甲氧滴滴涕对雌性小鼠子宫内膜促血管生成素-1表达的影响

目的：探讨甲氧滴滴涕（MXC）对雌性小鼠子宫内膜促血管生成素。1表达的影响。方法：成年雌性小鼠经口染毒MXC,随机分为50,100,200mg／（kg·d）3个染毒组和溶剂芝麻油组（对照组）。采用免疫组织化学及电子计算机图像分析技术,检测染毒后小鼠子宫内膜中ANGPT-1的表达情况。结果：MXC染毒组与正常内膜相比,ANGPT-1呈高表达状态,差异有显著性（P〈0.01）。MXC50,100,200mg／（kg·d）组内膜与正常内膜均随月经周期呈周期性改变,MXC100,200mg／（kg·d）组内膜ANGPT-1在增殖期的表达强度高于分泌期,与正常内膜相比,差异有显著性（P〈0.01）;而MXC50mg／（kg·d）组内膜与正常内膜相比,ANGPT-1在增殖期的表达强度无差异（P〉0.05）。结论：MXC染毒后小鼠子宫内膜中ANGPT-1的高表达可能在子宫内膜疾病的发生、发展中起重要作用。     

中药红花对白血病抑制因子在小鼠早孕子宫内膜表达的影响

目的：探讨中药红花抗早孕作用与白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor, LIF）在小鼠子宫内膜表达的关系。方法：受精后第2天,分别给孕鼠灌服不同剂量的红花浸液（10.5g/kg、15.5g/kg和20.5g/kg）和生理盐水,连续3天。停药后24h取子宫,石蜡包埋制片,进行HE和LIF免疫组化染色;将免疫组化染色结果输入图像分析仪, 对LIF蛋白的表达进行定量分析。结果：各实验组孕鼠子宫内膜充血,上皮细胞排列紊乱,且随着药物剂量的提高逐渐改变。在对照组,孕鼠子宫内膜LIF呈强阳性表达,在实验组的表达水平显著低于对照组（P＜0.05, P＜0.01）;随着红花剂量的提高,LIF的表达逐渐减少。结论：中药红花可抑制孕鼠子宫内膜细胞LIF蛋白的表达,从而影响胚胎的着床。     

甲氧滴滴涕染毒对小鼠着床期HOXA-10基因表达的影响

目的：观察甲氧滴滴涕慢性染毒对雌鼠HOXA-10基因表达的影响．方法：使用5wk龄雌性昆明小鼠作为实验动物,按体质量随机分为4组,每组10只,经2wk适应性饲养后腹腔注射染毒,染毒剂量分别为0（对照）、16（低剂量）、32（中剂量）、64（高剂量）mg/（kg·d）,对照组给予等剂量芝麻油,连续15d后合笼,继续给药4d,于孕5d处死．结果：①染毒后小鼠一般情况未见明显异常;②免疫荧光显示：对照组荧光明显亮于染毒组;③实时荧光PCR测得的HOXA-10 mRNA表达：与对照组比较,中、高剂量组均显著降低HOXA-10 mRNA的表达水平（P〈0．05）．结论：MXC染毒可降低孕鼠子宫组织中HOXA-10基因的表达从而影响胚胎着床．     

调经助孕胶囊对促排卵周期小鼠子宫内膜αvβ3、MMP9及TIMP1表达的影响

目的:探讨调经助孕胶囊对促排卵周期小鼠子宫内膜整合素αvβ3、基质金属蛋白酶(MMP-9)及其抑制物(TIMP-1)表达的影响。方法:60只8～9 w龄昆明种小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、实验组各20只。给予相应药物灌胃10 d后,造模,雌雄合笼。于妊娠第5天获取子宫内膜,检测小鼠子宫内膜整合素αvβ3蛋白表达及MMP9/TIMP1 mRNA表达。结果:模型对照组小鼠着床期子宫内膜MMP9及TIMP1的表达低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。实验组小鼠着床期子宫内膜MMP9、TIMP1及其比值均高于模型对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。模型对照组小鼠着床期子宫内膜整合素αvβ3表达明显低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05);实验组小鼠着床期子宫内膜αvβ3表达明显高于模型对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:促排卵可导致着床期子宫内膜MMP9及TIMP1mRNA表达下降,影响MMP9/TIMP1比值,整合素αvβ3蛋白表达下降,可能是促排卵影响子宫内膜容受性的机制之一。调经助孕胶囊可增加促排卵周期着床期小鼠子宫内膜整合素αvβ3蛋白表达,MMP9、TIMP1 mRNA表达,调节MMP9/TIMP1平衡。     

ME491／CD63对小鼠胚胎发育及着床的影响

目的：研究ME491／CD63对小鼠胚胎体外发育及着床的影响,以及ME491／CD63mRNA及蛋白在假孕D1～8小鼠子宫中的表达规律．方法：①将小鼠8-细胞胚胎培养于含不同浓度ME491／CD63抗体的培养液中,观察胚胎发育,记录囊胚形成及脱透明带的情况．②妊娠D4小鼠宫角注射ME491／CD63抗体,于妊娠D8观察小鼠胚胎植入数量．③用RT—PCR及免疫组织化学技术观察ME491／CD63mRNA及蛋白在假孕小鼠子宫的表达规律．结果：①ME491／CD63抗体可影响胚胎在体外的发育．与对照组相比,在ME491／CD63抗体浓度为1：400及以上时,囊胚的形成率明显降低（P〈0．05）;在抗体浓度为1：800及以上时,胚胎脱带率显著下降（P〈0．05）,ME491／CD63抗体对胚胎发育的影响具有浓度依赖性．②宫角注射一定量的ME491／CI）63抗体可以显著提高小鼠胚胎的着床数[（5．8±2．3）vs（4．1±1．8）,P〈0．05]．③ME491／CI）63mRNA在假孕D1～8小鼠子宫中均有表达,于D6表达最丰富．MFA91／CD63蛋白在假孕D1—8的子宫腺上皮细胞均有表达,假孕D1～5腔上皮细胞无表达,假孕D6—8,子宫腔上皮细胞阳性表达．结论：①ME491／CD63在小鼠胚胎发育和着床过程中发挥重要作用．②ME491／CD63在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的,其表达量的变化可能与胚胎存在与否有一定关系．     

Dicer基因在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的：检测Dicer基因在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达规律,为阐明其在胚胎着床中的作用打下基础。方法：利用实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blot分别检测未孕、假孕及孕d1~d7小鼠子宫内膜中Dicer基因mRNA和蛋白质的表达。结果：在小鼠着床窗期及着床后（d4～d7）,小鼠子宫内膜中Dicer基因mRNA和蛋白质表达均明显升高,d5达到高峰（PmRNA=0.000,P蛋白= 0.000）;且Dicer表达主要定位于子宫内膜基质细胞。结论：Dicer基因在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达存在时间与空间差异,这种规律性表达所调控的细胞生长、增殖和分化可能是胚胎正常着床的分子机制之一。     

宫内感染致胎鼠脑TNF-α表达及脑细胞凋亡变化的研究

目的：研究孕鼠腹腔注射内毒素（LPS）胎鼠脑肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达及胎鼠脑细胞凋亡的变化。方法：妊娠18d孕鼠随机分为对照组、LPS组，分别腹腔注射盐水和LPS。免疫组化法及RT-PCR法观察不同剂量、不同时间点的LPS腹腔注射后，两组胎鼠脑TNF-α的表达；采用原位末端标记法测定孕鼠腹腔注射LPS 0．4mg／kg后48h胎鼠脑细胞凋亡的变化。结果：胎鼠脑组织中TNF-α蛋白水平及mRNA表达，LPS组均显著高于对照组（P〈0．05），随着LPS剂量的增大，差异更为显著（P〈0．01）；LPS以4mg／kg腹腔注射后，胎鼠脑组织的TNF-α蛋白含量及mRNA表达增加，1h即显著高于对照组（P〈0．01），4h达高峰，至8h仍显著高于对照组（P〈0．05）；LPS组注药后48h胎鼠脑海马区见大量棕褐色核染的凋亡细胞。与对照组比较差异显著（P〈0．01）。结论：TNF-α可能是LPS致胎鼠脑损伤的关键的细胞因子。     

小鼠围植入期子宫内膜组织中白血病抑制因子蛋白及mRNA的表达

目的：观察小鼠围植入期子宫内膜组织中白血病抑制因子（LIF）表达的变化规律并探讨其与胚胎种植的关系。方法：取真孕、假孕第3、4、5、6天小鼠（n=10）子宫内膜组织,采用免疫组织化学、RT-PCR法分别检测LIF蛋白和mRNA的表达情况,并设未孕小鼠作对照组。结果：小鼠子宫内膜组织中LIF蛋白的表达主要定位在腔上皮和腺上皮。真孕组第3、4、5、6天子宫内膜组织中LIF蛋白和mRNA的表达水平均高于假孕组和对照组（P均〈0.05）,且表达水平在孕4d达高峰（P〈0.05）。结论：LIF表达的峰值与胚胎种植时间一致,可能是子宫内膜容受性的标志;LIF的表达不仅受母体激素的影响,也和胚胎的刺激有关。     

NMBR在不同妊娠阶段小鼠子宫平滑肌细胞中的表达及其与临产的关系

目的：探讨神经调节素B受体（neuromedin B receptor,NMBR）在妊娠小鼠子宫平滑肌细胞中mRNA、蛋白时空表达的变化及其与分娩启动的关系和机制。方法：按妊娠阶段的不同,将小鼠分为未孕组、早孕组、中孕组、晚孕组、产时组和产后组,每组12例。应用半定量RT-PCR和Western免疫印迹技术分别检测子宫平滑肌中NMBR, IL-6和HSP70 mRNA及蛋白表达;利用NoShift转录因子分析法检测NF-κB-P65的DNA结合活性, 并分析各指标与分娩的关系及其相关性。结果：产时组NMBR mRNA的相对表达量显著高于未孕、早孕、晚孕、产后组（P＜0.05）, 但与中孕组相比差异无统计学意义（P＞0.05）;产时组NMBR蛋白表达量显著高于其它各组（P＜0.01）。NF-κB-P65DNA结合活性产时组显著高于未孕、晚孕和产后组（P＜0.05）。IL-6 mRNA表达产时组显著高于未孕、晚孕和产后组（P＜0.05）, 其蛋白表达产时组亦显著高于未孕和产后组（P＜0.05）。HSP70 mRNA表达量产时组显著高于未孕和产后组（P＜0.05）,HSP70蛋白的表达量产时组明显高于晚孕、未孕组（P＜0.05）。临产前后子宫平滑肌细胞P65 DNA结合活性、IL-6 mRNA的表达均与NMBR mRNA的变化呈正相关（r=0.40, P＜0.01;r=0.30, P＜0.05）; P65, HSP70 mRNA的变化亦与NMBR的变化呈正相关（r=0.40, P＜0.01;r=0.49, P＜0.01）;但HSP70与P65无相关性。结论：子宫平滑肌细胞中NMBR mRNA和蛋白表达在临产时达最高峰。NMBR可借助NF-κB P65-IL-6通路、通过调节HSP70表达参与分娩发动和维持,但其对HSP70表达的影响不依赖P65途径。     

GRB7基因在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的：研究生长因子结合受体7（growth factor receptor bound 7,GRB7）在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨其在胚胎着床过程中的作用。方法：分别应用实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blot方法检测未妊娠及妊娠早期d1～7小鼠子宫内膜GRB7基因及蛋白的表达;孕3 d下午8点子宫角注射GRB7反义寡核苷酸,孕7 d观察胚泡着床数较正常组有无变化。结果：实时荧光定量PCR测得未妊娠（d0）和妊娠早期（d1～7）小鼠子宫内膜组织均有GRB7 mRNA表达,并在孕5 d达到峰值;免疫组化及Western blot分析显示GRB7蛋白在子宫内膜的表达规律与实时荧光定量PCR基本一致,孕1 d到孕4 d,GRB7蛋白主要表达部位为腔上皮、腺上皮,基质细胞少量表达,孕5 d、孕6 d,GRB7蛋白表达较之前增强,并且在基质细胞开始明显表达,孕5 d最强;孕6 d着床点GRB7蛋白高表达于初级蜕膜区,着床旁GRB7蛋白高表达于基质细胞;子宫角注射GRB7反义寡核苷酸后胚泡着床数较正常组明显减少。结论：GRB7在早孕小鼠子宫内膜中呈动态表达,提示它参与了胚胎着床的发育过程。     

甲氧滴滴涕对孕鼠生殖及其胎鼠发育的影响

目的:研究甲氧滴滴涕(MXC)染毒对孕小鼠生殖和胎鼠发育的影响.方法:将交配成功的雌鼠于孕12～17 d每日给予不同剂量的MXC(0,20,100,200 mg/kg)灌胃,并设芝麻油溶剂为对照组,观察各组孕鼠体质量和黄体等计数测定,同时观察各组F1子代仔鼠的体质量和肛门生殖器距离等,采用放射免疫法检测孕鼠血清雌二醇(E2)和孕酮(P)含量.结果:生殖影响:随染毒剂量增加,母鼠子宫着床数减少,雄性胎鼠肛殖距(AGD)缩短,孕鼠血清中E2和P水平升高,呈不同剂量间差异,具有统计学意义(P＜0.05).发育影响:随染毒剂量增加孕鼠体质量增长减少,活胎数下降,不良妊娠结局(死胎、吸收胎数)增多,呈不同剂量间差异,具有统计学意义(P＜0.05).结论:MXC可干扰孕小鼠的生殖功能,导致生殖和胎仔发育毒性.     

甲氧滴滴涕染毒对孕鼠胎盘组织ERα表达的影响

目的探讨孕早期持久性暴露有机污染物甲氧滴滴涕(methoxychlor,MXC)对孕鼠胎盘组织雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)表达的影响。方法孕鼠随机分为3组,每组10只,其中孕鼠皮下注射MXC为染毒组,皮下注射芝麻油为正常对照组,皮下注射雌二醇(estradiol,E2)为阳性对照组。应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组孕鼠胎盘组织中ERα的表达强度。结果孕鼠MXC染毒组ERαmRNA(0.68±0.11),与正常对照组(0.49±0.09)比较,有显著性差异(P<0.05);与阳性对照组(0.60±0.10)比较,差异无显著性(P>0.05)。免疫组化结果显示,MXC染毒孕鼠胎盘组织ERα阳性表达明显高于正常对照组。结论 ERα中的高表达可能是MXC影响胚胎发育的毒性作用机制之一。     

The Expression and Implication of TRPV5,Calbindin-D28k and NCX1 in Idiopathic Hypercalciuria

The expression of calcium epithelium TRPV5, alcium binding protein Calbindin-D28k and Na＋/Ca2＋ exchanger NCX1 was detected in renal distal convoluted tubule, and their effects on urine calcium reabsorption and the possible pathogenic mechanism in idiopathic hypercalciuria （IH） were investigated. Genetic hypercalciuric stone-forming （GHS） rats were chosen as animal models to study urine calcium reabsorption and IH. The cognate female and male rats that had maximal urine calcium were matched to breed next generation. Twelve GHS rats and 12 normal control （NC） SD rats were selected. Western blot and real time quantitative PCR were used to detect the protein and gene expression of TRPV5, Calbindin-D28k and NCX1 respectively. The expression levels of TRPV5 protein and mRNA in GHS rats were significantly lower than in NC rats （P〈0.05）. Western blot revealed that the expression levels of Calbindin-D28k in GHS rats and NC rats were 0.49±0.02 and 0.20±0.01 respectively, with the difference being significant between them （P〈0.05）. By using real time quantitative PCR, it was found that there was no significant difference in Calbindin-28k mRNA expression levels between GHS rats and NC rats （P〉0.05）. There was no significant differ- ence in the NCX1 expression between GHS rats and NC rats （P〉0.05）. It was suggested that TRPV5 and Calbindin-D28k might play an important role in urine calcium reabsorption and IH, but they dif- ferently contributed to the pathogenesis： The down-regulation of TRPV5 decreases urine calcium reabsorption, directly leading to loss of the urine calcium and resulting in hypercalciuria, and the increased Calbindin-D28k expression could relieve, neutralize and decrease intracellular Ca2＋ concentration to maintain calcium balance. NCX1 is not the key protein in urine calcium reabsorption.     

甲氧滴滴涕对雄性生殖系统的氧化损伤作用

目的观察甲氧滴滴涕(MXC)对雄性小鼠的生殖系统毒性作用并探讨其毒性作用的可能机制.方法光镜观察喂服MXC小鼠睾丸和附睾的变化,并以生物化学的方法测定氧化损伤相关指标的改变.结果精子活动度和活率降低,畸形率增高,生精小管上皮变薄;睾丸和附睾的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和超氧化物歧化酶(SOD)活力显著下降(p＜0.001),丙二醛(MDA)含量明显升高(P＜0.01),维生素E组各项指标的变化均较21 d组的变化小(P＜0.05).结论MXC对雄性小鼠生殖系统具有一定的毒性作用,可导致睾丸和附睾抗氧化能力下降,脂质过氧化增加,其毒性作用可被维生素E减轻.     

甲氧滴滴涕对小鼠骨质疏松的影响

目的：探讨甲氧滴滴涕（MXC）对小鼠骨质疏松的影响.方法：将40只昆明小鼠随机分为50,100,200mg/（kg.d）组及溶剂芝麻油组（对照组）,连续14d给予灌胃染毒MXC,末次给予MXC24h内处死小鼠,取肝、脾、胸腺称质量,取左侧股骨进行骨组织形态学观察,并取右侧股骨进行骨干质量、骨钙及骨羟脯氨酸（B-HOP）的测定和比较.结果：不同剂量MXC分别致小鼠骨干质量减少,骨横短径减少,骨钙及骨羟脯氨酸含量减少和胸腺萎缩.结论：MXC可引起小鼠以骨量丢失为主的骨质疏松.     

雌激素及雌激素受体拮抗剂ⅡCI 182780对大鼠垂体泌乳素GH3细胞Calbindin-D9k表达的影响

目的 探讨17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）对大鼠泌乳素腺瘤细胞株GH3细胞Calbindin-D9k（CaBP-9k）表达的影响,并探讨选择性雌激素受体拮抗剂ⅡCI 182780是否能够拮抗雌激素对CaBP-9k表达的诱导作用.方法 以GH3细胞作为垂体泌乳素腺瘤的体外模型,通过免疫荧光法观察CaBP-9k在GH3细胞的表达情况;E2分3个剂量：10-8、10-9、10-10 M对GH3细胞作用24h,分别以RT-PCR法及Western blot法检测CaBP-9k基因和蛋白的表达水平;E2以10-8 M的剂量对GH3细胞作用24 h,同时设ⅡCI 182780拮抗组（10-6M）,被用于研究ER介导的通路对CaBP-9k表达的影响;用免疫共沉淀法检测CaBP-9k与ERα的相互作用关系.结果 在GH3细胞中,CaBP-9k的表达水平随E2给药浓度的增高而增加.当同时给予ⅡCI 182780时,E2诱导CaBP-9k表达的作用被拮抗,其表达水平显著降低.进一步通过免疫共沉淀法证实,在GH3细胞中,CaBP-9k与ERα能够直接结合,E2能够上调2者的相互作用.结论 雌激素可能通过ERα途径诱导GH3细胞CaBP-9k的表达,且CaBP-9k与ERα能够直接结合相互作用.提示CaBP-9k可能参与GH3细胞ER途径相关的生物学效应.     

自然铜、鹿衔草对肺癌骨转移模型裸鼠肿瘤组织ICAM-1、MMP-9及PTHrP表达的影响

目的探讨自然铜、鹿衔草在裸鼠肺癌骨转移过程中对细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)表达水平的影响。方法 50只BALB/c祼鼠以A549肺癌细胞建立肺癌胫骨局部骨转移模型。将模型鼠随机分为自然铜组、鹿衔草组、联合给药组、阳性对照组及模型对照组。自然铜组按6g/kg隔天灌胃自然铜混悬液;鹿衔草组按6g/kg隔天灌胃鹿衔草混悬液,联合给药组按6g/kg隔天灌胃自然铜和鹿衔草混合溶液,阳性对照组腹腔注射帕米磷酸二钠注射液;模型对照组给予生理盐水处理。3周后收集肿瘤组织标本,采用免疫组织化学法及实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测ICAM-1、MMP-9、PTHrP蛋白及mRNA表达水平。结果自然铜组、鹿衔草组及联合给药组ICAM-1表达阳性细胞百分率分别为(35.2±1.1)%、(33.6±4.0)%、(38.3±4.6)%,MMP-9表达阳性细胞百分率为(59.2±0.7)%、(65.4±1.7)%、(67.7±1.7)%,均低于模型对照组[(90.2±0.7)%、(94.3±0.4)%,P均0.01]及阳性对照组[(57.9±2.3)%、(76.7±2.4)%,P均0.01];联合给药组PTHrP表达阳性细胞百分率(73.3±7.2)%,低于模型对照组[(85.9±3.6)%,P0.05]。自然铜、鹿衔草及联合给药组ICAM-1 mRNA相对表达量分别为(10±0.5)×10-2、(7.3±0.6)×10-2、(6.6±1.1)×10-2,MMP-9 mRNA相对表达量分别为(11.9±2.2)×10-2、(21.7±5.1)×10-2、(23.4±5.9)×10-2,均低于模型对照组[(100.8±13.8)×10-2、(100.3±9.0)×10-2,P均0.01]及阳性对照组[(20.4±3.2)×10-2、(45.5±7.4)×10-2,P0.01,P0.05];联合给药组PTHrP mRNA相对表达量为(74.7±17.1)×10-2,低于模型对照组水平[(100.9±14.9)×10-2,P0.01]。结论自然铜、鹿衔草及其联合用药可能通过下调ICAM-1、MMP-9、PTHrP表达水平抑制裸鼠肺癌骨转移过程。     

甲氧滴滴涕对小鼠卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨甲氧滴滴涕(MXC)对小鼠卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响。方法:MTT法测定卵巢颗粒细胞在MXC作用后的细胞活力(A值);流式细胞技术检测细胞凋亡变化;电镜观察细胞的形态学改变等;综合评价MXC对卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响。结果:1MTT法测得MXC在(2.5~10.0)μg/ml浓度范围内能明显抑制卵巢颗粒细胞的增殖,并具有浓度依赖性,10.0μg/mlMXC作用36h的卵巢颗粒细胞A值最低;2流式细胞仪检测结果显示5.0,10.0μg/mlMXC处理组卵巢颗粒细胞的凋亡率分别为27.8%和41.7%,明显高于对照组的9.9%(P<0.05);3电镜下可见卵巢颗粒细胞呈典型凋亡样改变。结论:MXC能明显抑制小鼠卵巢颗粒细胞增殖,并具有显著促进颗粒细胞凋亡的作用。