人凝血因子Ⅷ提取工艺优化研究

目的：优化血浆中人凝血因子Ⅷ提取工艺条件。方法以人血浆冷沉淀为原料,人凝血因子Ⅷ的比活性回收率作为评价指标,采用单因素试验,对铝胶的加量,铝胶吸附时的pH值、酸沉淀时的pH值等进行研究,优选提取工艺。结果加入冷沉淀重量12%的铝胶,并将pH值调节至7.1进行吸附,上清液中人凝血因子Ⅷ比活性可达9.50IU/mg,酸沉淀时将pH值调节至6.3,离心上清夜中人凝血因子Ⅷ比活性为11.50 IU/mg。经过以上两步处理,可将人凝血因子Ⅷ比活性提高近2倍。结论人凝血因子Ⅷ提取工艺优化研究工艺合理、可行,能有效达到纯化提取人凝血因子Ⅷ的效果。     

人凝血因子Ⅷ生产冷沉淀制备工艺的优化

目的：通过优化冷沉淀制备过程中的工艺条件,获得最佳的人凝血因子Ⅷ生产用冷沉淀的制备工艺。方法主要对溶解过程中的夹层循环水温度、搅拌转速和离心过程中的离心机转速、出液温度和进液速度等影响因素进行考察,以人凝血因子Ⅷ效价为衡量指标进行研究。结果通过该试验研究,获得的最佳制备工艺为：循环水温度大于25～30℃,搅拌转速100 r/min,离心机转速14000 r/min,出液温度0～2℃,每台进液速度为3 kg/min。结论通过该试验研究,获得了最佳的人凝血因子Ⅷ生产用冷沉淀的制备工艺,为提高人凝血因子Ⅷ的质量和产量奠定了基础。     

凝血因子Ⅷ制备工艺研究

凝血因子Ⅷ制剂是治疗血友病甲的最主要血液制品。８０年代中期发展了新一代血浆凝血因子Ⅷ浓制剂及基因重组凝血因子Ⅷ技术，不仅提高了凝血因子Ⅷ制剂的纯度，减少了副作用，而且降低了病毒感染的危险性。本文介绍了凝在子Ⅷ制剂的生产及病毒灭活工艺。     

冷沉淀凝血因子制备工艺的改良

目的建立一种冷沉淀凝血因子的制备方法,确保产品质量符合预期要求。方法取筛选预留的保存期内的新鲜冰冻血浆,采用循环水浴,并将初始温度控制在15℃,定期观察水温,保证在30 min内水温达到4℃,然后维持4℃水温30 min,在4℃无菌条件下分离出沉淀在血浆中的冷不溶解物质并在1 h内冻结。以纤维蛋白原和Ⅷ因子含量为质控项目。结果改良的方法通过调整融化时的初始水温、采用循环水浴确保水温均匀度,与原工艺比较,缩短融化时间2 h。36袋制品的纤维蛋白原和Ⅷ因子含量均符合国家要求并好于原方法,临床使用效果良好。结论此方法优于原传统方法,可推广应用。     

冷沉淀凝血因子制备工艺的改进

建立一种冷深沉凝血因子的制备方法,确保产品质量符合预期要求。取筛选预备的保存期内的新鲜冰冻血浆,循环水浴,并将初始温度控制在15℃,定期观察水温,在30 min内水温达到4℃,然后维持4℃水温30 min,在4℃无菌条件下分离出沉淀在血浆中的冷不溶解物质并在1 h内冻结。以纤维蛋白原和Ⅷ因子含量为质控项目。结果36袋制品的纤维蛋白原和Ⅷ因子含量均符合国家要求并好于原方法,临床使用效果良好。此方法优于原传统方法,可推广应用。     

人凝血因子Ⅷ浓缩制剂治疗血友病甲的临床观察研究

目的：探究人凝血因子Ⅷ浓缩制剂治疗血友病甲的临床效果。方法：选取本院本科室2018年1月至2022年6月期间收治血友病甲患者60例进行临床资料回顾性分析。所有患者均实行人凝血因子Ⅷ浓缩制剂治疗,统计分析临床治疗有效性与安全性。与此同时,根据患者人凝血因子Ⅷ浓缩制剂使用剂量,将研究对象分为甲组(每次10IU/kg,每3天1次,属于小剂量用药)与乙组(15～30IU/kg,每7天3次,属于中剂量用药),观察比较两组临床治疗有效性与安全性。结果：60例患者治疗28d后临床总有效率100.00%;患者第一次输注24h人凝血因子Ⅷ活性水平、治疗28d生活质量评分均优于治疗前(P<0.05);抑制物产生阳性率3.33%,未见病毒学阳性病例,不良反应发生率8.33%,均为轻症。甲组临床治疗显效率93.33%、第一次输注24h人凝血因子Ⅷ活性水平(37.88±7.44)%、治疗28d生活质量评分(37.88±7.44)分,均优于乙组(P<0.05)。结论：血友病甲治疗中人凝血因子Ⅷ浓缩制剂具有确切疗效,安全性较好;小剂量用药与中剂量用药均可满足治疗需求,相对而言中剂量用药效果更明显,便于患...     

Lowry法测定人凝血因子Ⅷ蛋白含量

目的：对Lowry法应用于人凝血因子Ⅷ蛋白含量测定中的可行性进行研究。方法：考察S公司人凝血因子Ⅷ原液及成品,比较凯氏定氮法与Lowry法对蛋白测定结果产生的差异,及不同浓度保护剂对Lowry法的影响。结果：甘露醇对蛋白含量测定有明显正干扰,甘氨酸有负干扰;对样品进行预稀释,辅料在低浓度范围内,当甘露醇浓度为0．1％和甘氨酸浓度为0．3％时,可减少辅料的干扰作用。结论：适当稀释样品可减少保护剂的干扰,用Lowry法测定人凝血因子Ⅷ蛋白含量,简单快速准确可行。     

人凝血因子Ⅷ在基因工程中的研究进展

目的：因原料血浆不足,作为治疗血友病A的唯一有效用药人凝血因子Ⅷ资源短缺,而运用基因工程生产的重组人凝血因子Ⅷ能很好的解决这些问题。本文从人凝血因子Ⅷ的结构改造、载体及表达系统、基因治疗和前沿基因编辑技术的应用等几个方面对FⅧ在基因工程中的研究进行总结及展望。     

高效液相法测定人凝血因子Ⅷ中甘氨酸含量

目的:建立HPLC法测定人凝血因子Ⅷ中甘氨酸含量。方法:采用氨基键合柱进行分离,流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液(50∶50),流速1.0 m L·min-1,紫外检测波长为205 nm,柱温40℃,进样量20μL;用面积外标法计算含量。结果:在本实验条件下,甘氨酸与精氨酸的分离度符合要求;甘氨酸质量浓度在1.02~5.04 mg·m L-1范围内线性关系良好;3批样品平均含量分别为8.70、8.76、8.80 mg·m L-1,RSD分别为0.57%、0.32%和0.50%。结论:该方法经方法学验证,可用于人凝血因子Ⅷ中甘氨酸含量的测定。     

重组人凝血因子Ⅷ在中国人血友病A患者中的安全性和有效性探讨

目的:探讨第2代基因重组抗血友病因子(Kogenate FS)在中国人血友病A患者中使用的安全性和有效性。方法:应用Kogenate FS治疗16例血友病A志愿者患者,用药前后分别进行FⅧ抗体、FⅧ促凝活性(FⅧ∶C)测定。结果:采用Kogenate FS治疗的16例血友病A志愿者患者中,好转15例(占93.75%),改善1例(占6.25%)。只有1例发生可逆的不良反应。结论:Kogenate FS治疗中国人血友病A患者耐受性好,安全、有效。     

人凝血因子Ⅷ血液制品中的病毒灭活与验证

目的 研究人凝血因子Ⅷ制备过程中S/D病毒灭活法和80℃、72 h干热灭活法的病毒灭活工艺的灭活效果。方法 经过S/D法及80℃、72 h干热法双重处理灭活病毒,并通过加入指示病毒(PRV、Sindbis、HIV、EMCV、PPV)验证病毒灭活效果。结果 上述工艺可有效灭活脂包膜和非脂包膜病毒。最终制品中TNBP残余量小于1/10万(10 ppm)、吐温-80(Tween-80)残余量小于1/万(100 ppm),符合安全标准,人凝血因子Ⅷ的生物活性及其他各项指标未发现明显变化。结论 可以作为人凝血因子Ⅷ实验过程中的病毒灭活方法。     

凝血因子Ⅷ

在已经有新一代药物在美国及欧洲上市的情况下，拜耳（Bayer）仍然向亚洲和拉丁美洲的第三世界国家倾销可能传播艾滋病的旧版本药物。药物安全的管理一直是令医药产业产疼的大问题，如此行径，却超出了监管部门的职权范围，早在上世纪80年代，拜耳公司从约10，000名志愿捐献的血液中提取了大量凝血因子Ⅷ?A3笔币蛭际跸拗疲庑┎范济挥芯却恚蚨庑┎分屑赡苄薍IV病毒和其它病毒。     

长效重组人凝血因子Ⅷ细胞培养条件的优化

优化国产长效重组人凝血因子Ⅷ的细胞培养条件,为后续研究提供实验依据。采用分批补料培养方式,将长效重组人凝血因子Ⅷ细胞接种至1 L发酵罐中进行培养,分析在不同补料培养基浓度(2%Cell Boost 2,3%Cell Boost 2,5%Cell Boost 2,补料培养基为Cell Boost 2和细胞培养基按照W/V比配制的培养基)、不同细胞培养pH(pH=6.9、pH=7.0、pH=7.1)、不同培养基(CDM4 PERMAb、CD11V、Veros),培养基补加Cu²⁺的情况下,细胞密度、细胞活率、细胞代谢以及发酵液中蛋白活性的变化,从而确定最优培养条件。最佳培养条件：补料浓度2%Cell Boost 2,细胞培养pH 7.0,培养基为添加40μmol/L Cu²⁺的CD11V,整个细胞培养周期17 d,细胞培养液收获体积是初始培养体积的2.6倍;细胞密度峰值达2 375×10⁴ cells/mL,在收获时活率高于90%;在蛋白表达最高时,乳酸仅为0.3 mmol/L,蛋白活性高达2 443.94 IU/mL,是同...     

全血保存凝血因子Ⅷ改变的探讨

近年来 ,对安全输血的问题引起极大重视 ,血液各种制品的保存技术也不断更新 ,医院血库对库存血液成分有否改变 ,且进行监测是极为重要。本文报道一组库存全血凝血因子 活性 (F ∶ C)的改变情况如下。1　材料与方法1.1　材料 :试剂 :缺因子 血浆、活化部分凝血活酶 (福建太阳生物技术研究提供 ) :2 5 mmol/ L 氯化钙 ;F 标准参考血浆(法国 Stago公司提供 ) :CPDA血袋 :福州血液中心监制 ,p H6 .5。仪器 :ACL- 2 0 0型全自动血液凝固检测仪。标本 :CPDA抗凝血计 18份 ,其中 A型血 5份 ,B型血 8份 ,O型 5份 ;其中男 10份 ,女 8份 ;…     

凝血因子Ⅷ(FⅧ)在哺乳动物细胞中的表达研究

对FⅧ cDNA进行分子改建，并分别克隆到表达载体中，在多种哺乳动物细胞表达体系（CHO、BHK等）成功地获得了表达。结果证实：基因的改建可以有效的提高FⅧ在细胞中的表达。FⅧ B结构域的缺失比全长FⅧ的表达量提高了3倍左右，而重链和轻链的共表达及vWF与FⅧ的共同转染使得其表达量进一步提高。与CHO表达系统相比较，FⅧ在BHK表达系统中的表达量提高了近10倍。     

高效液相色谱法测定人凝血因子Ⅷ制品中甘氨酸的含量

目的 建立高效液相色谱法测定人凝血因子Ⅷ制品中甘氨酸含量的方法。 方法 采用Shim-pack CLC-ODS色谱柱,以丙氨酸为内标,2、4-二硝基氟苯(DNFB)为柱前衍生剂,50%乙腈溶液-0.05 mol/L醋酸钠缓冲液(35:65)为流动相,检测波长为360 nm。 结果 甘氨酸在0.006~0.030 mg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.999 3),平均回收率为101.4%,RSD为0.14%(n=9)。 结论 该方法简单灵敏,结果准确可靠,可用于人凝血因子Ⅷ制品中甘氨酸含量的测定。     

不同保护剂对人凝血因子Ⅷ冻干及100℃干热灭活的影响

目的选择一种人凝血因子Ⅷ(FⅧ)冻干及100℃干热灭活过程的保护剂。方法将同一批次的半成品分成多份,分别加入25,50,100 g/L的甘氨酸、甘露醇、蔗糖和麦芽糖,进行冻干和干热灭活,测定灭活后的FⅧ活性、水分残留以及复溶时间。结果采用甘露醇作为保护剂,冻干和干热灭活后水分残留最低、复溶时间最短,而且活性回收率最高;不同浓度甘露醇作为保护剂对制品水分、复溶时间以及活性的影响不显著。结论甘露醇是FⅧ冻干和干热灭活的理想保护剂。     

重组人凝血因子Ⅷ结构改造的研究进展

血源凝血因子Ⅷ是血液凝固过程中关键因子,为治疗甲型血友病的特效药,但存在价格昂贵、给药频率高和潜在的病毒污染风险等缺点;且由于血液制品来源有限,凝血因子Ⅷ类药物在国内供不应求。随着基因工程技术的发展,药用重组人凝血因子Ⅷ得以实现,在此基础上大量针对重组人凝血因子Ⅷ的结构改造研究不断涌现,部分产品已投放市场。文章主要对哺乳动物细胞表达的各类改构重组人凝血因子Ⅷ的原理和研究进展进行综述。由于存在提高蛋白质稳定性及延长药物半衰期等优势,结构改造将是重组人凝血因子Ⅷ类药物未来的技术发展方向。