蝎毒抗癌多肽对CNE-2Z细胞生长周期移行和p53表达的影响

目的观察蝎毒抗癌多肽(APBMV)对CNE-2Z细胞生长周期和p53表达的影响.方法采用流式细胞仪双标法.结果APBMV处理CNE-2Z细胞48h后,进入S期的细胞明显减少,处于G1期和G2期的细胞明显增多,APBMV16mg/L处理CNE-2Z细胞48h后,G1期、S期和G2期细胞的百分比分别为59.7%、32.3%和7.9%,空白对照组的百分比分别为53.3%、45.2%和1.5%,二者比较差异有显著性(P<0.01或P<0.001).空白对照组CNE-2Z细胞P53蛋白24h和48h表达量处于较高水平(27.23±0.93)和(31.67±1.75),经APBMV处理24h或48h后,P53蛋白表达量明显下降,与空白对照组相比差异有显著性(P<0.01).结论APBMV能够阻止CNE-2Z细胞周期的移行,并抑制抑癌基因p53的表达.     

125I低剂量率照射对鼻咽癌细胞CNE-2的杀伤效应

目的 探讨125I低剂量率照射对鼻咽癌细胞CNE-2的杀伤效应。方法 用MTT、流式细胞术和细胞迁移体系观察CNE-2细胞的增殖、凋亡、细胞周期和迁移的变化。结果 照射后细胞增殖能力逐渐下降,其中24h与对照组差异显著(P<0.05),48h较6h和12h差异显著(P<0.05);照射后细胞凋亡逐渐增加,24h后接近半数,72h后达70%以上;照射后处于G1期的细胞逐渐减少,12h与对照组差异显著(P<0.05),且较6h明显减少(P<0.05);处于G2/M期的细胞逐渐增加,12h较对照组增加显著(P<0.05),且较6h增加明显(P<0.05);处于S期的细胞比例相对稳定。照射后细胞的迁移逐渐减少,照射后24h较对照组减少明显(P<0.05),之后数量稳定,照射后24h较6h时减少明显(P<0.05)。结论 125I低剂量率照射在体外能有效的杀伤鼻咽癌细胞CNE-2,并抑制其迁移。     

羟基脲对体外Hela细胞周期同步化作用的研究

目的 探讨利用羟基脲(HU)对Hela细胞进行细胞周期同步化.方法 培养Hela细胞,采用Hu处理Hela细胞24 h,然后除去HU,让Hela细胞进入细胞周期G1、S、G2/M期,通过流式细胞术确认.结果 流式细胞仪检测证实Hela细胞在HU祛除后3.5 h处于S期,8.5 h处于G2/M期,18 h处于G1期.结论 HU处理可以有效地将Hela细胞同步化于特定的细胞周期,而且方法简单,易于操作.     

山奈酚对CNE-2细胞周期及CyclinB1、Cdk1mRNA表达的影响

目的:观察山奈酚对鼻咽癌CNE-2细胞周期分布及细胞周期素B1(CyclinB1)、细胞周期依赖性蛋白激酶1(Cdk1)表达的影响。方法:分别用0、20、40、60、80和100μmol/L的山奈酚处理CNE-2细胞。处理24、48和72h后,应用MTT法测定CNE-2细胞活力;处理24和48h后用流式细胞术检测细胞周期;处理24h后用RT-PCR技术检测细胞CyclinB1及Cdk1mRNA的表达水平。结果:随山奈酚作用剂量的增加和作用时间的延长,CNE-2细胞活力逐渐降低(F浓度=385.194,F时间=237.324,F浓度×时间=13.757,P<0.001),细胞被阻滞于G2/M期(P<0.05);CNE-2细胞中CyclinB1和Cdk1mRNA的表达量随山奈酚作用浓度的增加而逐渐降低(F=95.682、154.871,P<0.001)。结论:山奈酚可能通过下调CNE-2细胞CyclinB1和Cdk1mRNA的表达水平,诱导G2/M期阻滞,抑制其增殖。     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期变化与凋亡的关系

目的探讨β-淀粉样肽25-35(βamyloid peptide-25-35,Aβ25-35)诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化与凋亡的关系。方法用常规的去血清培养使细胞同步于G0期,采用终浓度为0~45μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞24h,用MTT比色法分析细胞存活率;Hoechst33258荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变;DNA电泳观察细胞凋亡时特异性梯状条带(DNA-Ladder);流式细胞仪检测分析细胞周期的改变与凋亡的时间关系。结果随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);用25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞12、24h,荧光染色结果显示24h出现典型的凋亡,表现为核固缩、核碎裂;DNA电泳结果显示凋亡特异性梯状条带;流式细胞仪分析表明去血清培养24h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8、16、24h与对照组比较,S期细胞比例增加(P<0.01),16h后细胞凋亡率增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰)。结论Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期并随之出现凋亡,提示Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡可能与细胞周期紊乱有关。     

黄芪注射液诱导人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡及对细胞周期阻滞的研究

目的:研究黄芪注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响.方法:采用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法(ATP-TCA法)测定不同浓度黄芪注射液在不同作用时间内对体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞的增殖状态; 应用细胞形态学实验方法和流式细胞术分析细胞生长周期及凋亡情况.结果:黄芪注射液对体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞株有明显的抑制作用,与浓度和作用时间呈正比;流式细胞仪分析显示,250 mg/L黄芪注射液作用CNE-2细胞48 h有明显的G0/G1期阻滞作用,AnnexinV,PI染色显示CNE-2细胞凋亡率从对照组的1.8%升高到62.4%.HE染色观察到250 mg/L黄芪注射液作用48 h后CNE-2细胞质空泡、核固缩、核染色质聚集等形态学改变.结论:黄芪注射液可抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖,其抗鼻咽癌的活性是通过诱导细胞凋亡而实现的.     

白桦脂酸抑制鼻咽癌细胞CNE-1生长及其机制探讨

目的 研究白桦脂酸(betulinic acid)对鼻咽癌细胞CNE-1生物学行为的影响并探讨其可能机制.方法 不同浓度(10、20、40、80、120、160 μg/mL)白桦脂酸处理CNE-1细胞,作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测CNE-1细胞增殖变化;不同浓度白桦脂酸(10、20、40 μg/mL)作用CNE-1细胞72 h后,流式细胞仪PI单染法和FITC-AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞周期和凋亡变化;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA表达水平的变化;Western blot 检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平的变化.结果 MTT实验显示不同浓度白桦脂酸对CNE-1细胞均有抑制作用(均P＜0.05),抑制效果呈时间和剂量依赖性,24、48和72 h的IC50分别为(37.46±2.51),(24.28±1.87),(21.15±1.42)μg/mL;流式细胞术结果显示10、20、40 μg/mL白桦脂酸组与空白组比较均出现G0/G1期阻滞[(59.21±2.47)%、(72.20±4.28)%、(77.13±3.57)% vs (42.94±2.63)%,均P＜0.05]和凋亡比例的增加[(14.95±2.11)%、(21.71±2.84)%、(38.49±3.26)% vs (4.02±0.96)%,均P＜0.05];RT-PCR结果显示对照组与白桦脂酸20、40 μg/mL组的Bcl-2与内参β-actin吸光度积分值之比(Bcl-2/β-actin)随白桦脂酸浓度增加而减小,而Bax与内参β-actin吸光度积分值之比(Bax/β-actin)随白桦脂酸浓度增加而增加;Western blot结果显示白桦脂酸下调抑凋亡基因Bcl-2蛋白的表达,同时上调促凋亡基因Bax蛋白表达.结论 白桦脂酸通过介导细胞G0/G1期阻滞和诱导细胞凋亡抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖.其诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2/Bax表达比例相关.     

顺铂不同给药方式对鼻咽癌细胞毒性以及细胞周期影响体外研究

目的:采用细胞培养方法研究顺铂不同给药方式对鼻咽高分化鳞癌细胞株CNE-1的细胞毒性以及细胞周期的影响.方法:MTT方法检测顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞的半抑制浓度(IC50),1/5IC50为小剂量化疗参考剂量,而IC70则为MTD化疗参考剂量.细胞分4组进行如下处理:A组剂量为1/5IC50的顺铂连续作用96 h;B组剂量为IC70的顺铂连续作用3h;C组为IC70作用3h后间隔93 h;D组为未加入顺铂化疗的鼻咽癌细胞株同样条件下培养96 h.采用流式细胞仪进行细胞周期的检测.结果:顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞株作用72 h的IC50值为0.26 μg/ml,1/5IC50为0.05 μg/ml,IC70为0.72 μg/ml.顺铂为0.05μg/ml剂量时对CNE-1细胞无明显毒性,但细胞周期研究发现,当其连续作用96 h时,与阴性对照组相比可引起明显G2/M期阻滞(P＜0.05);而顺铂剂量为0.72 μg/ml连续作用3h后间隔24 h以及93 h时检测细胞周期变化也出现显著G2/M期阻滞(P＜0.05);但在0.72 μg/ml的顺铂作用3h后立即检测细胞周期变化,与相应阴性对照组相比无统计学意义(P＞0.05).结论:体外低毒性的小剂量顺铂连续给药可诱导鼻咽癌细胞株CNE-1细胞周期G2/M期阻滞.     

参芪扶正注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞生长抑制的体外实验

目的观察参芪扶正注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞的生长抑制作用,为其临床应用提供理论依据。方法将不同浓度的参芪扶正注射液与CNE-2细胞作用24、48、72和96h,用MTT法检测参芪扶正注射液对CNE-2细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态学变化。结果参芪扶正注射液对CNE-2细胞的生长抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增大。流式细胞仪分析显示参芪扶正注射液将CNE-2细胞明显阻滞于G1期。参芪扶正注射液浓度为8.0g/L作用48h,CNE-2细胞的凋亡率为39.3%,荧光显微镜下观察有凋亡细胞存在。结论参芪扶正注射液能够抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的增殖,能使CNE-2细胞阻滞于G1期,可诱导CNE-2细胞发生一定程度的凋亡。     

鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2(R743)的建立及其差异表达蛋白的初步分析

目的 建立放射抗拒的人鼻咽癌(NPC)细胞株,探讨NPC细胞的放射抗拒机制.方法 应用X射线反复照射NPC CNE-2细胞,总剂量为51 Gy,筛选出放射抗拒的细胞株CNE-2(R743).采用克隆形成实验测定细胞的放射敏感性,流式细胞术检测细胞周期特征;采用双向凝胶电泳结合质谱分析法鉴定差异表达蛋白.结果 与CNE-...