骨髓基质细胞及VLA-4抗体对儿童白血病细胞凋亡影响的研究

目的：研究骨髓基质细胞（BMSCs）对儿童白血病细胞的保护作用及细胞粘附分子缓慢抗原-4（VLA-4）抗体对原代白血病细胞凋亡的影响。方法：分离儿童白血病骨髓单个核细胞,培养BMSCs及白血病细胞。实验分4个组：①白血病细胞单独培养组（对照组）;②BMSCs＋白血病细胞组（BMSCs组）;③BMSCs上清+白血病细胞组（上清组）;④BMSCs＋白血病细胞＋VLA-4抗体组（抗体组）。流式细胞仪检测各组白血病细胞的凋亡率,RT-PCR方法检测各组白血病细胞survivin和bcl-2基因的表达。结果：BMSCs组和上清组的白血病细胞凋亡率均低于对照组,P<0.05。与BMSCs组和上清组比较,抗体组的凋亡率显著增高,P<0.05。抗体组12 h的凋亡率与24 h的凋亡率比较,差异有统计学意义,P<0.01。与BMSCs组和上清组比较,抗体组survivin、bcl-2基因的表达均有降低,P<0.05。结论：BMSCs对白血病细胞有保护作用,VLA-4抗体能够抑制白血病BMSCs与白血病细胞间的粘附,促进白血病细胞的凋亡。［中国当代儿科杂志,2010,12（11）：897-901］     

儿童急性淋巴细胞白血病及阿霉素所致Jurkat细胞凋亡时WAVE1表达研究

目的：初步探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1（WAVE1）在急性淋巴细胞白血病（ALL）发病中可能的作用及意义。方法：运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量法和蛋白质印迹（Western blotting）分别检测40例ALL初治患儿、15例化疗完全缓解半年、4例复发、10例非白血病患儿BMMCs中WAVE1 mRNA和蛋白的表达水平。以不同浓度阿霉素处理Jurkat细胞：①采用MTT法测细胞增殖;②采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;③采用RT-PCR和Western blotting检测WAVE1表达。结果：ALL初治和复发患儿BMMCs均有WAVE1 mRNA和蛋白的表达,对照和缓解组BMMCs中mRNA和蛋白低表达或无表达,初治和复发组的WAVE1 mRNA和蛋白的表达表达水平显著高于化疗后缓解组和对照组（P<0.01）。阿霉素明显抑制Jurkat细胞增殖,抑制作用呈剂量时间依赖效应（P<0.05）;阿霉素作用24 h后,细胞凋亡随药物浓度增增高而增加,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);细胞WAVE1 mRNA和蛋白表达水平随阿霉素处理浓度的增高而降低,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论：WAVE1在ALL患儿BMMCs中高表达;WAVE1可能与儿童ALL病程相关,它可能成为动态检测儿童ALL病情的一个新指标。     

骨髓基质细胞对白血病细胞保护作用的研究进展

白血病骨髓基质细胞与其分泌的细胞因子、细胞外基质构成的骨髓微环境在机体造血发育、血液病发生、恶性血液病细胞凋亡等生理病理过程中发挥着重要作用.该文综述了白血病患者骨髓基质细胞与白血病细胞耐药、抗凋亡特性的关系及其机制的相关研究进展.     

骨髓基质细胞对白血病细胞保护作用的研究进展

白血病骨髓基质细胞与其分泌的细胞因子、细胞外基质构成的骨髓微环境在机体造血发育、血液病发生、恶性血液病细胞凋亡等生理病理过程中发挥着重要作用.该文综述了白血病患者骨髓基质细胞与白血病细胞耐药、抗凋亡特性的关系及其机制的相关研究进展.     

巨细胞病毒对白血病骨髓基质细胞粘附能力的影响

用流式细胞仪检测巨细胞病毒（ＣＭＶ）对急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）病儿骨髓基质细胞粘附分子ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１表达的影响。结果发现：ＣＭＶ可以感染ＡＬＬ骨髓基质成纤维细胞,１０００ＴＣＩＤ５０ ＣＭＶ对ＡＬＬ基质细胞的形态无明显影响。ＣＭＶ感染早期,ＡＬＬ骨髓基质细胞ＩＣＡＭ－１表达增高,ＣＭＶ感染早期,ＡＬＬ骨髓基质细胞ＩＣＡＭ－１表达降低。ＣＭＶ对ＶＣＡＭ－１的表达无明显影响。结果提示Ｃ     

细胞凋亡与白血病的发病机制及临床意义

细胞凋亡是细胞死亡的一种生理现象，它与细胞坏死有着本质的区别。它维持着体内细胞数的动态平衡，它的失衡与某些免疫性疾病、血液系统疾病及肿瘤的发生、发展有密切关系。本文综述了细胞凋亡的特殊；ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ、ｐ５３、ｂｃｒ／ａ ｂｌ基因对细胞凋亡的调控与白血病发生的关系；某些细胞因子、化疗药物通过诱导细胞凋亡治疗白血病方面的研究进展；以及利用基因共作技术促进白血病细胞凋亡等方面的进展。     

细胞凋亡与白血病的发病机制及临床意义

细胞凋亡是细胞死亡的一种生理现象，它与细胞坏死有着本质的区别。它维持着体内细胞数的动态平衡，它的失衡与某些免疫性疾病、血液系统疾病及肿瘤的发生、发展有密切关系。本文综述了细胞凋亡的特征；bcl－2、c－myc、p53、bcr／abl基因对细胞凋亡的调控与白血病发生的关系；某些细胞因子、化疗药物通过诱导细胞凋亡治疗白血病方面的研究进展；以及利用基因工程技术促进白血病细胞凋亡等方面的进展。     

急性白血病细胞凋亡、DNA含量的流式分析

目的分析急性白血病(急淋初治37例、缓解期32例，急非淋9例)细胞凋亡量、DNA含量的变化及临床意义。方法采用流式细胞术(FCM)碘化丙啶插入性DNA定量染色法。结果凋亡百分率在缓解期最高，为19.92±8.05，初治组为8.16±3.12，与正常儿有显著性差异；白血病儿DNA指数(DI值)、异倍体(AN)率、SPF值(S期细胞百分比)均显著性增高，异倍体的发生与肝脾大小、白细胞数有关，与FAB分型无关。结论小儿白血病细胞存在DNA含量的异常，凋亡量、SPF等指标对提示预后有一定的参考价值。     

儿童急性淋巴细胞白血病并发糖尿病一例

患儿女,13岁。主因“发热头晕伴纳差,乏力皮肤瘀斑7d”于2002年6月7日入院。患儿无糖尿病家族史及既往糖尿病史。体检：贫血貌,肝大,浅表淋巴结轻度增大。血象示原 幼淋为8％;骨髓象示原 幼淋为86％;单抗示普通B淋巴细胞表型。故诊断为急性淋巴细胞白血病(简称急淋,ALL)。确诊后拟用长春新碱(VCR) 柔红霉素(DNR) 左旋门冬酰胺酶(L-ASP) 地塞米松(D EX),即VDLD EX方案诱导。化疗前空腹静脉血糖5．38mmol／L。     

儿童急性淋巴细胞白血病 53例疗效分析

目前国外对小儿急性淋巴细胞白血病（ALL）的治疗进展较快,缓解率（CR）已达95％以上,5年以上无事故生存率（EFS）达70％～80％。我国经过多年临床实践,于1998年在山东荣城召开的全国小儿血液病会议期间,制定了一套符合国情的小儿血液病诊疗方案。我院按此方案治疗53例小儿ALL．现总结分析如下。     

骨髓基质细胞在脂多糖诱导的肺损伤小鼠肺组织的定植研究

目的：探讨静脉输注骨髓基质细胞（BMSCs）在脂多糖（LPS）诱导的肺损伤小鼠肺组织定植并向肺泡上皮细胞分化的可能性。方法：绿色荧光蛋白（GFP）转基因C57BL/6J小鼠作为BMSCs移植供体,同种野生型小鼠为移植受体。气道滴入LPS诱导肺损伤。受体分为以下几组：(1) PBS+BMSCs移植（CM）; (2) LPS+BMSCs 移植（LM）; (3) PBS+全身放射+BMSCs移植（CIM）; (4) LPS+全身放射+BMSCs移植（LIM）。移植14 d后,以免疫荧光双标染色检测BMSCs在受体肺组织的定植情况,流式细胞仪检测体外培养的肺泡II型上皮细胞（AEC II）GFP阳性率,荧光定量PCR法检测肺组织表面活性物质蛋白（SP）-A、SP-C和水通道蛋白（AQP）-5 mRNA的表达。结果：移植后14 d,免疫荧光双标染色可见CIM和LIM组有少量肺泡上皮细胞呈GFP和角蛋白双染阳性,而且LIM组较CIM组有较多阳性细胞。与CM和LM组（分别为2.82±1.03%和3.81±0.93%）比较,CIM和LIM组的AEC II GFP阳性率更高（分别为11.10±3.19% 和14.40±2.40%; P<0.05）。LIM组SP-C mRNA表达较CM组增高(2.09±0.18 vs 1.38±0.30;P<0.05)。结论：供体来源的BMSCs能在LPS诱导的受损肺组织定植分化,提示静脉输注BMSCs可能有助于肺损伤的修复。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：321-327］     

Discarded portions of bone marrow aspirates are a new resource for patient‐derived mesenchymal stem and stromal cells

Bone marrow‐derived mesenchymal stem and stromal cells (BM‐MSCs) protect malignant cells from chemotherapy and are important potential therapeutic targets. Isolating primary BM‐MSCs for research traditionally requires the sacrifice of valuable cell populations from within the same sample. To avoid this, we report here a resource for isolating patient‐derived BM‐MSCs from the red blood cell layer of ficoll gradients of bone marrow aspirates, a resource that has until now been universally discarded. This resource yields BM‐MSCs nearly identical to those obtained conventionally and includes cells with a more stem‐cell like nature. Obtaining primary BM‐MSCs in this way will likely expand opportunities to study this important cell population.     

Single institution experience with high-dose cyclophosphamide,continuous infusion vincristine,escalating doses of VP-16-213, and total body irradiation with unpurged bone marrow rescue in children with neuroblastoma

Seven consecutive autologous bone marrow transplants were performed in children with neuroblastoma with very good partial remission (VGPR). A combination of cyclophosphamide, escalating doses of VP-16-213, continuous infusion vincristine, and total body irradiation followed by infusion with unpurged bone marrow was used. The dose-limiting toxicity in this regimen was mucositis which occurred when the total dose of VP-16-213 was 2,400 mg/m². The response rate to this regimen was 4/7 (-CR 48+, 21+, 21+, 35+ mo) 3/7 had a CR/PR post transplant with progressive disease between 1 and 4 months later (mean 2.6 mo). We conclude that this regimen is well tolerated when the maximum dose of VP-16-213 does not exceed 1,800 mg/m². Further evaluation will be necessary with this regimen to determine its therapeutic value in a larger number of patients with neuroblastoma.     

骨髓基质细胞脑内移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑白质的保护作用

目的：探讨骨髓基质细胞 (BMSCs)脑内移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑白质损伤的保护作用。方法：34只7日龄新生SD大鼠，随机分为正常对照组（n＝10）、HIBD组（n＝12）和移植组（n＝12），后两组大鼠结扎左颈总动脉后低氧暴露2 h制作HIBD模型，移植组大鼠在HIBD后24 h在大鼠脑立体定位仪下，将体外培养3~5代的SD大鼠BMSCs用Hochest 33324标记24 h后脑内移植于左侧海马。日龄45 d时处死大鼠，用荧光显微镜观察BMSCs在脑内的存活及BMSCs的O4的阳性表达。行髓鞘碱性蛋白（MBP）检测左侧胼胝体和皮质下白质MBP表达，行O4免疫组织化学检测左侧侧脑室周围和皮质下白质O4的表达。结果：BMSCs移植后37 d，移植部位及左侧皮层区（损伤侧）均可见到胞核蓝色的BMSCs，移植细胞表达O4的阳性率为（3.70±1.09）%。HIBD组左侧（损伤侧）胼胝体和皮质下白质MBP染色变浅，有不同程度的髓鞘脱失改变，左侧侧脑室周围和皮质下白质O4阳性细胞数较对照组明显减少，差异均有显著意义（P<0.01）。移植组胼胝体和皮质下白质MBP染色较深，部分有髓鞘脱失改变，相同部位O4阳性细胞数较对照组稍减少，比HIBD组明显增加，其差异有显著意义（P＜0.01）。结论：BMSCs脑内移植对HIBD新生大鼠脑白质损伤具有保护作用。     

含人胚胎骨髓基质细胞层体系对脐血造血干/祖细胞的扩增效果

目的 研究含人胚胎骨髓基质细胞层体系对脐血造血干／祖细胞的扩增效果。方法 分别建立人胚胎骨髓基质细胞层和成人骨髓基质细胞层,观察他们单独及其与造血生长因子联合,在不同时间对脐血ＣＤ＾＋３４细胞,ＣＤ＾＋３４ＣＤ＾－３８细胞,粒单系祖细胞,多向祖细胞,早期红系祖细胞的扩增作用。结果 （１）人胚胎骨髓基质细胞单独作用及其与ＨＧＦｓ「包括脐血浆,干细胞因子（ＳＣＦ）,ＩＬ－３,ＩＬ－６,白细胞介素１β（     

5-氮杂胞嘧啶核苷诱导小鼠骨髓间充质干细胞凋亡

目的 研究5-氮杂胞嘧啶核苷(5-AZA)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的影响.方法 从小鼠股骨和胫骨骨髓中分离BMSCs;利用免疫荧光染色检测间充质干细胞特异性标记分子CD44和CD90在BMSCs上的表达;应用0、10和20 μmol/L的5-AZA体外诱导培养BMSCs 48 h,应用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和荧光标记的半胱天冬酶抑制剂(FLICA)凋亡试剂盒检测5-AZA处理后细胞的凋亡率;应用Western blot检测凋亡相关蛋白Annexin V和Caspase-3在处理后的细胞表达水平.结果 实验中,BMSCs阳性表达间充质干细胞特异性标记蛋白CD44和CD90.DAPI染色和Caspase-3染色均显示10和20 μmol/L 5-AZA可增加BMSC的凋亡率;对照组、10 μmol/L组5-AZA和20 μmol/L 5-AZA组DAPI染色阳性凋亡率分别为(21.086±2.601)％、(34.467 ±3.724)％和(46.512±3.864)％,Caspase-3染色阳性凋亡率分别为(5.354±0.735)％、(15.462±2.385)％和(28.190 ±4.190)％,组间比较差异均有统计学意义(P均＜0.01).Westernblot检测显示Annexin V和Caspase-3在5-AZA处理后表达均显著增高;对照组、10 μmol/L组5-AZA和20μmol/L 5-AZA组Annexin V相对表达水平分别为(26.612±2.184)％、(42.873 ±4.313)％和(50.056±4.457)％,Caspase-3的相对表达水平分别为(19.231 ±2.683)％、(38.618 ±5.385)％和(91.235 ±7.116)％,组间比较差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 常规剂量的5-AZA可诱导BMSCs凋亡.     

Characterization of bone marrow stromal abnormalities in a patient with constitutional trisomy 8 mosaicism and myelodysplastic syndrome

The development of myeloid leukemias and myelodysplastic syndrome (MDS) is common in children with trisomy 8 mosaicism. However, the mechanisms by which the presence of an additional chromosome 8 translates to an increased risk of leukemias and MDS is currently unknown. The authors describe the analysis of stromal cells from a pediatric MDS patient with constitutional trisomy 8. Patient and control marrow stromal cells were analyzed for alterations in cytokine production. Clonogenic assays were used to examine stromal support for hematopoiesis. The interplay between leukemia cells and stroma was studied by co-culture experiments. The results indicate that stromal cell function in this patient was seriously altered in favor of progenitor cell proliferation and expansion. This indicates that constitutional trisomy 8 in stromal cells plays a critical role in the pathogenesis of MDS.