有机阴离子转运多肽3参与全氟辛烷磺酸诱导支持细胞损伤

目的 :探讨Oatp3在PFOS诱导的支持细胞毒性中的作用。方法 :体外分离纯化原代大鼠支持细胞,通过细胞毒性实验,观察PFOS对原代支持细胞生长的影响;利用Oatp3 si RNA构建Oatp3基因敲减模型,观察Oatp3在PFOS诱导的支持细胞毒性中的作用,并采用Western blot法检测PFOS对Oatp3蛋白表达的影响。结果:0~30μmol/L剂量的PFOS对大鼠支持细胞生长无明显影响(P>0.05);当PFOS剂量增至40μmol/L时,对支持细胞毒性作用明显(P<0.01),PFOS毒作用的IC50值约为45.6μmol/L。40μmol/L的PFOS可明显诱导Oatp3蛋白的表达(P<0.01),联合Oatp3 si RNA处理后,其诱导作用明显抑制(P<0.01)。与转染试剂对照组(Mock)相比,加入40μmol/L的PFOS后,支持细胞存活率明显降低(P<0.01),联合Oatp3 si RNA处理后,PFOS诱导的支持细胞毒性明显被抑制(P<0.05或P<0.01)。结论:Oatp3很可能参与PFOS诱导支持细胞损伤。     

常用抗癫痫药对大鼠体内Oatp2表达的影响

目的：研究常用抗癫痫药AEDs丙戊酸钠（VPA）、卡马西平（CBZ）、苯妥英钠（PHT）对正常及癫痫大鼠脑、肝内Oatp2表达的影响．方法：采用氯化锂-匹罗卡品诱发Wistar大鼠慢性自发性癫痫（SE）,分别予VPA[187．5mg／（kg·d）],CBZ[125mg／（kg·d）],PHT[62．5mg／（kg·d）]治疗4wk后,采用免疫组化SABC法检测大鼠脑、肝内Oatp2分布,Western Blot及RT—PCR方法检测Oatp2蛋白及mRNA的表达水平．结果：①脑、肝组织中均可见Oatp2免疫反应阳性物质,分别表达于脑微血管内皮细胞、脉络丛上皮细胞及肝细胞;②与正常对照相比,癫痫大鼠及AEDs治疗大鼠脑内Oatp2蛋白表达均降低,而Oatp2-mRNA表达无明显变化;③癫痫大鼠肝内Oatp2-mRNA与蛋白表达与正常对照组相比无明显变化;而使用CBZ,PHT后大鼠肝内Oatp2-mRNA与蛋白表达上调,使用VPA后肝内Oatp2-mRNA与蛋白表达下调．结论：VPA,CBZ,PHT均可下调脑内Oatp2表达,而对肝内Oatp2的表达变化存在不同影响,AEDs可能通过影响Oatp2表达,影响其自身向脑内的转运和在体内的代谢．     

原代培养大鼠肾小管上皮细胞在有机阴离子转运中的应用

目的优化原代培养大鼠肾小管上皮细胞(RTEC)的方法,探讨其应用于有机阴离子转运分析研究的优点。方法将大鼠肾皮质剪碎,经消化、过滤、短暂贴壁,所得大鼠RTEC在含体积分数10%胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔培养基/F12培养基中培养,同时加入胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)营养添加剂。人肾小管HK-2细胞的培养条件同大鼠RTEC,但不添加ITS。反转录聚合酶链反应法检测大鼠RTEC及人肾小管HK-2细胞中β-actin、α-酮戊二酸(盐)受体1及有机阴离子转运蛋白1(OAT1)mRNA的表达。将HK-2细胞、大鼠RTEC应用于荧光素转运实验,观察2种细胞荧光强度随时间变化的差异。结果大鼠RTEC可传代,且生长状态良好。HK-2细胞无OAT1表达,不具有转运荧光素的能力;大鼠RTEC有OAT1表达,具有转运荧光素的能力。结论 ITS营养添加剂有利于原代培养大鼠RTEC的传代生长,该细胞可成功用于有机阴离子转运的研究,较HK-2细胞株更能客观地反映肾小管的转运功能,是研究肾脏相关功能的理想细胞学模型。     

有机阴离子转运肽在药物转运中的作用

溶质运载蛋白家族（solute carrier family,SLC）和ATP结合盒转运蛋白家族(ATP binding cassette family,ABC)在药物吸收、消除和组织分布中起重要作用。本综述将对有机阴离子转运肽（organic anion transporting polypeptide,OATP）的最新命名、分类、组织分布、功能及在药物转运中的作用加以介绍。     

有机阴离子转运蛋白1研究进展

有机阴离子转运蛋白1（hOAT1）,主要表达于肾近曲小管上皮细胞基底膜。它可以介导有机阴离子进入其分布的细胞,进而参与肾脏对尿酸盐的分泌和重吸收过程。本文从hOAT1的分子生物学基础、主要功能、底物的特异性及其功能等进行综述。     

有机阴离子转运蛋白1和3的研究进展

尿酸是嘌呤代谢的终末产物,主要在肝脏产生,通过肾小球滤过,在近端肾小管重吸收后再排泌到尿液中.尿酸的排泌主要依靠近端肾小管上皮细胞中的转运因子[1].     

人源有机阴离子转运多肽1B1和多药耐药相关蛋白2双转MDCKⅡ细胞株的构建及其功能验证

 目的 构建人源有机阴离子转运多肽1B1 (human organic anion transporting polypeptide 1B1, hOATP1B1)和多药耐药相关蛋白2 (multidrug resistance-associated protein 2, hMRP2)双转MDCKⅡ细胞株,验证其功能,并应用其考察创新药物2,3-双加氧化酶 (indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan, 1-MT)的转运特性。方法 采用基因工程手段获得hOATP1B1和hMRP2表达真核载体pVITRO2-SLCO1B1-ABCC2,转染MDCKⅡ细胞,通过遗传霉素G418筛选得到稳定表达的细胞株;通过Real-time PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜确认目的蛋白特异性;利用该双转模型考察普伐他汀(不同pH环境和不同底物浓度)和1-MT的转运。结果 经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明重组质粒构建成功;通过Real-time PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜证明经遗传霉素筛选的MDCK-OATP1B1/MRP2细胞构建成功;pH=6.5时,普伐他汀在所构建双转细胞模型上转运最佳;在0~500 μmol/L的浓度范围内,普伐他汀在该模型上的转运呈现浓度依赖性。1-MT在该细胞模型上无明显转运。结论 成功构建人源MDCK-OATP1B1/MRP2双转细胞株,发现1-MT既不是OATP1B1蛋白也不是MRP2蛋白的底物,该细胞株可用于OATP1B1/MRP2介导的外源性物质(如药物)和内源性物质(如胆红素)的转运研究。     

有机阴离子转运肽在药代动力学中的作用

近年来,药物转运体在药物的吸收及代谢过程中发挥着重要的作用。有机阴离子转运肽(organic anion transporting polypeptides,OATPs)家族作为摄取转运体中的一员,由于其在肝、肠、肾等重要组织中的表达而影响着临床药物的药代动力学,尤其是OATP1B1,OATP1B3和OATP2B1。同时,众多临床药物被认为是OATP的底物药物(例如许多他汀类药物是OATP1B1的底物)。一些药物可能抑制OATP而导致药物相互作用(例如环孢素A)。此外,由OATP介导的基因多态性也导致了某些药物显著的个体差异。本文重点评述OATP家族不同成员在人体内的表达及其底物、OATP基因多态性、OATP介导的药物相互作用及其在临床药物的药动学与药效学中的作用。     

缬沙坦大鼠在体肠吸收动力学

通过大鼠在体单向肠灌流模型(SPIP),采用反相高效液相色谱法测定大鼠肠液中缬沙坦的浓度,研究缬沙坦的肠吸收动力学与P-糖蛋白(P-gp)和有机阴离子转运多肽(OATP)对缬沙坦肠吸收的影响。结果表明,缬沙坦为全肠段吸收,吸收速率与灌流液的pH和肠段部位有关,吸收速率按十二指肠、空肠、结肠和回肠顺序下降。缬沙坦在十二指肠的非线性吸收动力学参数为Ka=0.328 h-1;Vm=72.652μmol/(L.h);Km=10.968μmol/L;Vms=69.115μmol/(L.h);Kms=0μmol/L。空肠、结肠和回肠的吸收速率常数分别为(0.595±0.091),(0.586±0.153)和(0.551±0.030)h-1。与原药组相比,含P-gp抑制剂药物组Papp显著增加,含OATP抑制剂药物组Papp显著减少(P<0.05)。缬沙坦的肠吸收机制为主动转运-被动扩散混合吸收,符合非线性动力学过程。     

淫羊藿苷对大鼠肝药物代谢Ⅱ相酶和药物转运体的影响

目的揭示淫羊藿苷(icariin,ICA)对大鼠药物代谢Ⅱ相酶和药物转运体的影响,并比较月龄差异。方法6月龄和18月龄SD雄性大鼠随机分为6月龄大鼠生理盐水组(6NS)和ICA组(6ICA),18月龄大鼠生理盐水组(18NS)和ICA组(18ICA),每组8只,灌胃ICA(60 mg.kg-1)4 w后取肝脏,钙沉淀法提取肝微粒体,BCA法测定微粒体蛋白浓度。比色法测定谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione S-transferase,GSTs)活性;紫外分光光度法测定尿苷-5’-二磷酸葡醛酰转移酶(uridine 5’-diphosphate glucuronosyl transferase,UGTs)活性;ELISA法测定有机阴离子转运多肽2(organic anion transporting polypeptide 2,Oatp2)和有机阴离子转运体2(organic anion transporter2,OAT2)含量;Real-Time RT-PCR检测UGT1A6、UGT2B7、GST-π、OAT2和Oatp2 mRNA表达。结果 ICA(60mg.kg-1)明显增加Oatp2和OAT2含量,上调OAT2和Oatp2 mRNA的表达,但未见明显月龄差异;对GSTs和UGTs活性以及UGT1A6、UGT2B7、GST-πmRNA的表达未见明显影响。结论 ICA对大鼠肝组织OAT2和Oatp2具有诱导作用,该作用未见明显月龄差异,对GSTs和UGTs无明显影响。     

年龄和惊厥持续时间对持续惊厥发作后海马细胞色素C释放的影响

目的: 探讨年龄和惊厥持续时间对惊厥持续状态(SC)后海马细胞色素C(cytC)释放的影响. 方法:健康成年(ARs)和生后20 d幼龄Wistar鼠(IRs)各80只,经腹腔注射氯化锂-匹罗卡品分别诱发持续惊厥发作30 min的SC (30 min SC)和3 h SC,在SC后3 h至7 d的6个不同时点上处死动物,采用流式细胞仪检测海马细胞cytC含量,比较两组间的动态变化. 结果:① 30 min SC后3 h,两组大鼠海马细胞cytC含量均升高,6 h达到高峰,12 h后开始回落. 两组cytC含量峰值分别为32.47±6.28,33.23±8.66,显著高于对照组(P<0.01). ②30 min SC后7 d时,IRs组cytC含量已降至正常,而ARs组仍高于正常对照组(P<0.05). 在SC后1, 3, 7 d, IRs组海马细胞cytC含量均显著低于ARs组. ③3 h SC后3, 6 h,两组海马细胞cytC含量均显著高于30 min SC后的相同观察时点(P<0.05). 经偏相关参数分析,在排除年龄的影响后,不同惊厥持续时间与海马细胞cytC含量呈显著正相关(r=0.66,P<0.05). 结论:①严重惊厥发作可导致海马细胞cytC的释放. ②年龄和惊厥持续时间均是影响惊厥后海马细胞cytC释放的重要因素. ③惊厥持续时间越长,海马细胞cytC释放越明显. ④与成年鼠不同,幼年鼠海马细胞cytC释放启动后不久即迅速回落,提示幼年脑内可能存在一个主动抑制海马细胞cytC释放的保护性反应.     

TrkA在胚胎期Wistar大鼠端脑内的表达

目的：探讨TrkA受体在胚胎不同时期Wistar大鼠端脑内的表达情况。方法：成年Wista大鼠合笼饲养，查到阴栓或阴道涂片查到精子为E0天，分别在E13、E15、E17、E19和E21天利用常规形态学手段免疫组织化学方法观察胚胎期Wistar大鼠不同脑区TrkA表达情况。结果： E13天胎脑组织内未检测到TrkA阳性表达，E15天TrkA表达阳性率在胚胎期大鼠端脑皮质内呈上升趋势，E17天达次高峰，E19开始下降，出生前E21天再次达表达高峰。胎鼠纹状体、海马的发育较晚，E17天开始发育，TrkA在其内的表达与皮质内相似。结论：TrkA在胎鼠端脑的表达始于E15天，且自E15～E21表达量呈持续增加趋势，符合胚胎诱导过程。     

胎鼠脊髓内TrkA表达与神经元发育初探

目的:观察神经生长因子特异性受体TrkA在不同胎龄大鼠脊髓内的表达特点,并探讨其与神经元发育的相关性。方法:利用尼氏染色、免疫组织化学方法观察胚胎期Wistar大鼠脊髓内神经元发育及TrkA表达特点。结果:神经元在胎鼠脊髓内的发育始自E13天,神经元数量持续增加至E19天。E19后神经元数量没有明显增加,胞体不断增大,突起不断延长,胞内尼氏体明显增多;E13天大鼠脊髓内开始检测到TrkA的表达,并随着胚胎的进一步发育呈逐渐增加趋势。结论:TrkA与神经元的发育呈同步相关,神经元的发育成熟依赖于TrkA的表达。     

不同条件作用下瘦素对大鼠血压的影响

目的:探讨瘦素(Leptin)对大鼠血压的影响及可能机制。方法:共行4次实验。①24只Wistar大鼠随机等分为4组,分别静脉注射10μg/kg、100μg/kg、1000μg/kg的Leptin及生理盐水(对照)。②12只Wistar大鼠,先注射NO合酶抑制剂左旋精氨酸甲酯(L-NAME),其中6只再注射100μg/kgLeptin,另6只注射生理盐水(对照)。③大鼠12只,先注射神经节阻断剂六甲双胺10mg/kg,血压和心率稳定后,其中6只注射Leptin100μg/kg,另6只注射生理盐水作为对照。④大鼠12只,注射六甲双胺10mg/kg和Leptin100μg/kg,血压和心率稳定后,其中6只注射L-NAME30mg/kg,其余6只注射生理盐水作为对照。各实验中观察大鼠血压变化。结果:①3种剂量Leptin均未使大鼠血压发生变化(P>0.05)。②注射L-NAME后大鼠血压升高,再注射Leptin,大鼠血压进一步升高(P<0.01)。③注射六甲双胺后大鼠血压降低,再注射Leptin,大鼠血压进一步降低(P<0.01)。④六甲双胺和Leptin用药后大鼠血压降低,再注射L-NAME,血压回升(P<0.05)。结论:Leptin不能改变血压,其可能通过既激活交感神经系统,又促进内皮细胞合成和释放NO,从而维持体内血压的动态平衡。     

大鼠脑皮质微血管内皮细胞的培养

目的：培养脑皮质微血管内皮细胞。方法：取1－5d Wistar乳鼠脑皮质，经不同孔径的筛网过滤后，用胶原酶振荡消化获得的血管内皮细胞进行培养，用Ⅷ因子相关抗原免疫组化鉴定。结果：培养的细胞呈单层贴壁生长，7－9d呈典型的铺路卵石样征象。结论：建立了一种简便易行的培养脑皮质微血管内皮细胞的方法。