贴壁培养细胞胶体金免疫电镜标本制备技术的改进

介绍一种贴壁培养细胞胶体金免疫电镜标本制备方法,本法适用于观察各种因素对细胞表面抗原性质影响的免疫电镜研究。     

乙型肝炎病毒抗原快速免疫电镜检测法

自从Blumberg发现乙型肝炎(下称乙肝)抗原后,Bayer首先用电镜观察到免疫扩散法阳性血清标本中有病毒样颗粒。随后zalan曾用电镜直接观察在临床和生化方面符合乙肝诊断的病人血清,发现有三种病毒样颗粒。Dane氏进一步用免疫电镜观察了16例免疫扩散法阳性的乙肝抗原血清标本,并认为大球形颗粒可能为乙肝病原。但常规免疫电镜所用的标本,均需经超速离心处理,且需时较久(24小时以上)。以后Mey—     

阴道毛滴虫标本制作的一种改良方法

本文报导染制阴道毛滴虫标本的一种改良方法。本法系先采取纯培养推片,再用姬姆萨—瑞氏混合染液染色。其优点在于同一时期内可获取大批的、形态结构清晰的阴道毛滴虫标本,可供教学和科研需用。本法也可用于杜氏利什曼原虫前鞭毛体的标本制作,同样取得好的效果。     

人脐血造血祖细胞与脐血浆依赖性的研究

人脐带血与骨髓、外周血干祖细胞生物学特性虽基本相同,但同时也存在一些不同的特性。通过造血祖细胞体外半固体培养发现3种不同来源的粒系祖细胞(CFU—GM)体外生长所需条件不同。骨髓和外周血CFU—GM培养需要外源细胞生长因子GM—CSF存在。脐血CFU—GM培养仅需要脐血浆单独存在即可获得较高的集落产率。揭示了脐血浆中存在一种脐血祖细胞依赖的成分。它不同于GM—CSF,也可能不是GM—CSF协同因子,尚待进一步探讨。此外,提出了一个脐血粒系祖细胞体外培养简便易行的培养体系。     

阿糖胞苷对体外CFU—GM增殖的影响

本文用体外琼脂培养法检测了抗肿瘤药物阿糖胞苷对正常小鼠粒、单系定向造血祖细胞(CFU—GM)增殖的影响。结果显示:10μg/ml浓度的阿糖胞苷即能明显抑制CFU—GM的产率,CFU—GM的自杀率为32.55％;当阿糖胞苷浓度增至20μg/ml时,CFU—GM产率进一步下降,自杀率增至50.55％;再增加药物浓度,CFU—GM的产率和自杀率不再随之改变。结果提示:低浓度的阿糖胞苷即能明显抑制CFU—GM的产率,降低其存活率,是其在临床肿瘤的化疗中导致外周血粒细胞或单核细胞减少的直接原因。此外,可以利用阿糖胞苷作为细胞毒剂,用于检测CFU—GM的自杀率。     

扫描电镜生物标本的一种新干燥方法—叔丁醇冻干法

对于含水份多的生物样品进行彻底脱水与干燥处理,是电镜标本制作过程中的关键环节。标本干燥通常采用的是临界点干燥法。本法存在人为假象的问题,而且所需干燥仪器又特殊昂贵。最近我们成功地对生物标本在脱水过程中进行了中间溶剂的变换实验。结果发现:叔丁醇是最有效和最合适的有机溶剂,且挥发性极好,仅需一个真空泵,而无需特殊仪器,故成本低廉。     

人脐血粒单系及成纤维系祖细胞的体外培养

采用体外单层半固体琼脂培养法及液体培养法检测了脐血中CFU—GM和CFU－F，并与成人骨髓和外周血对照。结果显示：脐血培养7dCFU－GM产率约相当于成人外周血的5～6倍，但低于骨髓；培养14d的产率略高于骨髓，与骨髓培养7d结果相比无统计学差异；脐血中CFU－GM的集落大小、细胞构成明显不同于成人外周血及骨髓；脐血中可培养出CFU—F，但产率仅为骨髓的1／5，而外周血中则无CFU－F形成。提示人脐血富含造血祖细胞，且有不同于骨髓及外周血的性质。     

肺泡灌洗液与血清GM试验在侵袭性肺曲霉菌病中的诊断判定评价

目的 分析支气管肺泡灌洗液(BALF)与血清两种GM实验检测标本对于侵袭性肺曲霉菌病(IPA)早期诊断的价值.方法 收集拟诊肺部真菌感染住院患者374例,所有患者均接受血清GM试验、肺泡灌洗液(BALF)真菌培养及GM试验检查.通过分析GM试验的检测结果,比较两种标本对侵袭性肺曲霉菌病(IPA)的诊断价值.结果 374...     

组胺受体激动剂和拮抗剂对粒单系祖细胞增殖的影响

用体外琼脂培养法研究了2-噻唑乙胺、dimaprit及甲氰咪胍对小鼠CFU—GM产率的影响。结果表明:10~(-8)M～10~(-4)M的2-噻唑乙胺不影响CFU—GM产率,而10~(-8)M的dimaprit即可明显增加CFU—GM产率。此作用随剂量的递增而加强,至10~(-5)M时,增至最大值,此后不再增高。单用甲氰咪胍不影响CFU—GM产率,但伍用dimaprit时,甲氰咪胍阻断dimaprit的上述作用;二者对CFU—GM产率的影响呈现竞争现象。分析了该结果的理论意义和临床意义。     

正常人及常见血液病骨髓粒系祖细胞体外软琼脂培养实验观察

<正> 近年来,造血细胞培养技术逐渐应用于临床,对于造血系统疾患的研究起了很大的推动作用。本文采用体外软琼脂培养法对正常人和常见血液病患者的骨髓粒系祖细胞CFU—GM进行培养,观察其生长规律,藉以了解其临床意义。一、骨髓来源骨髓标本采自健康医务人员共20人。男13人,女7人。年龄20—42岁,平均年龄24岁。血液病患者38例。其中再生障碍性贫血(简称再障)19例,骨髓增生性全血细胞减少7例,粒细胞减少12例。     

电镜标本快速微波聚合法的改进

目前,电镜技术已越来越多地应用于临床病理诊断,但传统电镜标本制备方法周期较长,不能满足临床病理诊断的需要。微波法处理电镜标本可以大大缩短电镜标本的制备时间,但由于各家医院采用的微波炉型号与功率的不同,微波制备方法尚未统一,我们根据现有科室的实验条件,经过长期实验对比,对电镜标本快速微波聚合法进行了改进,不仅提高了工作效率和质量,也方便临床和病人。     

介绍一种免疫电镜标本定位方法

免疫电镜标本制备方法有:组织块免疫染色法,冰冻切片免疫染色法,超薄冰冻切片法。其中以冰冻切片法最常用,免疫电镜成功与否受很多因素影响,标本块的定位十分重要。国外多用半簿切片定位,即先切一、二张0.5～2μ的大面积切片,在光学显微镜观察,找出免疫酶反应部位。然后将标本与切片对照,进行修块,再制超薄切片。最近我们开展对免疫电镜研究,发现用上法对冰冻切片免疫染色的电镜标本定位不     

用微分原理求K_D的新方法

本文报道一种新的求K_D的实验方法(简称微分法)。本法公式是根据药物—受体相互作用的占领学说,用数学方法推导而的。只需用药物的两个不同浓度,做两根单收缩曲线。在同一大白鼠左侧离体输精管标本上,用该法先后求得重酒石酸去甲肾上腺素的两个K_D值,也用累积剂量一效应曲线法简称累积法求得两个;共17个标本,各求得17对K_D值。两方法先后四次实验所求得的K_D均值之间,除累积法第二次的均值分别与微分法先后两次均值相比,差别显著外,其余均不显著。经方差齐性检验,本法17对K_D值的变异,显著小于累积法。本法不仅操作、计算简便,重现性好,精密度高,而且求得的K_D值也与累积法相符。     

小鼠粒-单系祖细胞体外培养的透射电镜观察

用液体法培养了C_(57)BL/6J小鼠CFU—GM,并对其进行透射电镜观察,发现在2～6天培养时间内各期集落的细胞组成不同,CFU—GM在体外发育过程中细胞核、线粒体、粗面内质网、游离核糖体、高尔基复合体.糖原颗粒及颗粒的发育有特征性变化,与体内的成熟规律有些差异。同时讨论了粒系细胞与单系细胞的区别.     

人骨髓、胎肝GM-CFU体外微量培养观察

我们在GM—CFU传统体外琼脂培养(简称全量法)基础上,参照葛忠良等建立的GM—CFC体外微量法(筒称微量法),对“正常人”骨髓及3.5～5个月胎龄的胎肝细胞悬液各9例进行了GM—CFU体外微量琼脂培养。“正常人”骨髓取自本院胸科手术中切除的肋骨,半小时内将骨髓细胞挤压在RPMI1640液,用吸管打散,过7号及41/2号针头后以2000r/min离心10min。弃上清,加适量RPMI1640液打散,淋巴细胞分层液(比重1.077)4ml的离心管内加上骨髓细胞分层以1700r/min离心25min.     

系统性红斑狼疮血清对树突状细胞诱导作用的时间相关性

目的：研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLF)血清诱导正常单核细胞(Monoeyte，Mo)向树突状细胞(Dendritic cells，DC)分化的时间相关性。方法：分离正常人单核细胞，分别以GM—CSF／IL-4系统和正常人血清(Normal serum)系统以及SLE患者血清(SLE serum)系统诱导培养，在培养的第3、5和第7天收集细胞。流式细胞术检测HLA—DR和CD80，混合淋巴细胞反应检测其功能。结果：诱导培养的第3天SLE血清组可见大量细胞集落，电镜下观察呈典型树突状形态；GM—CSF／IL-4组第4天亦可见大量集落；正常血清组始终无集落形成。HIA—DR在GM—CSF／IL-4系统中始终高表达，CD80随LPS的刺激而升高。正常血清中HLA—DR和CD80始终低表达。SLE患者血清中HLA—DR中等程度表达，CD80在第5天升高达中等程度表达并维持至第7天。MLR显示SLE患者血清组的SI在第5天升高，然而第7天明显下降。结论：SLE血清可以诱导正常单核细胞分化为DC，其功能状态与培养时间呈一定的相关性。     

小鼠粒-单系祖细胞体外培养的扫描电镜观察

用液体法培养了小鼠的GFU—GM,并对培养不同时间的集落细胞进行扫描电镜观察。CFU—GM在分化成熟过程中有如下特点:(1)粒系细胞集落细胞表面由粗糙变光滑,主要变化在其表面的微绒毛。(2)单系细胞集落在培养早期成团,细胞表面光滑,4天后变粗糙,形状由规则变成多形性,由大小均匀至大小不一;培养中期有伪足形成.(3)同一集落位于中心的细胞较周边细胞幼稚.同时还发现粒细胞集落基底多存在一个贴壁细胞.     

四种细胞因子组合从小鼠骨髓细胞体外诱导优势不成熟CD8a＋DC

【目的】探索从小鼠骨髓细胞体外诱导大量优势不成熟CD8a＋DC（DC2）的新方法。【方法】取小鼠骨髓细胞，采用GM—CSF5ng／mL，IL-420ng／mL，Fh3L25ng／mL，SCF100ng／mL4种细胞因子组合，37℃，5％CO2体外培养诱导。第3、7、16天流式细胞术4色荧光标记法分析细胞表型，细胞计数分析总细胞产量，采用电镜、免疫荧光及相差摄影观察细胞形态。【结果】小鼠骨髓细胞经GM—CSF＋IL-4＋Flt3L＋SCF诱导第3天在CDllc＋的DC细胞群中可产生97．09％的CD8a＋优势DC2细胞（占总细胞的34．6％），其中CD8a＋MHCⅡ-的不成熟DC占61．77％：随培养时间延长比例下降．但培养第16天时CD8a＋的不成熟DC仍占优势。总细胞计数分析显示随培养时间延长，细胞总数下降。电镜、免疫荧光及相差摄影等形态学检查显示所诱导的DC呈现典型树突状形态特征。【结论】GM—CSF＋IL-4＋Fh3L＋SCF可以体外快速诱导小鼠骨髓细胞产生大量优势不成熟CD8a＋DC．是体外制备不成熟DC2的一种较好的新方法。     

检测血清半乳甘露聚糖对肾移植术后侵袭性肺曲霉病的诊断价值

目的探讨检测血清曲霉半乳甘露聚糖(GM)抗原对肾移植术后侵袭性肺曲霉病的诊断价值。方法对31例肾移植术后合并肺部感染且对广谱抗生素治疗效果不佳的患者,每周采集血液标本2次进行GM试验,共测定标本92份。GM检测采用双夹心酶联免疫吸附法。对GM试验阳性的患者给予伊曲康唑或伏立康唑抢先抗曲霉治疗。结果31例患者中11例GM试验阳性(35.5%)。GM阳性的11例中,7例确诊为侵袭性肺曲霉病。9例GM试验阳性的患者完成针对曲霉病的抢先治疗,7例有效,2例无效死亡。结论检测血清GM抗原可作为早期诊断肾移植术后侵袭性肺曲霉病的一种有效方法。     

痰液标本不同检测方法对结核杆菌检测比较

目的比较不同检测方法检测痰液标本结核分支杆菌的检测效果,为检测方法的选择提供参考。方法60份拟诊为肺结核患者的痰液标本分别用涂片抗酸染色法、结核分支杆菌培养法和荧光定量法（RT—PCR）检测,分析三种检测方法的检出率、检测时间及检测成本。结果RT—PCR检出率为95．0％,菌培养法检出率为70．0％,染色法检出率为55．0％。RT-PCR检出率高于菌培养法及染色法;菌培养法检出率高于染色法,染色法检出时间低于菌培养法及RT-PCR法,且检测成本低于菌培养法及RT—PCR法;RT—PCR法检出时间低于菌培养法,但检出成本高于菌培养法。结论不同的检测方法痰液结核分支杆菌的检测效果存在差异,应依据临床用途选择应用。