CIK细胞对A549肺癌细胞株的抗增殖及诱导凋亡作用的形态学研究

目的 研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对A549肺癌细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用.方法 应用MTT法检测CIK细胞对肺癌细胞株的抗增殖作用的影响及细胞毒活性;通过倒置显微镜、HE染色、AO/EB荧光染色、透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变.结果 MTT比色法表明随着CIK细胞与肺癌细胞效靶比增加及作用时间延长,抑制率明显增强(P<0.01).CIK细胞作用于肺癌细胞24 h后,形态学观察肺癌细胞发生凋亡或坏死.结论 体外制备的CIK细胞对肺癌A549细胞具有抑制增殖和促进凋亡作用.     

鲨鱼软骨抽提物诱导人胃癌细胞凋亡并下调Bcl-2表达

目的：探讨鲨鱼软骨抽提物(SCP)诱导人胃癌MGC80—3细胞调亡的作用机制。方法：以不同浓度SCP加入体外培养的MGC80—3细胞中，用MTT比色法检测细胞存活率；Hoeehst33342／PI荧光染色，荧光显微镜分析凋亡细胞百分率；流式细胞术进行细胞凋亡定量；琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带；免疫细胞化学染色法检测Bel-2蛋白的表达。结果：SCP明显抑制(MGC80—3细胞生长，IC50值为1mg／ml；荧光显微镜下可见60％以上细胞为凋亡细胞的形态学改变；琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带(DNA ladder)；免疫细胞化学检测显示Bcl-2表达明显降低。结论：SCP诱导人胃癌MGC80—3细胞凋亡，其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白的表达水平有关。     

CIK细胞对乳腺癌细胞株ZK-75-1的杀伤作用及其机制

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cyto-kine-inducedkillingcells,CIK)对乳腺癌细胞株ZK-75-1的杀伤作用,并探讨其作用机制。方法通过HE染色观察凋亡细胞ZK-75-1的形态学改变。应用TUNEL(TdT-mediateddUTPnickendlabeling)法检测CIK细胞的凋亡。通过免疫细胞化学染色法检测ZK-75-1细胞中p53、p16、C-myc、Bcl-2及Bax的表达率。结果HE染色显示,CIK细胞向ZK-75-1细胞靠近,形成典型的玫瑰花环状;肿瘤细胞的胞浆中出现颗粒状物,有的肿瘤细胞只见颗粒状碎片;而作为对照的乳腺癌细胞生长良好。TUNEL法检测显示,对照组细胞未染色或染呈均匀的淡蓝色;实验组凋亡的细胞缩小,核或核周染呈深蓝色。CIK细胞作用4~12hZK-75-1细胞的凋亡率上升,作用12~24h细胞的凋亡率下降,与对照组相比较有统计学意义(P<0.01)。免疫细胞化学染色的结果表明,CIK细胞实验组p53、p16、C-myc及Bcl-2蛋白随作用时间的延长均下降,Bax蛋白的表达上调,与对照组相比较均有统计学意义(P<0.01)。结论CIK细胞对乳腺癌细胞ZK-75-1杀伤作用的机制之一,可能与p53、p16、C-myc、Bcl-2蛋白表达的下调及Bax蛋白表达的上调有关,并与CIK细胞作用的时间关系密切。     

佛波酯处理人胃癌MGC80-3细胞过程中磷酯酶C-γ2的意义

目的 探讨佛波酯(TPA)处理人胃癌MGC80-3细胞过程中磷酯酶C-γ2(PLC-γ2)的意义.方法 通过DAPI染色,荧光显微镜观察分析TPA对胃癌MGC80-3细胞的影响;借助核浆分离手段获得胃癌细胞核浆蛋白,并通过免疫印迹(Western blotting)检测TPA对PLC-γ2蛋白表达水平影响;通过免疫荧光技术处理,激光扫描共焦显微镜观察胃癌细胞内PLC-γ2蛋白的定位和转运;用PLC-γ2的抑制剂(U73122)预处理细胞,免疫印迹和激光扫描共焦显微镜分别检测其对TPA作用胃癌细胞内PLC-γ2的影响;以及荧光显微镜下观察分析U73122是否影响TPA对胃癌细胞的作用.结果 TPA诱导胃癌MGC80-3细胞凋亡;同时TPA提高PLC-γ2蛋白表达水平,并诱导其发生核浆转运;其抑制剂(U73122)可以降低TPA对PLC-γ2蛋白表达水平的作用,但并不能影响TPA诱导胃癌细胞凋亡;而TPA诱导的PLC-γ2核浆转运却没有被PLC-γ2抑制剂(U73122)阻止.结论 尽管TPA提高了胃癌MGC80-3细胞中PLC-γ2表达水平,但PLC-γ2表达水平和TPA诱导的胃癌MGC80-3凋亡没有直接关系,而其核浆转运可能与TPA诱导的胃癌细胞凋亡相关.     

IL-6+CD3AK细胞对MGC-803胃癌细胞株杀伤作用的体外实验研究

目的 :培育杀伤效应更强的肿瘤杀伤细胞。方法 :IL 6 +CD3AK细胞是用人外周血单个核细胞加rIL 6、rIL 2、CD3单抗制备的 ;靶细胞用MGC 80 3胃癌细胞株。效应细胞分 5组 ,每一组又按效靶比例分 4组 ,到培养第 2 4小时和 4 8小时检测各组癌细胞的死亡情况。用四唑盐 (MTT)比色法、台盼蓝排斥法检测死亡的癌细胞 ;并用各种显微镜观察肿瘤杀伤细胞杀伤靶细胞的形态变化。结果 :显示rIL 6 +CD3AK细胞组杀伤癌细胞效应比其他组强 (P <0 0 5 ) ;随效靶比例的增加和作用时间的延长 ,杀伤效应出现增强趋势。在光镜下观察到肿瘤杀伤细胞围绕癌细胞形成玫瑰花结样结构 ,在扫描电镜下观察到肿瘤杀伤细胞和靶细胞的微绒毛呈犬牙交错状结合 ,随着时间的延长 ,靶细胞表面的微绒毛逐渐变短消失 ,核膜表面出现众多孔洞 ,以至靶细胞碎裂死亡。结论 :IL 6 +CD3AK细胞对胃癌细胞的杀伤力强于LAK(只加rIL 2 )细胞。     

槲皮素抑制人胃癌MGC-803细胞增殖并诱导其凋亡的研究

目的:研究槲皮素抑制人胃癌MGC803细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法:采用MTT比色法检测不同终浓度的槲皮素对MGC803细胞增殖的影响及其细胞毒活性。应用TUNEL(TdTmediateddUTPnickendlabeling)染色法检测槲皮素诱导MGC803细胞凋亡的作用。用免疫组化法测定P16、P53和Cmyc的表达率。结果:在40～100μmol/L范围内,槲皮素可显著抑制MGC803细胞增殖(P<0.01),且呈剂量、时间依赖性。TUNEL染色显示,槲皮素诱导48h后,MGC803细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。免疫组化检测表明,用药组P53及Cmyc蛋白的表达下降,P16蛋白的表达率增强,与对照组相比较均有显著性差异(P<0.01)。结论:槲皮素可抑制人胃癌MGC803细胞增殖,并能诱导其凋亡,其作用机制可能与下调P53及Cmyc蛋白的表达、上调P16蛋白的表达有关。     

乙型肝炎病毒X和p53对肝癌细胞生长的影响

目的　探讨乙型肝炎病毒X(HBx)基因与p5 3在损伤情况下的相互作用及对肝癌细胞生长的影响及作用机制。方法　通过构建正义及反义野生型 (wt)p5 3 ,与HBx分别单转染或共转染含wtp5 3 ( + )、HBV( - )的人肝癌细胞株SMMU 772 1细胞 ,在吡柔比星的诱导下 ,用流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响 ,及HBx对细胞周期的影响 ,并通过检测含p5 3结合位点p2 1Waf1启动子荧光素酶活性来观察HBx是否通过p5 3影响p2 1Waf1的表达 ,以及绘制细胞生长曲线观察HBx对SMMU 772 1细胞生长的影响。结果　在吡柔比星的诱导下 ,HBx能够促进细胞凋亡 ,转染空载体组及pcDNA3HBx组细胞凋亡率分别为 5 3 2 %和 12 66%。但HBx对外源性p5 3诱导的细胞的凋亡具有抑制作用 ,转染空载体、正义pcDNA3wtp5 3及正义pcDNA3wtp5 3 +pcDNA3HBx组细胞凋亡率分别为 5 3 2 %、11 72 %、4 67%。同时处在G0 ～G1期瞬时表达及稳定转染HBx细胞数较对照组分别减少 4 79% ,10 2 5 %。而且HBx可抑制p2 1Waf1启动子荧光素酶的活性 (P <0 0 5 )及促进细胞生长。结论　细胞在DNA损伤因素的作用下 ,HBx可能通过抑制p5 3导致p2 1Waf1的表达降低 ,引起停滞在G0 ～G1期的细胞减少 ,导致肿瘤细胞仍能继续分裂增殖形成恶性生长     

LncRNA ZFAS1作为ceRNA吸附miR-541-3p调控胃癌侵袭转移北大核心CSCD

目的:本研究旨在探讨长链非编码RNA锌指蛋白反义链1(ZFAS1)作为ceRNA吸附miR-541-3p对胃癌侵袭转移的影响。方法:qRT-PCR对癌旁组织、胃癌组织以及人胃黏膜上皮细胞株、胃癌细胞株中ZFAS1和miR-541-3p的表达进行检测。验证ZFAS1和miR-541-3p的之间的靶向关系。取ZFAS1表达最高的细胞用于后续试验并转染miR-541-3p inhibitor、ZFAS1-shRNA等。MTT检测细胞增殖,Western blot检测侵袭转移相关因子的表达,Transwell测定细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:癌组织中ZFAS1表达增多而miR-541-3p表达减少,ZFAS1能够靶向抑制miR-541的表达(均P<0.05)。抑制ZFAS1表达能够抑制胃癌细胞增殖、侵袭以及侵袭转移相关因子的表达,诱导细胞凋亡,而敲除miR-541-3p后效果则相反(均P<0.05)。ZFAS1-shRNA对胃癌细胞的作用能够被miR-541-3p inhibitor挽救。结论:ZFAS1能够作为ceRNA吸附miR-541-3p,从而抑制胃癌细胞增殖和侵袭转移,促进细胞凋亡。     

塞来昔布诱导不表达环氧合酶-2的胃癌细胞凋亡研究

目的： 探讨选择性COX-2抑制剂celecoxib诱导COX-2不表达胃癌细胞MGC-803凋亡。 方法： 应用MTT法研究celecoxib对细胞存活率的影响；Hoechst33258染色，DNA 琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术分别检测celecoxib处理后细胞形态学改变，DNA断裂情况和DNA含量的变化。 结果： COX-2高表达于AGS胃癌细胞株，而MGC-803中未检测到COX-2表达; 选择性COX-2抑制剂 celecoxib呈浓度和时间依赖性诱导MGC-803细胞凋亡。 结论： Celecoxib 可诱导不表达COX-2的胃癌细胞MGC-803凋亡。     

非小细胞肺癌组织中细胞凋亡与p53蛋白表达的定量研究

目的 :观察非小细胞肺癌 (NSCLC)组织中Caspases介导的细胞凋亡与p5 3蛋白表达情况 ,探讨两者之间的相关关系和意义。方法 :临床手术切除的NSCLC标本 4 4例 ,其中鳞癌 2 0例 ,腺癌 2 4例。采用Caspase特异的单克隆抗体M30Cy toDEATH免疫组化染色显示凋亡细胞 ,计算凋亡指数 (AI) ;免疫组化法检测p5 3蛋白表达 ,用显微图像分析系统测定阳性细胞百分率 (P/A)、平均光密度 (AOD)及阳性水平指数 (PLI)。结果 :NSCLC组织中M30阳性率为 2 5 0 % ,肺鳞癌组织的M 30阳性率明显高于肺腺癌组织 (P <0 0 5 )。低分化鳞癌组织的AI高于中、高分化鳞癌 (P <0 0 5 )。NSCLC组织中 p5 3蛋白阳性率为 5 2 2 %。p5 3蛋白的PLI与癌细胞AI之间无直线相关关系。 结论 :在NSCLC组织中存在Caspases介导的细胞凋亡机制 ,且与组织学类型及组织分化程度有关。p5 3蛋白表达与癌细胞凋亡无相关关系 ,提示突变型 p5 3蛋白失去了激活Cas pases而诱导细胞凋亡的作用 ,与肺癌的发生、发展、治疗及预后有关。     

p53和nm23蛋白表达与大肠癌浸润转移的关系

目的：探讨大肠癌组织中ｐ５３和ｎｍ２３蛋白表达与癌组织分化浸润转移的关系,以及它们之间的相关性。方法：应用免疫组织化学（ＳＡＢＣ）方法对４１例大肠癌组织中ｐ５３和ｎｍ２３蛋白表达情况进行检测。结果：大肠癌组织中ｐ５３和ｎｍ２３蛋白表达的阳性率分别为５８．５％和５３．７％,ｐ５３过表达、ｎｍ５３低表达与大肠癌浸润深度和淋巴转移具有相关性,ｐ５３过表达在低分化腺癌中明显高于高分化腺癌（Ｐ〈０．０１）;而ｎｍ２３高表达与大肠癌的分化程度无关（Ｐ〉０．０５）。ｎｍ２３低表达与ｐ５３高表达有相关性。结论：ｐ５３高表达、ｎｍ２３低表达在大肠癌的浸润转移中起重要作用,ｐ５３高表达与大肠癌组织分化程度有关,大肠癌组织浸润与淋巴转移可能与多基因异常改变有关。     

Higher frequency of p53 gene mutations in diffuse large B-cell lymphoma with MALT component

p53 gene mutation is not a frequent event in the tumorigenesis of lymphomas and the expression of p53 protein is independent of p53 gene mutations. The present study aimed to investigate mutations in the p53 gene in a series of extranodal B-cell lymphomas, and its association with p53 protein expression. A total of 52 cases were graded histologically into Grade 1, Grade 2 and Grade 3 tumors and p53 protein expression was detected using immunohistochemistry. Mutations in the p53 gene were analyzed using polymerase chain reaction single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) and mobility shifts were confirmed by direct sequencing. The tumors comprised 26 (50%) Grade 1, 9 (17%) Grade 2 and 15 (29%) Grade 3. A high proportion of Grade 2 (25%) tumors expressed p53 protein (P = 0.051) and carried p53 gene mutation (33%) (P = 0.218). However, p53 protein expression was not associated with p53 gene mutations (P = 0.057). Transversion mutations (88%) were more frequently detected than transition mutations (12%). The present study revealed that p53 gene mutations and p53 protein expression occurred in higher frequencies in Grade 2 tumors, which may be of pathogenetic importance. The high frequency of transversion mutations may reflect the influence of an etiological agent in the tumorigenesis of mucosa-associated lymphoid tissue (MALT lymphoma).     

应用免疫组化技术检测胃癌组织p53、c-erbB-2、p21、nm23基因表达产物及其临床意义

目的：为探讨胃癌组织p53、c-erbB-2、p21、nm23联合基因表达产物对胃癌诊断与治疗方面的价值。方法：应用免疫组化技术检测了手术切除胃癌组织p53、c-erbB-2、p21、nm23基因产物表达。结果：p53蛋白表达阳性率37．6％-46．2％，c-erbB-2为34．6％-56．8％，p21为37．8％。61．5％，nm23为30．8％-70．3％；非胃癌组织(胃、十二指肠溃疡、胃息肉、重度不典型增生)未见c-erbB-2、p21、nm23基因表达。c-erbB-2、p21的表达与胃癌的分化程度有关，p21、nm23基因表达与肿瘤浸润深度、肿瘤转移程度有关。p53、c-erbB-2、p21、nm23四种肿瘤蛋白在胃镜活检标本和手术切除标本中表达是一致的，无显著性差异。结论：对胃癌组织检测p53、c-erbB-2、p21、nm23基因表达产物在胃部的良恶性肿瘤鉴别、非手术临床分期的判断及指导胃癌的临床诊断与治疗等方面具有一定价值。     

p53 Protein expression in laryngeal squamous cell carcinomas bearing wild-type and mutated p53 gene

We performed an immunohistochemical analysis to investigate the expression of p53 protein in a panel of 18 laryngeal squamous cell carcinomas, 15 primary tumours and three in relapse, previously analysed by us for the presence of p53 gene mutations. Dysplastic and/or normal surrounding mucosa was evaluated in 15 different tumours. The results of our study are the following: (1) expression of p53 protein was observed in one out of five tumours positive for p53 gene mutations (20%) and in 10 out of 13 (80%) negative cases; (2), p53 protein over-expression was frequently observed in normal and/or dysplastic mucosa surrounding either wild-type (7/11) or mutated p53 tumours (2/4); (3), p53 immunoreactive cells showed a pattern of distribution in normal and mildly/moderately dysplastic mucosa (basal layers), different from that in severely dysplastic mucosa (whole thickness). These data further support the hypothesis that p53 protein over-expression may be a marker of the earliest phases of multistep tumorigenesis in laryngeal squamous cell carcinoma.     

白细胞介素1β通过p38信号通路上调系膜细胞表达白细胞介素6

目的：探讨p38信号通路(p38MAPK)在白细胞介素1(IL-1)β上调肾小球系膜细胞表达白细胞介素6(IL-6)中的作用。方法：应用Western Blotting检测p38MAPK在IL-1β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度，应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和ELJSA法检测IL-1β诱导的系膜细胞促炎症介质IL-6的表达水平并观察p38MAPK特异性抑制剂SB203580对其mRNA的转录和蛋白质生成的影响。结果：IL-1β以时间和剂量依赖方式刺激系膜细胞引起p38MAPK的活化，并明显上调系膜细胞IL-6表达。SB203580以剂量依赖方式从基因转录和翻译水平显著抑制IL-1β诱导的IL-6表达。结论：p38MAPK在IL-1β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应产生炎症介质IL-6中起重要作用。     

异紫堇碱抑制裸鼠人宫颈癌Siha细胞移植瘤的生长

目的研究异紫堇碱(ICD)对裸鼠人宫颈癌Siha细胞移植瘤的影响,探讨异紫堇碱抑制宫颈癌发生发展的机制。方法将人宫颈癌Siha细胞接种于BALB/c(nu/nu)裸鼠皮下建立动物模型,待移植瘤平均直径≥0.5 cm时,随机分为对照组及腹腔注射不同剂量异紫堇碱干预组。4周后取出瘤体组织,用HE染色法观察瘤体组织病理形态学,用免疫组化染色及Western blot方法观察负荷瘤组织中的蛋白表达。结果经异紫堇碱干预后的宫颈癌Siha细胞裸鼠负荷瘤体积减小(P<0.05);细胞形态可由干细胞样向上皮样细胞转化;上皮细胞分化成熟标记E-cadherin表达明显升高,而HPV16E6蛋白和间叶组织标志物vimentin的表达下降。结论异紫堇碱可能通过抑制携带HPV亚型的宫颈癌Siha细胞中E6蛋白的表达及EMT相关信号通路来抑制宫颈癌的发生发展。     

Loss of p53 expression is accompanied by upregulation of beta‐catenin in meningiomas: a concomitant reciprocal expression

Crosstalk between Wnt and p53 signalling pathways in cancer has long been suggested. Therefore in this study we have investigated the involvement of these pathways in meningiomas by analysing their main effector molecules, beta‐catenin and p53. Cellular expression of p53 and beta‐catenin proteins and genetic changes in TP53 were analysed by immunohistochemistry, PCR/RFLP and direct sequencing of TP53 exon 4. All the findings were analysed statistically. Our analysis showed that 47.5% of the 59 meningiomas demonstrated loss of expression of p53 protein. Moderate and strong p53 expression in the nuclei was observed in 8.5% and 6.8% of meningiomas respectively. Gross deletion of TP53 gene was observed in one meningioma, but nucleotide alterations were observed in 35.7% of meningiomas. In contrast, beta‐catenin, the main Wnt signalling molecule, was upregulated in 71.2%, while strong expression was observed in 28.8% of meningiomas. The concomitant expressions of p53 and beta‐catenin were investigated in the same patients. In the analysed meningiomas, the levels of the two proteins were significantly negatively correlated (P = 0.002). This indicates that meningiomas with lost p53 upregulate beta‐catenin and activate Wnt signalling. Besides showing the reciprocal relationship between proteins, we also showed that the expression of p53 was significantly (P = 0.021) associated with higher meningioma grades (II and III), while beta‐catenin upregulation was not associated with malignancy grades. Additionally, women exhibited significantly higher values of p53 loss when compared to males (P = 0.005). Our findings provide novel information about p53 involvement in meningeal brain tumours and reveal the complex relationship between Wnt and p53 signalling, they suggest an important role for beta‐catenin in these tumours.     

咪达唑仑通过下调p300抑制人咽鳞癌FaDu细胞增殖

 目的：探讨咪达唑仑（midazolam）抑制人咽鳞癌FaDu细胞增殖的机制。方法：咪达唑仑处理FaDu细胞后， MTT及BrdU掺入比色法检测细胞增殖情况，RT-PCR及Western blotting检测p300 mRNA及蛋白水平；沉默p300后，MTT比色法及BrdU掺入法检测细胞增殖情况，Western blotting 检测细胞周期相关蛋白的表达水平。结果：咪达唑仑抑制FaDu细胞增殖；咪达唑仑抑制p300表达； 沉默p300后p21及p27表达上调，p-Rb表达下调FaDu细胞增殖被抑制。结论: 咪达唑仑通过下调p300抑制人咽鳞癌FaDu细胞增殖。     

AgNORs,p53癌基因蛋白在胶质细胞增生和胶质瘤中的表达

目的：探讨核仁组成区嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲｓ），ｐ５３蛋白在胶质细胞增生和胶质瘤中的表达。方法：运用免疫组化和形态半定量技术，对胶质细胞增生和星形细胞瘤分别标记ＡｇＮＯＲｓ（３７例），ｐ５３蛋白（３３例）的表达。结果：ＡｇＮＯＲｓ，ｐ５３蛋白在胶质细胞增生和Ⅰ级星形细胞瘤以及Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级星形细胞瘤中的表达存在差异性，各组间统计学处理Ｐ＜０．０１，差异有显著性。结论：ＡｇＮＯＲｓ、ｐ５３蛋白可作为鉴别胶质细胞增生和Ⅰ级星形细胞瘤有用的参考指标，两者表达随着星形细胞瘤级别增加而增强，具有正相关性，能较好地反映星形细胞瘤的恶性程度