苯并[a]芘染毒小鼠神经组织的形态学改变及细胞凋亡

目的：研究苯并[а]芘(BaP)染毒小鼠神经组织的损伤状况。方法：将50只昆明种小鼠随机分为5组，每组10只，染毒组分为高、中、低3个剂量组，并设溶剂对照及空白对照组。染毒组用含BaP的植物油溶剂进行腹腔注射，每组分别注射7.8、3.2和1.3mg/kg，每周4次，连续染毒10周。溶剂对照用植物油溶剂作平行处理，空白对照组不做处理。10周后取各组小鼠脑组织大脑皮质、海马、小脑和脑干部分以及脊髓、坐骨神经制作普通石蜡切片及电镜切片，光镜及电镜观察组织损伤的形态学指标，并用DNA断点末端核糖核酸转移酶地高辛标记（TUNEI）法进行细胞原位凋亡检测。结果：BaP染毒组在光镜及电镜下可见到组织损伤的形态学改变，高剂量组各组织在光镜及电镜下可见较为集中的坏死区，未做原位凋亡检测；中剂量组原位细胞凋亡阳性率为90.02%-94.22%；低剂量组原位细胞凋亡阳性率为62.45%-77.54%；而溶剂对照及空白对照组各组织未见组织损伤，原位细胞凋亡阳性率很低（4.60%-5.57%）。结论：BaP具有神经毒性，可损伤神经组织并使神经细胞胞核内DNA断裂，引起神经细胞凋亡。     

苯并[a]芘对大鼠海马神经元形态学的影响

目的研究苯并[a]芘(B[a]P)对大鼠海马形态学和突触的影响。方法初断乳雄性Wistar大鼠40只,随机分为空白对照组、溶剂对照组和3个染毒组(分别为6.25、2.5和1mg/kg体重),连续腹腔染毒13周(90d)。在染毒结束后,用电镜和光镜观察海马形态学改变。结果 HE染色对照组和B[a]P暴露各组大鼠海马神经元形态结构未见明显异常,电镜仅高剂量组偶有线粒体肿胀和核浓缩现象出现。高剂量组神经元突触PSD厚度和突触活性区长度均明显小于对照组和低剂量组(P﹤0.05),突触界面半径明显大于对照组和低剂量组(P﹤0.05)。结论低剂量B[a]P暴露对海马神经元形态和超微结构无明显影响,但B[a]P可能引起突触形态学的改变,降低突触的传递效率,因而影响学习记忆能力。     

苯并[a]芘对体外培养大鼠皮层神经元HSP70表达的影响

目的 研究苯并[a]芘(B[a]P)对体外培养大鼠皮层神经元热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法 分离培养SD大鼠皮层神经元,用0、0.1、0.5 、1、5和10μmol/L浓度的B[a]P染毒24h观察剂量-效应关系;用0、0.5和5μmol/L浓度的B[a]P染毒24、48和72h观察时效关系.培养液中均添...     

苯并[a]芘致小鼠认知功能障碍及脑细胞中microRNA的表达

目的探讨苯并[a]芘(benzo[a]pyrene,BaP)致小鼠认知功能障碍中,miR10b、miR124、miR134及miR155表达的变化,为BaP神经毒性机制的研究提供科学依据。方法将雄性ICR小鼠按体重随机分为溶剂对照组(植物油)和低(0.5mg/kg)、中(2.0 mg/kg)、高(10.0 mg/kg)BaP染毒组,每组10只,采用腹腔注射染毒。染毒8周后,用Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力,用洞板实验检测探索能力,用流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)检测大脑皮质神经细胞凋亡,用实时荧光定量PCR法测定大脑皮质miR10b、miR124、miR134及miR155的表达。结果与溶剂对照组比较,10.0 mg/kg BaP染毒组小鼠逃逸潜伏期明显延长,差异有统计学意义(P0.05),进入目标象限的总次数及在目标象限的游泳路程明显减少,差异有统计学意义(P0.05),探洞次数明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。与溶剂对照组比较,各染毒组小鼠大脑皮质神经细胞凋亡明显增加,差异均有统计学意义(P0.05),2.0、10.0 mg/kg BaP染毒组大脑皮质miR10b表达明显增高,差异有统计学意义(P0.05),10.0 mg/kg BaP染毒组miR124、miR134和miR155表达增高,且差异有统计学意义(P0.05)。相关性分析显示,大脑皮质神经细胞凋亡与miR10b、miR124、miR134和miR155表达均呈明显的正相关,相关系数分别为0.589、0.795、0.793和0.757。结论 miR10b、miR124、miR134及miR155表达在小鼠大脑皮质中不同程度地增高,这可能与BaP致小鼠认知功能障碍有关。     

中国八省市食用植物油中苯并[a]芘的调查分析

目的了解中国食用植物油中苯并[a]芘的污染状况。方法 2011年对中国八省(区、市)不同销售场所销售的部分食用植物油中苯并[a]芘含量进行调查,通过对数据进行统计分析后进行评价。结果从食用油种类分析,菜籽油和花生油苯并[a]芘含量最高,分析可能与其生产加工方式有关。从样本类型分析,散装植物油苯并[a]芘含量高于定型包装产品。结论中国食用植物油(主要为花生油和菜籽油)仍存在苯并[a]芘超标现象。     

苯并[a]芘染毒致小鼠脑组织胞核DNA损伤

目的研究苯并[a]芘（BaP）染毒对小鼠脑组织胞核DNA的损伤。方法将50只昆明种小鼠随机分为5组，每组10只，染毒组分为高、中、低3个剂量组，并设溶剂对照及空白对照组。染毒组用BaP的植物油溶剂进行腹腔注射处理，高、中、低剂量组每次分别腹腔注射BaP7．8，3．2和1．3mg／kg，每周4次。溶剂对照组用植物油溶剂作平行处理，空白对照组不做处理。实验中观察记录小鼠一般情况及神经系统症状，染毒10周后取各组小鼠脑组织制作切片及细胞悬液，DNA断点末端核糖核酸转移酶地高辛标记法（TUNEL）及单细胞凝胶电泳（SCGE）2种方法检测小鼠脑组织神经细胞DNA的损伤。结果（1）高剂量BaP染毒组小鼠有明显的全身及神经系统中毒症状。（2）TUNEL法检测，染毒组与对照组以及不同剂量BaP染毒组之间小鼠脑组织胞核DNA损伤率差异均有统计学意义（P〈10^-16～10^-62）。（3）SCGE法检测，高剂量BaP染毒组与对照组之间小鼠脑组织胞核DNA损伤程度差异有统计学意义（P〈0．05）。结论高剂量BaP具有神经系统毒性。BaP染毒可引起小鼠脑组织胞核DNA损伤，损伤率及损伤程度随染毒剂量增加而增加。     

苯并[a]芘、铅单独及联合作用对体外神经元存活率的影响及对DNA的损伤

目的　研究苯并 [a]芘、铅单独及其联合作用对体外神经元毒性及胞核DNA的损伤。方法　取 8日龄SD大鼠小脑粒细胞培养 ,按以下分组进行处理 :①空白对照组 ;②溶剂对照组 (等量DMSO +S9 mix平行处理 ) ;③低浓度铅染毒组 (PbAc5 μmol L) ;④高浓度铅染毒组 (PbAc5 0 μmol L) ;⑤低浓度BaP染毒组(BaP5 μmol L +S9 mix) ;⑥高浓度BaP染毒组 (BaP5 0 μmol L +S9 mix) ;⑦低浓度铅 +低浓度BaP联合染毒组 ;⑧低浓度铅 +高浓度BaP联合染毒组 ;⑨高浓度铅 +低浓度BaP联合染毒组 ;⑩高浓度铅 +高浓度BaP联合染毒组。染毒 90分钟 ,胰酶消化法收集标本 ,台盼蓝染色法检测存活率 ;单细胞凝胶电泳法检测胞核DNA的损伤。结果　①两种浓度的BaP、铅单独或联合染毒均可降低细胞存活率 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。②高浓度BaP单独染毒组 (第 6组 )、两种毒物联合染毒且其中 1种或 2种为高浓度组 (第 8、9、10组 )与对照组相比胞核DNA损伤程度均有显著差异 (P <0 0 1)。结论　①BaP、铅均有一定的体外神经毒性 ,二者联合作用可使毒性增强。②胞核DNA损伤可能是BaP引起体外神经毒性的机制之一。     

苯并[a]芘与铅联合神经毒性的细胞学研究

目的苯并[a]芘(BaP)、铅及其联合作用对体外神经元的毒性及细胞凋亡率的影响.方法取8日龄SD大鼠小脑粒细胞培养,按以下分组进行处理空白对照组;溶剂对照组;低浓度铅染毒组;高浓度铅染毒组;低浓度BaP染毒组;高浓度BaP染毒组;低浓度铅+低浓度BaP染毒组;低浓度铅+高浓度BaP染毒组;高浓度铅+低浓度BaP染毒组;高浓度铅+高浓度BaP染毒组;高、低浓度的BaP染毒分别为BaP50μmol/L+S9-mix和BaP5μmol/L+S9-mix,高、低浓度的铅染毒分别为50和5μmol/L的PbAc,溶剂对照组用等量DMSO平行处理,空白对照组不作处理.染毒90min,胰酶消化法收集标本.台盼蓝染色法检测存活率;DNA断点末端核糖核酸转移酶地高辛标记(TUNEL)法检测大鼠小脑粒细胞凋亡率,并对细胞存活率与凋亡率进行相关分析.结果各染毒组细胞存活率均低于对照组,高剂量组降低程度高于低剂量组,联合染毒组降低程度高于单独染毒组(P<0.05～P＜10E-7).各染毒组细胞凋亡率显著升高,高剂量组升高程度高于低剂量组,联合染毒组升高程度高于单独染毒组(P＜0.001～P＜10E-9).细胞凋亡率与存活率间呈负相关(r=-0.76125,P＜0.05).结论 BaP、铅均有一定的体外神经毒性,二者联合作用可使毒性增强.细胞凋亡可能是BaP引起体外神经毒性的机制之一.     

苯并[a]芘致肺癌中circRNA 001988及其靶基因的表达改变

目的研究苯并[a]芘恶性转化的肺癌细胞16HBE-T中circRNA 001988的表达及其下游靶基因的表达改变,并探索该circRNA在化学致癌过程中可能发挥的作用。方法采用q RT-PCR检测circRNA 001988在16HBE-T中的表达,进一步在人肺癌细胞株A549、H460和H446中检测其表达,同时在20例肺癌组织样品中检测了circRNA 001988的表达水平;利用生物信息学分析软件mi RSystem和RegRNA,预测得到circRNA 001988靶向的microRNA以及与其相互作用的mRNA;采用q RT-PCR在16HBE-T和H460中检测microRNA及mRNA的表达。结果与16HBE相比,circRNA 001988在16HBE-T中的表达下调了(6.54±0.75)倍,差异有统计学意义(P0.01),而在A549和H460细胞中表达分别下调(2.06±0.38)倍、(3.02±0.51)倍,差异均有统计学意义(P0.05)。与癌旁组织相比,circRNA 001988在肺癌组织中的表达平均下调了(2.11±0.71)倍,差异有统计学意义(P0.05)。结合生物信息学预测分析和qRT-PCR检测发现,相对于16HBE,circRNA 001988靶向的hsa-mi R-382-5p和hsa-miR-583在16HBE-T和H460细胞中的表达均上调,而hsa-miR-382-5p和hsa-miR-583共同作用的mRNA(CCDC6)的表达水平分别降低(26.20±3.92)倍、(12.61±1.48)倍。结论 circRNA 001988在苯并[a]芘恶性转化的16HBE-T细胞中的表达水平明显降低,它在苯并[a]芘致肺癌过程中可能发挥抑癌因子的作用,并可能通过内源性竞争的机制影响其下游的microRNA和mRNA的表达。     

双壳类水产品中(+)-anti-BPDE-DNA加合物HPLC/FD检测

目的 建立检测双壳类水产品中（+）-反-7,8-二羟基-9,10-环氧苯并（a）芘（BPDE）-DNA加合物的高效液相色谱荧光法（HPLC/FD）。方法 用组织基因组DNA提取试剂盒提取6种双壳类水产品组织中的DNA,0.1 mol/L HCl 、90 ℃酸解4 h,乙酸乙酯充分萃取酸解产物——苯并（a）芘-四醇。以CenturySIL C18-BDS色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）分离;洗脱流动相：V（甲醇）/V（水）=55/45;流速：1.0 mL/min;进样量：20 μL;激发波长：265 nm,发射波长：395 nm;荧光检测苯并（a）芘-四醇的含量。结果 该方法的检测限为0.3 ng/mL,在0.5~100 ng/mL范围内呈良好的线性关系（r²=0.9960）;日内相对标准偏差（RSD）为2.8%~4.2%,日间RSD为3.2%~5.8%;双壳类水产品中（+）-anti-BPDE-DNA含量为13.44~152.7 μg/kg,RSD为3.0%~6.5%;加标回收率为86.9%~91.6%,RSD为3.1%~7.3%。结论 该法简便、快速、灵敏度高,可用于双壳类水产品中（+）-anti-BPDE-DNA加合物的检测。     

苯并[a]芘、铅染毒小鼠神经毒性及脑组织细胞凋亡的研究

目的研究苯并[a]芘(BaP)、铅及其联合作用引起的小鼠神经毒性及脑组织细胞凋亡.方法将80只昆明小鼠随机分为10组,即:①未处理对照组;②溶剂(植物油)对照组;③低浓度铅(5.4 mg/L,饮水)染毒组;④高浓度铅(54 mg/L,饮水)染毒组;⑤低剂量BaP(0.5 mg/kg体重,每周4次腹腔注射)染毒组;⑥高剂量BaP(5 mg/kg体重,每周4次腹腔注射)染毒组;⑦低浓度铅 低剂量BaP联合染毒组;⑧低浓度铅 高剂量BaP联合染毒组;⑨高浓度铅 低剂量BaP联合染毒组;⑩高浓度铅 高剂量BaP联合染毒组.实验中观察记录一般情况,处理8周后测脑脏器系数,TUNEL法检测小鼠脑组织细胞凋亡率并对凋亡率与脑脏器系数进行相关分析.结果①高浓度BaP单独染毒组(0.98%)及各联合染毒组(0.95%、0.93%、0.92%、0.90%)小鼠脑组织脏器系数低于对照组(1.08%、1.08%, P＜0.05～P＜0.000 1).②除低剂量铅单独染毒组外的其余各染毒组小鼠脑组织细胞凋亡率(11.91%、18.09%、44.62%、20.12%、60.84%、52.28%、90.17%)显著高于对照组(5.89%、5.87%, P＜0.000 1). ③细胞凋亡率与小鼠脑组织脏器系数间存在负相关关系(r=-0.827 1,P＜0.05).结论①BaP、铅对小鼠均有一定的中枢毒性,两者联合作用可使毒性增强;②细胞凋亡可能是BaP引起中枢神经系统毒性的机制之一.     

苯并[a]芘在大鼠脑组织中分布动态观察

目的 观察[¹⁴C]标记苯并[a]芘在大鼠脑内的分布。方法 将100只SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组尾静脉注射[¹⁴C]标记苯并[a]芘3.7×10⁵Bq/kg,对照组注射等量生理盐水;在注射后1,6,12,24和48 h用光镜放射自显影法观察苯并[a]芘在脑内的分布情况。结果 与对照组比较,实验组大鼠脑组织注药后1 h即有苯并[a]芘银粒出现,随着时间的增加,银粒数也逐渐增加,24 h达高峰,48 h明显减少,注射后1,6,12,24,48 h银粒数分别为(17.68±1.79),(22.67±2.15),(25.79±2.55),(32.33±2.78),(18.01±1.68)粒,差异有统计学意义(F=69.67,P<0.01);银粒在脑中分布不均匀,注药后1 h主要集中在海马,6 h主要集中于大脑皮层,12 h则分布于纹状体;各时相脑组织中神经元银粒数明显高于神经胶质细胞(P<0.05)。结论 苯并[a]芘在各脑区的分布不均匀,24 h达到高峰,神经元细胞可能是苯并[a]芘靶细胞。     

苯并[a]芘亚急性染毒对雄性Wistar大鼠心血管的影响

目的探讨苯并[a]芘(B[a]P)腹腔注射亚急性染毒对雄性Wistar大鼠心血管的影响。方法将10~11周SPF级雄性Wistar大鼠40只按体重随机分为空白对照组,溶剂对照组,低、中、高剂量染毒组(B[a]P浓度分别为1.0、2.5和6.25 mg/kg),每组8只。溶剂对照组给予1.0 mL/kg的橄榄油,空白对照组不做任何处理,连续28天。染毒结束后用Prospect 3.0小动物超声成像仪和BL-410生物机能实验系统观察其左心室结构功能和血流动力学改变。HE染色观察大鼠胸主动脉和左心室病理变化。结果染毒后各组大鼠射血分数(ejection fraction, EF)、左室短轴缩短率(fractinanal shortening, FS)和左室舒张末压(left ventricular end diastolic pressure, LVEDP)总体差异有统计学意义(H=11.497,P=0.022;H=11.422,P=0.022;H=10.104,P=0.039),中剂量组EF及FS低于溶剂组(调整后P<0.05),高剂量组大鼠LVEDP高于溶剂组(调整后P<0.05)。中、高剂量组胸主动脉HE染色显示血管内膜部分缺失,部分内皮细胞脱落,内膜下胶原暴露,中膜层间隙较大;中、高剂量组左室横纹模糊不清,肌纤维减少断裂或消失,心肌间隙增宽,偶见炎症细胞或有心肌间隙渗血现象。结论苯并[a]芘可致雄性Wistar大鼠心血管功能和内皮发生损伤。     

慢性苯并[a]芘暴露对大鼠学习记忆及谷氨酸受体影响

目的 探讨慢性苯并[a]芘暴露对大鼠学习记忆损伤及代谢性谷氨酸受体的影响.方法 将40只SD大鼠按照体重随机分为对照组、苯并[a]芘低、中、高剂量组(1.0、2.5、6.25mg/kg),每组8只,腹腔注射染毒13周;用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,免疫印迹法(Western-blot)检测大鼠脑组织海马代谢性谷氨酸受体(mGluR1、mGluR2、mGluR3)表达.结果 与对照组比较,苯并[a]芘中、高剂量组大鼠平均潜伏期[(18.34±7.09)、(24.0±12.76)s]明显延长(P＜0.05),高剂量组目标象限停留时间[(29.00±3.64)s]与穿越平台次数[(4.11±1.36)次]明显减少(P＜0.01),随着染毒剂量增加,大鼠海马组织mGluR1、mGluR2蛋白表达增高,高剂量组大鼠海马组织mGluR1、mGluR2蛋白表达[(1.09±0.29)、(0.85±0.14)]明显高于对照组[(0.56±0.13)、(0.54±0.15)],差异均有统计学意义(P＜0.05),mGluR3蛋白表达在各组之间差异不明显.结论 慢性苯并[a]芘暴露可导致大鼠大脑海马组织代谢性谷氨酸受体表达增高,这可能是引发学习记忆能力受损的机制之一.     

婴幼儿奶粉中苯并[a]芘检测技术研究及含量调查

目的建立婴幼儿奶粉中苯并[a]芘检测技术,并对市售奶粉中苯并[a]芘含量进行调查分析。方法婴幼儿奶粉在碱性条件下用乙醚-石油醚(1∶1,V/V)提取,然后用1.5 mol/L氢氧化钾乙醇溶液皂化,固相萃取柱净化后,经DB-EUPAH色谱柱(20 m×0.18 mm×0.14μm)分离后气相色谱质谱法检测,D12-苯并[a]芘内标定量。结果当婴幼儿奶粉中苯并[a]芘加标0.3、1.0和5.0μg/kg时,平均回收率分别为116.7%、86.0%、96.4%,相对标准偏差为10.5%、4.2%和4.4%(n=6)。方法定量限为0.3μg/kg,检出限为0.1μg/kg,采用本方法对市售的40份国产及进口婴幼儿奶粉进行测定,苯并[a]芘含量范围为<0.1~0.25μg/kg,检出率为32.5%。结论本方法简便快速准确,净化效果好,灵敏度高,满足婴幼儿奶粉中苯并[a]芘检测要求。目前市售婴幼儿奶粉中苯并[a]芘含量处于较低水平。     

槲皮素在苯并芘致小鼠DNA损伤中的作用

目的　研究槲皮素在苯并芘致小鼠DNA损伤中的作用。方法　小鼠一次性腹腔注射苯并芘 (B〔a〕P) 10 0mg/kg后 ,分别以 0 5 ,1 0 ,2 0g/ (kg·d)剂量的槲皮素连续灌胃 90d。取小鼠尾部静脉血进行单细胞凝胶电泳实验 ,通过荧光显像的方法观察并测量血细胞的拖尾长度。结果　阴性对照组小鼠的细胞无拖尾现象 ,高、中、低剂量槲皮素组和苯并芘阳性对照组的细胞均有拖尾现象。对彗尾进行统计学分析 ,与对照组相比 ,各剂量组均有显著性差异 (P <0 0 5 )。染毒组用不同剂量的槲皮素处理后 ,DNA的损伤程度显著减少。结论　槲皮素对苯并芘引起的小鼠DNA损伤有显著的保护作用     

B[a]P所致神经发育毒性的研究进展

B[a]P（benzo[a]pyrene,B[a]P）是重要的职业和环境污染物之一,它的神经发育毒性与致癌性／致畸性相比虽是一种弱效应,但会对处于发育中的机体造成不良后果,尤其是中枢神经系统对其更为敏感。本课题组以近年来国内外有关B[a]P神经发育毒性的研究为基础,综述其流行病学研究、实验动物研究以及可能的毒性机制等方面研究进展;结合本课题组的已有研究,认为由于B[a]P的神经发育毒性所致学习和记忆损伤应得到广泛关注。