蛋白激酶B受体在大鼠脑星形胶质细胞的表达及其磷酸化

目的:研究大鼠脑星形胶质细胞蛋白激酶B受体(TrkB)的表达及其信号转导通路。方法:用生后2~3dSD大鼠,在无菌条件下取脑,制备细胞悬液,以胶质纤维酸性蛋白(GFAP)鉴定星形胶质细胞;以RT-PCR法研究星形胶质细胞TrkB、ERK1、ERK2 mRNA表达,用蛋白印迹和免疫细胞化学法研究星形胶质细胞TrkB、ERK1、ERK2蛋白表达。用蛋白印迹法检测脑源性神经营养因子(BDNF)作用后的星形胶质细胞p-TrkB。结果:星形胶质细胞的纯度达95%以上,RT-PCR结果显示星形胶质细胞表达TrkB、ERK1、ERK2 mRNA,蛋白印迹及免疫细胞化学法显示星形胶质细胞表达TrkB、ERK1、ERK2蛋白。BDNF作用1h后TrkB磷酸化,K252a可阻止TrkB磷酸化。结论:培养的大鼠星形胶质细胞表达TrkB、ERK1、ERK2;BDNF可使TrkB磷酸化,TrkB与星形胶质细胞信号转导有关。     

睫状神经营养因子对体外培养的星形胶质细胞细胞周期及Fos蛋白表达的影响

目的研究睫状神经营养因子（CNTF）对体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞（Ast）细胞周期及Fos蛋白表达的影响。方法通过体外纯化培养获取大鼠大脑皮质Ast,将CNTF加入培养液,作用相应的时刻点后,应用流式细胞仪测定细胞周期的变化,采用免疫细胞化学方法研究Fos蛋白的表达。结果CNTF作用Ast6垢,可显著促进细胞周期进程,表现为G0／G1期细胞百分比降低;S期＋G2／M期细胞百分比（增殖指数,poliferation index,PI值）升高。12h促增殖作用达高峰,24h、48h有所恢复,但PI仍明显高于对照组。CNTF作用于Ast 2 h后即可引起Fos蛋白的显著表达,并持续至24h,而糖皮质激素预处理可明显抑制Fos蛋白表达。结论CNTF可促进Ast增殖及Fos蛋白表达。     

ERK与TrkB在大鼠星形胶质细胞的表达(英文)

本文探讨了ERK(extracellular signal-regulated kinase)和TrkB(tyrosine kinase receptor B)在星形胶质细胞的表达。生后2~3d的SD大鼠在无菌条件下取脑,以胰蛋白酶消化制备细胞悬液。用GFAP免疫细胞化学方法鉴定星形细胞,通过免疫细胞化学与蛋白印迹方法检测TrkB,ERK1和ERK2在星形胶质细胞的表达。结果显示,星形胶质细胞的纯度达95%以上,在星形胶质细胞的细胞质观察到ERK1免疫阳性染色;TrkB免疫阳性染色位于细胞膜、细胞质和细胞核。化学发光法检测后ERK1和ERK2两条蛋白条带清晰可见。以上结果提示大鼠大脑皮质星形胶质细胞表达TrkB,ERK1和ERK2,TrKB/ERK通路可能与星形胶质细胞增殖有关。     

星形胶质细胞在帕金森病发病机制中的作用

帕金森病是中老年人常见的中枢神经系统变性疾病。星形胶质细胞可能参与了其发病过程,一方面,它可以通过释放神经营养因子、谷胱甘肽等保护多巴胺能神经元,在帕金森病中发挥保护作用;另一方面,它也可能通过释放一些促炎症因子而推动帕金森病的发生和发展。     

桩蛋白在两型星形胶质细胞及神经元中的差异表达

目的:观察桩蛋白在大鼠两型星形胶质细胞及神经元中的差异表达情况。方法:通过细胞培养并结合免疫荧光和RT-PCR方法,观察了桩蛋白的mRNA及蛋白在大鼠两型星形胶质细胞T1A和T2A以及神经元中的表达。结果:RT-PCR显示体外培养的T1A表达桩蛋白mRNA,而T2A和神经元未表达桩蛋白mRNA;免疫荧光染色显示桩蛋白主要分布于T1A的胞浆及突起中。结论:桩蛋白在T1A中表达,但未表达于T2A和神经元中;本实验结果为进一步研究桩蛋白在T1A中的生物学作用奠定了基础。     

睫状神经营养因子的cDNA克隆、表达、纯化及其生物活性鉴定

反转录ＰＣＲ扩增人睫状神经营养因子（ｈｕｍａｎｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏＰｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ｈＣＮＴＦ）ｃＤＮＡ后,克隆进ｐＢＶ２２０,在大肠杆菌中实现原核高效表达,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ观察到分子量约为２４ｋＤ的预期表达产物,薄层扫描确定其表达量为２６％,制备电泳和凝胶过滤纯化后纯度达到９８％,生物活件分析表明,表达产物能刺激１０日龄鸡胚背根神经节细胞的生长,促进ＣＦＵ－ＧＭ的增殖。     

星形胶质细胞谱系及星形细胞瘤起源的研究

各种神经胶质细胞中数目最多、分布最广的星形细胞担负了神经胶质细胞的大部分功能。根据对两种神经组织标志物─ＧＦＡＰ、Ａ－２Ｂ－５抗体的反应不同，将星形细胞分为１型（ＧＦＡＰ＋Ａ－２Ｂ－５－）和２型（ＧＦＡＰ＋、Ａ－２Ｂ－５＋）。研究指出两型星细胞来源于不同祖细胞，而存在两个谱系，星形细胞胶质瘤与星形细胞具有同样的谱系源。对小胶质细胞在星形细胞发生和分化中的作用亦予以阐述。     

蛋白脂蛋白在两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达

目的:探讨蛋白脂蛋白(PLP)在分化成熟的两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达。方法:用激光共聚焦双重免疫荧光标记技术检测PLP在分化成熟的两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达情况。结果:在O-2A谱系来源的成熟2型星形胶质细胞和少突胶质细胞中PLP抗体标记为阳性,而在T1A谱系来源的成熟1型星形胶质细胞中则未检测到PLP的表达,从而在蛋白质水平验证本室研究两型星形胶质细胞基因表达谱差异基因芯片结果中PLP mRNA在T2A中高表达,而在T1A中低表达的现象。结论:PLP等脂代谢相关基因可能在O-2A谱系发生和分化过程中起重要作用,O-2A谱系与神经髓鞘发生以及脑内脂质代谢内在机制密切相关。     

人甲状腺促性腺激素释放激素及其受体的表达

目的　探讨人甲状腺中是否存在促性腺激素释放激素 (GnRH)及促性腺激素释放激素受体 (GnRH R)并细胞定位 ,试图从转录及翻译水平讨论人甲状腺可否合成GnRH及GnRH R ,为探讨GnRH可能影响甲状腺的功能提供形态学依据。　方法　采用免疫组织化学法和原位杂交技术。　结果　所测人正常甲状腺组织均呈较强的GnRH和GnRH R免疫反应阳性 ,甲状腺滤泡上皮细胞、滤泡旁细胞均为阳性细胞。免疫反应阳性物质主要分布在阳性细胞胞质内 ,胞核呈阴性。原位杂交结果同免疫组织化学染色基本一致 :甲状腺滤泡上皮细胞胞质和滤泡旁细胞胞质可检测到较强的GnRHmRNA及GnRH RmRNA阳性杂交信号。胞核均呈阴性 ,未检测到杂交信号。　结论　人甲状腺不仅表达GnRH和GnRH R ,而且可以自身合成GnRH和GnRH R。GnRH可能以自分泌的方式影响甲状腺的生理功能     

雄性大鼠下丘脑雄激素受体蛋白及其mRNA表达的探讨

为了观察雄激素受体 ( AR)蛋白及其 m RNA在大鼠下丘脑的表达 ,本研究采用免疫组织化学和原位杂交方法观察了成年 ( 3月龄 )雄性大鼠下丘脑 AR阳性神经元的存在及其表达。结果显示 ,雄激素受体阳性神经元广泛分布于下丘脑诸核 ,尤其是弓状核、腹内侧核、背内侧核、室周核、室旁核 ,阳性神经元多为小细胞。同时在基因水平证实部分下丘脑神经元能合成 AR,提示雄激素可能作用于以上区域。     

巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1在大鼠2型星形胶质细胞中的表达

目的 观察1型和2型星形胶质细胞(T1A、T2A)是否表达神经干细胞的标志物、是否具有神经干细胞的特性.方法 取新生大鼠脑皮质,体外培养纯化的O-2A祖细胞、T1A和T2A,应用激光共焦双重免疫荧光标记技术检测巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)的表达;观察O-2A祖细胞、 T1A和T2A在碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的培养液中生长方式的改变.结果 巢蛋白在O-2A祖细胞和T2A中表达,T1A不表达;SSEA-1仅在T2A中表达.在干细胞培养基中培养10d,T2A形成能增殖和连续传代的细胞球,细胞球巢蛋白标记阳性,贴壁后分化细胞具有神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞样形态;但相同培养条件下的O-2A祖细胞和T1A生长方式无改变.结论 巢蛋白和SSEA-1在两型星形胶质细胞中的表达存在差异,T2A具有神经干细胞的某些生物学特性.     

人α-IFN对脐血单个核细胞FcrR的调变作用及其机理初步研究

本文以热凝聚Ig间接免疫荧光染色及EA花结法,研究发现小剂量人IFN-α对人脐血单个核细胞Ecr受体表达有明显的促进作用(P<0.01),抗人IFN-α抗体可消除这种促进作用。鼠干扰素则无明显的促进作用。链霉蛋白酶处理可减弱Fcr受体的表达,而IFN-α可恢复该受体的正常表达。IFN-α对Fcr受体的调变作用可被哇巴因阻断。     

大鼠体神经-内脏神经吻合后脑源性神经营养因子及其受体的表达变化

为了研究大鼠体神经-内脏神经吻合后脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶B(TrkB)在脊髓前角神经元中的表达变化,以正常大鼠为对照,运用RT-PCR技术检测大鼠体神经-内脏神经吻合术后不同时间脊髓腰4(L4)前角神经元中BDNF及TrkB mRNA的表达变化。结果显示,在正常大鼠L4前角神经元中,BDNF及TrkB的mRNA均存在一定水平的表达;体神经-内脏神经吻合术后7d、14d、1m和2m,BDNF和TrkBm RNA的表达均升高,术后7d达到高峰,14d开始下降;2m时BD-NF mRNA的表达量仍显著高于正常组(P<0.01),而TrkB mRNA的表达量到2m时虽仍高,但与正常组相比,其差异已无统计学意义(P>0.05)。上述结果表明,大鼠体神经-内脏神经反射弧建立后,脊髓L4前角神经元的内源性BDNF及其受体TrkB的表达均增高,它们可能作为保护性因子有利于受损神经元的存活和再生。     

表皮生长因子及其受体在食管癌中的表达

目的 研究表皮生长因子（ＥＧＦ）及其受体（ＥＧＦＲ）在食管鳞状细胞癌中的表达。方法 用免疫组织化学ＡＢＣ法分析并研究染色结果与病理改变之间的关系。ＥＧＦ染色,以正常人颌下腺作为阳性对照。ＥＧＦＲ以正常人胎盘组织为阳性对照。ＥＧＦ和ＥＧＦＲ染色一抗的浓度分别为１：２００,１：１００,４℃孵育４８ｈ。结果 ＥＧＦ强阳性１８例,弱阳性１６例,ＥＧＦＲ强阳性１８例,弱阳性１６例。ＥＧＦ和ＥＧＦＲ的表达分为     

多肽类物质在体外培养星形胶质细胞中的表达

Recently, scientists interested in the diseases of human brain have paid much attention to the neuropeptides ［Nie XJ, et al. Rev Neurosci 1996, 7(3): 177］. Under normal conditions, these neuropeptides are found in some types of neurons and in endothelial cells of microvessels but not in glial cells.     

NMDA受体1和雌激素受体在白细胞介素-2致痫大鼠脑内的表达变化和共存

目的 探讨白细胞介素2(IL-2)致痫与NMDA受体(NMDAR)和雌激素受体(ER)的关系.方法 应用免疫组织化学、免疫荧光双标和激光共焦显微镜技术研究IL-2致痫大鼠及经免疫抑制剂预处理后再致痫大鼠脑内NMDAR-1、ER的表达变化以及NMDAR/ER和NMDAR/IL-2R共存情况.结果 大鼠侧脑室注射IL-2以后,动物出现明显的癫痫发作,其大脑皮质和海马部位NMDAR-1及ER表达较对照组明显增多,免疫反应平均吸光度(A)值与对照组相比有极显著性差异;而用IL-2抑制剂环胞霉素(CsA)或糖皮质激素(G)预处理后再注射IL-2,动物未出现或仅出现轻微的癫痫发作,其NMDAR-1和ER表达较IL-2组明显减少(P＜0.05).研究还观察到大鼠脑内大脑皮质和海马部位NMDAR/ER或NMDAR/IL-2R之间存在着广泛共存.结论 IL-2有致痫作用,NMDAR-1、IL-2R和ER在致痫活动中可能存在协同和互动作用.     

人孕激素受体在大肠杆菌中的高效表达及应用

为了制备抗重组人孕激素受体单克隆抗体，用聚酶链反应扩增人孕激素受体氨基础编码区段，定位克隆连入主同效表达载体ＰＭＳ－３１ｂ，构建重组质粒ＰＭＳ－ＰＲａ，将其转入大肠杆菌ＰＯＰ＾２１３６，     

胃癌组织中ZAC与生长抑素及生长抑素受体表达的相关性

目的 研究胃癌组织中ZAC与牛长抑素及生长抑素受体表达的相关性,探讨其与胃癌临床病理学指征的关系.方法 应用免疫组织化学及RT-PCR技术,检测30例胃癌、癌旁和正常胃黏膜组织中ZAC、生长抑素及生长抑素受体的表达.结果 胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织巾ZAC的阳性表达率分别为33.03%(10/30)、73.3%(22/30)和66.7%(20/30);生长抑素的阳性表达率分别为36.7%(11/30)、53.3%(16/30)和73.3%(22/30).胃癌组织中ZAC和生长抑素的表达阳性率均明显低于正常胃黏膜组织.胃癌、癌旁及相应正常胃黏膜组织中牛长抑素受体5种亚型(SSTR1～SSTR5)mRNA均有表达.与正常胃黏膜组织比较,胃癌组织中SSTR3的阳性率显著降低,SSTR2和SSTR5显著增高.胃癌组织中ZAC与生长抑素的表达趋势一致;与SSTR3的表达趋势亦一致.ZAC与生长抑素的共表达与胃癌的分化程度及浸润深度明显相关,而与淋巴结转移无明显关系.ZAC与SSTR3的共表达与胃痛的分化程度明显相关.结论 ZAC可能是生长抑素抑制胃癌发生的下游靶基因;生长抑素通过与其受体SSTR3结合,影响ZAC的表达,抑制肿瘤细胞的生长,促进其分化.