瘀毒清诱导真性红细胞增多症原代细胞凋亡的研究

目的 探讨瘀毒清对真性红细胞增多症(PV)原代细胞凋亡的诱导作用.方法 采用血清药理学方法,取PV患者骨髓制成的原代细胞悬液分成空白对照组,羟基脲组,瘀毒清高、中和低剂量组,羟基脲加瘀毒清高、中和低剂量组,分别加入不含药血清,含羟基脲血清,含高、中、低剂量(分别为1.50、0.75、0.375 mL/200 g)瘀毒清血清和含羟基脲加高、中、低剂量瘀毒清血清;另取正常人骨髓制成的原代细胞悬液,不加血清作为正常对照组.分别于干预后第12、24、48和72小时通过Annexin V/PI双染法,通过流式细胞仪检测不同时间、不同药物组的细胞凋亡率.结果 常人的单个核细胞也有比较低的凋亡率,而PV原代细胞的凋亡率更低,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).瘀毒清各剂量组在作用48 h时才显示出明显的促凋亡作用(P<0.05,P<0.01),且呈一定的时间、剂量依赖性(P<0.05),在72 h时,相比48 h凋亡率未见显著提高(P>0.05),48 h开始,高剂量组相比中剂量组凋亡率未见显著提高(P>0.05).羟基脲组12 h开始即显示较高的凋亡率,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),但72 h后羟基脲组凋亡率与瘀毒清高、中剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05).而羟基脲加瘀毒清各剂量组48、72 h的凋亡率与单纯羟基脲组、单纯瘀毒清组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 含瘀毒清血清对体外PV原代细胞有诱导凋亡作用,其作用呈一定时间、剂量依赖关系;含高、中剂量瘀毒清血清诱导凋亡作用与羟基脲含药血清作用相近;瘀毒清与羟基脲联合使用还具有增效作用.     

白藜芦醇对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究白藜芦醇抑制人上皮性卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡的作用及机制。方法:将人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3细胞随机分为5组,即正常对照组、白藜芦醇高剂量组(40 mg·L~(-1))、白藜芦醇中剂量组(20 mg·L~(-1))、白藜芦醇低剂量组(10 mg·L~(-1))和顺铂组(40 mg·L~(-1))。干预48 h后,通过光学显微镜观察各组细胞形态,MTT比色法检测各组细胞增值抑制率。通过流式细胞仪分析细胞周期的改变、流式细胞术检测细胞凋亡并计算细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达并计算Bax/Bcl-2比值,Western blot法检测细胞caspase-3蛋白表达。结果:与正常对照组比较,白藜芦醇高、中剂量组细胞出现变圆、脱壁、细胞间接触松散等状态,细胞抑制作用明显、增殖抑制率显著升高(P0.01);白藜芦醇各剂量组细胞周期被阻滞于G2/M期,白藜芦醇高、中剂量组细胞凋亡率显著升高(P0.01),同时可明显下调Bcl-2 mRNA而上调Bax mRNA表达,显著提高Bax/Bcl-2值(P0.05,P0.01),上调caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:白藜芦醇能够通过抑制增殖并促进凋亡对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞生长起到一定的抑制作用,其机制可能与白藜芦醇调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

白花丹参上调Bcl-2抑制内皮细胞凋亡

[摘要]目的研究白花丹参对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及对凋亡相关基因Bcl-2表达的调节。方法应用酶消化灌注法分离人脐静脉血管内皮细胞,采用形态学观察和Ⅷ因子抗体免疫荧光检测法进行鉴定。取对数生长期的细胞分组进行干预(白花丹参高剂量组0.10 g/ml, 白花丹参低剂量组0.01 g/ml),应用流式细胞技术观察细胞凋亡情况,应用免疫细胞荧光技术检测凋亡相关基因Bcl-2的表达。结果在白花丹参干预下,H2O2诱导的HUVEC凋亡率降低(高剂量组P<0.01,低剂量组P<0.05),高剂量组Bcl-2的表达增加(P<0.01)。结论白花丹参对H2O2诱导的HUVEC凋亡具有抑制作用,这种作用与Bcl-2表达上调有关。     

拉莫三嗪对慢性致痫大鼠海马细胞凋亡的影响

目的 通过观察拉莫三嗪对戊四氮慢性致痫大鼠海马Bcl-2和Bax表达的影响来探讨其抗凋亡作用. 方法 选取健康成年雄性Wistar大鼠80只,按体重随机分为:正常组;模型组;丙戊酸钠低、中、高剂量组;拉莫三嗪低、中、高剂量组;每组10只.模型组,丙戊酸钠和拉莫三嗪低、中、高剂量组,每日腹腔注射戊四氮35 mg/(kg·d)制作慢性点燃癫痫模型(大约2周).然后腹腔注射戊四氮35 mg/(kg·d),隔日一次;同时丙戊酸钠和拉莫三嗪各剂量组分别给予相应剂量的丙戊酸钠和拉莫三嗪灌胃,每天一次,共3周.然后取海马标本做免疫组化检测Bcl-2和Bax的表达. 结果 模型组Bcl-2和Bax表达显著高于正常组(P<0.001).与模型组比较,丙戊酸钠和拉莫三嗪各剂量组Bcl-2高表达,Bax低表达(P<0.001).其中拉莫三嗪低剂量组与丙戊酸钠低剂量组之间差异没有统计学意义(P>0.05);拉莫三嗪中剂量组与丙戊酸钠中、高剂量组之间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01). 结论 拉莫三嗪和丙戊酸钠对戊四氮慢性致痫大鼠海马细胞凋亡均具有抑制作用,但拉莫三嗪优于丙戊酸钠.     

银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾皮质Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨银杏叶提取物(EGb)对糖尿病大鼠肾皮质Bcl-2和Bax表达的影响。方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、胰岛素治疗组、EGb低剂量治疗组和EGb高剂量治疗组,每组10只。糖尿病模型组、胰岛素治疗组、EGb低剂量治疗组和EGb高剂量治疗组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(50 mg·kg-1)建立糖尿病模型,胰岛素治疗组、EGb低剂量治疗组和EGb高剂量治疗组大鼠给予不同的药物治疗3个月后,以免疫组织化学法和Western blot法检测大鼠肾皮质Bcl-2和Bax蛋白表达。结果免疫组织化学及Western blot结果表明,与正常对照组比较,糖尿病模型组大鼠肾皮质Bcl-2表达下降(P<0.01)、Bax表达上升(P<0.01);与糖尿病模型组比较,EGb低、高剂量治疗组大鼠肾皮质Bcl-2表达上升(P<0.05、P<0.01),EGb低剂量治疗组大鼠肾皮质Bax表达下降不明显(P>0.05),EGb高剂量治疗组大鼠肾皮质Bax表达显著下降(P<0.05)。结论 EGb可能通过升高糖尿病大鼠肾皮质Bcl-2表达及抑制Bax表达起到治疗作用。     

丹参酮ⅡA对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞的损害机制

目的探讨丹参酮ⅡA对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞的损害机制。方法 SPF级雄性SD大鼠40只。6月龄大鼠10只作为青年对照组,18月龄大鼠作为自然衰老组(n=10)及丹参酮ⅡA低剂量组(n=10)和高剂量组(n=10)。青年对照组和自然衰老组给予生理盐水灌胃,每日1次,连续灌胃6个月;丹参酮ⅡA低剂量和高剂量组分别给予10 mg/kg和30 mg/kg灌胃,每日1次,连续灌胃6个月。比较各组睾丸重量和睾丸指数、睾丸组织形态学、Bcl-2和Bax表达。结果与青年对照组比较,自然衰老组、丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组大鼠睾丸重量降低(P0.05);与自然衰老组比较,丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组大鼠睾丸重量增加(P0.05);丹参酮ⅡA高剂量组大鼠睾丸重量高于低剂量组(P0.05)。与青年对照组比较,自然衰老组、丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组大鼠睾丸指数降低(P0.05);与自然衰老组比较,丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组大鼠睾丸指数增加(P0.05);丹参酮ⅡA高剂量组大鼠睾丸指数高于低剂量组(P0.05)。青年对照组大鼠睾丸组织生精小管界膜完整,并且基膜内能够见排列整齐的各级生精细胞;自然衰老组大鼠睾丸组织生精小管形态结构出现显著变化,生精小管部分增厚,生精细胞层数减少,并且内细胞稀疏,间隙增大;丹参酮ⅡA低剂量和高剂量大鼠睾丸组织相比于自然衰老组,生精小管结构及生精细胞数目显著改善。与青年对照组比较,自然衰老组、丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组大鼠Bcl-2表达降低而Bax表达上升(P0.05);与自然衰老组比较,丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组大鼠睾丸Bcl-2表达升高而Bax表达下降(P0.05);丹参酮ⅡA高剂量组大鼠Bcl-2表达高于低剂量组而Bax表达低于低剂量组(P0.05)。结论丹参酮ⅡA对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞损害具有一定保护作用,可抑制衰老造成大鼠睾丸生殖细胞的凋亡,机制可能与上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白表达相关。     

叶酸对胚胎大鼠心脏细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:观察叶酸对妊娠大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响,在细胞水平探讨叶酸预防先天性心脏畸形的作用及机制,为临床应用叶酸预防出生缺陷性疾病提供理论和实验依据。方法:成年雌性SD大鼠40只,随机分为对照组、大、中、小剂量叶酸组。叶酸组受孕后灌胃给予2、1、0.5mg/kg/d等不同剂量叶酸,自受孕日开始持续10天。ED13.5天处死大鼠并取胎鼠心脏,常规制备组织切片,免疫组化检测Bax、Bcl-2的表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果:与对照组比较,叶酸干预组的细胞凋亡率、Bax表达均明显降低(P<0.01),Bcl-2的表达显著增高(P<0.05);叶酸不同剂量组间比较,Bax和Bcl-2蛋白表达、细胞凋亡率在大、中剂量组与小剂量组差异显著(P<0.05),大剂量组与中剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:叶酸干预可降低胎鼠心肌细胞的凋亡率和Bax的表达,提高Bcl-2的表达。一定范围内,叶酸对Bax、Bcl-2表达及细胞凋亡率的影响与剂量有关联。叶酸抑制心脏细胞凋亡的作用可能与预防畸形的作用机制有关。     

sorafenib对裸鼠肝癌术后复发的抑制和促凋亡的实验研究

目的 多激酶抑制剂sorafenib具有抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其联合外科手术治疗肝癌的效果尚待研究.文中探讨裸鼠肝原位移植癌手术切除后,应用sorafenib抑制肿瘤复发的作用和机制. 方法 将肝癌细胞原位种植于30只裸鼠肝,2周后手术切除移植瘤.随机均分成3组:对照组、低剂量sorafenib治疗组(30mg/kg)和高剂量sorafenib治疗组(100mg/kg).3周后观察肿瘤复发情况和微血管密度(microvessel density,MVD),用免疫组化法检测肿瘤细胞中CD34、血管内皮生长因子(vascular epithelial growth factor,VEGF)、细胞增殖相关抗原Ki67,用TUNEL法检测细胞凋亡. 结果 低剂量和高剂量sorafenib治疗组肿瘤体积明显小于对照组 (P<0.05),高剂量组小于低剂量组(P<0.05).高低剂量sorafenib治疗组MVD和VEGF表达均较对照组明显减少(P<0.05);高剂量组低于低剂量组,但无统计学差异(P>0.05).2个治疗组肝癌细胞凋亡数量显著增多,凋亡率明显高于对照组(P<0.01),高剂量组凋亡率高于低剂量组(P<0.05). 结论 sorafenib可有效地抑制裸鼠肝癌术后残留肿瘤细胞的生长,控制肿瘤的复发.     

黄芪多糖对乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤的修复机制

[目的]探讨半仿生提取的黄芪多糖对乙醇诱导大鼠胃黏膜损伤的修复作用及机制.[方法]将50只雄性SD大鼠随机分成正常组,模型组,胃乃安组,黄芪多糖低、高剂量组,每组10只.各组分别灌胃给药,1次/d,连续2 d.末次给药2 h后,除正常组外,其余各组分别按照1.4 mL/只灌胃给予无水乙醇诱导急性胃黏膜损伤.1 h后处死大鼠,取胃进行胃黏膜损伤评分和病理损伤评分,免疫组织化学法检测凋亡信号通路B细胞白血病2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的蛋白表达.[结果]黄芪多糖高、低剂量组均能显著降低胃黏膜的损伤分数和病理损伤评分(P<0.05),呈剂量依赖关系.与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织中抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平降低(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平增加(P<0.01).与模型组比较,黄芪多糖低、高剂量组胃黏膜组织中抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平增加(P<0.05或P<0.01),促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平降低(P<0.05或P<0.01).[结论]半仿生提取黄芪多糖对乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤具有明显的修复作用,可通过升高抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,降低促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达发挥作用.     

山楂叶总黄酮对NAFLD肝细胞凋亡影响的研究

目的探讨山楂叶总黄酮（HLF）对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）肝细胞凋亡的影响。方法采用肝L-02细胞诱导NAFLD模型,分为正常组、低剂量组、高剂量组、模型组4组,采用不同浓度HLF进行干预,低剂量组HLF100滋g/ml,高剂量组HLF400滋g/ml。观察细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblot检测凋亡蛋白表达的变化。结果模型组细胞形态学发生改变,HLF药物干预后,高剂量组细胞形态学改变明显好于低剂量组及模型组;模型组与HLF高剂量组早期凋亡率[（14.63±1.82）%、（6.75±1.83）%]比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;模型组与HLF高剂量组中晚期凋亡率[（11.36±2.94）%、（3.49±1.03）%]比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;HLF高、低剂量组中晚期凋亡率[（3.49±1.03）%、（8.79±1.05）%]比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;模型组与HLF高、低剂量组总凋亡率比较,差异有统计学意义（P＜0.05或0.01）。Bax、Cyt-C和Caspase-9促凋亡蛋白在模型组中表达明显增高,Bcl-2、MitochondriaCytochromeC抗凋亡蛋白在高剂量组及正常组中高表达;模型组与高、低剂量组凋亡蛋白Bax/Bcl-2的比值[（1.999±0.376）、（0.144±0.023）、（0.399±0.045）]比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;模型组与高、低剂量组凋亡蛋白Cytosolic/MitochondriaCytochromeC的比值[（0.287±0.037）、（0.041±0.006）、（0.097±0.024）]比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;模型组与高、低剂量组凋亡蛋白CleavedCaspase-9的表达[（0.060±0.005）、（0.030±0.003）、（0.030±0.003）]比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论NAFLD细胞模型存在凋亡现象,HLF药物可能通过调节Bcl-2、Bax、CytochromeC、Caspase-9等相关凋亡蛋白的表达,干预肝细胞的凋亡。     

三叶青黄酮调控STAT3信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制研究

目的 分析三叶青黄酮调控STAT3信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 将膀胱癌T24细胞分为对照组、低剂量组和高剂量组,分别使用空白培养基、50μg/mL三叶青黄酮、100μg/mL三叶青黄酮干预;使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,使用MTT法检测T24细胞的凋亡抑制率;使用Western blot法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、STAT3、β-actin水平。结果 高剂量组的膀胱癌细胞细胞增殖抑制率明显高于低剂量组,差异有统计学意义(P0.05);对照组、低剂量组、高剂量组膀胱癌细胞凋亡率有明显差异,其中高剂量组中细胞凋亡率最高,差异有统计学意义(P0.05);各组Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、STAT3表达水平有明显差异,其中高剂量组细胞Caspase-3、Caspase-9、Bax表达水平最高,Bcl-2、STAT3水平最低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 三叶青黄酮调控STAT3信号通路抑制膀胱癌细胞增殖并促进其凋亡。     

蒺藜皂苷对氧化应激PC12细胞内NF-κB水平的影响及其机制

目的：研究蒺藜皂苷(GSTT)对H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)缺氧损伤时细胞内核转录因子(NF-κB)含量的影响,并探讨其机制。方法: 将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组、模型组、蒺藜皂苷高剂量组（10 mg·L^-1）和低剂量组（3 mg·L^-1）。用H2O2建立PC12细胞缺氧损伤模型,应用流式细胞术检测细胞凋亡率,并采用流式细胞仪、免疫组织化学方法及Western blotting等方法检测NF-κB蛋白表达水平。结果：与模型组比较,蒺藜皂苷高和低剂量组的PC12细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与蒺藜皂苷低剂量组比较,蒺藜皂苷高剂量组细胞凋亡率降低(P<0.05);流式细胞仪及Western blotting方法检测,与模型组比较,蒺藜皂苷高和低剂量组PC12细胞内NF-κB蛋白表达明显增加(P<0.05),蒺藜皂苷高剂量组与低剂量组比较差异无显著性(P>0.05)。免疫组织化学方法检测,与对照组比较,模型组中胞浆呈棕黄色颗粒的细胞数明显减少,NF-κB蛋白表达强度显著降低 (P<0.01);蒺藜皂苷高和低剂量组中NF-κB呈阳性表达的细胞数明显高于模型组(P<0.05)。结论：蒺藜皂苷对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有一定的保护作用,其保护作用机制可能与NF-κB的激活有关。     

麝鼠香调控Bcl-2/BaX蛋白表达抑制缺血性大鼠心肌细胞凋亡

目的 研究麝鼠香(Muskrat musk,Mrm)对大鼠心肌缺血(myocardial ischemia,MI)模型心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响.方法 通过结扎大鼠左冠状动脉前降支复制大鼠MI模型.实验动物随机分为6组:假手术组、模型组、阳性对照组、麝鼠香高、中、低(600、300、150mg·kg-1·d-1剂量组).采用原位末端标记(TUNEL)法进行细胞凋亡指数检测;免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 与模型组比较,麝鼠香高、中剂量组心肌细胞凋亡指数明显降低,Bcl-2蛋白表达水平显著升高,Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2/Bax比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 麝鼠香通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达,能有效抑制心肌细胞凋亡的发生,对缺血心肌提供保护作用.     

甲醛对凋亡相关基因Bcl-2 Bax在生精细胞表达的影响

目的 研究长期在甲醛含量过高的室内环境中凋亡相关基因Bcl-2、Bax在睾丸和生精小管细胞中表达.方法 利用医用甲醛制备大白鼠的甲醛毒性模型,采用免疫组织化学技术,检测Bcl-2、Bax蛋白在睾丸及生精小管中的表达.结果 高浓度的甲醛作用于大白鼠2个生精周期,每个生精小管中Bcl-2蛋白表达的阳性细胞数目在高剂量组为27±2.47,低剂量组为35±4.61,均显著低于正常组93±2.81,(P<0.05).每个细胞中Bcl-2蛋白表达强度(OD值)在高剂量组为0.132±0.024,低剂量组为0.113±0.021,均明显低于对照组0.183±0.031,P<0.05;Bax蛋白表达的阳性细胞数目在高剂量组为89±20.14,低剂量组为61±14.76,均显著高于正常组23±4.71,P<0.05.每个细胞中Bcl-2蛋白表达强度(OD值)在高剂量组为0.098±0.021,低剂量组为0.085±0.018,均明显高于对照组0.032±0.026,P<0.05.结论 长期处于高浓度甲醛的室内环境中使睾丸和生精细胞中Bcl-2的表达降低,Bax的表达增强.     

Bcl-2、Bax、Cyt-C和Bid在原发性肝细胞癌中的表达及意义

目的 观察Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt-C)和Bid在原发性肝细胞癌(PHC)组织中的表达并分析其与病理分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移间的关系.方法 应用免疫组织化学法检测Bax以及应用原位分子杂交方法检测Bcl-2、Cyt-C和Bid在50例PHC组织及30例正常肝脏组织(对照组)中的表达.结果 PHC组Bcl-2、Bax和Bid的阳性表达率较对照组均明显下降(P<0.05或0.01),但Cyt-C阳性表达率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05). 高及中分化PHC组Cyt-C阳性表达率均明显高于低分化组(P<0.05和P<0.01),但不同病理分级和有无淋巴结转移组间差异未见统计学意义(P>0 05).PHC不同病理分级、分化程度和有无淋巴结转移组间Bcl-2、Bax和Bid表达比较均未见统计学意义(P>0.05).结论 PHC促凋亡基因Bid表达下调,同时Cyt-C随着PHC分化程度的降低而表达下调.     

益气通淋冲剂对大鼠前列腺增生组织Bcl-2、Bax表达的影响

目的:通过益气通淋冲剂对大鼠前列腺增生组织中Bcl-2、Bax表达影响的研究,探讨益气通淋冲剂治疗前列腺增生的作用机制. 方法: 应用免疫组化SP法对益气通淋冲剂和保列治干预的大鼠前列腺增生组织进行Bcl-2及Bax检测. 结果:①对照组分别与益气通淋冲剂大剂量组和保列治组Bcl-2阳性表达的差别有统计学意义(P<0.05、P<0.01);对照组与保列治组Bax阳性表达差别有统计学意义(P<0.01).②益气通淋冲剂大剂量组与保列治组Bcl-2/Bax差别无统计学意义(P>0.05). 结论:益气通淋冲剂治疗良性前列腺增生(BPH)可能是通过凋亡相关基因Bcl-2、Bax之间的比例变化,促进BPH的细胞凋亡达到治疗目的.     

疏肝健脾方药对慢性胃炎大鼠模型Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的 :观察疏肝健脾方药对慢性胃炎肝郁证大鼠模型胃黏膜细胞Bax、Bcl-2的干预作用。方法 :采用氨水加慢性束缚法复制慢性胃炎肝郁证模型,设正常组、慢性胃炎肝郁证(病证组)组、疏肝健脾高剂量组、疏肝健脾低剂量组。造模成功后,开始予药物干预,分别在给药1、2、4周的时候,进行胃黏膜细胞Bax、Bcl-2蛋白的表达(免疫组化法)的测定。结果 :与正常组比较,病证组大鼠胃黏膜Bcl-2、Bax蛋白的表达均强于正常对照组(P<0.05);与病证组比较,疏肝健脾高剂量组胃黏膜Bax和Bcl-2蛋白表达均下降(P<0.05)。结论 :疏肝健脾方药可能通过降低胃黏膜组织Bax和Bcl-2的表达,使细胞凋亡趋于正常而达到治疗作用。     

阿托伐他汀对同型半胱氨酸作用下人脐静脉内皮细胞Bcl-2启动子区甲基化水平的影响及其抗动脉粥样硬化机制

目的：探讨阿托伐他汀对同型半胱氨酸（Hcy）作用下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Bcl-2基因启动子区甲基化水平及其表达的影响,阐明阿托伐他汀抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法：HUVECs分别采用含有0、2、4、8、16和32  mmol/L Hcy的RPMI 1640培养液作用48 h,采用MTT实验检测细胞增殖抑制率及半数抑制浓度(IC50),根据IC50结果将本实验分为对照组(0 mmol/L Hcy)、Hcy组(9.00 mmol/L Hcy)、阿托伐他汀组(9.00 mmol/L Hcy＋1×10-3 mmol/L阿托伐他汀)。各组细胞培养48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR法检测Bcl-2 基因的mRNA表达,Western blotting 法检测Bcl-2蛋白表达水平,甲基化特异性PCR(MSP)联合巢式降落式PCR法检测Bcl-2启动子区甲基化水平。结果：与对照组比较,Hcy组细胞凋亡率上升(P<0.01), Bcl-2基因mRNA及蛋白表达水平下降（P<0.01）,Bcl-2基因启动子区甲基化水平降低（P<0.01）;与Hcy组比较,阿托伐他汀组内皮细胞凋亡率下降(P<0.01), Bcl-2基因mRNA及蛋白表达水平增加（P<0.05）,Bcl-2基因启动子区甲基化水平升高(P<0.05)。结论：阿托伐他汀可通过调节Hcy作用下的HUVECs Bcl-2基因甲基化水平抑制细胞凋亡。     

益髓理血饮减少二甲基苯蒽诱导的骨髓增生异常综合征大鼠骨髓细胞凋亡

目的：探索中药复方益髓理血饮对二甲基苯蒽诱导的骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS) 模型大鼠骨髓细胞凋亡的作用。方法：采用化学诱变剂二甲基苯蒽诱导建立大鼠MDS模型,并分为正常对照组、模 型+PBS组、模型+复方皂矾丸组、模型+益髓理血饮低剂量组和模型+益髓理血饮高剂量组,每组12 只。于造模第14 天开始分组连续给药30 d。观察各组大鼠一般情况,给药后的第31天将各组的大鼠处死,显微镜下观察骨髓细胞的病 理学改变,检测各组大鼠外周血细胞、免疫组织化学检测Bcl-2和Bax蛋白表达,流式细胞仪检测骨髓细胞凋亡情况。 结果：与正常对照组相比,模型+PBS组大鼠骨髓细胞病态造血,外周白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板下降明 显,促凋亡蛋白Bax明显增加,抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显减少(P<0.01),与模型+PBS组相比,治疗各组大鼠外周白细 胞、红细胞、血红蛋白和血小板升高,促凋亡蛋白Bax明显减少,抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显增加(P<0.05或P<0.01),尤 以模型+益髓理血饮高剂量组最为明显(P<0.01);与正常对照组相比,模型+PBS组骨髓细胞的总凋亡率、早期凋亡率 和晚期凋亡率均有所增加(P<0.01),治疗各组的凋亡率均有所下降(P<0.05或0.01),尤其总凋亡率和早期凋亡率下降更 为明显,仅有益髓理血饮对降低晚期凋亡率疗效明显(P<0.01),且高剂量组优于低剂量组。结论：中药复方益髓理血 饮治疗MDS能改善其外周血细胞情况,降低促凋亡蛋白Bax表达,升高抑凋亡蛋白Bcl-2表达,减少骨髓细胞凋亡。     

大黄素对重症急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的干预作用

目的 探讨大黄素对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织细胞凋亡的干预作用及机制。 方法 采用逆行胰胆管注射牛磺胆酸法进行造模,模型大鼠随机分入对照组、大黄素低剂量组、大黄素中剂量组和大黄素高剂量组;各组再随机编入3 h、6 h、12 h和24 h等4个时相点进行标本留置。检测血清淀粉酶、血清总钙和胰腺组织病理评分;应用DNA断裂的原位末端标记(TUNEL)法测定细胞凋亡并计算凋亡指数,免疫印迹法检测胰腺组织Notch-1、Hes-1和Hes-5蛋白表达情况。 结果 大黄素治疗组的血清淀粉酶均较模型对照组显著降低(P<0.01),血清总钙水平则均较模型对照组显著增高(P<0.05)。大黄素中剂量组和高剂量组胰腺病理评分均较模型对照组明显改善(P<0.01),高剂量组改善最显著。治疗各组的胰腺细胞凋亡指数在不同时间点均较模型对照组有不同程度升高,高剂量组效果最显著,低剂量组与模型对照组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗各组的Notch-1蛋白表达量均较模型对照组增加,中剂量组和高剂量组效果相对显著(P<0.05)。大黄素高剂量组Hes-1蛋白表达量显著高于模型对照组(P<0.05)、低剂量组(P<0.05)和中剂量组(P<0.05)。大黄素中剂量组和高剂量组Hes-5蛋白表达量均显著高于模型对照组(P<0.05),且高剂量组蛋白表达量较低剂量组显著增加(P<0.05)。 结论 SAP时大黄素可以通过促进胰腺局部细胞凋亡而减轻胰腺炎反应,Notch-1/Hes信号通路是大黄素调控胰腺局部细胞凋亡的重要途径。