重组核心蛋白聚糖转染对HepG2细胞周期、凋亡以及P21表达的影响

目的将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖（DCN）真核表达载体转染到HepG2中并检测其表达同时研究其抗肿瘤作用的机制。方法脂质体介导分泌型DCN真核表达载体转染HepG2细胞，经G418筛选建立稳定转染的细胞株，采用RT-PCR、免疫组化检测其表达。MTT检测细胞增殖活力，流式细胞仪分析细胞周期，RT-PCR方法检测P21^WAF1/CIP1mRNA表达情况。结果RT-PCR可见转染组细胞DCNmRNA表达明显增多，免疫组化可见转染组细胞DCN蛋白表达明显增高。细胞生长曲线显示转染组细胞生长缓慢；G1期细胞显著增多；P21^WAF1/CIP1mRNA表达增高。结论本研究成功建立稳定转染DCN的HepG2细胞株，证实DCN通过阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡和提高P21^WAF1/CIP1蛋白抑制HepG2的生长。     

5-aza—dC和丁酸钠对人胃癌细胞株MKN28细胞周期、凋亡以及抑癌基因表达的影响

背景：表遗传修饰的主要方式DNA甲基化和组蛋白乙酰化是胃癌发生机制研究中的热点内容。目的：探讨表遗传学调控对人胃癌细胞株MKN28细胞周期、凋广以及抑癌基因Runx3、p21^WAF1表达的影响。方法：培养人胃癌细胞株MKN28,并分为5-氮-2’-脱氧胞苷（5-aza—dC）组、丁酸钠组、5-aza—dC＋丁酸钠组和对照组。以Annexin V—FITC／PI双染法检测细胞周期和凋亡,以逆转录聚合艏链反应（RT—PCR）检测Runx3、p21^WAF1 mRNA表达,以甲基化特异性PCR（MSP）检测Runx3基因启动于区甲基化状态。结果：与对照组相比,5-aza—dC对细胞周期无明显影响,丁酸钠可使细胞周期阻滞于G0／G1期（P〈0．05）;5-aza—dC组和丁酸钠组细胞凋亡率均显著增高（8．3％±1．3％、20．8％±2．4％对2．0％±0．5％,P〈0．05）5-aza—dC可诱导Runx3mRNA重新表达（P〈0．05）,但对p21^WAF1 mRNA表达无影响。丁酸钠可增强p21^WAF1 mRNA表达（P〈0．05）,但不能诱导Runx3 mRNA表达。联合5-aza—dC和丁酸钠可显著绣导细胞凋亡和增强抑癌基因Runx3、p21^WAF1Ⅲ mRNA表达（P〈0．05）．5-azgt—dC十预后,Runx3基因启动子区呈去甲基化状态：结论：去甲基化制剂5-aza-dC或组生白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠通过重新表达Runx3或增强p21^WAF1表达而诱导胃癌MKN28细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用。     

p21WAF1/CIP1与大肠癌的相关性研究概况

细胞周期正常有序完成,受控于精密的分子调控机制,细胞周期蛋白激酶抑制物(cyclin kinase inhibitor,CKI)在该机制中起重要作用,细胞增殖抑制基因p21WAF1/CIP1(wide-type p53-acfivateA factor 1,WAF1/cyclin-depedent kinase interact-ing protein 1,CIP1,下述p21概指p21WAF1/CIP1)是CKI所包含的双重组特异性家族(CIP/KIP)的代表[1,2],具有广泛细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)抑制活性,在细胞周期调控中起负调节作用,表达异常可致使细胞周期调节紊乱,而导致细胞增殖失控,引起肿瘤发生,研究显示,p21基因对大肠癌的发生、发展、转归及预后密切相关.本文将p21与大肠癌临床病理学特征及预后的相关性研究作一介绍.     

丙戊酸钠对Kasumi-1细胞株细胞周期的影响

目的 观察丙戊酸钠(VPA)对急性髓性白血病(AML)Kasumi-1细胞周期的影响,并探讨其分子机制.方法 将对数生长期Kasumi-1细胞1×105/ml(观察组)分别经1、2、3 mmol/L VPA处理3 d;对照组不加药.RT-PCR法检测VPA不同浓度及不同作用时间(3 mmol/L作用0、1、2、3d)细胞周期调节因子cyclinE1、p21WAF1/CIP1、p27KIP1 mRNA及p21WAF1/CIP1蛋白变化.结果 观察组cyclinE1 mRNA表达明显降低(P<0.05),p21WAF1/CIP1 mRNA及其蛋白表达明显升高(P<0.05),且均呈剂量、时间依赖性;p27KIP1 mRNA表达水平无明显变化.结论 VPA可通过对Kasumi-1细胞周期蛋白及周期蛋白依赖性激酶抑制剂的影响调节细胞周期,使细胞阻滞于G0/G1期;本研究可为急性白血病的治疗提供理论依据.     

p21基因转染人肝癌SMMC-7721 细胞对化疗药物敏感性的研究

目的探讨p21基因转染人肝癌SMMC-7721细胞（7721细胞）对化疗药物的敏感性，深入研究p21基因对肝癌细胞的治疗作用。方法应用磷酸钙介导p21基因转染人肝癌7721细胞；通过G418筛选稳定表达细胞株并扩大培养；采用MTT法检测肿瘤细胞增殖速度；流式细胞术检测细胞周期变化。结果经过3～4w G418筛选得到稳定表达的细胞株，p21基因稳定转染并联合化疗药物应用可明显抑制7721细胞的体外增殖，细胞周期明显改变，细胞从G1期到G2期发生阻滞。结论提示转染外源p21基因联合化疗药物可使7721细胞周期阻滞于G1期，并可抑制肿瘤细胞增殖。     

曲古菌素A对人胃癌细胞增殖和细胞周期的作用

目的 观察曲古菌素A(TSA)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖及细胞周期的影响,探讨其可能的机制.方法 TSA干预人胃癌SGC-7901细胞24 h后.采用四甲基偶氮唑盐法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期,实时PCR检测细胞周期素D1和p21 mRNA的表达情况.结果 经TSA干预24 h后,人胃癌SGC-7901细胞增殖受抑制,TSA 0.1、0.5和2.0μmol/L组抑制率分别为3.52%±6.11%、13.29%±4.13%和14.24%±2.80%;同时TSA 0.5μmol/L组(71.26%±0.51%)和TSA 2.0μmol/L组(71.03%±0.12%)的G0/Gl期细胞比例明显高于对照组(51.12%±1.17%);TSA 0.5μmol/L组(13.55%±0.44%)和TSA 2.0 μmol/L组(10.63%±0.63%)的S期细胞比例明显低于对照组(34.60%±0.60%).出现G0/G1细胞周期阻滞.TSA干预后细胞周期相关基因细胞周期素D1 mRNA表达下调和p21 mRNA表达上调.结论 TSA通过调控细胞周期相关基因细胞周期素D1和p21的表达,抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,引起G0/G1期细胞周期阻滞,最终影响肿瘤细胞的生长.     

丙戊酸钠对肝癌SMMC-7721细胞增殖和细胞周期的影响及机制

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、细胞周期及对p21WAF1/CIP1mRNA表达的影响.方法:实验分为空白对照组、PBS组、VPA0.2mmol/L组、VPA1.0mmol/L组和VPA5.0mmol/L组.不同浓度VPA干预人肝癌SMMC-7721细胞24h、48h和72h,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期;干预72h后,用Real-timePCR法检测VPA干预72h后p21WAF1/CIP1mRNA的表达情况.结果:与空白对照组及PBS组比较,不同浓度的VPA作用24h,48h及72h时组肝癌SMMC-7721细胞增殖均出现了不同程度抑制(请将具体数据列出来P<0.05),随着VPA药物浓度升高,细胞增殖抑制作用逐渐增强,随作用时间延长,抑制程度逐渐增强(P<0.05).随药物浓度升高,G1期细胞比例逐渐增多,S期细胞比例逐渐减少,细胞发生G0/G1期阻滞.VPA干预肝癌SMMC-7721细胞72h后,VPA组p21WAF/CIP1mRNA表达较空白对照组及PBS组表达明显升高(请将具体数据列出来P<0.01).结论:VPA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,且呈时间及剂量依赖性,并诱导出现G0/G1细胞周期阻滞,同时上调p21WAF1/CIP1mRNA的表达.     

PHB1对人肝癌细胞增殖的影响及其作用机制

目的探讨抗增殖蛋白1(prohibitin1,PHB1)对人肝癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法构建PHB1真核表达重组质粒(pEGFP-PHB1)和PHB1靶向siRNA质粒(shRNA-PHB1)转染人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721,诱导PHB1在人肝癌细胞中表达上调和下调,采用MTT、流式细胞学、荧光定量PCR和免疫印迹等技术检测人肝癌细胞增殖、细胞周期,以及细胞周期关键调控分子的表达情况。结果高表达PHB1可阻滞HepG2和SMMC-7721细胞于G0/G1期[(67.28±2.94)%比(56.71±2.56)%,t=6.64,P=0.00;(69.48±3.82)%比(60.43±2.59)%,t=4.80,P=0.00],使S期比例下降[(14.74±1.45)%比(24.13±1.92)%,t=9.54,P=0.00;(13.73±1.26)%比(25.50±2.30)%,t=10.99,P=0.00],抑制细胞增殖;周期调控分子p53和p21CIP1mRNA和蛋白质水平显著升高,而Cyclin A2、Cyclin E1和CDK2 mRNA和蛋白质水平显著降低(P0.01)。低表达PHB1可促使HepG2和SMMC-7721细胞趋于S期[(31.65±2.71)%比(24.68±1.28)%,t=5.69,P=0.00;(31.02±2.49)%比(25.88±2.40)%,t=3.64,P=0.005],促进细胞增殖;p53、p21CIP1、Cyclin A2、Cyclin E1、CDK2 mRNA和蛋白质水平与PHB1高表达时相反(P0.01)。结论高表达PHB1可以阻滞人肝癌细胞周期于G0/G1期,进而抑制细胞增殖,其作用机制可能与p53介导的G0/G1期相关细胞周期蛋白有关。     

曲古菌素A对食管癌EC1细胞增殖和细胞周期的影响及其分子机制

目的:探讨不同浓度曲古菌素A对食管癌细胞系EC1 细胞增殖、细胞周期的影响及其对细胞周期调控基因p21 WAF1/CIP1 表达的影响. 方法:用0.3,0.5,1.0 μmol/L 的TSA 处理EC1 细胞,MTT 检测TSA 作用24 、48 h 对EC1 细胞的抑制作用,流式细胞仪检测0.3,0.5,1.0 μmol/L 的TSA 作用24 h 后EC1 细胞周期的改变,Western blot 法检测p21 WAF1/CIP1 变化. 结果:TSA 在0.5 μmol/L 以上时对EC1 细胞有抑制作用;0.3 μmol/L TSA 处理细胞后细胞周期与对照组相比,无明显变化;0.5 μmol/L TSA 处理EC1 细胞后,G0/G1期细胞较对照组明显增加,S 期细胞较对照组明显减少(74.56% ±1.34% vs 62.12%±0.52%;14.52%±1.81% vs 27.50%±0.66%,均P <0.05);0.5,1.0 μmol/L TSA 处理细胞后p21 WAF1/CIP1 表达明显增加(均P<0.05). 结论:一定浓度的TSA 对人食管癌细胞EC 具有的增殖抑制作用,引起EC1 细胞发生G0/G1 期阻滞,其部分机制与p21 WAF1/CIP1 上调有关.     

RNA干扰沉默基质交感分子1基因后对血管平滑肌细胞周期的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默基质交感分子1基因后对血管平滑肌细胞周期的影响。方法原代培养血管平滑肌细胞,用构建好的大鼠基质交感分子1干扰腺病毒载体和人重组基质交感分子1腺病毒载体进行转染,Western blot检测细胞基质交感分子1、p21和pRb表达,流式细胞仪测定细胞周期。结果大鼠基质交感分子1干扰腺病毒载体转染后48h细胞基质交感分子1表达与转染对照腺病毒载体比较明显降低(P<0.05),处于G0/G1细胞比例也明显增多(P<0.05),p21表达上调,pRb表达下调(P<0.05);人重组基质交感分子1腺病毒载体共转染后48h细胞基质交感分子1表达恢复到正常水平;G0/M细胞比例、p21和pRb表达恢复到正常水平。结论基质交感分子1基因沉默上调p21表达,下调pRb表达,抑制细胞进入S期,进而参与对血管平滑肌细胞增殖的调控。     

反义RNA对胃癌细胞MT1-MMP基因表达和侵袭性的抑制作用

目的:膜研究膜型-1基质金属蛋白酶(MT1- MMP)反义RNA对人胃癌细胞BGC823靶基因表达和侵袭特性的影响方法:利用基因重组技术构建人MT1-MMP反义RNA真核表达载体,转染人胃癌细胞BGC823,应用RT-PCR、MTT、明胶酶谱和体外侵袭实验等方法观察人胃癌细胞BGC823转染前后,MT1-MMP mRNA表达水平、细胞生长、明教酶A活性及细胞体外侵袭能力等指标的变化.结果:成功构建了MT1-MMP反义RNA真核表达载体pasMMP14,将其转染胃癌细胞BGC823后,与阴性对照组相比,实验组MT1- MMP mRNA表达水平降低,抑制率为36%.转染48 h,明教酶A的活化受到了明显抑制.转染72 h,细胞增殖明显受抑(t=2.358,P<0.01 vs空白组:t=2.727 P<0.01 vs阴性组).实验组的穿膜细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组(t=5.744,P<0.01;t=5.695,P<0.01).结论:反义RNA对人胃癌细胞MT1-MMP基因表达和侵袭能力具有明显的抑制作用,MT1-MMP基因可作为胃癌抗侵袭治疗的分子靶点.     

携带BARF1基因的人胃上皮细胞株的建立

目的建立携带BARF1基因的人胃上皮细胞株,为探讨EB病毒编码BARF1基因对胃上皮细胞的影响而建立体外模型。方法构建携带BARF1基因的真核载体pcDNA3.1（＋）-his/BARF1,转染人胃上皮细胞系GES-1,G418筛选单克隆。用CCK-8检测未转染的GES-1、转染空载体GES-1及转染BARF1基因的GES-1增殖状况。结果双酶切鉴定,666bp的BARF1基因片段已连接到真核表达载体pcDNA3.1（＋）-his。转染细胞通过G418筛选,获得了稳定表达BARF1基因的人胃上皮细胞株,转染BARF1基因的GES-1细胞增殖速度显著高于未转染的GES-1和转染空载体GES-1细胞（P〈0.01）。结论建立了稳定表达BARF1基因的人胃上皮细胞株。     

PSME1基因对人胃腺癌细胞株SGC-7901生物学特性的影响

背景:PSME1基因编码蛋白PA28α是26S蛋白酶体的重要组成部分,研究显示其在多种人类恶性肿瘤中表达下调,可能影响肿瘤细胞的生物学特性。目的:探讨PSME1基因对胃癌细胞恶性表型相关生物学特性的影响。方法:将PSME1基因克隆入pcDNA3.1载体,构建PC-PSME1表达载体,以脂质体法转染人胃腺癌细胞株SGC-7901,筛选并鉴定稳定转染细胞株SGC-PSME1。以生长曲线法、克隆形成实验、流式细胞术和细胞迁徙/侵袭实验分析SGC-PSME1细胞株的生长、增殖、细胞周期、细胞凋亡和侵袭转移情况。结果:与转染空载体的SGC-PC细胞和空白对照组SGC-7901细胞相比,SGC-PSME1细胞的生长速度和克隆形成率降低,G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低,细胞凋亡率增高,差异均有统计学意义(P0.05);SGC-PSME1细胞的迁徙率与两对照组相比无明显差异。结论:PSME1基因对抑制胃癌细胞的恶性表型有一定意义。其可抑制胃癌细胞的生长、增殖,同时影响细胞周期,对细胞的侵袭转移能力可能无明显影响。     

hPOT1 RNA干扰对人胃癌BGC823细胞突变型p53表达的影响

目的通过RNA干扰技术抑制人胃癌细胞BGC823中人端粒保护蛋白（human protection of telomeresl，hPOTl）的表达，观察hPOTl RNA干扰对胃癌BGC823细胞突变型p53基因转录水平的影响。方法从hPOTl编码区外显子8的区域选取一段19个碱基的序列gtactagaagcctatctca为RNA干扰靶向序列，构建hPOTl的RNA干扰真核表达载体，转人体外培养的低分化人胃癌细胞BGC823，提取细胞总RNA，半定量RT-PCR检测hPOTl和突变型p53基因mRNA表达水平的改变，验证hPOTlRNA干扰载体的基因沉默效率，了解抑制hPOTl表达后突变型p53基因mRNA水平的改变。结果经DNA测序鉴定，hPOTlRNA干扰载体包含干扰序列的插入片段，插入位置正确。经半定量RT-PCR鉴定，RNA干扰组细胞的hPOTl mRNA表达水平明显下调，基因沉默效率在70％左右；突变型p53表达下调。结论通过RNA干扰技术抑制人胃癌细胞BGC823中hPOTl表达后，突变型p53表达下调，提示hPOTl与突变型p53之间有一定的相关性。     

15-LOX-1基因表达对胃癌细胞增殖的抑制作用

目的研究15-LOX-1基因对人胃癌细胞增殖的影响。方法通过脂质体介导瞬时转染15-LOX-1基因于培养的胃癌细胞株（AGS）中，以转染空载体pcDNA3．1（＋）的细胞及未转染质粒的细胞作为对照；用RT—PCR和Westernblot检测人胃癌细胞的15-LOX-1mRNA及蛋白表达；倒置显微镜观察转染前后AGS形态变化；用MTT法比较转染前后AGS的增殖水平，流式细胞术检测转染后AGS细胞周期的变化。结果胃癌细胞系巾未检测到15-LOX—1mRNA和蛋白的表达，转染后的AGS表达有15-LOX—1的mRNA及蛋白。转染重组质粒绀细胞增殖显著低于未转染组及空质粒转染组（P〈0．05），转染后AGS细胞G0／G1期细胞明显增加，S期细胞明显减少，与未转染组及空质粒转染组相比均有显著性差异（P〈0．05）。结论15-LOX-1基因能抑制胃癌细胞的增殖，为进一步探讨胃痛的发病机制及治疗提供实验依据。     

P21对胃癌细胞MGC-803的增殖抑制及对POLD1基因表达的调控

目的:研究P21对POLD1基因的调控通路,以探索阻断癌细胞恶性增殖的机制.方法:实验主要分3组:阴性对照组(转染空载体pXJ41-neo的803-pXJ细胞)、空白对照组(胃癌细胞MGC-803)、实验组(转染P21重组真核表达质粒pXJ41-p21的803-p21细胞).MTT实验分析细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR技术检测基因表达水平的变化,Westernblot分析蛋白表达差异.结果:MTT实验显示,与空白对照和阴性对照组相比,实验组细胞增殖受到明显抑制,凋亡率(%)增高(11.36±0.51vs7.39±0.17,7.69±0.47,F=85.338,均P<0.05).实验组P21mRNA表达水平显著提高(2.15±0.23vs1.05±0.11,1.00±0.00,F=59.054,均P<0.05),POLD1则显著下调(0.45±0.07vs1.09±0.13,1.00±0.00,F=49.907,均P<0.05);P21、P125蛋白表达变化与基因变化相一致.cyclinE、Rb1基因表达均上调,CDK2基因表达下调,c-myc基因表达则变化不大.结论:P21抑制了...     

Effects of allitridi on cell cycle arrest of human gastric cancer cells

AIM: To determine the effect of allitridi on cell cycle of human gastric cancer (HGC) cell lines MGC803 and SGC7901 and its possible mechanism. METHODS: Trypan blue dye exclusion was used to evaluate the proliferation, inhibition of cells and damages of these cells were detected with electron microscope. Flow cytometry and cell mitotic index were used to analyze the change of cell cycle, immunohistochemistry, and RTPCR was used to examine expression of the p21~(WAF1) gene. RESULTS: MGC803 cell growth was inhibited by allitridi with 24 h IC_(50) being 6.4 μg/mL. SGC7901 cell growth was also inhibited by allitridi with 24 h IC_(50) being 7.3 μg/mL After being treated with allitridi at the concentration of 12 μg/mL for 24 h, cells were found to have direct cytotoxic effects, including broken cellular membrane, swollen and vesiculated mitochondria and rough endoplasmic reticula, and mass lipid droplet. When cells were treated with allitridi at the concentration of 3, 6, and 9 μg/mL for 24 h, the percentage of G_0/G_1 phase cells was decreased and that of G_2/M phase cells was significantly increased (P=0.002) compared with those in the group. When cells were treated with allitridi at the concentration of 6 μg/mL, cell mitotic index was much higher (P=0.003) than that of control group, indicating that allitridi could cause gastric cancer cell arrest in M phase. Besides, the expression levels of p21~(WAF1)gene of MGC803 cells and p21~(WAF1) gene of SGC7901 cells were remarkably upregulated after treatment. CONCLUSION: Allitridi can cause gastric cancer cell arrest in M phase, and this may be one of the mechanisms for inhibiting cell proliferation. Effect of allitridi on cells in M phase may be associated with the upregulation of p21~(WAF1) genes. This study provides experimental data for clinical use of allitridi in the treatment of gastric carcinoma.     

ANGPTL2 expression in gastric cancer tissues and cells and its biological behavior

AIM To explore expression of angiopoietin-like protein 2(ANGpT L2) and its effect on biological behavior such as proliferation and invasiveness in gastric cancer. METHODS Western blotting was used to detect expression of ANGp TL2 in 60 human normal gastric tissues, 60 human gastric cancer tissues and gastric cell lines including GES-1, N87, SGC7901, BGC823 and pA MC82. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) and Transwell assay were used to detect the proliferation and invasive ability of gastric cancer cells. RESULTS Compared to normal tissues, ANGp TL2 protein levels were significantly upregulated in gastric tissues, and this level was closely correlated with gastric tumor grade, clinical stage and lymph node metastasis. Compared to GES-1 cells, ANGpT L2 mR NA and protein levels were significantly increased in gastric cancer cells including N87, SGC7901, BGC823 and p AMC82. The expression of ANGpT L2 in highly malignant gastric cancer cell lines BGC823 and pA MC82 was significantly higher than in low malignancy gastric cancer cell lines N87 and SGC7901. MTT and Transwell experiments indicated that the proliferation rate and invasive ability of stable overexpressed gastric cancer cells was faster than in cells transfected with Lv-NC and blank controlcells, and the invasive ability of stable overexpressed gastric cancer cells was higher than that of cells transfected with Lv-NC and blank control cells.CONCLUSION ANGp TL2 contributed to proliferation and invasion of gastric cancer cells. In clinical treatment, ANGpT L2 may become a new target for treatment of gastric cancer.