几种因素对悬浮培养人参细胞生长和皂苷积累的影响

为了完善人参细胞悬浮培养体系,论文研究了人参细胞悬浮培养的动态,探明了培养瓶瓶盖透气滤膜的有无,摇床转速和接种量对人参细胞生长和皂苷积累的影响。结果表明人参细胞悬浮培养过程中,细胞生物量和皂苷产量在培养20 d时达到最大值,因此,可将培养期定为20 d。培养瓶盖上有透气滤膜时有利于人参细胞生长和皂苷合成;悬浮培养时摇床转速影响细胞生长但对皂苷合成无影响,转数为120 r·min^-1时,皂苷生产量最高。每个培养瓶接种6 g鲜重的细胞时,细胞生长和皂苷积累明显好于其他接种量,总皂苷质量分数达12.8 mg·g^-1DW,生产量达146.6 mg·L^-1。     

雷公藤不定根培养体系的建立及中试放大研究

以MS为基本培养基,进行雷公藤不定根的诱导研究时发现,不论是以雷公藤幼叶还是以幼叶诱导的愈伤组织为外植体,在添加1.0 mg·L^-1 IBA的培养基上均可以诱导出不定根并建立良好的不定根培养体系;以雷公藤愈伤组织建立的悬浮细胞在添加2.0~4.0 mg·L^-1 NAA时,也可以形成不定根并建立稳定的不定根培养体系,雷公藤不定根的3个培养体系中雷公藤甲素含量均超过自然生长的根皮中的含量,其中AR3不定根中雷公藤甲素含量最高,为根皮的5.3倍。在使用5 L发酵罐进行中试放大培养时,与250 mL摇瓶培养相比,每升培养基不定根增长量、次生代谢产物含量差异不大,这为通过组织培养生产雷公藤次生代谢产物奠定了基础。     

铁皮石斛原球茎液体悬浮培养的研究

目的研究铁皮石斛Dendrobiumcandidum原球茎液体悬浮培养的可行性以及接种量和培养液体积对原球茎生长的影响。方法利用完全随机实验设计和正交试验设计研究不同基本培养基、接种量和培养液体积对原球茎生长的影响。结果无论鲜重还是干重,铁皮石斛原球茎在液体培养基上均极显著好于固体培养基(P<0.001)。不同基本培养基对铁皮石斛原球茎生长影响的研究表明,培养天数为30d时,对于鲜重67-V极显著好于B5(P<0.01),B5极显著好于1/2MS(P<0.01),1/2MS显著好于MS(P<0.05);对于干重67-V与B5没有显著性差异(P>0.05),B5极显著好于1/2MS(P<0.01),1/2MS极显著好于MS(P<0.01)。接种量和培养液体积对原球茎生长影响的研究表明,接种量影响最大,体积其次,互作最小,若不考虑互作,对于鲜重和干重,最佳处理为接种量6.194g/瓶 培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶;对于干重,若考虑互作,接种量为6.194g/瓶时,应选培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶,接种量为3.102g/瓶时,应选培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶,接种量为1.693g/瓶时,应选150mL/瓶或50mL/瓶。结论液体悬浮培养对铁皮石斛原球茎的生长有利,获得了最佳基本培养基、接种量和培养液体积的最佳搭配方案,表明通过液体悬浮培养生产铁皮石斛原球茎具有较好的开发应用前景。     

抗人表皮生长因子受体2人源化单克隆抗体在中国仓鼠卵巢细胞中的表达、纯化及活性测定

 目的 筛选得到稳定表达重组人源化抗 HER2 单克隆抗体（rhHER2-mAb）的中国仓鼠卵巢细胞（CHO）最优表达株,采用旋转振荡式培养及小规模放大,测定纯化后抗体蛋白的活性和亲和力。方法 使用一次性旋转振荡生物反应器——Tubespin 对细胞株进行高通量筛选,然后使用摇瓶进行规模放大培养,利用 Protein A 亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、HPLC 检测产物的纯度,夹心ELISA 检测产物的表达量,MTT检测产物的活性。结果 通过比较,确定产量最高的 # 38 细胞克隆株,经过规模放大培养得到足量细胞上清液,摇瓶表达量达到（152±20） mg·L^-1。纯化后经检测目的蛋白的相对分子质量约为 150×10³,纯度在 96% 以上,与商品化的赫赛汀一致;活性检测和亲和力检测也显示其活性和亲和力与赫赛汀相当。结论 通过细胞株筛选得到高表达细胞株,经旋转振荡式放大培养,成功纯化获得抗体蛋白,与商品化药物性质一致,为大规模旋转振荡培养发酵奠定基础。     

碳源、氮源和磷源对西洋参悬浮细胞生物量和活性成分积累的影响

 目的研究碳源、氮源和磷源对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb1以及西洋参多糖合成的影响。方法利用组织培养技术结合高效液相色谱法和紫外分光光度法,通过改变培养基碳源种类、氮源和磷源浓度,研究其对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb1以及西洋参多糖含量的影响。结果添加40g·L^-1蔗糖的细胞干重生长率最大,加入30g·L^-1蔗糖得到的人参皂苷Re、Rb1和多糖的含量最高,分别为0.531%,0.145%和3.62%。本实验保持氮源浓度60mmol·L^-1,当培养基中全部为NO₃^-时,细胞干重生长率最低,而人参皂苷Re、Rb1和多糖含量最高,分别为对照组的2.40,1.96和4.41倍。添加5.00mmol·L^-1的KH₂PO₄,细胞干重生长率最大。当培养基中KH₂PO₄浓度为0.63mmol·L^-1时,人参皂苷Re、Rb1和多糖的含量最高。结论本实验确定了西洋参细胞悬浮培养的最佳碳源种类、氮源比例和磷源浓度,表明不同碳源、氮源和磷源对西洋参细胞生长和活性成分有显著影响。     

枇杷不同器官及不同物候4种三萜酸含量的动态变化

为考察4种三萜酸成分在枇杷各器官中分布,揭示不同物候枇杷叶三萜酸动态变化规律,观测枇杷物候,采集花、果实以及不同物候期的叶;采用高效液相色谱法测定熊果酸、齐墩果酸、科罗索酸和山楂酸含量。结果表明,4种三萜酸在所测样品器官中的质量分数高低顺序为落叶(23.2 mg·g^-1)>成熟叶(21.7 mg·g^-1)>嫩叶(17.5 mg·g^-1)>果肉(7.36 mg·g^-1)>花 (6.40 mg·g^-1),种子中未检出这4种三萜酸成分;在枇杷树萌芽、现蕾、开花、结果等不同物候采收的枇杷叶中4种三萜酸总量发生小幅波动,落叶变化范围17.8~26.2 mg·g^-1,成熟叶变化范围在16.5~23.5 mg·g^-1,嫩叶变化范围在14.7~21.5 mg·g^-1。随叶片发育、成熟、衰老,三萜酸含量有所增加;不同物候阶段对枇杷叶干物质积累及4种三萜酸含量产生一定影响。枇杷成熟叶在果实膨大时的干物质和三萜酸积累较多。文章对地域分布广泛的枇杷等植物药在次生代谢产物和采收期等相关研究上具有一定参考作用。     

蛇葡萄素对大鼠肝星状细胞增殖及胶原蛋白、细胞因子生成的影响

目的：研究蛇葡萄素对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）的增殖及胶原蛋白、细胞因子生成的影响。方法：对HSC-T6增殖的影响：用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液制备成HSC-T6细胞3×10⁴个/mL细胞悬液100 μL/孔接种于96孔培养板。设细胞对照组、秋水仙碱1.0 mg·L^-1组和100.0,75.0,50.0,25.0,12.5 mg·L^-15个不同质量浓度蛇葡萄素组,置37 ℃ 5%CO₂培养48 h。采用MTT法检测蛇葡萄素对大鼠肝细胞HSC-T6增殖的影响。对HSC-T6生成Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白及细胞因子（TGF-β₁,PDGF）含量的影响：取终质量浓度分别为50.0,25.0,12.5 mg·L^-1蛇葡萄素,3×10⁴个/mL细胞悬液100 μL/孔细胞液接种于96孔培养板。阳性组秋水仙碱的质量浓度为1.0 mg·L^-1。置37 ℃ 5%CO₂培养48 h。ELISA法检测HSC-T6细胞生成的胶原蛋白（Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ）、转化生长因子（TGF-β₁）及血小板衍生因子（PDGF）含量。结果：蛇葡萄素100.0,75.0 mg·L^-1对HSC-T6细胞的增殖有明显抑制作用,其无毒浓度为50.0 mg·L^-1。50 mg·L^-1的蛇葡萄素可使HSC-T6细胞生成的Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白,TGF-β₁,PDGF含量明显低于细胞对照组（P<0.05）,25 mg·L^-1的蛇葡萄素也可使HSC-T6细胞生成的Ⅲ型胶原蛋白含量明显低于细胞对照组（P<0.05）。结论：蛇葡萄素能抑制HSC-T6增殖并可使HSC-T6生成的Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白,TGF-β₁,PDGF含量降低。     

新疆雪莲细胞悬浮系的建立和黄酮类活性成分的产生

目的:建立新疆雪莲的悬浮培养体系。方法:研究不同培养基、培养基初始pH、碳源、接种量、植物生长物质含量对雪莲细胞生长和黄酮合成的影响。结果:N₆液体培养基在pH5.8、蔗糖含量50g·L^-1、接种量60-80g·L^-1FW时有利于细胞生长和黄酮合成,附加BA0.2mg·L^-1+NAA2mg·L^-1有利于黄酮合成,而附加BA0.5mg·L^-1+NAA3mg·L^-1则对生长有利。结论:培养条件的优化可有效提高雪莲悬浮细胞的生长和总黄酮的合成。     

何首乌不定根的离体诱导及悬浮培养研究

通过离体不定根的高效诱导与悬浮培养,实现何首乌资源的永续利用。在培养基中添加不同浓度的蔗糖和植物生长物质,筛选从幼茎有效诱导不定根的最适培养基;采用正交试验筛选不定根悬浮培养的最适培养基;对悬浮培养的不定根进行继代培养并测定生长曲线,同时对不定根中的主要有效成分进行检测。结果表明,能够从幼茎有效诱导不定根的最适培养基为MS+蔗糖 40 g·L^-1+α-萘乙酸 2.0 mg·L^-1+6-卞基腺嘌呤 0.2 mg·L^-1;不定根悬浮培养的最适培养基为 MS+蔗糖30 g·L^-1+α-萘乙酸 2.0 mg·L^-1+生根粉 0.2 mg·L^-1;经过检测,发现不定根同样含有何首乌药材中的主要有效成分二苯乙烯苷。该实验实现了何首乌不定根的高效诱导与培养,为中药资源的永续利用研究提供了工作基础。     

五子承气汤对大鼠高尿酸血症的影响

目的: 研究五子承气汤对高尿酸血症大鼠的影响. 方法: 将雄性SD大鼠60只随机分为6组,即:正常组、模型组、五子承气汤高、中、低剂量组(104,52,26 g·kg^-1)、阳性对照苯溴马隆(10 mg·kg^-1)组,采用腺嘌呤(100 mg·kg^-1,ig,qd × 28 d)和氧嗪酸钾(250 mg·kg^-1,ip,1次/周,连续4周)制备高尿酸血症大鼠模型.造模4周后,检测各组大鼠尿尿酸(UA),血尿酸(UA),血黄嘌呤氧化酶(XOD),血肌酐(SCr),尿素氮(BUN). 结果: 与正常组相比,模型组大鼠的尿UA显著降低,血UA,XOD,Cre及BUN 明显升高,差异具有显著性(P<0.01);五子承气汤低、中、高剂量组尿UA分别为(146.3±22.5),(202.2±53.8),(218.1±62.6) μmol·L^-1,显著高于模型组(89.8±27.1)μmol·L^-1(P<0.01,P<0.05);血UA分别为(207.3±42.5),(177.1±50.5),(158.0±49.0)μmol·L^-1,显著低于模型组(285.0±54.1)μmol·L^-1(P<0.01,P<0.05);五子承气汤还显著降低高尿酸血症大鼠血清XOD活性,显著降低SCr,BUN含量( P<0.01,P<0.05). 结论: 五子承气汤明显促进尿UA排泄,降低血UA含量,抑制血清XOD活性,改善肾功能,对大鼠高尿酸血症有一定的防治作用.     

白色紫锥菊不定根诱导及咖啡酸衍生物积累研究

以白色紫锥菊试管苗子叶为外植体,研究了植物生长素2,4-D,IAA,IBA,NAA对不定根诱导以及IBA浓度对液体悬浮培养中不定根的生长及咖啡酸衍生物积累的影响,并进行了生物反应器培养.结果表明,对白色紫锥不定根诱导最适合植物生长素是IBA1.0mg· L-1,不定根诱导数目达到22.5根/培养皿.液体悬浮培养中IBA 1.0 mg·L-1最适合不定根生长及咖啡酸衍生物的积累.白色紫锥菊不定根在5L气升式生物反应器中培养30 d后可获得8.98 g· L-1干重,是三角瓶悬浮培养干重4.38 g·L-1的2.05倍;生物反应器培养的不定根中紫锥菊苷质量分数为14.08 mg·g-1(干重),是栽培根的2.4倍;氯原酸,菊苣酸,总咖啡酸衍生物含量是栽培根的4.0 ～25.6倍.该研究为大量生产紫锥菊药品可提供富含紫锥菊苷等咖啡酸衍生物的高品质生物医学药材.     

金银花规范化种植中噻虫嗪安全使用标准的研究

建立了噻虫嗪在金银花中的残留分析方法,并研究了其在金银花中的消解动态和最终残留量,以及对其安全使用标准进行讨论。采用甲醇超声提取、二氯甲烷液液分配及SPE柱净化后,通过HPLC-UV检测分析。结果表明不同添加浓度下噻虫嗪回收率为84.91%~94.44%,RSD为1.7%~5.0%,满足农药残留检测要求。田间试验采用推荐剂量(90 g·hm^-2)和高剂量(135 g·hm^-2)进行处理,2年实验结果表明,农药噻虫嗪在金银花上施用后7 d可消解90%以上,半衰期为1.54~1.66 d。农药噻虫嗪在金银花中的消解速度较快,噻虫嗪在金银花中的最高残留限量推荐值为 0.1 mg·kg^-1,金银花规范化种植中建议每年施用25%噻虫嗪水分散粒剂剂量在90~135 g·hm^-2,喷施3 次以下,最后一次施药和收获时间的安全间隔期可推荐为14 d。     

忍冬叶总黄酮的测定及其体外抗菌活性

目的:研究忍冬叶总黄酮的分离工艺及其对9种常见病原菌的体外抗菌活性。方法:以河南封丘忍冬叶为研究对象,以总黄酮为主要考察指标,通过大孔树脂柱色谱分离得到忍冬叶总黄酮,并对其进行最小抑菌浓度(MIC),最小杀菌浓度(MBC),抑菌圈活性等体外抗菌评价。结果:建立了忍冬叶总黄酮简便、有效的分离工艺,证实了忍冬叶总黄酮对9种供试病原菌具有较好的广谱抑菌性(MIC为1.95~62.5 g·L~(-1),MBC几乎均为125 g·L~(-1))。此外,当忍冬叶总黄酮部位同时含有较多绿原酸(4.2%)时,不仅得率高(10.5%),活性也更强。结论:忍冬叶总黄酮具有较好的广谱抗菌性,可以将其开发抗畜禽病原菌药物或者饲料添加剂,这也为忍冬叶资源的合理开发利用奠定了坚实的基础。     

忍冬叶活性成分周期变化及其代谢关系研究

该文通过对忍冬叶初生及次生代谢过程进行研究,探讨不同发育阶段忍冬叶代谢规律。在每月下旬采收金银花上部5~8片完全展开叶,采用HPLC测定相关代谢指标。结果表明,忍冬叶含水量在3月份最高,达到78.59%,12月份最低,为60.83%;总糖量在冬季最高,1月份达到最高275.8 mg·g~(-1),其他时间明显降低;忍冬叶中的绿原酸、新绿原酸、木犀草苷和咖啡酸的含量变化基本一致,四者的含量均在3月达到最高,分别为42.79,2.01,7.13,0.16 mg·g~(-1)。忍冬叶的初生代谢产物和次生代谢产物含量在3—5月达到较高水平,与有效成分含量相关的因素主要有钾、镁、磷、门冬氨酸、苏氨酸、脯氨酸、缬氨酸、胱氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸。     

国槐种胚愈伤组织培养与异黄酮量的分析

目的 构建国槐Sophora japonica种胚愈伤组织培养体系,并对愈伤组织中的异黄酮量进行初步分析.方法 通过添加不同浓度不同种类的植物生长调节剂,得到国槐种胚愈伤组织诱导、悬浮细胞培养、异黄酮量最高的最佳培养基;通过对愈伤组织和悬浮细胞在生长中的生长量和异黄酮量进行测定,得到悬浮细胞最佳收获期.结果 国槐种胚愈伤组织诱导的最佳培养基为B5+2,4-D(1.0 mg/L) +6-BA(0.2 mg/L)+蔗糖(20 mg/L).固体培养基上,愈伤组织培养7d之后组织进入迅速生长期,第35天,愈伤组织的生长量达到最高(鲜质量7.413 7 g),但其异黄酮量均无显著变化.悬浮培养中,愈伤组织培养24 d达到最高生长量(鲜质量11.563 8g),24 d后进入衰亡期,继续培养细胞其鲜质量、干质量均呈现下降趋势,且细胞逐渐变褐,最终死亡,其中异黄酮量的变化趋势与生长曲线相反,在24 d达到最低(4.826 mg/g).结论 国槐种胚愈伤组织诱导、培养和异黄酮量与植物生长调节剂种类及浓度均具较大关联.     

藤梨根对RKO结肠癌细胞失巢凋亡的作用

目的:观察藤梨根对人结肠癌RKO细胞悬浮生长及失巢凋亡作用.方法:200～800 mg·L-1藤梨根作用于RKO细胞,CCK-8(CCK-8)法检测藤梨根对RKO细胞悬浮生长作用,双嵌入剂乙锭均二聚物(EthD-1)染色检测失巢凋亡,比色法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)活性,2-7-二氯氢化荧光素乙二脂染色法结合荧光酶标仪检测细胞内活性氧的产生.结果:200 ～800 mg·L-1藤梨根可显著抑制RKO悬浮生长,呈剂量依赖性(P＜0.01).200 ～800 mg·L-1藤梨根作用后悬浮生长RKO细胞吸收EthD-1散发红色荧光,部分细胞可见核碎裂,呈现凋亡形态改变;藤梨根组EthD-1荧光吸光度与对照组比较差异显著(P＜0.01).终质量浓度200 ～800 mg·L-1藤梨根可显著增强RKO细胞caspase-3活性以及细胞内活性氧的产生(P＜0.01).结论:藤梨根可抑制RKO细胞悬浮生长,促使RKO细胞发生失巢凋亡,可能与活化caspase-3以及升高细胞内活性氧水平相关.     

痰热清注射液对呼吸机相关性肺炎高热患者C反应蛋白和感染参数的影响

目的: 探讨痰热清注射液对呼吸机相关性肺炎高热患者C反应蛋白（CRP）和感染参数的影响。 方法: 选择胜利石油管理局汽修卫生院56例呼吸机相关性肺炎高热患者,按数字法随机分为对照组（n=28）和观察组（n=28）,对照组采用常规治疗包括盐酸左氧氟沙星0.4 g静滴,qd,干扰素-γ,皮下注射,1次/d,12周后改隔天1次;观察组在此基础上加用痰热清注射液静滴,1个疗程用药10 d,观察两组治疗前后C反应蛋白和感染参数等指标的变化。 结果: 观察组与对照组临床有效率分别为92.86%（26/28）,75.00%（21/28）,具有统计学差异（P<0.05）。观察组治疗前CRP含量为（43.12±0.75） mg·L^-1,NT-proBNP含量为（1 872.99±11.25）ng·L^-1;治疗后CRP含量为（11.51±0.22） mg·L^-1,NT-proBNP含量为（673.52±10.71）ng·L^-1;对照组治疗前CRP含量为（44.82±0.92） mg·L^-1,NT-proBNP含量为（1 863.02±11.93）ng·L^-1;治疗后CRP含量为（19.64±0.84） mg·L^-1,NT-proBNP含量为（894.12±10.73）ng·L^-1;治疗后两组CRP均呈降低趋势,观察组降低优于对照组（P<0.05）;观察组治疗后中性细胞数（GRAN）为（3.33±0.34）×10⁹/L、白细胞（WBC）为（1.52±0.71）×10⁹/L、淋巴细胞比率（LYM）为（51.61±7.64）%;对照组治疗后中性细胞数（GRAN）为（5.92±0.15）×10⁹/L、白细胞（WBC）为（2.92±0.04）×10^-9/L、淋巴细胞比率（LYM）（66.18±6.15）%;与治疗前比较,两组GRAN,WBC,LYM等指标均有明显降低（P<0.01）,观察组降低程度显著优于对照组（P<0.05）。 结论: 呼吸机相关性肺炎高热患者采用痰热清静滴可以有效地抑制炎症反应,起到有效抗菌的效果。     

熊果酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究熊果酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法:120只清洁级雄性SD大鼠随机分为假手术组、局灶性脑缺血再灌注模型组、熊果酸(20,40,80,120 mg·kg-1)治疗组,每组20只。采用颈内动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,术后通过尾静脉注射给药。6 h后,盲法行神经功能评分,测定脑梗死体积及脑组织含水量,测定血清中肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)含量以及总抗氧化能力(T-AOC);检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),过氧化氢酶(CAT)活性及MDA含量;通过苏木精-伊红(HE)染色法观察脑组织病理形态学改变。结果:与假手术组比较,局灶性脑缺血再灌注模型组大鼠出现明显的行为障碍,血清中CK,LDH,MDA含量显著降低(P0.01),T-AOC显著降低(P0.01),脑梗死体积和脑组织含水量显著升高(P0.01),脑组织中SOD,GSH-Px,CAT活性显著升高(P0.01),并且脑组织出现明显的病理性改变;与脑缺血再灌注模型组相比,熊果酸(40~120 mg·kg-1)治疗组大鼠行为障碍显著好转(P0.05,P0.01),血清中CK,LDH,MDA含量显著降低(P0.05),T-AOC显著升高(P0.05,P0.01);熊果酸(80,120 mg·kg-1)治疗组脑梗死体积和脑组织含水量显著降低(P0.05,P0.01),脑组织中SOD,GSH-Px,CAT活性显著升高(P0.05,P0.01),MDA含量显著降低(P0.05);脑组织病理形态学改变明显减轻,其中以熊果酸120 mg·kg-1治疗组效果最为显著。结论:熊果酸对大鼠脑缺血再灌注损伤具有剂量依赖性的保护作用,该作用可能与熊果酸有效改善抗氧化酶系统活性、减轻自由基损伤有关。