(GTG)5探针产生的DNA指纹图在近交系小鼠遗传检测中的应用

目的探讨用非放射性标记的寡聚核苷酸探针(GTG)5进行近交系小鼠的DNA指纹分析。方法用非放射性标记的寡聚核苷酸探针(GTG)5制作BALB/c、C57BL/6J、DBA/2、C3H近交系小鼠的DNA指纹图,对这四个品系的小鼠进行遗传检测,分析各品系内和品系间的遗传变异性。结果(GTG)5探针可产生具有良好多态性的DNA指纹图,平均图带数为8~12条。各品系内的DNA指纹图平均相似系数(-x)在0.96~1.00的范围内,具有相同指纹图的概率(P)均在3.1×10-1以上,极显著地高于品系间的相似系数(0.22~0.39)和相同指纹图的概率(P<1.07×10-4)。结论(GTG)5可用于制作近交系小鼠的DNA指纹图以对其进行遗传检测。     

应用α-珠蛋白3′-HVR探针进行小鼠的DNA指纹分析

目的:探讨3′-HVR探针及Southern杂交技术应用于实验小鼠遗传质量监测的可行性.方法:采用人源α-珠蛋白3′-HVR探针,应用ECL试剂盒,以HRP标记进行Southern杂交,以化学发光法进行检测,对5种近交系小鼠(BALB/c、DBA/2、T739、TA1、615)、1种封闭群小鼠(KM)及2种免疫缺陷小鼠(BALB/c-nu/nu及C.B-17SCID)进行DNA指纹分析.结果:其不同近交小鼠的DNA指纹图各异,而同种近交系的不同个体的DNA指纹图相同,封闭群KM小鼠不同个体之间的DNA指纹图存在一定差异.BALB/c-nu/nu小鼠、CB-17SCID小鼠不同个体之间的DNA指纹图相同,并且与BALB/c小鼠的一致.结论:该探针及其Southern杂交技术可用于实验小鼠的遗传质量监测.     

一种随机探针人DNA指纹分析法的建立

根据随机探针(Anonymous Probe)检测DNA限制性片段长度多态性(RFLPs)分析原理和人与鼠的髓鞘碱性蛋白(MBP)基因cDNA有90％以上同源序列的事实,选用rMBP-cDNA 3′-端非表达区高度重复序列的0.81千碱基对(kb)片段作探针,检测用HaeⅢ重酶解的人DNA限制性片段,结果可以分辨出22条谱带,受检的30例无血缘关系的个体之间,没有两个人的谱带是完全相同的,显示出此方法的高度特异性。本文还比较了若干DNA片段作探针和几种限制性内切酶水解人DNA后检测DNA指纹的初步结果。     

应用α—珠蛋白3′—HVR探针进行小鼠的DNA指纹分析

目的：探讨３′－ＨＶＲ探针及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术应用于实验小鼠遗传质量监测的可行性。方法：采用人源α－珠蛋白３′－ＨＶＲ探针,应用ＥＣＬ试剂盒,以ＨＲＰ标记进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,以化学发光法进行检测,对５种近交系小鼠（ＢＡＬＢ／ｃ、ＤＢＡ／２、Ｔ７３９、ＴＡ１、６１５）、１种封闭群小鼠（ＫＭ）及２种免疫缺陷小鼠（ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕ及Ｃ．Ｂ－１７ＳＣＩＤ）进行ＤＮＡ指纹分析。结果：其不     

二种多位点探针的制备及近交系小鼠DMA指绞分析

应用人及动物的基因组存在着高度可变的串联重复区域(小卫星DNA)具有高度多态性这一特点发展起来的DNA指纹技术,目前已在分子生物学研究的多个领域内获得了应用。本文研究的目的在于制备出两种来源丰富、使用方便、用于建立人及实验动物DNA指纹图的多位点探针—M13mp18噬菌体探针和寡聚核苷酸(GACA)_4探针。并用这两种探针对两种近交系小鼠的DNA指纹进行了初步研究。     

血卟啉衍生物不同途径给药并光照小鼠移植瘤的形态观察及DNA定量测定

用光镜、电镜和扫描图像分析仪,对比观察静脉注射与肿瘤局部注射血卟啉衍生物并光照,小鼠皮下型H_(22)肝癌细胞的形态学和DNA含量的改变。结果显示,两种给药法并光照对瘤细胞均有杀伤效应,后者更为显著。本实验为治疗某些体表肿瘤采用局部注药光照法,减少全身用药量和毒副作用提供了形态学依据。     

DNA探针的生物素标记试剂研究——Ⅱ.生物素化补骨脂素的合成和应用

4,5’,8-三甲基补骨脂素经三步反应合成了光生物素试剂——N,N’-二甲基-N-生物素酰-N’-(4’-亚甲基-4,5’,8-三甲基补骨脂素)-3,6-二氧-辛二胺(V)。(V)在光照下可与DNA探针中嘧啶环结合成生物素标记的DNA探针。     

DNA探针的生物素标记试剂研究——Ⅰ.生物素化2′-去氧核苷酸的合成和应用

5-[3-(生物素酰氨基己酰)-胺基]-丙烯基-2’-去氧-5’-三磷酸脲嘧啶核苷(VI)和5-[3-(生物素酰氨基己酰)-胺基]-丙烯基-2’-去氧-5’-三磷酸胞嘧啶核苷(Ⅶ)从d-CTP原料经四步反应合成。用(Ⅵ)和(Ⅶ)标记的生物素DNA探针已用于检测乙肝病毒,c-Myc基因和人类多瘤病毒等。     

白细胞介素-12和白细胞介素-18质粒对HBcAgDNA疫苗诱导小鼠(H-2d)体液免疫应答的影响

目的：观察编码白细胞介素（IL）－12和IL－18的真核表达载体[pcDNA3.1/IL-12(以下简称IL－12质粒）和pcDNA3.1/IL-18(以下简称IL－18质粒）]对HBcAg DNA疫苗（pJW4303/HBc)诱导BalB/c(H-2^d)小鼠免疫应答的影响。方法：肌肉注射接种IL－12质粒、IL－18质粒和HBcAg DNA疫苗，ELISA法检测小鼠血清抗HBc IgG亚类（IgGl,IgG2a)水平。结果：免疫6周后，联合注射IL－12、IL－18和IL－12＋IL－18组小鼠血清的抗HBc终点滴度均明显高于单纯注射HBcAg DNA疫苗组小鼠（P＜0．05），抗HBc IgG亚类以IgG2a占优。结论：IL－12、IL－18以及IL－12＋IL－18联合HBcAg DNA疫苗注射能够提高小鼠血清中抗HBc水平。     

HRP标记DNA探针的制备及杂交条件探讨

目的：用辣根过氧化物酶(HRP)直接标记DNA探针,并对其斑点杂交条件进行探讨。方法：以对苯醌(PBQ)氧化HRP使其产生活化位点,并与聚乙烯亚胺PEI缩合形成HRP-PBQ-PEI复合物,再以戊二醛连接DNA,共价结合构建直接酶标探针进行斑点杂交,利用HRP可与底物发生颜色反应的特点观察结果,并对不同杂交条件进行研究。结果：成功构建了HRP标记的DNA探针,并进行了斑点杂交反应,归纳出较好的杂交条件。结论：直接酶标DNA探针有较高的特异性及敏感性,操作简便快速,经济可行。     

鲤鱼精巢DNA对自然衰老小鼠体内抗氧化酶活性的影响

以自然衰老小鼠为实验对象,采用邻苯三酚自氧化法测定ＳＯＤ活性,紫外分光光度法测定ＣＡＴ活性,愈创木酚法测定ＰＯＤ活性,ＤＴＮＢ直接比色法测定ＧＳＨ－Ｐｘ活性,研究了鲤鱼精巢ＤＮＡ对老龄动物体内抗氧化酶活性的影响。结果表明,鲤鱼精巢ＤＮＡ可明显提高自然衰老小鼠体内抗氧化酶的活性。     

三代SMMC/B小鼠珠蛋白β肽链结构分析与遗传型比较

用脲解链-离子交换柱层析-凝胶过滤等程序,自纯化过的小鼠珠蛋白中分离纯化β肽链。并做酶解肽段混合物的层析与电泳双向分离,获得肽斑图谱。依图谱上肽斑的分布位置,确定遗传型。通过肽斑性质的比较,鉴别小鼠代间遗传差异。取βTp3肽斑,用DABITC/PITC双偶合微量顺序测定法,测定氨基酸顺序,比较β肽链基因遗传密码变异位点。分析结果表明,3代SMMC/B小鼠具相同遗传型和群体遗传纯一性。     

荧光定量PCR检测HBV DNA与HBV血清标志物的对比监测和分析

目的：探讨荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA与HBV血清免疫学标志物(HBVM)的相互关系。方法：801例血清标本采用ELISA方法对其免疫学标志物进行检测，并用实时荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测血清HBV DNA。结果：HBV DNA的总检出率为67.0％，在模式HBsAg( )，HBeAg( )，HBcAb( )中，HBV DNA的含量明显高于HBsAg( )，HBeAb( )，HBcAb( )及HBsAg( )，HBcAb( )模式。在HBsAg(-)模式中HBV DNA亦有检出。结论：HBVM能提供乙肝感染的间接证据，而荧光定量PCR法检测HBV DNA准确灵敏，能真实反映HBV感染、复制及病程变化，在乙型肝炎的诊断治疗中具有重要的临床指导价值。     

鲍曼不动杆菌多态性DNA指纹图与药敏谱对医院感染管理的指导作用

目的 建立鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)药敏谱及基因分型指纹图谱,探讨其对医院感染管理的指导作用.方法 收集2006年9月至2007年9月神经外科病房住院患者标本中分离的29株AB以及同年从该病房环境中分离的21株AB,以3个月为一期,采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对医院环境中AB和临床标本中分离的AB进行基因分型并建立DNA指纹图谱,同时结合WHO推荐的K-B法进行药敏试验,建立药敏谱,比较临床标本中AB与环境中分离的AB药敏谱与RAPD型间差异,判断相关性,并从中分析对医院感染管理的作用.结果 临床标本中AB的药敏谱及分型指纹图谱与环境中AB的药敏谱及分型指纹图谱呈现相关关系.29株临床分离的AB共分12种基因型,15种抗菌药物药敏谱分18个型;呈单一对应关系有10种,一对二的对应关系有2种;二对一的对应关系有一种.21株环境中分离的AB共分10种基因型,15种抗菌药物药敏谱分14个型;呈单一对应关系的有8种,一对二的对应关系的有3种,多株临床标本中AB与环境中AB具有同源性.结论 依据AB药敏谱及DNA分型指纹图谱对感染源的确定、防止耐药菌传播和制定一系列防治措施具有极为重要的指导意义.     

Morphological Observation and DNA Quantitative Analysis of Murine H_(22) Hepatoma after Injection of Hematoporphyrin Derivatives in Different Pathways and Light Irradiation

By means of light and electron microscopy and texture analysissystem, the morphologic changes and the content of DNA after injection ofhematoporphyrin derivatives (HPD) in different pathways and the lightirradiation on mice H_(22) hepatoma were observed. This study showed thatintravenous injection of HPD and local administration in the tumor andred-light irradiation could result in obvious injury of tumor cells, especiallythe tumor local injection and light irradiation. In order to reduce variousside-effects, tumor local injection and light irradiation may be used inclinical treatment. This article provides morphological basis for reference.     

替硝唑氯化钠注射液与二种注射用头孢菌素药物的配伍观察

目的根据药品配伍的要求，我们对替硝唑氯化钠与头孢类抗生素的配伍进行实验和观察。方法通过单药品、多种药品的配伍应用，观察在一定时间内的外观、pH酸碱度、吸收度等数个指标进行观察与分析。结果替硝唑氯化钠注射液与头孢唑啉钠注射液基本上无变化发生，认为可配伍使用。替硝唑氯化钠注射液与头孢拉定注射液在外观、DH酸碱度、吸收度上，发生了一些不同的变化，提醒临床医师和药品专业人员不应配伍使用。     

山茱萸醇提液对D-半乳糖致衰大鼠DNA损伤及糖基化终末产物形成的影响

目的研究不同剂量山茱萸醇提液对D-半乳糖致衰大鼠体内外周血淋巴细胞DNA损伤和糖基化终末产物(AGEs)形成的影响。方法大鼠随机分为青年组、衰老模型组、模型给药组。以D-半乳糖颈背注射6周制造大鼠衰老模型,模型给药组同时灌服大(5g/kg)、小剂量(2.5g/kg)山茱萸醇提液,测定青年、老年大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤、AR活性和胸主动脉、尾腱AGEs含量,同时观察不同剂量山茱萸醇提液对老年大鼠上述指标的影响。结果衰老大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤严重(P<0.01)、醛糖还原酶(AR)活性增高(P<0.01)、尾腱、胸主动脉AGE含量随龄增多(P<0.01)。山茱萸醇提液可减少外周血DNA损伤(P<0.01),降低AR活性(P<0.05,P<0.01)和抑制AGEs(P<0.01)形成。结论山茱萸醇提液可抑制体内糖基化终末产物形成、减少外周血淋巴细胞DNA损伤,具有抗衰老作用。