类风湿性关节炎患者血清Ⅱ型胶原抗体的检测及意义

目的 探讨类风湿性关节炎（RA）患者血清抗Ⅱ型胶原（CⅡ)抗体阳性的意义。方法 分别以人Ⅱ型胶原蛋白（HCⅡ）及牛Ⅱ型胶原蛋白CⅡ（BCⅡ）作为包被抗原进行间接ELISA法，检测30例RA患者，对照组（30例非RA的风湿病患者和34例健康人）血清抗CⅡ抗体。结果 以HCⅡ及BCⅡ作为包被抗原检测RA患者血清抗CⅡ抗体的阳性率分别约为30．0％和33．3％；对照组血清中抗体阳性率均约为1．6％；二者差异极其显著（P＜0．01）。抗CⅡ抗体阳性的RA患者RF的阳性率高于抗CⅡ抗体阴性的RA患者。与HCⅡ和BCⅡ均发生阳性反应的血清8例，均为早期RA患者。结论 抗CⅡ抗体可作为判断RA患者病的辅助手段之一，牛CⅡ可替代人CⅡ进行有关RA发病机制中B细胞免疫的实验研究。     

类风湿性关节炎患者血清中Ⅱ型胶原抗体的检测及临床意义

<正> 自身免疫是类风湿性关节炎(RA)发病中的重要因素,患者血清中存有抗自身IgG的抗体——类风湿因子。1977年,David和Threntham首次发现了50％的患者血清中存有抗Ⅱ型胶原的抗体,此种抗体与类风湿的发病和反复出现的症状有明显联系,我们应用ELISA检测,并对实验条件做了优选,取得满意结果。     

类风湿性关节炎患者血清抗Ⅱ型胶原抗体的检测及意义

目的探讨类风湿性关节炎(RA)患者血清抗Ⅱ型胶原(CⅡ)抗体阳性的意义. 方法分别以人Ⅱ型胶原蛋白(HCⅡ)及牛Ⅱ型胶原蛋白CⅡ(BCⅡ)作为包被抗原进行间接 ELISA法,检测30例RA患者,对照组(30例非RA的风湿病患者和34例健康人)血清抗CⅡ抗体. 结果以HCⅡ及BCⅡ作为包被抗原检测RA患者血清抗CⅡ抗体的阳性率分别约为30.0%和33.3%;对照组血清中抗体阳性率均约为1.6%;二者差异极其显著(P＜0.01).抗CⅡ抗体阳性的RA患者RF的阳性率高于抗CⅡ抗体阴性的RA患者.与HCⅡ和BCⅡ均发生阳性反应的血清8例,均为早期RA患者. 结论抗CⅡ抗体可作为判断RA患者病情的辅助手段之一,牛CⅡ可替代人CⅡ进行有关RA发病机制中B细胞免疫的实验研究.     

乌梢蛇Ⅱ型胶原提取及其诱导大鼠关节炎特性的研究

提取和纯化乌梢蛇Ⅱ型胶原,观察乌梢蛇Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎的特性,为研究乌梢蛇治疗类风湿关节炎的机制提供研究方向。离心提取乌梢蛇Ⅱ型胶原,经DEAE-52纤维素交换柱纯化,斑点免疫渗滤试验和免疫印迹试验进行成分鉴定。乌梢蛇Ⅱ型胶原不完全佐剂免疫大鼠,观察大鼠关节炎发生情况、抗Ⅱ型胶原抗体、CD 4/CD8亚群、血清中TNF-α、IL-10、IL-1β、IL-4的变化。乌梢蛇Ⅱ型胶原提纯品在SDS-PAGE凝胶电泳上呈一条区带,斑点免疫渗滤试验和免疫印迹试验为阳性反应。诱导大鼠关节炎发生率为86.67%,关节炎大鼠血清中抗Ⅱ型胶原抗体明显增高(P<0.01),CD4 T细胞亚群和CD4~+/CD8~+增高(P<0.05),TNF-α含量增加(P<0.01),IL-10含量降低(P<0.01),血清中IL-1β和IL-4含量无变化。结果显示,乌梢蛇Ⅱ型胶原能通过免疫方法可以诱导大鼠产生多关节炎,并且体内有自身免疫反应的表现。     

Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎模型的制作

Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎模型CIA模型是目前最为理想的类风湿关节炎动物模型。受诸多因素影响，模型制作难度较大，成功率不高。结合参考国内外大量文献，本室多年研究经验，从动物品系的选择，胶原的配制和准备，注射的部位和方法，评价的指标等方面为CIA模型的制作提供了参考。     

抗RA54自身抗体的识别及其临床意义

本文应用免疫印迹技术（ＩＢＴ），以兔胸腺的盐水提取物（ＲＴＥ）为抗原，在类风湿关节炎（ＲＡ）患者血清中检测到与ＲＴＥ中５４ｋＤ蛋白多肽反应的一种新自身抗体，暂命名为抗ＲＡ５４。通过对３６５３例各种不同风湿性疾病患者的检测，观察到抗ＲＡ５４主要见于ＲＡ组，阳性率为１４．５％，对ＲＡ的诊断有高度特异性（Ｐ〈０．００１）。     

靶向自身抗原和自身抗体防治系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎研究进展

当前,自身免疫性疾病的防治形势依然严峻,可选的临床药物有限,且治疗效果不尽如人意。已知自身抗原的暴露被免疫系统识别是自身免疫性疾病的关键起始环节,而产生的自身抗体又是致病的主要因素。当前,精准医学已经成为疾病防治的共识,采用特异性的封闭分子(如"诱饵抗体"或"诱饵抗原")精准靶向自身抗原和自身抗体防治自身免疫性疾病势在必行。同时,它能够避免影响机体正常的免疫应答,有望为自身免疫性疾病的防治提供新的策略,也将引领该领域新药研发的潮流。本文对设计或制备的"诱饵抗体"和"诱饵抗原"靶向自身抗原和自身抗体防治2种最常见的自身免疫性疾病系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)和类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的研究进展作一综述。     

鸡Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎大鼠模型的建立

目的以鸡Ⅱ型胶原皮内免疫Wistar大鼠,建立类风湿关节炎的大鼠模型。方法用鸡Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂于大鼠皮内注射免疫,自大鼠发病起,观察大鼠的踝关节部位的肿胀,毛色及运动状态;用ELISA法检测大鼠血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平;采用X线摄片、病理组织学等方法进行大鼠病理学特征分析。结果ELISA结果提示：实验组大鼠血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平较正常对照组明显高（P〈0．001）;与正常对照组相比,实验组大鼠脚踝与脚趾有明显的肿胀;X线摄片结果和病理学分析结果显示,实验组大鼠的关节组织呈现典型的关节病变的特征。结论本实验成功建立了鸡Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎大鼠模型。Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎大鼠模型的病理学特征与人类RA极为相似,为更好的研究人类RA的发病机制及其治疗研究提供了一个良好的动物模型。     

口服Ⅱ型胶原诱导分泌TGF—β的特异性Th3细胞

目的 了解饲喂Ⅱ型胶原（ｔｙｐｅ Ⅱ ｃｏｌｌａｇｅｎ，ＣⅡ）的大鼠能否在其肠相关淋巴细胞和脾脏中，诱导产生ＣⅡ特异性Ｔ细胞及其分泌的细胞因子的类型。方法 对口服ＣⅡ致耐大鼠进行特异和非特异性淋巴细胞增殖实验，并采用酶联免疫斑点法（ＥＬＩＳＰＯＴ），对ＣⅡ特异性Ｔ细胞在单细胞水平进行细胞内细胞因子检测。结果 ＣⅡ致耐大鼠的Ｔ细胞增殖能力下降，ＣⅡ特异性Ｔ细胞多数分泌ＴＧＦ－β，极少数分泌ＩＬ－４和     

重组人Ⅱ型胶原250-270多肽的表达及活性研究

目的　表达、分离、纯化重组人Ⅱ型胶原 2 5 0 2 70多肽 (recombinanthumancollagentypeⅡpeptide 2 5 0 2 70 ,rhCⅡ 2 5 0 2 70 )并研究其对类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis ,RA)患者外周血单个核细胞 (PBMC)和关节滑液单个核细胞 (SFMC)中特异性T细胞的活化作用。方法　利用DNA合成、聚合酶链式反应、重组DNA等基因工程的方法构建含有人Ⅱ型胶原功能性多肽CⅡ 2 5 0 2 70多聚基因的表达载体pGEX 4T 1,转化E .coliBL2 1,融合表达目的蛋白 ,经GlutathioneSepharose○R4B亲和层析柱分离纯化 ,12 %聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和凝胶薄层扫描测量其相对分子质量 (Mr)和纯度。以不同浓度 (0 .1、1.0、10、10 0、10 0 0 μg/ml)的 6聚rhCⅡ 2 5 0 2 70和化学合成的CⅡ 2 5 0 2 70刺激体外培养的RA患者PBMC和SFMC ,等浓度的GST蛋白和PBS作为阴性对照 ,流式细胞仪测定刺激前后 2组培养细胞中T细胞CD6 9的表达率 ,以分析其对特异性T细胞的活化作用。结果　融合表达的目的产物经SDS PAGE分析 ,相对分子质量 (Mr)大小约为 43× 10 3,与预期相符。分离纯化的 6聚rhCⅡ 2 5 0 2 70经SDS PAGE凝胶薄层扫描 ,纯度为 89% ,浓度为 2 .1mg/ml。FACS分析 :经 10 0 μg/ml浓度的 6×rhCⅡ2 5 0 2 70刺激 3d     

重组人Ⅱ型胶原250-270多肽对特异性体液免疫的抑制作用

目的:研究口服重组人Ⅱ型胶原250-270多肽(CⅡ250-270)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠特异性体液免疫反应的抑制作用,为应用口服CⅡ250-270治疗类风湿关节炎提供理论依据。方法:ELISA测定加强免疫后小鼠血清中抗原特异性抗体的表达,ELISPOT检测小鼠脾脏淋巴细胞中抗原特异性抗体形成细胞。结果:口服重组人CⅡ250-270小鼠血清中抗CⅡ和抗CⅡ250-270的IgG抗体水平[A值分别为(0.82±0.02)、(0.84±0.04)]比CⅡ免疫对照组[抗CⅡ的IgG抗体水平,A值为(1.01±0.06)]显著降低,而且特异性抗CⅡ250-270的IgG抗体反应在口服多肽组被明显抑制(P<0.01);口服重组人CⅡ250-270小鼠的CⅡ和CⅡ250-270特异性抗体形成脾细胞的增殖频率分别为(158±9计数/孔)、(181±10计数/孔),比CⅡ免疫对照组[CⅡ特异性抗体形成脾细胞的增殖频率为(247±16计数/孔)]也显著减少(P<0.05)。结论:口服重组人CⅡ250-270多肽具有抑制CIA小鼠的特异性体液免疫的作用,可能是此疗法治疗CIA多发性关节炎的重要机制。     

抗VEGF中和抗体对Ⅱ型胶原诱导的关节炎形成的影响

目的：了解抗血管内皮生长因子（VEGF）中和抗体对Ⅱ型胶原（CoⅡ）诱导的关节炎（CIA）形成的影响。方法：于8～10wk龄的DBA／1J小鼠尾根部皮内注射鸡CoⅡ进行被动免疫，建立小鼠CIA模型，以CIA发生率、关节炎指数及关节组织的病理变化为指标，评价抗VEGF抗体对CIA形成的影响。结果：与对照组相比较．在CIA形成的早期，注射抗VEGF中和抗体能有效地抑制关节炎的产生及减轻其严重程度（P〈0．05）；而在CIA已形成后再注射抗VEGF中和抗体对关节炎的严重程度则无明显影响（P〉0．05）。结论：抗VEGF中和抗体明显抑制滑膜细胞增殖、血管新生及血管炎，因此有望成为类风湿性关节炎（RA）治疗的新型制剂。     

RA患者抗天然Ⅱ型胶原抗体与ESR、CRP、AAG之间的关系

为探讨抗天然Ⅱ型胶原抗体(抗Nat Ⅱ)在类风湿性关节炎(RA)疾病活动中的意义.采用ELISA检测抗Nat Ⅱ IgG,用BN prospec特定蛋白分析仪检测C-反应蛋白(CRP)和α1-酸性糖蛋白(AAG),Electa血沉仪测定红细胞沉降率(ESR).结果60例RA患者血清抗Nat Ⅱ IgG水平与ESR和血清CRP、AAG含量呈正相关(相关系数r分别为0.402、0.268和0.382),其中23例抗NatⅡIgG阳性患者的ESR、CRP、AAG均显著高于抗Nat Ⅱ IgG阴性者(P＜0.01).抗Nat Ⅱ IgG可作为RA疾病活动性指标之一.     

口服鸡Ⅱ型胶原治疗大鼠实验性类风湿性关节炎的研究

本文研究口服鸡Ⅱ型胶原（CCⅡ）治疗大鼠类风湿性关节炎的作用。以CCⅡ和完全弗氏佐剂免疫Wistar大鼠,建立大鼠的类风湿性关节炎（RA）模型,用CCⅡ进行口服,观察实验组和对照组动物关节炎的发病程度。并以ELISA法对发病大鼠血清中的抗CCⅡ抗体的水平进行检测。结果表明,口服CCⅡ可以减轻大鼠关节炎的发病程度。其中口服6μg、60μgCCⅡ的实验组大鼠关节炎指数均对照组明显减低,且差异有显著性意义（P＜0．01;P＜0．05）。而口服600μgCCⅡ的实验组大鼠关节炎指数虽较对照组大鼠降低,胆二者相比,无显著性差异（P＞0．05）。ELISA检测结果显示,口服低剂量（6μg和60μg）可溶性CCⅡ对大鼠体抗CCⅡ抗体的产生有一定的抑制作用。口服CCⅡ对关节炎大鼠的发病程度有较明显的抑制作用。为应用口服耐受治疗RA等自身免疫性疾病提供了实验基础。     

高纯度猪软骨Ⅱ型胶原的制备与检测

探讨以猪透明软骨为原材料制备高纯度Ⅱ型胶原的方法,为批量化生产提供依据。以猪透明软骨为原料,采用盐酸胍抽提蛋白多糖,酸性条件下酶解,中间过程经多步纯化去除杂胶原、降解及变性产物,最后经Sepharose H.P.阴离子柱层析纯化制备出产品并以Sigma公司产品作对照。SDS－PAGE电泳、氨基酸成份分析和紫外最大吸收光谱的结果表明,所提取的Ⅱ型胶原性质符合文献报导,纯度比Sigma公司的产品高。所提取的Ⅱ型胶原为高纯度的Ⅱ型胶原,由于采用肉用猪作原料,来源丰富,成本低,适合批量化的产品开发。     

Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型IL-25表达水平的变化及意义

目的以Ⅱ型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎模型为研究对象,动态观察其IL-25的表达水平,探讨IL-25与关节炎发生发展的关系及其可能的机制,为寻找新的类风湿性关节炎免疫干预新途径积累实验数据。方法采用RT-PCR法扩增目的基因,构建mIL-25标准质粒,QRT-PCR检测模型鼠脾脏及其关节病变局部IL-25的表达水平;应用ELISA技术检测模型鼠血清和脾细胞培养上清IL-25蛋白的含量。结果在Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎的发病过程中,模型鼠脾细胞和关节滑膜组织IL-25的mRNA表达水平、均呈持续上升趋势,与对照小鼠相比差异显著(P<0.05)。这种IL-25蛋白和转录水平的表达,随着关节炎症程度的增加而升高。此外,模型鼠脾细胞对ConA的刺激表现出强IL-25表达性应答。结论 IL-25的表达水平与Ⅱ型胶原诱导的关节炎的发生发展密切相关。     

类风湿性关节炎患者血清中自身抗体ACⅡ、ACCP检测的价值

目的 探讨类风湿性关节炎患者血清中自身抗体ACⅡ、ACCP检测的价值.方法 收集2014年2月至2016年3月于我院风湿科住院的类风湿关节炎患者106例作为类风湿关节炎组,同期选择在我院进行体检的健康者106例作为对照组,两组都进行ACⅡ、ACCP、RF的检测与阳性率判断和相关性分析.结果 类风湿性关节炎组的血清ACCP、ACⅡ、RF水平分别为15.93±1.44 U/mL、30.22±7.14 U/mL和28.93±4.29 IU/mL,都明显高于对照组的2.78±0.99、5.11±2.84、10.93±5.33(P<0.05).类风湿性关节炎组血清ACCP、ACⅡ、RF阳性率分别为71.7%、61.3%和70.0%,都明显高于对照组的0.0%、0.0%和5.7%(P<0.05).在类风湿性关节炎组中,Pearson相关性检验显示ACCP、ACⅡ与RF都呈明显正相关性(P<0.05).结论 类风湿性关节炎患者血清中自身抗体ACⅡ、ACCP都呈现高表达状况,且与患者的风湿因子表达呈现正相关性,有很好的临床诊断与鉴别价值.     

HLA-DRB1结合性Ⅱ型胶原多肽抑制胶原性关节炎的实验研究

目的:研究替换CⅡ263-272序列中的268~270位氨基酸的变构肽sub268-270对胶原性关节炎(CIA)的抑制作用。方法:使用牛CⅡ在Lewis大鼠诱发CIA。以CⅡ变构肽sub268-27090μg静脉注射,每周1次治疗CIA;设置无关肽对照和空白对照组。从关节炎症积分、放射学积分和病理学积分来评价变构肽疗效。结果:变构肽、无关肽及空白对照组关节炎症积分分别为5.60±1.24、11.20±1.21和11.80±1.22,变构肽可明显抑制CIA关节炎症(P<0.01)。变构肽组的放射学积分(1.32±0.49)明显低于无关肽组(2.63±0.51)和空白对照组(2.69±0.53)(P<0.01)。此外,变构肽组的病理学积分(1.37±0.53)也显著低于无关肽组(2.94±0.63)和空白对照组(3.06±0.65)(P<0.01)。结论:CⅡ变构肽sub268-270可以明显抑制胶原性关节炎的关节炎症、病理损伤及骨破坏程度。     

鸡胶原Ⅱ型诱导大鼠类风关模型的建立

用鸡胶原Ⅱ型（chicken collagen Ⅱ,CCⅡ）和完全弗氏佐剂免疫Wistar大鼠诱导胶原性关节炎,建立自身免疫性类风湿性关节炎（RA）实验动物模型。以ELISA法检测实验组和对照组动物血清中的CCⅡ抗体的水平,同时采用组织病理学和X射线摄片的方法显示关节炎大鼠的发病程度和病理学特征,并对其血液和滑膜液进行微生物学鉴定。结果显示,用CCⅡ和完全弗氏佐剂免疫的实验组大鼠关节炎的发病率为80％,同时在免疫后25d,关节炎指数为最高（AI＝7．8）。ELISA法检测抗CCⅡ抗体结果显示,实验组大鼠血清中抗CCⅡ抗体的水平均较各对照组大鼠明显增高（P＜0．001）。组织病理学和X－射线摄片结果显示,关节软骨组织、骨组织和滑膜组织呈典型的关节炎病变。微生物鉴定结果均为阴性。本实验成功建立了胶原诱导的大鼠关节炎模型,且其病理特征和人类RA极为相似,为进一步深入研究人类RA的发病机制及其临床治疗提供了有价值的实验材料。     

类风湿关节炎四种自身抗体的检测及意义

为评估类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated pepdide,CCP)抗体、抗Sa抗体和抗角蛋白抗体(anti-keratin antibody,AKA)自身抗体对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)诊断的意义,采用速率散...