的频率总和为50.59%;36个HLA-DRB1等位基因中,频率>0.05的7种常见等位基因DRB1*0901、DRB1*1501、DRB1*1202、DRB1*0803、DRB1*1101、DRB1*0405和DRB1*0301的频率总和为60.21%。372条A-B、494条B-DRB1和1658条A-B-DRB1单体型中,分别有39、43和26条单体型,频率>0.005,其频率总和分别为66.07%、58.91%和34.30%,A*0207-B*4601、B*4601-DRB1*0901和A*0207-B*4601-DRB1*0901分别为其最主要单体型。结论获得了中国南方汉族人群HLA-A、-B、-DRB1基因的高分辨等位基因频率和单体型分布数据,进一步为人类学、法医学、移植配型和疾病相关研究提供了信息。     

陕西籍汉族造血干细胞献血者HLA-A-、B-、DRB1高分辨多态性分析

目的调查中国陕西籍汉族人群HLA-A-、B-、DRB1高分辨等位基因多态性及其分布特点。方法采用PCR-SBT方法对随机抽取的518名陕西籍汉族人的HLA-A、-B-、DRB1基因作高分辨检测,并用最大似然性方法分析其分布频率。结果在518名中国陕西籍汉族个体中可观察到的高分辨等位基因HLA-A有32个,-B有42个、-DRB1有41个。HLA-A高频等位基因为HLA-A*02(28.38%),以0201、0206和0207最常见;HLA-A*11(21.04%),以1101最常见;HLA-A*24(14.86%),以2402最常见。HLA-B高频等位基因为HLA-B*15(15.06%),以1501、1511、1502最常见;HLA-B*40(13.9%),以4001、4006、4002最常见;HLA-B*13(10.91%),以1302最常见。HLA-DRB1高频等位基因为HLA-DRB1*15(16.70%),以1501最常见;HLA-DRB1*09(12.93%),全部为0901;HLA-DRB1*07(12.45%),全部为0701。HLA-A,-B,-DRB1基因观察到A-B、B-DRB1和A-B-DRB1单体型分别为518条、675条和2 375条,单体型分别占理论数的38.54%(518/1344)、39.20%(675/1 722)和4.31%(2 375/55 104)。HLA-A-B-DR单体型前5位是:A*3001-B*1302-DRB1*0701(4.51%)、A*0207-B*4601-DRB1*0901(1.81%)、A*3303-B*5801-DRB1*0301(1.25%)、A*1101-B*1502-DRB1*1202(1.23%)、A*0101-B*3701-DRB1*1001(1.15%),占全部3座位单体型频率的9.95%。结论陕西汉族基因频率分布符合北方群体特征,但也有其自身的特点。     

P52Characteristics of HLA Class I and Class II Antigens of the Somali Population

HLA antigens of the Somali population are not categorised as well as those of other international ethnic groups. We analysed the HLA antigens of 76 unrelated Somalis who lived in the west of England. HLA ‐A, ‐B, ‐C and DRB1 typing was performed by polymerase chain reaction using sequence‐specific oligonucleotide probes (PCR‐SSOP) at a low‐intermediate resolution level. Phenotype frequency, gene frequency and haplotype frequency were used to study the relationship between Somalis and other relevant populations. The antigens with highest frequencies were HLA ‐A1, A2, and A30; B7, B51 and B39; Cw7, Cw16, Cw17, Cw15 and Cw18; DR 13, DR17, DR8 and DR1. HLA haplotypes with high significance and characteristics of the Somali population are B7‐Cw7, B39‐Cw12, B51‐Cw16, B57‐Cw18. The result of HLA class I and class II antigen frequencies show that the Somali population appear more similar to Arab or Caucasoid than to African populations. The results are consistent with hypothesis, supported by cultural and historical evidence, of common origin of the Somali population. This study will serve as a reference for further anthropological studies, as well as studies of associations between HLA and disease.     

罕见开米拉A_3B_3血型的分子生物学研究

目的一例ABO表型鉴定困难的个体及其家系的分子遗传背景的研究。方法用常规血清血型方法,对其ABO血型分型;PCR-SSP法进行基因分型;同时通过ABO基因直接测序及克隆测序、HLA分型、以及15个常染色体位点短串联重复序列检测对该研究对象进行家系研究。结果患者血清学分型定为A3B3型,其ABO基因分型、序列测定、HLA-B、DR基因分型、和STR-PCR特异性检测的vWA和D8S1179位点均有两个以上的单倍体存在。结论该研究对象认定是一例罕见的开米拉血型,清晰提示此罕见血型的分子基础,有助于深入认识此种分子遗传的方式。     

HLA—DQB1基因分型技术

报告了简便、快速的ＨＬＡ－ＤＱＢ１聚合酶链反应一序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）基因分型技术。比较了基因分型与血清学分型技术的结果，其中３３份标本中６份血清型结果（１８．２％）与基因型不吻合。还讨论了基因分型的意义     

HLA基因与再生障碍性贫血相关性研究

本研究探讨HLA基因与再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA）发病之间的相关性.采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR—SSP）分型技术．对82例再生障碍性贫血患者和400名正常对照者进行HLA基因分型，分析HLA基因分布频率在两组中的差异。结果表明：AA组与正常对照组相比，HLA—A＊2301（1．84％）、B$5501（4．36％）、DRBl＊0901（23．49％）基因频率明显增高，相对危险性（relative risk，RR分别为5．0253、3．3645和2．1269，X^2为4．6634、6．3120、9．1511）（P〈0．01）。AA组DRBl＊130l基因频率（1．23％）显著低于正常对照组，其RR为0．2257，X^2=6．66294（P〈0．01）．结论：HLA—A＊230l、B＊550l、DRBl＊090l基因可分别作为AA发病的危险标志，而DRBl＊130l可作为AA的保护标志。     

中国人群HLA-DRB1＊1454等位基因和HLA-DRB1第3外显子鉴定意义

目的:在中国人群中鉴定人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)DRB11454等位基因,分析供受者HLA-DRB1第3外显子DNA序列信息对器官移植、细胞移植及人类遗传学研究的重要现实意义.方法:应用聚合酶链反应-直接测序分型方法对58例等待造血干细胞移植供受者进行人类白细胞抗原测序分型,1 268例广东地区随机健康供者采用聚合酶链式反应-序列特异寡核苷酸探针反向杂交法进行HLA-DRB1中高分辨基因分型,部分模棱两可结果采用聚合酶链式反应-序列特异引物PCR-SSPHLA-DRB14高分辨方法分型法.结果:在1 268例广东地区随机健康人群中检出HLA-DRB11403,1406,1410,1412,1418,1425和1454等位基因,HLA-DRB1401/1434/1454等位基因模棱两可结果的8例样本被确认为HLA-DRB11454等位基因,DRB11454等位基因可能是广东人群最为常见的HLA-DRB114 基因. 中国人群HLA-DRB114第3外显子存在多态性.结论:中国人群HLA-DRB11454等位基因确认了DRB1等位基因第3外显子多态性的存在,进一步明确了开展中国汉族人群及少数民族HLA-DRB1第3外显子检测的意义.