SARS病情的动态变化

此前曾认为,导致此次SARS全球流行的元凶——SARS冠状病毒(SARS— CoV)是一种已知的人的冠状病毒的突变,从而获得了新的致病力;或是一种动物 冠状病毒的突变具有了感染人的能力;或是两种人类冠状病毒或人与动物冠状病 毒的重组。 然而,2003年5月15日新英格兰医学杂志(N ENGL J MED)于网上发表 了Katnryn V.Holmes撰写的题目为“SARS相关的冠状病”的研究文章,对SARS 患者血中病毒抗体进行了检测及研究。研究结果显示,这个抗体与已知的任何一种抗体均不同,提示SARS—CoV对人类是一个全新的病毒。 SARS—CoV的核苷酸序列已被科学家们测定出来,人们发现它的基因组成与已知的冠状病毒的序列完全不同。SARS—CoV的基因组序列不包括编码HE的基因,也没有从其他病毒或宿主细胞获得的大的基因片段。因此,人们推测SARS—CoV既不是已知病毒的突变,也不是已知病毒的基因重组。它是一个全新的冠状病毒,有可能寄生于其他动物,在某种条件下获得了感染人的能力。只有在SARS疫情最初暴发的区域检测野生及家养动物的血清才能鉴别它的最初宿主。比较来自SARS患者和自然宿主的病毒间的差异,有可能揭示病毒如何变迁转而感染人类。当病毒以人类为宿主后,是否还具有感染其初宿主的能力?若病毒丧失了这个能力,人类彻底清除这个病     

应用RT-PCR技术检测啮齿类动物冠状病毒

为了检测啮齿类动物冠状病毒，设计了特异性引物，建立RT—PCR检测方法，并用于检测。在基因文库中查找了啮齿类动物冠状病毒和SARS病毒的基因序列，从N基因片段中，利用计算机软件设计了一对特异性引物，通过确定反应混合物的浓度和反应条件，并建立了一整套从病毒。RNA抽提、反转录到PCR反应的快速检测啮齿类动物冠状病毒的方法，扩增出了148bp的目的片段。并已用于啮齿类动物中检测各组织和拭子中的冠状病毒。该方法对啮齿类动物冠状病毒的早期诊断和与SARS病毒区别有重要意义。     

应用荧光定量PCR检测SARS康复者血浆冠状病毒RNA

目的　通过对SARS临床诊断康复者血浆中冠状病毒RNA的检测 ,观察SARS临床诊断康复者血浆中携带冠状病毒的情况 ,对SARS临床诊断康复者血浆临床应用的安全性提供实验室依据。方法　采用荧光定量PCR仪 ,分别用两种不同厂家荧光定量PCR试剂、对 2 6份SARS康复者血浆进行冠状病毒RNA检测。结果　两种不同试剂检测 2 6份SARS临床诊断康复者血浆冠状病毒RNA均为阴性。结论　实验室检测发现 ,SARS临床诊断康复者血浆冠状病毒RNA为阴性 ,为进一步临床采用SARS临床诊断康复者血浆辅助治疗SARS患者的安全性提供一定的实验室证据。     

新型冠状病毒肺炎的研究进展

自2019年12月起,中国湖北省暴发了一系列原因不明的肺炎病例,科学家分离出一种新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS CoV 2）,这种病毒感染已经在中国和全球多个国家流行,引起了全球关注。这是继严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS CoV）和中东呼吸综合征冠状病毒（MERS CoV）后发现的第三种冠状病毒,目前诸多学者对其进行大量的研究,本文对SARS CoV 2的病原学、流行病学特点、临床表现、影像学检查、实验室检查、诊断及治疗等进行综述。     

严重急性呼吸综合征实验室诊断技术研究进展

严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome,SARS)是一种起病急、传播快的呼吸系统传染病。已初步证实 ,其病原体为一种新型冠状病毒 ,现命名为冠状病毒Urban变种 (urbanstrainofSARS -associatedcoronavirus) [1,2 ] 。自从世界各地实验室成功分离出该病毒以来 ,许多用于SARS病原学诊断的检测方法相继问世 ,随着实验室诊断技术研究和开发 ,对进一步了解SARS自然史及明确诊断无疑是有益的。现将目前的研究进展及其存在的问题介绍如下。1　病原体研究1.1　形态结构　SARS相关冠状病毒是一种RNA病毒 ,属冠状病毒科。其颗…     

SARS相关冠状病毒S2基因的克隆及其DNA疫苗的免疫效果

目的：构建抗原基因为SARS相关冠状病毒(severe acute resplratory syndrome coronavtrus，SARS—CoV)S2基因的DNA疫苗，将其接种小鼠后观察病毒特异性抗体产生情况。方法：将合成的S2基因片段克隆至真核表达载体，随之将质粒进行小鼠肌内接种免疫，定期检测血清中抗SARS—CoV的病毒特异性抗体水平。结果：疫苗接种后第2周就能检测出病毒特异性抗体，随着时间的延续，抗体水平逐步升高，而空质粒对照组未检测出明显的特异性抗体。结论：以S2为抗原基因的DNA疫苗能诱导SARS病毒特异性抗体。     

新型冠状病毒实验室检测方法及应用

随着新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus?2,SRAS?CoV?2）分离培养与基因组测序的完成,新型冠状病毒肺炎（corona virus disease,COVID?19）的确诊主要依靠RT?PCR 法检测SARS?CoV?2 核酸基因,重组酶介导等温核酸扩增技术（recombinase aided amplification,RAA）等新型常温核酸扩增技术也得到进一步应用。免疫学诊断包括胶体金和ELISA IgM 和IgG 抗体检测技术,主要用于人群的筛查和辅助诊断。基于CRISPR技术的新型诊断技术等也在进一步完善过程中。     

SARS冠状病毒的生物学性状及实验室检测方法研究进展

严重急性呼吸道综合征(Severe Acute Respritory Syndrome,SARS,即非典型肺炎 ) 在全球二十多个国家和地区爆发,是进入新世纪以来的一次危胁人类健康的重大灾害. 在各国医学专家的共同努力下,很快将引起SARS的病原体锁定为变异的冠状病毒--SARS冠状病毒 (SARS Coronavirus, SARS CoV )这是一种全新的病毒,充分认识其生物学特性对于我们防治和攻克SARS有十分重要的意义.本文介绍了最近国内外对SARS CoV生物学性状和实验室检测方面的研究现状及进展,希望为SARS的防治和研究提供参考.     

严重急性呼吸综合征病原学诊断方法研究进展

严重急性呼吸综合征是由SARS病毒引起的一种急性呼吸道传染病。在传染性疚病的诊断中，病原学的诊断对确诊病例具有重要意义。本文对SARS病毒基因组和SARS病原学诊断方法的国内外的研究情况进行了综述。SARS--CoV的分离培养是SARS病原学诊断的金标准，但不适于常规开展。PCR检测SARS病毒核酸可作为SARS早期诊断的重要指标，但PCR假阳性和假阴性的问题尚有待解决。免疫法检测血清中抗SARS病毒特异性抗体可作为SARS确诊的辅助诊断依据，但不能用于早期诊断。多个部位、多份标本、多种方法联合检测可增加敏感性，减少假阴性；严格执行实验室操作标准，避免假阳性；多个实验室联合检测，可提高实验的准确性。     

SARS相关病毒基因组序列的研究

严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome，SARS)是由SARS相关病毒(SARS—CoV)引起的一种新的烈性呼吸道传染病。SARS—CoV是一种新的冠状病毒，基因组结构符合典型的冠状病毒特征，编码基因从5′端起分别为：RNA依赖的RNA聚合酶、突起蛋白、包膜蛋白、膜蛋白，3′端为核衣壳蛋白。对14株SARS—CoV的4个变异点分析，可将14株病毒分成两个基因型，即第9404、19084、22222、27827位的T：T：T：T／C：G：C：C两型。对SARS—CoV的基因组的全面了解不仅为疾病的发病机理研究提供主要线索，而且将为SARS的诊断、预防和治疗提供帮助。     

SARS相关冠状病毒M基因片段的克隆及其DNA疫苗诱导的体液免疫

目的：构建含有SARS相关冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARS—CoV)M基因片段的核酸疫苗，观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法：将合成的M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体pVAX1中，免疫小鼠后，用SARS—CoV抗体ELISA检测试剂盒定期检测免疫小鼠血清中抗SARS—CoV的病毒特异性抗体水平。结果：构建了重组核酸疫苗质粒pVCo—M，免疫小鼠后可诱导产生出病毒特异性抗体。结论：以M为抗原基因的DNA疫苗能诱导SARS病毒特异性抗体，为进一步改进或探索同类DNA疫苗提供有益启示。     

RT-PCR结合GeneScan检测SARS病毒的高灵敏度技术的建立及应用

目的建立高度敏感的检测SARS病毒(SARS—CoV)RNA的技术，提高SARS病毒检出率。方法用RT—PCR技术扩增SARS—CoV 138bp片段并荧光标记后，用ABI-310毛细管电泳仪和GeneScan软件对扩增产物进行分析，并以峰高的方式给出产物的相对产量，参考空白对照和阴性对照的峰高定出本批实验检测基线。高于基线为SARS病毒阳性。结果检测了来自20例SARS患的67份标本，与常规的琼脂糖凝胶电泳法的结果(23／67)相比，GeneScan法(38／67)检测SARS—CoV的灵敏度提高22．4％。全部20例患的1-5种标本中都有1种、2种甚至3种、4种检出为阳性。病程1-22天的患均能检出阳性。结论ABI-310仪检测SARS—CoV的灵敏度较高，有助于早期诊断。     

SARS临床检测实验室消毒初探

现已证实 ,严重急性呼吸系统综合征 (severeacuteres piratorysyndrome,SARS)的病原体为变异的冠状病毒 (SARSCorovirus,SARS CoV) [1] ,其传染性强、生存时间长。保证实验室工作人员的安全 ,是目前SARS临床检测工作的当务之急。在至今尚无先例与规律可循的情况下 ,我科作为SARS定点医院 (三级甲等定点医院 )的专业临床检测实验室 ,根据国家的相关规定 ,结合SARS临床检测的特殊性和我科实验室现有条件 ,对SARS检测实验室的消毒措施进行了大量调研与实践 ,摸索、总结出一些经验 ,并取得了防止SARS在实验室交叉感染的初步成效。…     

血、便、痰和尿标本中SARS冠状病毒核酸的检测和病毒基因谱的初步建立

目的：利用冠状病毒全基因组芯片检测SARS患者血、便、痰和尿标本中的冠状病毒核酸并试图建立其基因谱。方法：提取SARS患者血、便、痰和尿样本中的冠状病毒RNA，经全基因组随机反转录和PCR扩增标记成荧光探针，与SARS病毒全基因组芯片进行杂交，同时用体外培养的病毒RNA和从健康人血液中提取的RNA做对照。结果：SARS患者的4种标本中都能检测到冠状病毒核酸的存在，与整个病毒基因组相比，大都为一些不连续的片断。其中尿、痰和便标本中的基因谱较为相似，另外，发现编码S1蛋白的核酸在一些标本中是连续的，具体为23份血标本中有2份是连续的，13份痰标本中有8份是连续的，51份便标本中有48份是连续的，2份尿标本中都是连续的。结论：冠状病毒全基因组芯片能够检测出SARS患者血、便、痰和尿标本中的冠状病毒核酸，并能建立各来源标本中病毒核酸的基因谱。     

严重急性呼吸综合征相关冠状病毒基因组研究的新技术——RNA干扰

最近，严重急性呼吸综合征(SARS)在全世界约30个国家和地区散发或流行，众多实验室由此展开了针对SARS病原体的国际联合攻关。目前，已经确认其病原体是一种新型冠状病毒(命名为SARS—CoV)，而且该病毒的全基因组测序已经完成。采用现代分子病毒学实验技术对SARS病毒的功能基因组进行深入研究，有重要的理论和实际意义。作为一种崭新的基因沉默技术，RNA干扰无疑将在SARS病毒基因组研究中发挥重要的作用。     

SARS病毒S蛋白的原核表达与DNA疫苗的构建

目的探讨SARS冠状病毒的刺突(spike，S)蛋白的免疫学特性，以及S蛋白作为SARS—CoV病毒疫苗组分的可行性。方法将S蛋白基因分段克隆入原核表达载体pET—15b，并在大肠杆菌中表达，经过亲和层析得到纯化的重组蛋白rSa和rSb；将全长S基因克隆入真核分泌表达载体pSecTagB，得到重组DNA疫苗pSecS，免疫小鼠，得到SAS—CoV S蛋白抗血清。然后用纯化的重组蛋白rSa和rSb建立的SARS—CoV S抗体ELISA检测技术研究所构建的S-DNA疫苗的免疫效果。结果分段的重组蛋白rSa和rSb在大肠杆菌中均以可溶性形式得到高效表达，并能与SARS确诊病人血清以及pSecS免疫鼠血清发生特异性抗原抗体反应，原核表达的重组分段S蛋白具有SARS—CoV S蛋白相似的抗原性。结论原核表达的两段重组S蛋白有可能作为抗原组分用于临床SARS—CoV检测中；所构建的SARS—CoV的S基因核酸疫苗能在小鼠体内产生特异性抗体，这为进一步SARS DNA疫苗的研制提供一定的借鉴作用。     

人冠状病毒SARS-CoV、229E和OC43核衣壳(N)蛋白单克隆抗体的制备及3株人冠状病毒N蛋白的抗原相关性观察

目的 通过制备和鉴定人冠状病毒SARS．CoV、229E和OC43核衣壳（N）蛋白单克隆抗体〈mAb）,观察3株人冠状病毒的N蛋白抗原相关性。方法 分别用基因重组SARS．CoV、229E和OC43N蛋白免疫BALB／c小鼠,制备mAb,并采用ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光进行筛选和鉴定．同时用mAb分析3株人冠状病毒N蛋白之间的免疫交叉反应。结果 获得多株抗SARS．CoV、229E和OC43N蛋白mAb杂交瘤细胞株。ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光结果均显示,所有的mAb仅与各自病毒的N蛋白特异性反应。而在3株人冠状病毒N蛋白抗原之间不产生免疫交叉反应。结论 获得的特异性抗人冠状病毒N蛋白mAb为进一步研究3株人冠状病毒的抗原决定簇相关性奠定了基础。     

冠状病毒具有免疫原性的抗原

SARS(severeacuterespiratorysyndrome)冠状病毒(CoV,coronavirus)是冠状病毒的一种新变体。对11株SARS-CoV的核苷酸序列和翻译的氨基酸序列分析表明均有典型的CoV基因组结构。研究SARS-CoV具有免疫原性的抗原对于研制疫苗、新药和了解其致病机制十分重要。冠状病毒感染多种家畜、家禽和与其有关的动物,除猫传染性腹膜炎病毒(felineinfectiousperitonitisvirus,FIPV)和凝血性脑脊髓膜炎病毒(hemagglutinatingencephalomyelitisvirus,HEV)引起全身性感染外,冠状病毒多引起呼吸道和肠道的局部感染。肠致病性冠状病毒感染肠上皮绒毛…     

SARS冠状病毒N基因重组腺病毒载体的构建及其在Vero E6细胞中的表达

目的：构建SARS冠状病毒N基因重组腺病毒载体并在Vero细胞中表达,为进一步研究SARS病毒的基因疫苗提供试验基础。方法：用化学合成的方法得到SARS病毒N基因,以PCR法使其加上CACC序列接头,经过定向拓扑克隆使目的基因连接到转移载体上,再通过LR酶促反应,将目的基因转移到腺病毒表达载体DNA上,获得N基因重组的腺病毒DNA,转染HEK293A细胞,包装、扩增后得到SARS冠状病毒N基因重组的腺病毒,进一步感染Vero E6细胞,用westem blot的方法检测目的基因表达产物。结果：目的基因能成功地在感染细胞中表达并保持了较好的免疫原性。结论：该研究为SARS冠状病毒基因疫苗的研制了提供理论和实验依据。     

SARS冠状病毒多聚酶基因临床检测方法的建立

目的分析SARS冠状病毒广东株多聚酶基因片段的异质性,建立RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法,为SARS的快速诊断提供依据。方法合成针对SARS冠状病毒多聚酶基因区段的特异性引物,从广东省SARS病人及疑似病人标本中提取RNA,经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析,并将序列与SARS冠状病毒和其他已知冠状病毒进行同源性分析。结果从多例SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到RT-PCR阳性片段,随机选取其中8例经克隆和DNA序列分析证实均为SARS冠状病毒序列(同源性100%),而所有阴性参照标本RT-PCR均为阴性。克隆片段BNI109与已知冠状病毒在核苷酸和氨基酸水平进行分析显示,该片段与牛冠病毒(bovinecoronavirus,BCV)和鼠肝炎病毒(murinehepatitisvirus,MHV)同源性最高,在氨基酸水平上同源性高达75%。结论SARS冠状病毒多聚酶基因片段BNI109的保守性极强,适合建立RT-PCR法检测SARS冠状病毒。