单克隆抗体Mab03.2C1-C2靶抗原性质的初步研究

目的分析抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单抗Mab03.2C1-C2靶抗原的性质,探讨该抗原用于实验室检测的可行性.方法制备单克隆抗体,通过SDS-PAGE及Western Blotting法分析该单抗所识别的抗原的分子量.体外诱导形成不同长度的芽管,分析其表面靶抗原的形成情况.不同的生化方法处理芽管,采用间接免疫荧光方法,对单抗靶抗原表位性质进行分析.取口腔念珠菌病患者的真菌涂片标本,用IIF方法观察体外诱导培养之芽管与体内白念芽管表面抗原分布异同.结果体外诱导30 min后白念珠菌芽管表面方可检测到靶抗原.体内白念菌丝与体外诱导菌丝表面靶抗原分布不同.靶抗原表位可能位于N-糖链上.结论Mab03.2C1-C2靶抗原为白念菌丝形成过程中生成的新成分,可能参与白念致病过程.靶抗原为糖蛋白,抗原性显著,对临床应用于系统性白念珠菌感染的检测有意义.     

抗白念珠菌单抗的保护性研究

证实抗白念珠菌保护性抗体存在,为保护机制以及保护性工程抗体的研究打下基础。方法在实验动物模型中观察单抗影响珠菌感染动物存活时间、感染动物重要脏器的组织病理变化,相应组织中白念珠菌ｃｆｕ等。结论１Ｂ５和３Ｅ８皆是具有保护作用的抗念珠胞壁外膜单克隆抗体。     

溶菌酶对白念珠菌芽管形成的促进作用

白念珠菌在血清和蛋清中可形成芽管,加热灭活血清和蛋清中酶成份,芽管形成率则下降,在灭活的血清或蛋清中补加溶菌酶,芽管形成率则恢复或升高。即使在低营养条件下溶菌酶也可提高芽管形成率。溶菌酶在0.2～2.1mg/ml浓度范围内均示提高芽管形成率但不出现杀菌作用。可见溶菌酶具有促进白念珠菌形成芽管的作用。本文首次报告这个发现。     

KZY-2复方制剂对白念珠菌芽管形成的影响

目的：探讨抗真菌中药复方制剂（KZY-2）对白念珠菌芽管形成的抑制作用。方法：采用白念珠菌芽管形成的优化条件（1640培养基、pH7．0、37℃振荡培养3h），观察药物对白念珠菌标准菌株（ATCC14053、CCCMC1a）和临床分离菌株（C1-1、C1-4）芽管形成的抑制程度。结果：（1）KZY-2对四株实验菌均具有明显抑制芽管形成的作用，但对不同菌株芽管形成的最低抑菌浓度（MIC）差异较大，对ATCC14053、CCCMC1a、C1-1、C1-4的MIC依次为：31．25μg／ml；62．5μg／ml；125μg／ml；500μg／ml。组间比较具有显著意义（P〈0．05或P〈0．01）。（2）药物浓度可明显影响抑制芽管形成的百分率，浓度在50％MIC以下时，芽管形成抑制率均低于30％。结论：KZY-2复方制剂具有明显抑制白念珠菌芽管形成的作用，抑制作用的强弱与药物浓度密切相关。     

单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4体外抑制白念珠菌芽管形成及粘附作用

目的:观察单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4在体外抑制白念珠菌芽管形成及抑制白念珠菌与宿主细胞粘附的作用.方法:将不同浓度的单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4分别与白念珠菌酵母相悬液在有利于芽管形成的条件下共同孵育,倒置显微镜下计数白念珠菌总数以及白念珠菌芽管数;将不同浓度的单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4与白念珠菌酵母相和人角质形成细胞混悬液、白念珠菌酵母相和人口腔黏膜上皮细胞混悬液、白念珠菌酵母相和胎儿脐静脉内皮细胞混悬液共同孵育,分别计数人角质形成细胞、人口腔黏膜上皮细胞、胎儿脐静脉内皮细胞上粘附的白念珠菌数.结果:与对照组比较,不同浓度的单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4均能抑制白念珠菌芽管生成,并且抗体浓度越高,抑制白念珠菌芽管形成的作用越明显;同时单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4能够显著减少白念珠菌与角质形成细胞、上皮细胞、内皮细胞的粘附,其抑制作用与单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4的浓度呈正相关.结论:单克隆天然抗角蛋白抗体IgM 3B4在体外能够抑制白念珠菌芽管形成,能够抑制白念珠菌与人角质形成细胞、人口腔黏膜上皮细胞、胎儿脐静脉内皮细胞的粘附,从而降低白念珠菌的侵袭力,提示天然抗体IgM在机体抗真菌感染的天然免疫中可能具有积极的作用.     

白念珠菌芽管法药敏试验新方法

目的 通过药物对白念珠菌芽管抑制试验方法，建立一个对白念珠菌快速药敏试验的新方法。方法 在白念珠菌血清芽管试验方法的基础上，将一定浓度的药物与血清混合，再接种一定菌量的菌液，置37℃温箱孵育2～3h(不超过3h)观察白念芽管生长情况，最终评估该药对白念芽管的抑制程度。结果 共用5种药物，其中黄连、姜黄、桂皮3种为常用中药，均对白念菌芽管有较明显的抑制作用。另2种为常用广谱抗真菌药物伊曲康唑（ECZ)和二性霉素B。实验证明黄连抑制芽管的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC)为125μg/ml；姜黄抑制芽管的MIC为62．5μg/ml；挂皮抑制芽管的MIC为500μg/ml；二性霉素B抑制芽管的MIC为5μg/ml；ECZ2mg/ml仍有芽管生长，其生长程度、数量与对照组比较无明显差异(P＞0．05)，其原因有待进一步探讨。结论 本实验方法作为对白念珠菌药敏试验的一个新方法探讨，虽然所试药物的抑菌作用MIC浓度与以往的报道相似，但该药敏试验方法简单、快速，并有利于临床即时粗筛白念珠菌抗菌药物，更有利于推广应用。     

都柏林念珠菌和白念珠菌粘附能力的比较研究

目的：比较研究都柏林念珠菌（candida dubliniensis,CD)和白念珠菌（candida albicans,CA)的粘附能力。及4%小苏打液和0.2%洗泌肽对CD和CA粘附力的影响。方法：检测糜烂型口腔扁平苔藓（oral lichen planue,OLP)，非糜烂型OLP和健康对照组3种不同来源颊粘膜上皮细胞（buccal epithelial cells,BEC)。经0.2%洗泌汰和4%小苏打液体外处理前后，BEC上粘附孢子数。结果：（1）处理前，3种不同来源BEC上，粘附CD孢子数显著高于粘附CA的孢子数。（2）糜烂型OLP和非糜烂型OLP来源的BEC上，粘附的孢子数显著高于健康对照组；（3）3种不同来源BEC经0.2%洗泌汰和4%小苏打液处理后，其上粘附的孢子数显著减少。结论：（1）CD对BEC粘附力比CA强；（2）4%小苏打液能降低CD和CA对BEC的粘附，4%小苏打液和0.2%洗泌汰在降低念珠菌对BEC的粘附上，具有相近的作用。     

免疫酶斑点法(IEDA)检测白色念珠菌芽管特异性抗原的临床研究

目的：试图寻求一种较理想的系统性念珠菌病的血清学诊断方法。方法：制备白色念珠菌芽管特异性抗体，采用ＩＥＤＡ对临床病人血清中的相应抗原进行检测。结果：①检测的最低敏感浓度为０．２５ μｇ／ｍ ｌ；②以１４ 例系统性念珠菌病患者为实验组，以１５ 例浅表白念感染者，１１ 例其它疾病患者及２０位正常人为对照组，检测的敏感性为７１．４％ ，特异性为１００％ 。结论：该方法敏感性较高，特异性强，且具有简便经济的特点。有助于系统性念珠菌病的诊断，尤其适宜在基层医院普及应用。     

芽管试验法与琼脂扩散法同步筛选抗白念珠菌中草药

目的：从中草药中筛选有效的抗白念珠菌药物。方法：采用琼脂扩散法和芽管试验法对130种中草药进行同步筛选。结果：应用芽管试验法筛选的有效药物有31种,应用琼脂扩散法筛选的有效药物有21种,其中两种方法均有效的有14种。结论：琼脂扩散法与芽管试验法同步筛选是抗白念珠菌中草药筛选的一种新思路。     

维生素C对小鼠系统性白念珠菌感染的影响

目的观察维生素C对系统性白念珠菌感染病情的影响。方法 50只ICR小鼠随机分为5组(n=10),通过尾静脉注射白念珠菌菌液建立系统性白念珠菌感染小鼠模型。维生素C通过灌胃或腹腔注射给药,剂量为50mg/kg或500mg/kg;考察小鼠生存时间;检测肾脏载菌量;制作肾脏组织病理学标本评估真菌感染程度。结果补充维生素C后,各实验组与空白组中位生存时间均为4～5d,各组间无明显差异;补充维生素C后,实验组lgCFU/g分别为8.342、8.412、7.350、7.764,与空白组lgCFU/g7.134比较,肾脏载菌量增加(P<0.05)。肾脏组织病理学结果显示受检小鼠均有肾脓肿及肾小管上皮变性(肾病)损害,损害程度没有明显差异,表明维生素C不能缓解白念珠菌感染的病情。结论补充维生素C对小鼠系统性白念珠菌感染病情没有改善作用,甚至可能导致病情恶化。     

Inhibition of germ tube‘s formation of Candida albicans by lactobacillus spp.

Objective:To investigate the effects of 6 strains of lactobacilli and their main culture metabolites on the morphogenesis of Candida albicans (C. albicans) so as to screen medicinal strains as antifungal agents. Methods: Spent culture supernatant (SC'S) at different culture time points, live lactobacilli, heat-killed bacteria and bacterial short-chain fatty acids (SCFA) with different molarities were incubated with C. albicans respectively. Crystal violet-based germ tube assay was used to detect the germination of C. al-bicans and the inhibitory efficiency of each addition was tested by germination rate. Results: SCS of lacto-bacillus spp. decreased the germination significantly and live bacteria of L. rhamnosus. GG, L. acidophilus 1.050103-12 as well as L. johnsonii JCM1022 could partially inhibit the conversion, however, all the heat-killed bacteria failed to control the germ tube formation. In addition, only butyric acid blocked the conversion of yeast to hypha among all the SCFA. Conclusion: The excellent fungistasis activities make L. rhamnosus. GG. L. acidophilus L050103 12 and L. johnsonii JCM1022 potential strains as antifungal drugs and the inhibition seems to have direct correlation to the metabolites.     

1B5单抗抑制白念珠菌对上皮细胞、内皮细胞的粘附

目的 探讨抗白念珠菌保护性单抗1B5的保护机制。方法 分离人颊粘膜上皮细胞并对胎儿脐静脉内皮细胞进行原代培养，在此基础上对白念珠菌进行粘附抑制实验。结果 1B5单抗能显著减少人口腔颊粘膜上皮细胞和胎儿脐静脉内皮细胞表面粘附的白念珠菌孢子数目，这种抑制作用与1B5单抗浓度成正比关系。结论 我们认为1B5单抗抗白念珠菌感染的保护性作用机制是抗体抑制白念珠菌对粘膜上皮、血管内皮细胞的粘附，降低了白念珠菌的侵袭能力。     

厚朴煎剂对白色念珠菌及其生物膜影响的初步研究

目的 观察厚朴煎剂对白色念珠菌(Candida albicans)芽管形成、早期黏附基因及成熟期生物膜的影响。方法 采用芽管形成试验检测厚朴煎剂对白色念珠菌芽管形成的影响;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测厚朴煎剂作用后,凝集素样序列1(agglutinin-like sequencefamily1,ALS1)、ALS2、ALS3基因的表达情况;荧光显微镜及扫描电镜观察厚朴煎剂对白色念珠菌成熟期生物膜的影响;共聚焦显微镜观察厚朴煎剂对生物膜中菌活性的影响。结果 芽管形成试验结果显示,厚朴煎剂可抑制白色念珠菌的芽管形成且抑制作用具有浓度依赖性(P＜0.05)。厚朴煎剂能使ALS1、ALS2、ALS3基因表达下调且具有浓度依赖性(P＜0.05)。荧光显微镜下空白对照组生物膜以菌丝为主,厚朴煎剂作用24、48及72 h后生物膜结构被破坏。扫描电镜结果也提示厚朴煎剂可以破坏生物膜的结构。共聚焦显微镜下空白对照组白色念珠菌以活菌为主,15.625 mg/L厚朴煎剂作用48 h后死菌数量明显增加。结论 厚朴煎剂可通过下调ALS1、ALS2、ALS3基因抑制白色念珠菌早期黏附,同时可通过破坏成熟期生物膜的结构促进药物进入生物膜内抑制芽管形成和发挥杀菌作用。     

抗白色念珠菌IgY的稳定性与应用研究

目的：观察抗白色念珠菌鸡蛋黄抗体IgY的稳定性与体外生物学效应。方法：用水溶法从免疫鸡蛋黄中提取抗白色念珠菌抗体IgY,ELISA法检测抗体耐热,耐酸,耐碱的稳定性,观察IgY抑制白色念珠菌生长和抑制白色念珠菌粘附肠上皮细胞（IEC－6）,结果：IgY在巴氏消毒后活性为对照的61％,在pH7.0至3．0酸性环境中活性改变不显著,在pH7.9,37℃作用150min活性仍对照的60％,IgY在10mg/ml时能明显抑制白色念珠菌生长和对肠上皮细胞的粘附,明显降低细胞上清二胺氧化酶（DAO）释放。结论：鸡蛋黄抗抗IgY具有高度稳定性和良好的体外生物学效应。,     

抗白色念珠菌鸡卵黄抗体(IgY)的研制

目的：观察鸡蛋黄中抗体的产量、纯度、来源及稳定性。方法：应用白色念珠菌作为抗原免疫25周龄Leghorn鸡，通过改良水溶法（WD）提取蛋黄中抗体IgY，双紫外光测定抗体含量，SDS-APGE电泳检测抗体纯度，Western blot免疫印迹法测定该抗体来源，ELISA检测热处理后的抗体活性。结果：抗体含量13mg/ml蛋黄液，抗体纯度达到95%，Western blot免疫印迹证明该抗体与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。ELISA检测热处理后的抗体活性，其具有良好的热稳定性。结论：鸡蛋黄内含有丰富的抗体，通过WD水溶提取法可得到高产量，高纯度的特异性抗体IgY，证明其来源于鸡血清中的IgG，对热具有高度稳定性。     

聚氨酯复合材料表面白色假丝酵母菌黏附的实验研究

目的分析含纳米聚磷腈的聚氨酯材料表面白色假丝酵母菌的黏附情况。方法制备含1%、5%纳米聚磷腈的聚氨酯材料试件(PZS-1%、PZS-5%组,n=12)和硅橡胶软衬材料试件(硅橡胶组,n=12),各组试件分别行白色假丝酵母菌黏附实验,光学显微镜下观察试件表面白色假丝酵母菌黏附情况,菌落形成单位计数法测定各组白色假丝酵母菌黏附量(×104CFU/mL)。结果 PZS-1%、PZS-5%和硅橡胶组试件表面的白色假丝酵母菌黏附量分别为207.800±22.300、133.200±31.597和200.600±32.250。统计学分析结果表明:PZS-5%组试件表面的白色假丝酵母菌黏附量显著低于PZS-1%组和硅橡胶组,差异均有统计学意义(P<0.001),而PZS-1%组与硅橡胶组试件表面白色假丝酵母菌黏附量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论与PZS-1%和硅橡胶软衬材料相比,PZS-5%材料表面黏附的白色假丝酵母菌明显减少。聚磷腈成分的添加可能影响材料表面白色假丝酵母菌的黏附能力。     

IgY与双歧杆菌防治小鼠白色念珠菌感染的研究

目的 观察特异性抗白色念珠菌鸡蛋黄抗体IgY和双歧杆菌的体内生物学效应，探讨将二者复合应用的可能性。方法 建立无特殊病原菌(Specific pathogen free,SPF)小鼠烧伤后口服白色念珠菌感染模型，应用活菌计数方法检测其回肠膜粘附白色念珠菌量、盲肠内容物白色念珠菌量以及白色念珠菌脏器移位率。结果 烧伤SPF小鼠喂服IgY和双歧杆菌后，均能明显抑制肠道内白色念珠菌生长和白色念珠菌粘附肠上皮细胞；二者复合应用后还能明显降低脏器白色念珠菌移位率。结论 特异性鸡蛋黄抗体IgY具有良好的体内生物学效应且优于单独使用双歧杆菌，二者复合应用效果最佳。