基于超高效液相色谱-飞行时间质谱技术的肺炎支原体感染小鼠血清代谢组学研究

采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)联用技术的代谢组学方法,分析肺炎支原体(MP)感染小鼠血清内源性代谢物的变化,筛选出与肺炎支原体肺炎(MPP)相关的潜在生物标记物,分析代谢通路,探讨MPP的致病机制。采用MP滴鼻感染的方法建立小鼠MPP模型,肺组织病理切片、IgM和支原体核酸的含量测定结果显示造模成功。利用UPLC-Q-TOF-MS方法分析MP感染小鼠的血清代谢轮廓,利用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)方法进行数据处理。结果显示MP感染模型小鼠的血清代谢谱与正常小鼠有显著差别,经数据库检索、质谱信息匹配,筛选出包括鸟氨酸、皮质醇、维生素A、色氨酸等47种生物标志物,涉及视黄醇代谢、精氨酸与脯氨酸代谢、甾类激素合成等17条代谢通路。该文建立了基于UPLC-Q-TOF-MS技术的MP感染小鼠血清代谢组学研究方法,从整体水平反映了MP感染小鼠内源性小分子的代谢变化,为进一步在分子水平进行药物筛选与评价奠定了基础。     

基于高效液相色谱-飞行时间质谱技术的高血压病肝阳上亢证尿液代谢组学研究

目的研究高血压病肝阳上亢证患者的尿液代谢物变化,寻找其特征代谢物,探索高血压病肝阳上亢证的证候本质。方法选择高血压病肝阳上亢证患者10例为患者组,另设12名健康体检者为正常组,采用高效液相色谱-飞行时间质谱技术(HPLC-TOFMS)采集两组尿液代谢物谱,利用SIMCA-P软件进行主成分分析(principal component analysis,PCA)及偏最小二乘判别分析(partial least-square discriminant analysis,PLS-DA),寻找并鉴定尿液内差异代谢物,做出相关代谢途径的可能解释。结果 PCA方法处理患者组和正常组的尿液代谢物谱数据显示,两组HPLC-TOFMS谱数据可以明显分开。与正常组比较,患者组机体相关代谢发生显著变化。经PLS-DA确定与高血压病肝阳上亢证有关的代谢物,通过查询KEGG数据库共确定了15个化合物的结构及代谢途径,主要包括氨基酸、游离脂肪酸、神经鞘氨醇等。结论采用HPLC-TOFMS结合模式识别的代谢组学方法对高血压病肝阳上亢证患者尿液代谢物进行研究,从微观领域寻找小分子代谢标记物,有利于深入发现中医证候的生物学本质。     

液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术及其在中药代谢（组学）研究中的应用

 目的 总结液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（LC-Q-TOF/MS）联用技术的特点及其在中药代谢、中药代谢组学中的应用概况与进展。方法 参考近5年国内外文献进行分析评述。结果与结论 LC-Q-TOF/MS是一种具有高通量筛选检测和数据分析能力,能满足中药代谢（组学）研究需要的新型联用技术,具有广阔的应用前景。
     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS代谢组学技术研究炮制前后何首乌化学成分变化

目的 利用代谢组学分析方法对比分析市售生首乌和制首乌化学成分的差异。方法 采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)方法,通过主成分分析和偏最小二乘判别分析等方法对比分析市售生首乌和制首乌化学成分的差异。结果 市售生首乌和制首乌化学成分差异较大,共鉴别45个差异化学成分,主要为蒽醌、二苯乙烯和鞣质等。结论 基于UPLC-Q-TOF-MS/MS代谢组学技术从整体角度分析了市售生首乌和制首乌的化学成分差异,为其炮制机理的阐释和临床应用奠定基础。     

运用代谢组学技术研究发现炮制引起大黄多成分变化

利用代谢组学技术,对大黄全成分进行对比分析,研究生熟大黄各类化学成分的变化。应用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF)联用技术,获取大黄生品和熟品的色谱和质谱信息,采用多元统计分析技术对提取的324个特征峰进行比较分析。炮制大黄非靶向代谢组学研究中,发现大黄生品和熟品化学成分明显不同,与生大黄相比,炮制后有127个成分发生显著变化,其中125个成分含量降低,2个成分升高。该研究鉴定了其中的10个化合物,另外推测了其他23个成分的结构类型,其中15个为鞣质类,8个为蒽醌类,炮制均使它们含量降低。炮制大黄靶向代谢组学研究发现炮制使芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚含量降低。炮制显著影响大黄中多种成分的含量,代谢组学研究能够比较全面地揭示这种变化。     

参麦方对于大鼠尿液代谢组学影响的初步研究

目的:运用代谢组学方法研究大鼠灌服参麦方后机体内源性代谢物的变化,探讨参麦方在体内的作用及其机制。方法:通过超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC/TOF-MS)分析药物作用后大鼠尿液的代谢物图谱,采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)寻找各组代谢物差异,变量重要性投影(VIP)及t检验筛选潜在内源性标志物。结果:鉴定出16种内源性代谢物。结论:结果表明参麦方可通过改变色氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等氨基酸代谢,脂肪酸、嘌呤以及能量代谢来影响机体的生理功能从而发挥功效。该研究为参麦方在疾病模型的分析以及临床应用方面提供了依据。     

超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱分析五味子化学成分

目的:应用超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(UPLC-ESI-TOF/MS)分析五味子化学成分。方法:采用50%甲醇和甲醇依次提取制备五味子供试品溶液,经UPLC-ESI-TOF/MS联用仪进行检测,通过对高分辨质谱数据的分析计算分子式,表征五味子UPLC-TOF/MS色谱图中各峰,进而通过检索五味子化学成分数据库进行初步鉴定。结果:五味子有机酸和木脂素类成分均获得检测,共表征了24个峰,初步鉴定了17个峰。结论:本研究更全面地分析了五味子化学成分,为其质量控制提供了新的分析方法。     

高脂血症大鼠造模过程中血液代谢组学研究

目的采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-TOF-MS)代谢组学法动态观察高脂血症大鼠造模过程中血液的代谢轮廓的改变,寻找高脂血症演化过程中的生物标志物。方法将SD大鼠分成正常对照组和模型组,运用高脂乳剂灌胃法复制高脂血症大鼠模型,并收集不同时间点的血样,采用UPLC-TOF-MS检测并进行主成分分析。结果随着造模时间的延长,高脂血症大鼠血清代谢轮廓呈现动态演变。与正常对照组比较,模型组鞘磷脂、乙酰糖蛋白、谷酰胺、3-羟基丁酸、甲硫氨酸、甜菜碱、磷脂酰胆碱、柠檬酸、乌头酸、肌酸、3-吲哚硫酸、赖氨酸、甘氨酸等21种物质发生明显改变。结论在高脂血症进展过程中,不仅大鼠血液脂质代谢发生了紊乱,而且还伴随着糖代谢、氨基酸代谢的紊乱以及炎症和氧化应激。     

基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱技术的洋川芎内酯H在大鼠体内的代谢产物分析

目的 采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS)技术对洋川芎内酯 H 在大鼠体内的代谢产物进行分析鉴定。方法 SD大鼠灌胃给药后,收集其血浆、尿液、胆汁和粪便,并对样品进行前处理。采用ThermoAccucore C₁₈色谱柱(2.1 mm×150 mm,2.6 μm),以体积分数0.1%乙酸-水(A相)-乙腈(B相)作为流动相进行梯度洗脱。根据准分子离子峰和碎片离子信息,结合对照品与文献报道,对大鼠血浆、尿液、胆汁和粪便中的原型成分及其代谢产物进行鉴定。结果 最终在大鼠血浆、尿液、胆汁和粪便中共检测到32个代谢产物,包括24个Ⅰ相和8个Ⅱ相代谢物。结论 洋川芎内酯 H 主要的体内代谢反应包括氧化、氢化、去羟基化、甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化、半胱氨酸结合、谷氨酰胺结合以及相关的复合反应等。本研究应用高分辨液质联用技术阐明了洋川芎内酯 H 在大鼠体内的代谢产物,为今后药效学和药理学研究奠定了基础。     

基于色谱质谱联用技术的中医痰湿体质的代谢组学研究

目的:寻找中医痰湿体质血清标志性代谢物及其引起的代谢通路变化,结合糖脂代谢、胰岛素抵抗指数等指标,探讨中医痰湿体质形成、发展等各阶段的病理特征以及中医关于"肥人多痰湿"的发病机制。方法:收集正常组平和质、超重组非痰湿质和痰湿质、肥胖组痰湿质的血清样本,分析比较4组间体脂参数(体重指数BMI、腰围WC、腰臀比WHR)、血脂(TG、CHOL、HDLC、LDLC)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(Homa-IR),并分别与中医痰湿体质积分作相关性分析。应用高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用(HPLC-Q-TOF/MS)的代谢组学技术为基础、使用多元数据统计分析寻找痰湿体质的血清差异代谢物,进一步探讨中医痰湿体质内在的病理学特征及相关疾病的发病机制。结果:BMI、WC、WHR、TG随着组别依次呈现逐渐增大的趋势,HDL-C则逐渐减小,肥胖组痰湿质的FINS、Homa-IR指数显著高于正常组平和质(P<0.01);全组中医痰湿体质积分与BMI、WC、WHR、TG水平呈显著正相关(P<0.05);与HDL-C水平呈显著负相关(P<0.01);超重组非痰湿质显著性差异表达血清代谢物有8种,超重组痰湿质有9种,肥胖组痰湿质有9种(P<0.05)。结论:痰湿质肥胖症存在着显著的体脂分布异常、脂代谢紊乱、胰岛素水平过高、高胰岛素抵抗等病理特征,提示中医痰湿体质是肥胖症的易患体质;中医痰湿体质存在显著性差异表达血清代谢物。     

女贞子的化学成分研究

目的:研究女贞Ligustrum lucidum的干燥成熟果实的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱,Sephadex LH-20凝胶柱色谱和ODS柱色谱等色谱方法进行分离纯化,并根据NMR,MS等波谱方法和理化性质鉴定其化学结构。结果:从女贞子中分离得到20个化合物,其中三萜类化合物15个,分别鉴定为齐墩果酸(1),2α-羟基齐墩果酸(2),乙酰齐墩果酸(3),羽扇豆醇(4),白桦脂醇(5),达玛烯二醇(6),3β-乙酰氧基-20,25-环氧-24α-羟基-达玛烷(7),20,25-环氧-3β,24α-二羟基-达玛烷(8),3β-乙酰氧基-达玛烯二醇(9),3β,20S-二羟基-24R-过氧羟基-25-烯-达玛烷(10),fouquierol(11),oliganthas A(12),达玛烯二醇3-O-棕榈酸酯(13),拟人参皂苷元II 3-O-棕榈酸酯(14),3β,20S-二羟基-25-过氧羟基-23E-烯-达玛烷(15);苯乙醇类化合物5个,分别为毛蕊花苷(16),北升麻宁(17),2-(3,4-二羟基苯基)乙基-O-β-D吡喃葡萄糖苷(18),osmanthuside H(19),3,4-二羟基苯基乙醇(20)。结论:化合物4,16,17,19为首次从本植物中分离得到,化合物12~15为首次从本属植物中分离得到。     

女贞子化学成分的UPLC-ESI-Q-TOF-MS分析

目的:采用UPLC-ESI-Q-TOF-MS技术对女贞子中的化学成分进行定性分析。方法:采用ACQUITY UPLC BEHC18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱;质谱使用ESI离子源,正离子与负离子模式下采集数据。结果:通过正、负离子质谱信息及元素组成分析并结合对照品与相关文献数据对照,共鉴定出14个化合物。结论:通过超高效液相色谱分离,质谱测定相对分子质量及相关文献数据信息检索确定女贞子中的化学成分,为阐明女贞子的药效物质基础提供有力的证据。     

GC-MS结合化学计量学方法用于女贞子乙醚提取物的定性定量分析

目的:对湖南产女贞子乙醚提取物化学成分进行定性与定量分析。方法:利用气相色谱-质谱(GC-MS)进行检测;通过直观推导式演进特征投影(HELP)法对产生的二维数据进行解析得到重叠峰中各组分的纯色谱图和质谱;并利用质谱相似度结合程序升温保留指数(PTRI),实现了对同分异构体(特别是构象异构)组分的定性分析,最后对各组分进行相对定量分析。结果:共分辨出84个色谱峰,鉴定了其中75个组分,占乙醚提女贞子化学成分总含量的84.3%。结论:女贞子主要挥发成分为顺式油酸(cis-oleic acid,9.805%)、羽扇豆醇(lupeol,8.848%)和9,12-亚油酸[(Z,Z)-9,12-octadecadienoic acid,8.357%]。     

女贞子多糖的提取工艺及单糖组成

目的: 优选女贞子多糖的最佳提取工艺并测定其单糖组成及摩尔比。方法: 采用正交试验法,以多糖提取率为评价指标,对女贞子多糖的提取因素进行研究,用苯酚-硫酸比色法对女贞子多糖进行含量测定。多糖经硫酸水解后,水解产物利用高效液相色谱(HPLC)分析其单糖组成及摩尔比。结果: 女贞子多糖的最佳提取工艺为10倍量水,回流提取3次,3 h/次;该多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖4种单糖组成,其摩尔比为3.71∶3.21∶1.00∶16.06。结论: 该方法简便、准确,可用于女贞子多糖的单糖组成测定及质量控制。     

女贞子醇提物不同极性部位的体外抗氧化活性研究

目的:研究女贞子乙醇提取物不同极性部位的体外抗氧化活性,旨在为女贞子抗氧化相关有效成分的分离提供依据。方法:在体外化学模拟的条件下,采用1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)自由基法、邻苯三酚法测定其对DPPH自由基和对超氧阴离子自由基的清除能力。结果:女贞子醇提物的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇3个萃取部位抗氧化结果显示,相同浓度下女贞子乙酸乙酯部位抗氧化效果最强,其次是正丁醇部位、石油醚部位。结论:测定了女贞子醇提物不同溶剂提取物的抗氧化活性,初步确定女贞子中抗氧化相关活性成分主要存在于女贞子醇提物的乙酸乙酯部位。     

女贞子的化学成分研究

 目的 研究木犀科药用植物女贞子（Ligustrum lucidum的化学成分。 方法 用溶剂提取、萃取、硅胶正相柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及结晶法进行化学成分的分离纯化,通过理化性质和波谱分析鉴定结构。 结果 从女贞子中分离鉴定了9个化合物,结构分别为3-O-cis-P-coumaroyl maslinic acid(1,oleoside 11-methyl ester(2,oleonuezhenide(3,G 13(4,oleoside dimethyl ester(5,nuezhenide(6,oleuropein(7,3,4-dihydroxyphenethyl-β-D-glucoside(8和3,4-dihydroxyphenethyl-(6′-caffeoyl-β-D-glucoside(9。 结论 化合物1为首次从该属植物中分离得到,化合物2～4,8,9为首次从该植物中分离得到。     

光质对灵芝生长与灵芝多糖含量的影响

目的:研究不同光质对灵芝生长发育和灵芝多糖含量的影响,为灵芝优质高产栽培提供理论依据。方法:栽培灵芝时进行不同光质处理,在灵芝不同生长发育时期观测其形态变化并测量多糖含量。结果:不同光质处理形态上弹孢前期灵芝菌盖厚度与菌盖表面环纹的数目与对照差异显著,灵芝多糖含量出现最高值时期不同。蓝色光质处理在现蕾期、开伞期、弹孢后期多糖含量均高于对照,且差异显著。绿色光质处理有助于生长末期多糖积累。不同光质处理对灵芝子实体产量与灵芝孢子粉产量均有影响。结论:对照处理灵芝子实体产量高,性状好;蓝色光质处理可以提高灵芝多糖含量。     

不同品种灵芝多糖含量差异研究

目的 :比较产粉灵芝与无粉灵芝多糖含量的不同,明确不同品种灵芝子实体多糖含量的差异。 方法 :光学显微镜观察灵芝子实体结构,蒽酮-硫酸法测定了不同品种灵芝多糖含量。 结果 :无粉灵芝的多糖含量比产粉灵芝多糖含量高出近1倍;灵芝子实体由4部分组成,分别为菌皮、皮层、菌肉、菌管;子实体中菌管所占比例最大,厚度比例占70％以上,且多糖含量在各部分中也最高,最高可达3.88％。 结论 :无粉灵芝多糖含量高于产粉灵芝;菌管是灵芝子实体多糖的主要来源。     

HPLC测定不同产地灵芝中9种三萜酸

目的:建立HPLC测定灵芝子实体中9种三萜酸的方法.方法:采用Alltima C18色谱柱(4.6 mm × 150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.04％甲酸溶液,检测波长254 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温15℃.结果:灵芝酸C2、灵芝酸G、灵芝烯酸B、灵芝酸B、灵芝烯酸A、灵芝酸A、赤芝酸A、灵芝烯酸D、灵芝酸C1的线性范围分别为6.81～40.88,6.38 ～38.25,6.75～40.50,6.38～ 38.25,5.95 ～ 35.65,5.90 ～ 35.25,7.00 ～ 42.00,6.20 ～ 37.15,6.05 ～ 36.4 mg· L-1(r=0.999 4,0.999 2,0.999 4,0.999 2,0.999 2,0.994 5,0.999 0,0.999 2,0.998 4),加样回收率分别为102.1％,102.3％,100.6％,103.3％,104.1％,103.2％,96.42％,102.5％,101.5％,RSD为1.5％,0.96％,1.9％,1.3％,1.7％,2.5％,0.62％,2.9％,1.3％.测定了31个不同地区、不同栽培条件下灵芝样品的三萜含量.结论:该方法可行、重复性好,可定量测定灵芝中三萜酸的含量.     

赤芝孢子粉和子实体主要化学成分变异规律研究

目的:揭示产地、品种、采收部位和潮次、破壁技术对赤芝孢子粉和子实体中总三萜、总多糖、总蛋白含量的影响。方法:收集龙芝1号、沪农1号、市售赤芝孢子粉和子实体,分别采用硫酸-蒽酮比色法、香草醛-冰醋酸比色法和Lowry法测定其中总多糖、总三萜、总蛋白的含量。结果:全国6个主产区的破壁孢子粉总多糖为0.40%~2.25%,总三萜为1.36%~3.15%,总蛋白为0.74%~1.91%;浙江主栽赤芝品种子实体总多糖、总三萜、总蛋白质量分数分别为0.25%~1.42%,0.44%~1.42%,1.82%~3.67%,未破壁孢子粉分别为0.41%~0.91%,0.09%~0.12%,0.78%~0.90%,破壁孢子粉分别为1.03~2.25%,1.89%~3.15%,0.96%~1.04%。结论:全国不同主产区的灵芝破壁孢子粉化学成分含量存在显著差异,浙江产区总多糖和总三萜含量较高,福建产区总蛋白含量较高;浙江主栽赤芝品种龙芝1号总三萜含量较高,沪农1号总多糖含量较高;破壁孢子粉中总三萜与总多糖含量高于子实体,子实体菌柄中总多糖含量大多高于菌盖,菌盖中总三萜含量显著高于菌柄;2潮采收的菌盖和菌柄中总多糖含量高于1潮相应的部位,但总三萜含量大多低于1潮;孢子粉破壁可显著提高总三萜和总多糖的提取和溶出率。