灵芝孢子降低维甲酸诱导的孕鼠胚胎神经管畸形的发生

目的 探讨灵芝孢子能否促进受维甲酸诱导,而停滞在G0/G1期的胚胎神经管神经上皮细胞重新进入细胞周期循环,继续增殖和分化,减少神经管畸形的发生.方法 于实验对照组和灵芝孢子组小鼠孕期胚胎E17.75d时一次性胃饲全反式维甲酸,造成这两组孕鼠的胚胎出现神经管畸形.然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液.在孕期E10.5d时取出两组孕鼠的胚胎,分别计数胚胎的神经管畸形发生率.应用免疫荧光组织化学染色和流式细胞仪检测胚胎神经管神经上皮的巢蛋白(nestin)表达情况.应用DNA定量荧光染色和RT-PCR技术检测胚胎神经管依赖细胞周期蛋白激酶2(Cdk2) mRNA和Cdk4 mRNA的转录.结果 灵芝孢子组孕鼠胚胎的神经管畸形发生率显著低于实验对照组.神经管神经上皮细胞表达nestin的百分率也明显大于实验对照组.实验对照组孕鼠胚胎的神经管细胞在G0/G1期的比例则显著高于灵芝孢子组,但是实验对照组神经管细胞S期的比例低,低于灵芝孢子组形态正常的胚胎神经管细胞.RT-PCR检测发现,灵芝孢子组孕鼠胚胎神经管细胞能够正常转录Cdk4 mRNA,而实验对照组则低转录Cdk4 mRNA.结论 灵芝孢子能够减少维甲酸诱导的妊娠小鼠孕期E10.5d胚胎神经管畸形的发生.     

灵芝孢子在预防维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对Cdk4表达的影响

目的探讨预先服用灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(cyclindependentproteinkinase4,Cdk4)表达的影响。方法于孕期小鼠E0d时给予灵芝孢子组的孕鼠胃饲灵芝孢子溶液,8g·kg-1·d-1。实验对照组的孕鼠胃饲等量溶剂。于E7.75d时,两组孕鼠一次性胃饲维甲酸,剂量为50mg/kg体重。正常对照组孕鼠胃饲等量灵芝孢子溶剂,但是在E7.75d时,仅给予维甲酸溶剂。空白对照组孕鼠常规饲养不作任何处理。在孕期E10.5d时取出4组孕鼠的胚胎,应用免疫荧光组织化学染色和Westernblot检测胚胎神经管神经上皮Cdk4表达情况。结果实验对照组孕鼠胚胎神经管神经上皮细胞Cdk4的表达明显降低,而灵芝孢子组胚胎表达Cdk4的强度明显高于实验对照组。正常对照组与空白对照组相比Cdk4的表达无统计学意义(P>0.05)。结论灵芝孢子可能是通过增强神经管神经上皮细胞表达Cdk4降低维甲酸诱导胚胎小鼠神经管畸形的发生。     

Dishevelled2 和Vangl2表达与过量维甲酸致昆明小鼠神经管畸形的相关性

目的 探讨Dishevelled2和Vangl 2蛋白与过量维甲酸致昆明小鼠神经管畸形发生的关系。 方法 50只昆明孕小鼠随机分为对照组和实验组。孕775d时,实验组一次性胃饲30mg/kg致畸量维甲酸（RA）,对照组胃饲等量溶剂,服药后4h、18h、42h、66h及90h分别取胚胎,常规石蜡切片,采用原位杂交和免疫组织化学技术,分别检测胚胎神经管组织中Dishevelled2蛋白和Vangl2 mRNA及蛋白的表达水平变化。 结果 两种蛋白均存在于对照组及实验组不同发育阶段的小鼠神经管上皮,且两者的表达变化趋势有所不同。与对照组相比,实验组Dishevelled2蛋白在RA处理18h、42h时表达水平明显降低(P≤0.05),66h时表达升高(P≤0.05),90h时两组表达水平无明显差异;Vangl2 mRNA在灌服RA 4h、18h时表达水平明显低于对照组(P≤0.05),42h时两组表达水平无明显差异,66h时表达显著高于对照组(P≤0.05)。Vangl2蛋白在RA处理18h、42h时表达显著降低(P≤0.05),66h时两组表达水平无明显差异,90h时表达显著高于对照组(P≤0.05)。 结论 过量RA可能通过调节Dishevelled2和Vangl2表达干扰正常胚胎神经管的闭合过程。     

过量维甲酸对金黄地鼠胚胎神经管维甲酸受体β表达的影响

目的探讨过量维甲酸(RA)对金黄地鼠胚胎神经管维甲酸受体(RARβ)基因和蛋白表达的影响。方法采用原位杂交和免疫组织化学方法及图像分析,半定量分析金黄地鼠胚胎神经管正常发生及RA致神经管畸形过程中RARβ转录和表达水平的变化。结果正常对照组RARβ表达水平随胚龄增加呈先降低后升高并再次减弱的趋势。实验组在灌服过量RA后3、6h,RARβ表达水平明显低于正常对照组(P<0.01);14h时表达升高显著高于正常对照组(P<0.05);22h时其表达再次降低明显低于对照组(P<0.01);46、96h表达逐渐增强,96h时明显高于对照组(P<0.01)。结论过量RA引起的RARβ转录和表达水平的变化与RA致金黄地鼠神经管畸形相关。     

灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对Cdk4表达的影响

目的 探讨灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(CDk4)表达的影响.方法 给予实验对照组和灵芝孢子组妊娠E7.75d的小鼠一次性胃饲维甲酸,造成这2组孕鼠的胚胎出现神经管畸形.然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液.在孕期E10.5d时取出2组孕鼠的胚胎,应用免疫荧光组织化学染色和Western blotting检测胚胎神经管神经上皮依赖细胞周期蛋白激酶4(Cdk4)的表达情况.结果 在灵芝孢子组可以观察到形态正常的胚胎中,神经管的神经上皮细胞有Cdk4的表达,其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较没有明显差异.在灵芝孢子组形态异常的胚胎中,其神经管的神经上皮细胞也有cdk4的表达,但其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较是低的.结论 灵芝孢子可能是通过促进神经管神经上皮细胞上调Cdk4的表达来减轻维甲酸诱导的胚胎小鼠神经管畸形.     

维甲酸受体α/β及β-连环素在维甲酸致小鼠神经管畸形中的表达变化

目的 探讨维甲酸受体α/β(RARα/β)及β-连环素(β-catenin)在维甲酸(RA)致小鼠胚胎神经管畸形发生过程中的表达变化及意义.方法 100只昆明小鼠随机分为实验组和对照组,分别通过半定量RT-PCR及Western blotting检测RARα/β及β-catenin的表达变化.结果 RARα及RARβ蛋...     

维甲酸诱导的小鼠神经管畸形模型中神经系统相关基因的表达情况分析

 摘要: 目的: 研究在全反式维甲酸诱导小鼠神经管畸形模型中神经系统相关基因（ASH2L,HDAC4,NSPC1与DOK5）的表达变化。方法: 取8只E8.5的C57/BL6孕鼠随机分为两组：对照组（4只）,模型组（4只）。对照组腹腔注射橄榄油,模型组腹腔注射全反式维甲酸;E13.5取胚胎。采用Real-time PCR检测两组小鼠脑和脊髓中ASH2L,HDAC4,NSPC1与DOK5的mRNA表达;采用Western Blotting技术检测两组小鼠脑和脊髓中ASH2L,HDAC4,NSPC1与DOK5的蛋白表达情况。结果：全反式维甲酸可诱导小鼠出现典型神经管畸形;与对照组相比,全反式维甲酸处理组的致畸胚胎脑和脊髓中,ASH2L HDAC4, NSPC1和DOK5的mRNA表达有所下降（P<0.05）;同时这些基因的蛋白水平也显著下降 (P<0.05)。结论：ASH2L,HDAC4,NSPC1和DOK5可能是抑制全反式维甲酸致神经管畸形的潜在基因。     

P>维甲酸受体α/β及β-连环素在维甲酸致小鼠神经管畸形中的表达变化  /P>

目的 探讨维甲酸受体α/β(RARα/β)及β-连环素(β-catenin)在维甲酸(RA)致小鼠胚胎神经管畸形发生过程中的表达变化及意义.方法 100只昆明小鼠随机分为实验组和对照组,分别通过半定量RT-PCR及Western blotting检测RARα/β及β-catenin的表达变化.结果 RARα及RARβ蛋白表达水平在RA灌服后18h、42h时明显低于正常对照组(P＜0.01);66h、90h时RARα蛋白表达水平与对照组相比无显著性差异,RARβ蛋白表达水平则显著高于正常对照组(P＜0.05).β-catenin mRNA水平在RA灌服后4h和18h时明显低于正常对照组(P＜0.05),42h时与对照组相比无显著性差异,66h时其表达水平明显高于对照组(P＜0.05);β-catenin蛋白表达水平在RA灌服后18h和42h时显著低于正常对照组(P＜0.01),66h时与对照组相比无显著性差异,90h时其表达水平显著高于正常对照组(P＜0.01).结论 RA改变了小鼠胚胎神经管中RARα/β和β-catenin基因的正常时间表达模式,这种异常的基因表达模式可能参与了RA诱导的小鼠神经管畸形的发生.     

神经管畸形的分子遗传学研究

神经管畸形(neural tube defects, NTDs)是一种由于在胚胎发育的第26-28d神经管未闭合而造成的头部至脊柱部位从无脑到轻度脊柱裂不同程度的畸形.包括无脑、露脑、小头畸形、大头畸形、脑积水、脑脊膜膨出、颅脊柱裂和脊柱裂.是常见的先天畸形之一,在出生缺陷性疾病中仅次于先天性心脏病居第二位,在世界各地均有发生,我国是神经管畸形的高发区,发病率约为2.74‰[1] ,其后果极其严重,是自然流产、死胎、死产及围产儿死亡的最主要的原因.一般认为NTDs是由环境因素和遗传因素共同作用造成的.其中认为同型半胱氨酸的代谢同神经管畸形的关系最为密切[2].     

PMX诱导神经管畸形及其对神经上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:用培美曲塞(pemetrexed,PMX)建立叶酸缺乏的神经管畸形(neural tube defect,NTD)动物模型,并探讨其对神经上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用不同剂量PMX(5、10、15、17.5、20和30 mg/kg)对C57BL/6孕鼠进行干预,筛选最佳造模剂量。采用磷酸化组蛋白H3(pH3免疫组化的方法以及TUNEL方法)观察胎鼠神经上皮增殖和凋亡情况。结果:随着PMX剂量的增加,小鼠胚胎的吸收胎和畸形率逐渐增加,其中17.5mg/kg体重组的NTD的发生率最高(30.6%),被筛选为最佳造模剂量。pH3免疫组化和TUNEL结果显示,与正常对照组相比,NTD小鼠胚胎神经上皮细胞增殖减少(P<0.05),凋亡增加(P<0.05)。结论:PMX能诱导NTD的发生,其机制可能是因为PMX阻断了叶酸代谢通路并导致神经上皮细胞的增殖抑制和过度凋亡。     

神经管畸形的预防

NTDs为多因素疾病,发病率高,危害严重.现有的预防措施主要有围孕期服用叶酸制剂及产前监测.孕前筛查利用基因诊断筛查出生育NTDs的亲代高危人群,为孕前重点干预及孕期重点监测提供依据.若3种方法结合可使NTDs的预防措施更具针对性,从而最大限度地有效降低NTDs的发生率.     

高温致神经管缺陷过程中凝集素受体变化的实验动物研究

妊娠金黄地鼠随机分为实验组和对照组,前者于受精后第８天置４２℃水浴中持续２０ｍｉｎ,后者置３７℃水浴中持续２０ｍｉｎ。分别于高温后８、１２、２４、４８ｈ剖腹取胎,石蜡包埋,连续切片。应用生物素标记的花生凝集素、刀豆凝集素、麦胚凝集和荆豆凝集素为分子探针作亲合细胞化学染色,对各期鼠胚神经上皮及其基膜、脊索和神经管周围间充质中相应受体糖基进行定性、定位和半定量观察。结果显示,正常胚胎神经上皮及其周围组     

神经管畸形动物模型的研究进展

神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是一类常见的发病率高且后果严重的出生缺陷,为影响我国出生人口素质的重要问题.目前,其大部分研究内容依靠动物模型来完成.神经管畸形动物模型的建立对研究其发病机制及其防治起着重要作用.本文从物理和化学两方面因素对神经管畸形动物模型诱导方法及其机制作一综述.     

脑内高表达microRNAs的时空效应及其在神经管缺陷中的可能作用

MicroRNAs (miRNAs) are known to play an important role in regulating the cell proliferation, differentiation and organogenesis. Abnormal expression of miRNAs is associated with increased risk for various diseases, such as neural tube defects (NTD), which is a severe developmental disease as the result of closing the neural tube incompletely or too early. The present review summarizes some enriched miRNAs in the brain of mammals and their spatial temporal feature, and tries to elaborate the relationship between the aberrant expression of miRNAs and the pathogenesis of NTD.     

神经管缺陷与Dishevelled基因表达的关系

神经管缺陷是复杂的多基因疾病,是中枢神经系统最常见的先天畸形。虽然其发病机制尚不清楚,但是研究已证实遗传因素与其发病具有相关性。本文将着重对Dishevelled基因细胞信号通路在神经管发育、神经管缺陷发病机制中的作用及有关Dishevelled基因的研究进展进行阐述。     

MAPKs信号转导蛋白在高温致神经管畸形中的表达

目的:探讨高温致畸中MAPKs激酶中的ERK1/2通路与JNK1/2通路蛋白表达及其作用,进一步揭示高温致畸机制。方法:在高温致金黄地鼠畸形的动物模型上,应用Western blotting技术检测对照组和高温组胚胎的丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2及JNK1/2的表达及其磷酸化水平。结果:p-ERK1/2在对照组稳定表达;高温作用后p-ERK1/2表达与对照组相比活性降低,差异明显(P0.05);p-JNK1/2在对照组不表达,在高温组各时段均出现表达,并于高温作用后16h活性达最大值,与对照组差异明显(P0.05)。结论:高温可导致胚胎MAPKs信号转导通路中p-ERK1/2活性表达降低、p-JNK1/2活性升高,引起胚胎发育过程中细胞增殖和凋亡的失衡,从而导致胚胎先天缺陷的发生,这可能是高温致畸的一条重要途径。     

孕妇血清叶酸、维生素B12和同型半胱氨酸水平与胎儿神经管畸形相关性研究

目的比较胎儿神经管畸形（neural tube defects,NTDs）孕妇和正常孕妇血清叶酸（Folate,Fol）、维生素B12（Vitamin B12,B12）和同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）水平,以了解三种物质的代谢水平与胎儿NTDs的关系。方法根据有无胎儿NTDs将研究对象分为病例组（n=47）和对照组（n=43）,两组共90例。病例组指经B超诊断为孕NTDs胎儿并通过终止妊娠确诊活产或死产NTDs胎儿的孕妇。对照组指经B超诊断胎儿发育正常,并经随访确认所分娩婴儿正常的孕妇中随机抽取43例。检测两组孕妇血清标本Fol、B12和Hcy水平,并比较两组孕妇血清Fol、B12和Hcy水平差异。结果病例组和对照组血清Hcy水平分别为9.31±4.19（8.08~10.54）μmol/L和7.75±1.95（7.15~8.35）μmol/L,两组经独立样本t检验比较,差异有统计学意义（t=2.189,P=0.031）;两组血清Fol和B12水平比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。单因素Logistic回归分析从6个变量中遴选出1个危险因素,Hcy OR=2.021（95%CI：1.167~3.500）,是子代发生NTDs的危险因素;多因素Logistic回归分析结果显示,随着孕妇血清Hcy水平的升高,其发生胎儿NTDs发病风险增加。结论中孕期妇女血清高水平Hcy是妊娠NTDs的独立危险因素,随着孕妇血清Hcy水平的升高,其发生胎儿NTDs发病风险增加。