胰岛素受体底物1表达及其酪氨酸磷酸化与妊娠期糖尿病患者胰岛素抵抗的关系

目的探讨骨骼肌组织中胰岛素受体底物1（IRS-1）表达及其酪氨酸磷酸化与妊娠期糖尿病发生胰岛素抵抗的关系。方法采用蛋白印迹法（western blot）及免疫沉淀法检测22例妊娠期糖尿病患者（妊娠期糖尿病组）、22例正常妊娠妇女（正常妊娠组）及13例正常非孕妇女（正常非孕组）骨骼肌组织中IRS-1蛋白表达水平及其酪氨酸磷酸化程度;采用放射免疫法及葡萄糖氧化酶法检测各组妇女空腹胰岛素（FINS）及空腹血糖（FPG）水平,并采用稳态模型法计算胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）。结果（1）妊娠期糖尿病组FPG、FINS、HOMA—IR分别为（5．6±0．8）mmol／L、（15．4±5．1）mU／L、1．2±0．5,正常妊娠组分别为（4．4±0．5）mmol／L、（10．6±3．1）mU／L、0．8±0．3,两组间各指标分别比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）;正常非孕组FINS、HOMA—IR分别为（7．6±2．3）mU／L、0．5±0．3,分别与正常妊娠组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。（2）妊娠期糖尿病组IRS．1蛋白表达水平为0．64±0．11,明显低于正常妊娠组的0．81±0．13,两组分别比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）;正常非孕组IRS-1蛋白表达水平为0．83±0．12,与正常妊娠组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）妊娠期糖尿病组基础及胰岛素刺激后的IRS-1酪氨酸磷酸化程度分别为0．35±0．12及0．48±0．14,均低于正常妊娠组的0．38±0．13及0．66±0．12,两组分别比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）;正常妊娠组胰岛素刺激后的IRS．1酪氨酸磷酸化程度明显低于正常非孕组的0．85±0．09（P〈0．01）。（4）妊娠期糖尿病组IRS-1蛋白表达水平和胰岛素刺激后的酪氨酸磷酸化程度与HOMA-IR呈明显负相关（r=-0．613,-0．632;P〈0．01）;正常妊娠组胰岛素刺激后酪氨酸磷酸化程度与HOMA—IR呈明显负相关（r=-0．526,P〈0．05）。结论骨骼肌组织中IRS-1蛋白表达及其酪氨酸磷酸化程度异常,是妊娠期糖尿病患者发生胰岛素抵抗的分子机制之一。     

子宫内膜癌组织中雌激素受体相关受体亚型的表达及其意义

目的探讨雌激素受体相关受体(ERR)亚型在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义.方法选取46例子宫内膜癌及24例正常子宫内膜新鲜组织,采用RT-PCR技术和免疫组化法检测ERR亚型α、β、γ在组织中的表达,并根据雌激素受体(ER)α的表达情况将其分为ERα(+)和ERα(-)者.结果 ERRα、β、γ的 mRNA和蛋白表达之间均呈明显正相关关系(r=0.462, P=0.009; r=0.689, P=0.016 ; r=0.673, P=0.001).内膜癌组织ERα(+)者中,ERRα mRNA阳性表达率及表达水平(分别为42%,0.24±0.18)均明显低于正常内膜组织ERα(+)者(分别为78%,0.42±0.23;P=0.019,P=0.021);内膜癌组织中ERRβ mRNA阳性表达率及表达水平(分别为23%,0.21±0.16)与正常内膜组织(分别为22%,0.27±0.15)相比,差异无统计学意义(P>0.05);ERRγ mRNA在内膜癌及正常内膜组织中均呈现高表达,ERα(+)的内膜癌组织中ERRγ mRNA的表达水平(0.93±0.24)明显高于正常内膜组织(0.72±0.21,P=0.023).ERRα mRNA表达阳性的内膜癌患者中,手术病理分期为Ⅰ期患者所占百分比(30%)明显低于ERRα mRNA表达阴性者(70%,P=0.017),但其Ⅱ～Ⅳ期患者及深肌层浸润患者所占百分比(分别为70%和78%)均明显高于ERRα mRNA表达阴性者(分别为30%和43%;P=0.017,P=0.033);内膜癌组织中ERRβ mRNA的表达与手术病理分期、病理分级、肌层浸润及淋巴结转移无关(P>0.05);ERRγ mRNA表达阳性的内膜癌患者中,淋巴结有转移患者所占百分比(18%)明显低于ERRγ mRNA表达阴性者(58%,P=0.021),但其与手术病理分期、病理分级及肌层浸润程度无关(P>0.05).结论 ERR亚型可能是ER以外与子宫内膜癌发生关系密切的又一受体.ERRα可能是子宫内膜癌预后不良的指标,而ERRγ高表达可能提示预后良好.     

胰岛素受体α、β及胰岛素受体底物-1在子宫内膜癌的表达及其临床意义

目的 探讨胰岛素受体α（IRα）、β（IRβ）及胰岛素受体底物-1（IRS-1）在子宫内膜癌的表达及其临床意义。方法 用免疫组织化学法检测10例正常子宫内膜：18例子宫内膜增生及57例子宫内膜癌组织中IRα、IRβ及IRS-1蛋白的表达。结果 IRα、IRβ、IRS-1的表达在10正常子宫内膜表达分别为80．00％（8／10）、60．00％（6／10）及70．00％（7／10）；在18例子宫内膜增生组织中分别为77．78％（14／18）、61．11％（11／18）及77．78％（14／18）；在子宫内膜癌组织中分别为47．37％（27／57）、54．39％（31／57）及63．16％（36／57）。IRα的表达在子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组及子宫内膜增生比较差异有显著性（P〈0．05），其余差异无统计学意义（P〉0．05）；Ⅰ期子宫内膜癌组织中IRα的阳性表达率明显低于Ⅱ～Ⅳ期者（P〉0．05）；IRβ及IRS-1各组间的阳性表达率与Ⅱ～Ⅳ期者相近（P〉0．05）；IRS-1的阳性表达率Ⅰ期明显低于Ⅱ～Ⅳ期者（P〉0．05）；IRα、β、IRS-1蛋白的表达在子宫内膜癌G1—2与G3差异有显著性（P〈0．05），与肌层浸润深度及淋巴结转移与否差异无显著性（P〉0．05）。结论 IRα及IRS-1的表达与子宫内膜癌的期别有关，提示其表达的改变可能是子宫内膜腺癌发生的早期事件。     

PGP9.5在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的 :研究蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)在子宫内膜癌组织中的表达,并探讨其与子宫内膜癌的发生、发展和侵袭、转移的关系。方法:采用免疫组织化学二步法检测60例子宫内膜癌及10例正常子宫内膜中PGP9.5的表达。结果:在60例子宫内膜癌组织中有45例(75.0%)表达PGP9.5,而正常子宫内膜细胞中仅2例(20%)表达PGP9.5。PGP9.5的表达与子宫内膜癌的分期、分化程度及有无淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、子宫内膜癌的组织学类型无关(P>0.05)。结论:PGP9.5在子宫内膜癌侵袭及转移过程中可能发挥重要作用,PGP9.5的表达可作为肿瘤组织侵袭子宫内膜的一个分子标记物。     

子宫内膜癌组织中雌激素及孕激素受体亚型的表达研究

目的探讨子宫内膜癌组织中雌激素受体(ER)亚型mRNA及孕激素受体(PR)亚型mRNA和蛋白表达水平的变化及其意义。方法采用RT-PCR法检测66例子宫内膜癌和30例正常子宫内膜组织ER、PR亚型mRNA的表达,采用蛋白印迹法检测PR亚型蛋白的表达。结果(1)ERαmRNA在子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中的表达水平分别是8.00±7.77、3.84±2.57,而ERβmRNA的表达水平分别是4.15±3.55、0.41±0.29,子宫内膜癌组织中ERα、ERβmRNA表达水平均高于正常子宫内膜,两种组织间分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)PR、PRA和PRB蛋白表达及PR mRNA表达的降低与子宫内膜癌的发生有关(P<0.05),而PRA与PRB蛋白表达的比值和PRB mRNA的表达与子宫内膜癌的发生无明显相关性(P值分别为0.550、0.901)。(3)子宫内膜癌组织中PRB mRNA与ERβmRNA的表达水平呈正相关关系(r=0.43,P<0.01)。结论子宫内膜癌组织中ER亚型mRNA表达上调、PR蛋白和mRNA表达的下调可能参与了子宫内膜癌的发生;PRB mRNA与ERβmRNA表达呈正相关关系。     

子宫内膜癌中Maspin的表达及其与雌激素受体表达的相关性研究

目的:检测Maspin蛋白在正常子宫内膜、不典型增生及内膜癌组织中的表达,及其与雌激素受体(ER)表达的关系,探讨Maspin在子宫内膜癌发生中的作用及其作用机制。方法:免疫组化SP法检测40例子宫内膜腺癌、18例不典型增生及10例正常子宫内膜(对照组)中Maspin蛋白的表达及其与子宫内膜癌患者临床病理特征和ER蛋白表达的关系。结果:Maspin阳性表达在正常子宫内膜组最高(9/10,90%),高于内膜不典型增生组(10/18,55.6%)和内膜癌组(17/40,42.5%),差异有统计学意义(P<0.05),在内膜癌中FIGOⅠ期的表达(13/20,65.0%)明显高于Ⅱ~Ⅲ期(4/20,20.0%;P<0.05),无淋巴结转移者(17/34,50.0%)明显高于有淋巴结转移者(0/6;P=0.030),但与组织学分级及肌层浸润程度无关(P>0.05)。ER在正常子宫内膜、内膜不典型增生及内膜癌组织的阳性表达率分别为(10/10,100.0%)、(13/18,72.2%)和(20/40,50.0%),各组间差异有统计学意义(P<0.05);内膜癌组织中FIGOⅠ期的表达(14/20,70.0%)明显高于Ⅱ~Ⅲ期(6/20,30.0%;P<0.05);内膜癌高、中、低分化组中ER表达率分别为(11/15,73.3%)、(8/18,44.4%)、(1/7,14.3%),组间差异有统计学意义(P<0.05);无淋巴结转移者(20/34,58.8%)明显高于有淋巴结转移者(0/6;P=0.020),肌层浸润≤1/2者(16/24,66.7%)明显高于肌层浸润>1/2者(4/16,25.0%;P<0.05)。子宫内膜癌中,Maspin的表达与ER的表达存在正相关关系(r=0.394,P<0.05)。结论:从正常子宫内膜、内膜不典型增生到内膜癌,Maspin蛋白表达逐渐降低,且其低表达与子宫内膜癌临床分期晚、淋巴结转移有关,并与ER蛋白表达呈一致性,提示Maspin蛋白的表达可能受雌激素调控,参与了子宫内膜癌发生发展和转移过程。     

雌激素受体ERα36在子宫内膜癌组织中表达及临床意义的初步研究

目的:分析新型雌激素受体ERα36在子宫内膜癌组织中的表达与临床病理特征的关系。方法:免疫组织化学方法检测73例子宫内膜癌、20例正常子宫内膜、9例不典型增生子宫内膜组织切片ERα36的表达,并分析其与临床病理特征间的关系。结果:ERα36在子宫内膜癌组织中阳性表达率(32.9%,24/73)显著低于正常子宫内膜组织(85%,17/20)(P<0.01);ERα36阴性表达者较阳性表达者出现更多宫颈受侵(48.9%vs 20.8%,P<0.05);ERα36阳性表达者无疾病生存时间短于阴性表达者(P<0.01);ERα36表达与患者年龄、临床分期、组织学分级、肌层浸润、淋巴结转移和病理类型的差异无统计学意义(P>0.05);ERα36表达与ER、PR、PTEN、p53无显著相关性(P>0.05)。结论:ERα36在子宫内膜癌组织的表达明显低于正常子宫内膜组织;ERα36表达与ER无明显相关性,可能是子宫内膜癌预后的一个指标。     

胰岛素受体底物1蛋白表达及其酪氨酸磷酸化程度与多囊卵巢综合征发病的关系

目的　研究多囊卵巢综合征 (polycysticovarysyndrome ,PCOS)患者脂肪组织胰岛素受体底物 1(insulinreceptorsubstrate 1,IRS 1)蛋白的表达及其酪氨酸磷酸化程度 ,探讨PCOS患者产生胰岛素抵抗 (insulinresistance ,IR)的分子生物学机制。方法　采用放射免疫法检测PCOS伴IR者19例 (A组 )、PCOS无IR者 10例 (B组 )及单纯子宫肌瘤患者 15例 (对照组 )的血清黄体生成素(luteinizinghormone ,LH)、卵泡刺激素 (folliclestimulatinghormone ,FSH )及睾酮的水平 ;采用放射免疫法测定各组空腹血清胰岛素 (fastinginsulin ,FIN)水平 ;采用葡萄糖氧化酶法测定各组空腹血糖(fastingplasmaglucose ,FPG)水平 ;采用稳态模型 (homeostasismodelassessment,HOMA)计算IR指数(即HOMAIR) ;采用蛋白印迹法检测IRS 1蛋白表达水平 ,同时应用免疫沉淀方法检测IRS 1的酪氨酸磷酸化程度。结果　 (1)A组患者血清LH、LH /FSH、睾酮、FIN及HOMAIR分别为 (15 8±2 8)U/L、2 8± 0 6、(4 3± 0 9)nmol/L、(2 5 2± 3 8)mU/L、1 56± 0 2 5;均显著高于B组的(13 9± 1 9)U/L、2 3± 0 4、(3 6± 0 4)nmol/L、(13 4± 3 8)mU/L、0 87± 0 2 8及对照组的 (7 3± 2 1)U /L、1 3± 0 3、(0 9± 0 2 )nmol/L、(9 5± 2 6     

子宫内膜癌中fhit、survivin的表达及临床意义

目的 :探讨脆性组氨酸三联体基因蛋白fhit和凋亡抑制蛋白survivin在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法 :用免疫组化S P法检测 12例正常子宫内膜 ,15例不典型增生子宫内膜 ,4 2例子宫内膜癌组织中fhit蛋白、survivin蛋白的表达。结果 :fhit蛋白在子宫内膜癌中的阳性率明显低于正常子宫内膜或不典型增生子宫内膜 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。survivin在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜、子宫内膜癌中的阳性表达率分别为 16 .7%、6 6 .7%、90 .5 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;在子宫内膜癌组织中 ,随组织学病理分级的增加、手术临床分期的进展、肌层浸润程度的加深和淋巴结的转移 ,fhit蛋白表达阳性率逐渐下降 ,survivin表达强阳性率则逐渐上升 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;fhit蛋白、survivin蛋白表达呈负相关性 (r=- 0 .76 9,P =0 .0 0 0 )。结论 :fhit、survivin在子宫内膜癌的发生、发展过程中起着重要的作用 ,联合检测可为子宫内膜癌的早期诊断、进一步治疗及预后判断提供必要的理论依据。     

cyclinD1、p16蛋白在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的 :探讨cyclinD1、p16与子宫内膜癌发生与发展的关系。方法 :用免疫组化SP法检测了 50例子宫内膜癌、2 2例子宫内膜不典型增生、10例正常子宫内膜组织中cyclinD1、p16蛋白的表达情况。结果 :cyclinD1蛋白在正常子宫内膜、内膜不典型增生、子宫内膜癌中的表达率分别为 0 ( 0 /10 )、2 2 .73% ( 5/2 2 )、4 0 .0 0 % ( 2 0 /50 ) ,其中子宫内膜癌与正常内膜差异有显著性 (P <0 .0 5)。p16蛋白在内膜癌的表达率为 4 6.0 0 % ,明显低于正常内膜组织的 90 .0 0 % (P <0 .0 5)。 50例内膜癌中 ,cyclinD1蛋白在G2 、G3级及临床Ⅱ～Ⅲ期中的表达率分别高于G1级及临床Ⅰ期 (P <0 .0 5) ,复发组表达率高于未复发组 (P <0 .0 5)。p16蛋白表达与子宫内膜癌的细胞分级、临床分期及预后有关 (P <0 .0 5) ,p16蛋白表达阴性者分化差 ,分期晚 ,复发率高。相关性分析显示 ,cyclinD1与p16表达呈负相关 ,二者协同异常表达者生物学行为较差。结论 :cyclinD1、p16与子宫内膜癌的发生、发展密切相关 ,二者异常表达提示子宫内膜癌复发率高、预后差     

多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗患者脂肪组织胰岛素受体底物2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化的研究

目的检测多囊卵巢综合征(PCOS)患者脂肪组织胰岛素受体底物(IRS)2蛋白表达及其酪氨酸磷酸化的程度,探讨发生PCOS合并胰岛素抵抗(IR)的机制。方法采用蛋白印迹(Westernblot)法,检测PCOS合并IR患者19例(PCOS合并IR组)、PCOS非IR患者17例(PCOS非IR组)及因单纯子宫肌瘤行子宫切除术的患者20例(对照组)的IRS2蛋白的表达;并采用免疫组化技术,检测IRS2在脂肪组织中的分布;采用免疫沉淀及增强化学发光法,检测IRS2的酪氨酸磷酸化程度。结果(1)PCOS合并IR组、PCOS非IR组及对照组IRS2蛋白表达分别为115±026、113±026及100±025,3组比较,差异无统计学意义(P>005)。(2)PCOS合并IR组、PCOS非IR组及对照组IRS2蛋白酪氨酸磷酸化程度分别为077±016、091±025及100±012,3组比较,差异有统计学意义(P<005);PCOS非IR组与对照组比较,差异无统计学意义(P>005)。结论PCOS合并IR患者脂肪组织的IRS2蛋白酪氨酸磷酸化程度的降低,可能是发生IR的机制之一。     

脂肪组织中胰岛素受体底物1蛋白的表达及酪氨酸磷酸化在多囊卵巢综合征发病中的作用

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者脂肪组织胰岛素受体底物1(IRS1)的蛋白表达及酪氨酸磷酸化在PCOS发病中的作用。方法采用免疫沉淀法、Western印迹法和增强化学发光蛋白免疫印迹法及图像分析半定量检测24例PCOS患者[PCOS组,根据体重指数分为肥胖(体重指数≥24kg/m2)和非肥胖(体重指数<24kg/m2)者各12例]及同期因卵巢囊肿或输卵管阻塞行开腹手术的非PCOS患者24例(对照组,根据体重指数分为肥胖和非肥胖者各12例)的脂肪组织中IRS1的蛋白表达及酪氨酸磷酸化程度。结果PCOS组肥胖者IRS1的蛋白表达为(82±15)%,PCOS组非肥胖者为(79±18)%;对照组肥胖者为(75±19)%,对照组非肥胖者为(70±19)%,各组间比较,差异均无统计学意义(P>005)。脂肪组织中IRS1的酪氨酸磷酸化程度在PCOS组肥胖者为(52±23)%,对照组非肥胖者为(88±12)%,两者比较,差异有统计学意义(P<001);对照组肥胖者为(45±22)%,PCOS组非肥胖者为(70±25)%,与对照组非肥胖者比较,明显降低,差异均有统计学意义(P<001,P<005);PCOS组肥胖者和对照组肥胖者间以及PCOS组肥胖者和PCOS组非肥胖者间比较,差异均无统计学意义(P>005)。结论PCOS组脂肪组织IRS1的蛋白表达及酪氨酸磷酸化程度明显减弱,可能参与胰岛素受体后信号传导抑制,并与PCOS胰岛素抵抗的发生有     

血管紧张素转化酶基因插入/缺失多态性及胰岛素受体亚单位-1基因Gly972Arg突变对出生体重的影响

目的 探讨血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)基因插入/缺失(insertion/deletion,I/D)多态性及胰岛素受体亚单位-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)基因Gly972Arg突变对出生体重的影响.方法 将入选296例新生儿分为两组,适于胎龄儿组222例,小于胎龄儿组74例,于生后3 d哺乳前检测血糖、胰岛素,计算HOMA-IR值比较两组的胰岛素敏感性;应用PCR-RFLP方法分析IRS-1基因Gly972Arg突变及ACE基因I/D多态性,比较各基因型组间出生体重、出生体重百分位.结果 小于胎龄儿组HOMA-IR值(Ln对数转换后)为0.217±0.367,高于适于胎龄儿组0.001±0.378(P<0.01).IRS-1基因突变组与野生型相比,出生体重较轻,分别为(2270.00±638.97)g及(2655.53±774.78)g,出生体重百分位较低,分别为(13.12±10.76)%及(39.87±30.18)%,差异均有统计学意义(P<0.05).ACE基因DD基因型出生体重百分位为(27.05±24.70)%,低于ID基因型(39.21±29.37)%及Ⅱ基因型(44.69±27.91)%,差异有统计学意义(P<0.05).同时具有ACE基因DD基因型及IRS-1基因突变者出生体重最低(2516.00±230.28)g,低于正常组(2919.87±717.04)g及具有一种基因多态性组(2572.44±724.20)g;其出生体重百分位也最低(18.00±14.89)%,低于正常组(44.97±27.07)%及具有一种基因多态性组(26.95±20.70)%,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 IRS-1基因Gly972Arg突变及ACE基因I/D多态性可能对胎儿宫内发育和出生体重具有影响.     

子宫内膜癌中孕激素受体亚型表达及其甲基化状态的研究

目的:研究子宫内膜癌中孕激素受体亚型PRA、PRB表达与其启动子区甲基化状态的关系,探讨子宫内膜癌中孕激素受体亚型表达下调的机制。方法:(1)应用Real-Time PCR法检测子宫内膜癌及正常组织中孕激素受体亚型PRA、PRB mRNA的表达及去甲基化试剂5-Aza-CdR处理Ishikawa细胞前后孕激素两种受体亚型及DNA甲基化转移酶mRNA的表达;(2)应用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测子宫内膜癌细胞系Ishikawa中PRA、PRB的甲基化状态。结果:与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中,总PR表达显著降低,与病理类型相关;PRB表达显著下降,与其临床特征无关。子宫内膜癌细胞系Ishikawa中,加入5-Aza-CdR2.5μmol/L48h后,孕激素受体亚型PRA、PRB甲基化条带均消失;孕激素受体亚型PRA、PRB mRNA表达水平增加;同时Ishikawa细胞中DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3B表达下调。结论:子宫内膜癌组织中,孕激素受体亚型mRNA表达下调可能与子宫内膜癌的发生相关;孕激素受体亚型表达下调与其启动子区甲基化状态相关;去甲基化试剂5-Aza-CdR可逆转基因启动子区的甲基化状态,恢复PR基因的表达。     

子宫内膜癌中雌激素受体亚型α第五外显子变异体的表达

目的:探讨雌激素受体亚型α的第5外显子野生型及变异体在内膜癌中的表达以及在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法:选取1999年10月至2003年1月行手术治疗的子宫内膜癌患者41例,以2001年11月至2003年3月接受手术的正常子宫内膜癌患者29例做为对照,进行逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR),半定量研究雌激素受体亚型第5外显子变异体的表达。结果:内膜癌组织中雌激素受体α第5外显子变异体的表达高于正常内膜组织(P<0.05),而二者之间野生型及野生型与变异体的比值差异无显著性(P>0.05)。结论:雌激素受体α第5外显子缺失型变异体可能在内膜癌的发生和发展中起重要作用。