生后不同时期大鼠坐骨神经NGF基因的表达

采用 RT-PCR方法半定量分析生后 1、15、3 0、60、12 0和 3 60 d大鼠坐骨神经中 NGF m RNA表达的变化。结果表明 ,大鼠生后 1d坐骨神经中即有 NGF m RNA的表达 ;随着生后发育过程 ,NGF m RNA的表达量逐步增加 ,并呈严格单调上升的趋势。开始时增加速度较慢 ,但随鼠龄的增加而逐渐加快 ,至 49d时达到最快 ,然后逐渐减慢 ,到 12 0 d时已接近生后稳定表达水平。     

β_1整合素在生后不同年龄阶段小鼠睾丸生精细胞分布的研究

目的　观察 β1 整合素在出生后不同年龄阶段小鼠睾丸生精细胞中的免疫组化定位。方法　用免疫组织化学观察 β1 整合素在生后 1d、4d、7d、1 1d、2周、3周、4周、5周、6周和成年昆明小鼠睾丸生精细胞中的分布。结果　出生后 1～ 1 0d的小鼠睾丸生精小管上皮细胞未见 β1 整合素的表达 ;出生后 1 1d到成年小鼠的不同年龄阶段均可检测到 β1 整合素在睾丸生精小管上皮细胞中的表达。在生后 1 1d到 4周小鼠 ,β1整合素主要表达于增殖能力旺盛的精原细胞的胞膜 ,5周后 β1整合素主要表达于精原细胞和拉长期精子细胞头部细胞膜。结论　β1 整合素是生后 1 1d～ 4周小鼠精原细胞的表面标志     

小鼠Cpne5基因mRNA水平的表达分布及其在胚胎的表达定位

目的明确小鼠Cpne5基因在mRNA水平的组织表达分布及其在胚胎的表达定位。方法提取新生、成年小鼠主要脏器的总RNA,利用RT-PCR法检测Cpne5 mRNA的表达量;合成针对Cpne5 mRNA的杂交探针,取不同胎龄胎鼠进行整体原位杂交。结果 Cpne5 mRNA在成年小鼠10种脏器组织均有不同程度的表达,以大脑,小脑,睾丸和肺脏表达量较高;而肝脏和肌肉未表达。新生小鼠9种脏器中,Cpne5表达量最高的是脑组织,眼和肾次之,肺和肝脏表达量很少。制备并评估Cpne5原杂探针的产量,SP6转录的反义探针浓度为100ng/μL,T7转录的正义探针浓度为10ng/μL,原位杂交结果显示Cpne5 mRNA主要表达于胎鼠的端脑、间脑、中脑及菱脑原节。结论在新生和成年小鼠的脑组织中Cpne5基因mRNA高水平表达,并在胎鼠发育过程中定位于胎脑。     

Hetrin基因在大鼠脑发育过程中表达的初步研究

本文目的是 :观察 hetrin基因在大鼠脑发育过程中的表达变化规律 ,藉以探讨 hetrin在神经系统发育过程中的作用。以地高辛 (dig)标记 hetrin基因 3 ' -末端 c RNA为探针 ,采用原位杂交法研究 hetrin m RNA在生后第 10 d(P10 )、P3 0和 P60大鼠脑中的分布状况 ;同时采用半定量 RT-PCR法分析出生前后大鼠脑内 hetrin m RNA表达水平的变化。结果发现 ,hetrin m RNA原位杂交阳性信号定位于神经元胞质内 ,在 P10、P3 0和 P60大鼠的脑组织中均可见明显的杂交信号。 RT-PCR结果显示 ,在胚胎第 9d(E9)大鼠脑内 hetrin m RNA开始表达 ,但表达量很低 ,以后其表达量逐渐升高。出生后大鼠不同脑区 hetrin m RNA的表达量变化趋势不同。本实验结果表明 ,在胚胎期及出生后大鼠脑的多个部位都有 hetrin m RNA表达 ,而且 hetrin m RNA表达量与神经细胞突起生长及新突触连接的建立在时间上有一定的同步性 ,提示 hetrin m RNA的表达与神经突起生长存在着一定的关系 ,进一步支持存在 hetrin基因的神经细胞突起具有诱向生长功能     

实验性铅中毒对睾丸神经生长因子基因表达的影响

目的 探讨实验性铅中毒对睾丸组织神经生长因子（ＮＧＦ）基因表达的影响。方法 小鼠以０．５％醋酸铅自由饮服８周,测定血铅和睾丸铅含量。采用原位杂交法（以地高辛标记ＮＦＧ ＤＮＡ为探针）和ＲＴ－ＰＣＲ方法,观察睾丸组织ＮＧＦ ｍＲＮＡ含量的变化。结果 铅染毒小鼠血铅和睾丸组织铅含量明显升高;原位杂交结果显示,铅染毒小鼠睾丸杂交信号明显减少,ＲＴ－ＰＣＲ结果表明,铅染毒小鼠睾丸组织ＮＧＦ ｍＲＮＡ表达量     

大鼠、小鼠各组织中的Lhx3同源盒基因的差异表达

目的分析新生及成年大鼠、小鼠各组织中Lhx3基因的表达情况。方法提取新生及成年大鼠、小鼠的骨骼肌、肝、肺、心脏、大脑皮层、脊髓等组织的总RNA,合成Lhx3基因特异性引物,用RT-PCR方法检测其表达情况。结果该基因在新生和成年大鼠和小鼠的大脑皮层和脊髓中有较高的表达,在肺中有中度表达。新生大小鼠的骨骼肌中有微量表达,而在成年大小鼠骨骼肌中未见表达。在新生大小鼠的心肌中未见表达,而在成年大小鼠心肌中有中度表达。结论Lhx3基因在不同年龄的大、小鼠的不同组织中的表达有明显的差异,说明该基因在不同组织发育和功能发挥中有不同的作用。     

层黏连蛋白受体在小鼠睾丸和附睾中的表达

目的 探讨层黏连蛋白受体(LAMR1)在小鼠睾丸和附睾中的表达.方法收集3只正常成年昆明小鼠睾丸和附睾.采用原位杂交和免疫组织化学方法,检测LAMR1 mRNA及蛋白在成年小鼠睾丸和附睾中的分布.结果 LAMR1 mRNA在附睾头和附睾尾表达最强;在睾丸生精细胞中也有表达.免疫组织化学结果显示,LAMR1蛋白从附睾头到...     

CNTF基因在大鼠脊髓中的表达及生后发育的变化

目的 观察CNTF基因在大鼠脊髓中的表达以及生后发育过程中的变化。方法 以地高辛标记（dig）－CNTF cDNA为探针，采用原位杂交法，观察CNTF mRNA在大鼠脊髓中的分布；采用TR－PCR法，半定量分析大鼠生后发育过程中，脊髓CNTF mRNA表达水平的变化。结果 CNTF mRNA原位杂交阳性信号存在于正常大鼠脊髓白质的腹索、外侧索周边的部分胶质细胞中；灰质中未能发现阳性杂交信号。RT－PCR结果显示，大鼠生后1d脊髓细胞中即可见CNTF mRNA表达，但表达量较低；出生15d表达量迅速增加；30d时最高；60d时的表达量有下降的趋势。结论 大鼠脊髓白质的部分胶质细胞可表达CNTF mRNA；大鼠出生后1d CNTF mRNA即有表达，之后随脊髓的发育而呈动态变化的趋势。     

DDX3和CK1ε在SOD1-G93A突变的ALS转基因小鼠纹状体的表达

目的:检测DDX3和CK1ε在SOD1-G93A突变的ALS转基因小鼠纹状体的表达变化,探讨其在ALS纹状体病变中的作用,为ALS研究提供新的实验依据。方法:将发病早期、中期和晚期(即95 d、108 d和122 d)的成年野生型小鼠和SOD1-G93A突变型ALS转基因小鼠分别处死取材,运用免疫荧光技术对小鼠纹状体内DDX3和CK1ε的表达水平进行检测,运用RT-PCR技术对小鼠纹状体内DDX3和CK1ε的m RNA水平进行检测,运用Western Blot行蛋白水平变化检测。结果:野生型小鼠和SOD1-G93A突变型转基因小鼠纹状体中均可检测到DDX3和CK1ε阳性细胞。DDX3和CK1ε在神经元表达,但在星形胶质细胞不表达。在发病的中期和晚期,DDX3在ALS转基因小鼠纹状体中的m RNA和蛋白表达与野生型鼠相比均升高。CK1εm RNA在ALS发病的早期不变化,在中期、晚期较野生型鼠降低;而在ALS发病的早期转基因小鼠纹状体中CK1ε蛋白表达量较野生型鼠升高,在中期、晚期降低。结论:DDX3和CK1ε在SOD1-G93A突变的ALS转基因小鼠纹状体中表达异常与ALS纹状体的病变密切相关。     

针刺对备用DRG的NGF及其mRNA阳性大、中、小神经元数量的影响

本研究观察了 NGF及其 m RNA阳性神经元在 DRG大、中、小神经元中的数量变化 ,目的在于探讨 DRG各类神经元NGF变化与针刺促进脊髓可塑性的关系。对 5只成年猫进行双侧备用根手术。术后当日开始针刺一侧 L6 脊神经后肢分布区的两组穴位即足三里和悬中、伏兔和三阴交 ,每天一次 ,每次 3 0 min,连续针刺 7d后处死动物。取针刺侧与非针刺侧 L6 的 DRG制成 2 0μm厚冰冻纵切片。分别用 NGF抗血清和 NGF的 c RNA探针进行免疫组织化学反应及原位杂交染色。计数两侧 DRG相同面积内大 (>5 7μm)、中 (4 2～ 5 7μm)、小 (<42 μm)型 NGF及其 m RNA阳性神经元的数量。结果显示 :针刺侧备用 DRG NGF及其 m RNA阳性大、小型神经元的数量明显增加 (P<0 .0 5 ) ,而对中型神经元数量影响不明显。结论 :针刺促进脊髓可塑性可能与备用 DRG大、小神经元表达 NGF增多有关。     

生后小鼠颌下腺神经生长因子基因表达的发育变化

为了探讨在发育过程中小鼠颌下腺神经生长因子基因表达的变化，应用原位杂交组织化学技术和图像分析方法对新生至２月龄ＩＣＲ雄性小鼠颌下ＮＧＦｍＥＮＡ基因表达的变化，应用原位杂交研究。结果显示：新生小儿颌下腺未见ＮＧＦｍＲＮＡ杂交信号，８－１０ｄ龄小鼠颌下腺ＮＧＦ原位杂交信号呈阴性至弱阳性。     

In situ hybridization of nerve growth factor mRNA in the mouse submandibular gland

We studied the presence of beta-nerve growth factor (NGF) mRNA in the submandibular gland of the mouse by in situ hybridization using 35S-labeled prepro-beta-NGF antisense RNA. Female and male mice were studied at different stages of postnatal development, ranging from 3 to 12 weeks. Although NGF mRNA was detectable in the granular convoluted tubules of the submandibular gland in all the age and sex groups studied, the abundance of the signal dramatically increased after 5 weeks during the development of the submandibular gland. In addition, a conspicuous sexual dimorphism became increasingly apparent in the 6-, 7-, 10-, and 12-week-old animals, due to the remarkable development of the granular convoluted tubules in the adult male mouse, that expressed abundant NGF mRNA.     

Transmembrane protein 50b (C21orf4), a candidate for Down syndrome neurophenotypes, encodes an intracellular membrane protein expressed in the rodent brain

Transmembrane protein 50b, Tmem50b, previously referred to as C21orf4, encodes a predicted transmembrane protein and is one of few genes significantly over-expressed during cerebellar development in a Down syndrome mouse model, Ts1Cje. In order to assess potential mechanisms by which Tmem50b could contribute to Down syndrome-related phenotypes, we determined the expression patterns of Tmem50b mRNA, as well as Tmem50b protein distribution, expression and subcellular localization. In situ hybridization in mice at embryonic day 14.5 showed cortical plate and spinal cord mRNA expression. By postnatal day 7, strong mRNA expression was seen in the cerebellum, hippocampus and olfactory bulb, with diffuse cortical expression. Quantitative PCR of adult mouse tissue showed Tmem50b mRNA expression in the brain, heart and testis. A rabbit polyclonal antibody was generated against Tmem50b and rat and mouse tissue screening by Western blot, and immunohistochemistry showed that protein expression concurred with mRNA expression. Double immunofluorescence revealed that Tmem50b is highly expressed in rat and mouse glial fibrillary acidic protein-positive cells in vivo and in vitro, but less so in neuronal MAP2- or beta-tubulin II-positive cells in vitro. Tmem50b is invariably expressed in cultured mouse neural precursor cells. In adult mouse cerebellum sections, Tmem50b immunoreactivity was found in Purkinje and Golgi cell somata and in Bergmann glial processes. Electron microscopy confirmed that Tmem50b was present on endoplasmic reticulum (ER) and Golgi apparatus membranes. Results indicate that Tmem50b is a developmentally-regulated intracellular ER and Golgi apparatus membrane protein that may prove important for correct brain development through functions associated with precursor cells and glia.     

部分背根切断对备用DRG神经元和胶质细胞NGF表达上调的影响

本研究目的在于探讨部分背根切断后备用背根节(DRG)中各类细胞NGF及其mRNA的量变状况。将成年雄猫10只分为正常组、单侧部分背根切断后7天组等2组,每组5只。实验组切除一侧L1～L5,L7～S2 DRG,保留L6 DRG为备用根。取正常组一侧和术后7天组手术侧的L6 DRG制成20μm厚冰冻纵切片,分别用NGF抗体及其cRNA探针进行免疫组织化学及原位杂交反应。观察NGF及其mRNA在DRG各类细胞的分布,测定NGF及其mRNA的光密度值以反映其相对含量。结果表明,在正常组,L6DRG中仅存在少量的NGF及其mRNA阳性神经元,此外,一些胶质细胞也呈阳性反应。在手术组,各类神经元及胶质细胞内NGF及其mRNA的光密度值较正常者显著升高(P<0.05)。结论:部分背根切断导致备用DRG神经元和非神经元表达NGF增多,提示NGF可能有利于促进备用背根生芽。     

Expression of NGF and trkA mRNA in song control and other regions of the zebra finch brain

We used in situ hybridization to measure the expression of NGF and trkA mRNA in the zebra finch brain at posthatch day 11 (P11), P25, and in adulthood. Expression of NGF and trkA was restricted to specific areas of the telencephalon in the adult zebra finch brain. Interestingly the expression of NGF and trkA overlapped in most brain regions, suggesting that NGF acts at sites close to cells that synthesize it. In song regions of adults, both NGF and trkA were clearly expressed in lMAN, HVC, and RA in males and in lMAN and RA in females. At P11, NGF and trkA mRNA were detected only in RA in both sexes. At P25, when sex differences in lMAN and RA begin to emerge, NGF mRNA was expressed in lMAN and RA in both sexes and trkA was detected at low levels in lMAN in both sexes. Whereas the level of trkA expression in RA of males at P25 was consistently low but detectable, expression in females was not detected. The volume of RA defined by NGF was significantly larger in males than females at P25. We also found a tendency for the intensity of NGF in RA to be higher in males than in females at P25, although the difference was not statistically significant. The presence of NGF and trkA mRNA in RA and lMAN at P25 suggests that they may participate in sexually dimorphic neural development of RA and lMAN, possibly by participating in sex-specific cell survival.     

轴突生长导向因子Sema 3A在鸡胚脊髓中的表达

为了探讨轴突生长导向因子 Sema 3 A在鸡胚脊髓中的表达 ,扩增含有 Sema 3 A编码序列的质粒并制备 RNA探针 ,应用原位杂交技术检测 Sema3 A m RNA在鸡胚不同发育期 ( E4、E6、E7、E8)脊髓中的表达。结果表明 ,在鸡胚发育的第 4d( E4) ,Sema 3 A m RNA表达在神经管周围和脊髓 ;在 E6期和 E7期 ,Sema 3 A表达在中央管周围和脊髓前角 ,以腹侧为著 ;在 E8期 ,表达主要集中在前角运动神经元 ,其它部位则信号明显较弱。结论 :Sema3 A在鸡胚不同发育期脊髓中的表达是动态的 ,呈现向腹侧集中的趋势 ;它可能在脊髓发育期轴突的投射中起着导向作用     

联合应用神经生长因子和神经节苷脂1对坐骨神经损伤大鼠脊髓神经元的保护作用

目的：了解联合应用神经生长因子(NGF)和神经节苷脂1(GMl)对大鼠周围神经损伤后脊髓神经元的保护作用。方法：选用SD大鼠,分为生理盐水(NS)组、NGF组、GM1组和NGF GM1组,将大鼠坐骨神经造成5mm缺损,术中硅胶管内局部加药、术后大鼠损伤侧小腿肌注药物。术后定期光、电镜观察L4～I6脊髓前角神经元结构变化,测定损伤远段和近段神经传导速度。结果：脊髓运动神经元数目以及神经传导速度4周时,NGF组和GM1组均多于或快于NS组,NGF GM1组则多于或快于NS组、NGF组和GM1组,8周时NGF GM1组、NGF组、GM1组组间无显著性差异但均多于或快于NS组。结论：NGF GM1对周围神经损伤后脊髓运动神经元退变的保护作用与单用NGF或GM1相比,能更早期地发挥作用,并且效果优于单用NGF或GM1。     

从rds小鼠视网膜克隆视网膜色素变性相关差异片段

目的 从遗传性视网膜色素变性动物模型rds小鼠中克隆视网膜色素变性发病过程中特异表达的基因。方法 应用差异显示技术,分析rds小鼠发病过程中视网膜的mRNA。对特异性表达的mRNA片段进行克隆测序。结果 在视网膜色素变性发病过程中,rds小鼠的视网膜存在着相当明显的基因表达差异。在所测序分析的5个差异显示片段中其中一个与GenBank刚登录的功能未知的、从成年男性睾丸组织中克隆出来的cDNA序列较高同源（同一率为86％）另外4个为低同源序列。25天rds小鼠高表达的一个差异片段,与37天正常鼠表达而rds小鼠不表达的另一个片段,长度相同,177个碱基只相差两个。结论 视网膜色素变性这类慢性病变,存在着多个基因的表达及调控。