盐酸埃他卡林对同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的保护作用研究

高浓度同型半胱氨酸具有血管内皮细胞毒性。高血压病理过程中存在血管内皮细胞功能紊乱。盐酸埃他卡林（Iptakalim hydrochloride，Ipt）为新型降血压药物。本实验以逆转录-聚合酶链式反应检测单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）、细胞间粘附分子-1（intercellular adhesive molecule-1，ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesive moleculel-1，VCAM-1）mRNA表达水平，观察埃他卡林对同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）诱导内皮细胞损伤的作用。     

高糖致内皮细胞粘附分子基因的过度表达以及槟榔碱的调节作用

目的:观察D-葡萄糖(D-glucose)对培养的牛主动脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte che-moattractant protein-1,MCP-1)、细胞间粘附分子-1(in-tercellular adhesive molecule-1,ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesive molecule1-1,VCAM-1)mRNA表达水平的影响,并观察槟榔碱、PPVP、DMH-PPP、辛伐他汀的干预作用,探讨它们在糖尿病血管并发症中的作用机制。方法:通过逆转录-聚合酶链式反应技术,以β2-微球蛋白为内参照检测内皮细胞与不同浓度D-葡萄糖作用不同时间后,以及用槟榔碱、PPVP、DMHPPP、辛伐他汀预孵育20 h后再给予D-葡萄糖时内皮细胞MCP-1I、CAM-1、VCAM-1mRNA表达水平的变化。结果:浓度为10、25和50mmol.L-1的D-葡萄糖孵育牛主动脉内皮细胞16 h,以及浓度为25 mmol.L-1的D-葡萄糖分别孵育8、162、4 h均可使MCP-1I、CAM-1及VCAM-1 mRNA表达显著上调,且上调作用有浓度与时间依赖性。10-5mmol.L-1槟榔碱、PPVP、DMHPPP和辛伐他汀与牛主动脉内皮细胞孵育20 h,再给予终浓度为25mmol.L-1的D-葡萄糖孵育16 h后,与模型组相比,槟榔碱可显著抑制由D-葡萄糖诱导的牛主动脉内皮细胞三个炎性基因MCP-1I、CAM-1、VCAM-1 mRNA表达上调;PPVP可显著抑制MCP-1和ICAM-1 mRNA表达上调;DMHPPP和辛伐他汀可显著抑制MCP-1mRNA表达上调。结论:高浓度D-葡萄糖可诱导牛主动脉内皮细胞MCP-1,ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达水平增加,槟榔碱、PPVP、DMHPPP和辛伐他汀对过量表达的三种炎性因子的抑制作用不同。     

盐酸埃他卡林对血管内皮细胞分泌功能的影响

目的 :研究新型抗高血压药物盐酸埃他卡林(Ipt)对血管内皮细胞分泌功能的影响。方法 :采用灌流消化法分离小牛主动脉内皮细胞 (BAEC) ,观察Ipt对BAEC分泌内皮素 1(ET 1)、前列环素 (PGI2 )和一氧化氮 (NO)的影响 ,同时观察Ipt对培养的BAEC胞浆游离Ca2 浓度的影响。结果 :在Ipt浓度为 10 -6mol·L-1及以上时 ,能够剂量依赖性地抑制培养的BAEC合成分泌ET 1,并在Ipt 10 -5mol·L-1及以上时促进NO的合成分泌 ,同时在Ipt浓度为10 -4mol·L-1及以上时 ,显著地增高BAEC胞浆游离Ca2 浓度。结论 :Ipt通过抑制内皮细胞合成分泌ET 1和促进NO的合成分泌 ,从而使ET和NO的平衡状态得到改善 ;尚能增加内皮细胞 [Ca2 ]i,有利于内皮细胞合成NO增加 ,从而增强内皮介导的舒血管效应。     

盐酸埃他卡林对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究盐酸埃他卡林(Ipt)对谷氨酸(Gli)所致细胞损伤的保护作用。方法 采用培养PC12细胞,MTT法测细胞存活率。结果 Ipt 1×10~(-10)～1×10~(-4)mol·L~(-1)可拮抗Glu介导的神经毒作用,提高细胞存活率,该保护作用可被10 μmol·L~(-1)格列苯脲(ATP敏感性钾通道拮抗剂)所取消。结论 Ipt可拮抗Glu介导的神经毒作用,该保护作用可能与ATP敏感性钾通道相关。     

盐酸埃他卡林对大鼠血压及心脏功能的影响

盐酸埃他卡林是军事医学科学院毒物药物研究所自行设计合成的脂肪仲胺类化合物 ,动物实验表明它具有选择性抗高血压作用 ,即对清醒正常血压大鼠的血压影响较轻 ,对清醒高血压大鼠的血压影响明显 ,降压强度与动物血压高低相关。传统的降压作用机制不能解释其抗高血压作用 ,进一步的研究证明盐酸埃他卡林抗高血压作用的机制是作用于ＡＴＰ敏感性Ｋ+通道 ,使细胞膜发生超极化 ,降低细胞内的钙离子浓度 ,而导致血管扩张 ,血压下降 ,属ＡＴＰ敏感性Ｋ+通道开放剂。为进一步了解盐酸埃他卡林心血管作用的特点 ,本文在自发性高血压大鼠及麻醉的Ｗｉ…     

中国健康成年志愿者单次口服盐酸埃他卡林片耐受性研究

目的：在中国健康成年志愿者体内评估单次口服盐酸埃他卡林片的安全性、耐受性。方法：采用区组随机化设计,选择18～50岁健康志愿者52名,随机分配至2．5、5、10、15、20、25mg剂量组,其中2．5、25mg组各有6名受试者,其余各组均有10名受试者,男女各半,每组中均有2人（男、女各1人）接受安慰剂。严密观察给药前后的临床症状、体征、实验室指标变化,并观察试验期间发生的不良事件。结果：入选受试者给药后症状、体征以及实验室检查指标均未见有异常的改变。试验中未见严重不良事件,未见可能与药物有关的临床不良反应。结论：52名中国健康受试者单次空腹口服盐酸埃他卡林片最大剂量达25mg,比较安全,耐受性较好。     

盐酸埃他卡林片的制剂学研究*

目的：筛选盐酸埃他卡林（iptakalim hydrochloride）片的处方及优化工艺,对本片进行质量研究。方法：处方及工艺研究采用比较法,含量、含量均匀度及溶出度测定为溶剂萃取酸性色素比色法（BCG法）,有关物质检查采用HPLC法（示差折光检测器）。结果：所选处方合理、工艺可行;BCG法灵敏、可靠、重复性好、操作简单,能够很好地控制本片的质量。结论：按照该处方及工艺压制的盐酸埃他卡林片具有良好的稳定性;制定了本片的制剂质量标准,为新药报批提供了制剂研究资料。     

盐酸埃他卡林对动脉平滑肌钾电流的影响

目的　探讨抗高血压新药盐酸埃他卡林对动脉平滑肌细胞钾电流的作用。方法　分离大鼠动脉平滑肌细胞 ,用膜片钳全细胞记录技术记录细胞钾电流 ,通过浴槽内给药 ,观察盐酸埃他卡林对钾电流的影响。结果　盐酸埃他卡林(0 1、1、10、10 0 μmol·L-1)均可明显引起正常血压大鼠肺动脉平滑肌外向钾电流I U曲线上移 ,盐酸埃他卡林作用后 5min内细胞外向钾电流强度分别增强为初始电流强度的[(118 6± 15 9) % ,P <0 0 1vscontrol,n =6 ]、[(10 3 9±5 9) % ,P <0 0 1vscontrol,n =5 ]、[(132 7± 2 3 9) % ,P <0 0 1vscontrol,n =6 ]、[(15 0 1± 2 5 1) % ,P <0 0 1vscontrol,n =7];盐酸埃他卡林 (1、10、10 0 μmol·L-1)均可引起肾性高血压大鼠肺动脉平滑肌外向钾电流I U曲线上移 ,盐酸埃他卡林作用后 5min内细胞外向钾电流强度分别增强为初始电流强度的 [(12 1 5± 4 2 ) % ,P <0 0 1vscon trol,n =7]、[(132 2± 6 7) % ,P <0 0 1vscontrol,n =8]、[(114 2± 7 7) % ,P <0 0 1vscontrol,n =8];盐酸埃他卡林 (10 μmol·L-1)可引起肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌外向钾电流I U曲线上移 ,盐酸埃他卡林作用后 5min内细胞外向钾电流强度为初始电流强度的 [(80 6± 10 1) % ,n =5 ],同时间对照     

盐酸埃他卡林对自发性高血压大鼠肾组织细胞外基质降解系统的影响

目的观察埃他卡林(iptakalim hydrochloride,Ipt)对自发性高血压大鼠(spontaneously hyper-tensiverats,SHR)肾组织细胞外基质降解系统的影响。方法SHR于第12周龄进入实验,实验分组如下Ipt1、3、9mg·kg-1·d-1剂量组,苯那普利(benazepril)3mg·kg-1·d-1治疗组及SHR空白对照组,另设同月龄同种属正常血压大鼠(Wistar Kyotorat,WKY)为正常对照组,灌胃给药每天1次,持续给药12周,应用免疫组织化学和RT-PCR技术,观察埃他卡林对高血压大鼠肾组织Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制物(TIMPs)表达的影响。结果埃他卡林长期降压治疗同时上调肾组织局部MMP-9mRNA和蛋白水平,同时一致性降低TIMP-1、TGF-β1及Ⅳ型胶原转录和蛋白水平。结论埃他卡林对肾脏靶器官的保护作用机制可能通过抑制肾脏局部TGF-β1表达,纠正MMP-9/TIMP-1失衡,从而促进细胞外基质的降解,减少细胞外基质的积聚。     

盐酸埃他卡林对脑神经元钠、钾、钙通道的影响

目的　研究盐酸埃他卡林 (Ipt)对脑神经元钠、钾、钙通道的影响。方法　在原代培养的大鼠海马神经元上 ,应用膜片钳全细胞记录技术观察Ipt对钠、钾、钙离子通道电流的影响。结果　Ipt对钠、钙电流幅度以及电流 -电压曲线无影响 ,可增强外向钾电流幅度 ,使电流 -电压曲线上移。其中 ,Ipt 1、10、10 0 μmol·L-1分别使钾通道电流峰值增大为给药前的 (12 1 9± 8 1) %、(114 7± 7 1) %和 (10 9 1±10 0 ) % (P <0 0 1～ 0 0 5 )。给予盐酸埃他卡林 1μmol·L-1的同时给予ATP敏感性钾通道拮抗剂格列本脲 30 μmol·L-1时 ,对钾通道电流无影响。结论　盐酸埃他卡林对脑神经元ATP敏感性钾通道具有激活作用 ,它不影响神经元钠通道和钙通道     

s-油酰丙醇胺对人脐静脉内皮细胞黏附分子表达的影响

目的探讨s-油酰丙醇胺对用肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞黏附分子(VCAM-1,I-CAM-1,E选择素)表达的影响。方法从新鲜的脐带中分离出人脐静脉内皮细胞,培养至3~9代,用不同浓度的s-油酰丙醇胺(10,50,100μmol/L)孵育12 h后,用TNF-α(20 ng/mL)孵育8 h,采用荧光实时定量PCR和细胞酶联免疫吸附试验分别检测VCAM-1,ICAM-1,E选择素的mRNA及蛋白的表达,同时采用细胞黏附实验检测其对细胞黏附的影响。结果相对于正常的人脐静脉内皮细胞,TNF-α诱导后的人脐静脉内皮细胞黏附分子(VCAM-1,ICAM-1,E-选择素)的表达明显增加。s-油酰丙醇胺可以显著的抑制VCAM-1的表达,并呈现出一定的剂量依赖性,而且对人急性单核细胞性白血病细胞(THP-1)的黏附也有明显的抑制作用,但对ICAM-1,E-选择素的表达却没有影响。结论s-油酰丙醇胺和大多数的PPARα激动剂一样,能够抑制慢性炎症,减少单核细胞的黏附,抑制VCAM-1的表达,而对急性炎症没有作用,如对E-选择素的表达无影响。     

血管内皮细胞活性化合物对同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的保护作用

目的观察同型半胱氨酸(homocyste ine,HCY)对培养的牛主动脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)mRNA表达水平的影响,并观察槟榔碱、PPVP、DMHPPP、辛伐他汀的干预作用,探讨它们在动脉粥样硬化中的作用机制。方法通过RT-PCR技术,以β2-微球蛋白为内参照检测内皮细胞与不同浓度HCY作用不同时间后,以及用槟榔碱、PPVP、DMHPPP、辛伐他汀预孵育20 h后再给予HCY时内皮细胞MCP-1、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达水平的变化。结果终浓度为0.1、0.5和5.0 mmol.L-1的HCY孵育牛主动脉内皮细胞6 h,以及以终浓度为0.1 mmol.L-1的HCY分别孵育3、6、12、24 h均可使MCP-1 mRNA、ICAM-1mRNA及VCAM-1 mRNA表达上调,且上调作用有浓度与时间依赖性。10μmol.L-1槟榔碱、PPVP、DMHPPP和辛伐他汀与牛主动脉内皮细胞孵育20 h,再给予终浓度为0.1 mmol.L-1的HCY孵育6 h后,与模型组相比,槟榔碱、PPVP和辛伐他汀均可抑制由HCY诱导的牛主动脉内皮细胞MCP-1、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达上调;DMHPPP可抑制MCP-1和VCAM-1 mRNA表达上调。结论HCY可诱导牛主动脉内皮细胞MCP-1,ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达水平增加。槟榔碱、PPVP、DMHPPP和辛伐他汀可以减轻其过量表达。     

水蛭素对凝血酶诱导血管内皮细胞与中性粒细胞表达黏附分子的影响

目的:研究水蛭素对凝血酶诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达细胞黏附分子(ICAM-1)和中性粒细胞表达膜整合素CD11b的影响.方法:用酶消化法获得HUVEC,密度梯度离心和重力沉降法分离人外周血细胞中性粒细胞.用酶联免疫吸附测定HUVEC在凝血酶、水蛭素作用下ICAM-1的变化,同时以免疫荧光流式细胞术检测中性粒细胞表达CD11b水平的变化.结果:与对照组相比,凝血酶诱导的HUVEC 表达ICAM-1显著增多,随时间延长,ICAM-1的表达递增,高峰在24 h.凝血酶使中性粒细胞CD11b的表达也显著上调,6 h平均荧光强度明显增加,随时间延长逐渐升高,高峰在24 h.水蛭素和肝素对凝血酶诱导的HUVEC 表达ICAM-1和中性粒细胞表达CD11b均有明显的抑制作用,且水蛭素抑制ICAM-1的表达强于肝素,尤其在ICAM-1表达的高峰期,对CD11b表达的抑制作用水蛭素与肝素无明显差别.结论:水蛭素可以明显抑制凝血酶诱导的HUVEC 表达ICAM-1和中性粒细胞表达CD11b.     

四环素抑制活化的内皮细胞表达粘附分子

目的　研究四环素对肿瘤坏死因子 α(TNF α)或细菌内毒素 (LPS)活化的内皮细胞表达粘附分子E 选择素和细胞间粘附分子 1(ICAM 1)的影响 ,为探讨四环素类药物的抗炎作用提供新的实验依据。方法　用TNF α(0 5～ 5 0 μg·L-1)或LPS(0 5～ 5 0mg·L-1)孵育培养的人脐静脉内皮细胞使其活化 ;用四环素 (10 -6～ 10 -4 mol·L-1)预孵育内皮细胞 1h再与TNF α(1μg·L-1)或LPS(5mg·L-1)共同孵育4h或 18h ;应用细胞 酶联免疫吸附分析方法检测E 选择素和ICAM 1的表达。结果　TNF α或LPS孵育内皮细胞 4h明显诱导E 选择素的表达 ,TNF α或LPS孵育内皮细胞 18h明显增加ICAM 1的构成表达 (P <0 0 1) ;用四环素处理后则明显抑制TNF α或LPS诱导的E 选择素和ICAM 1的表达 (P <0 0 1) ,并呈现剂量依赖性。结论　四环素可抑制TNF α或LPS活化的人脐静脉内皮细胞表达粘附分子E 选择素和细胞间粘附分子 1。     

埃他卡林对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察埃他卡林对在体大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法夹闭大鼠左侧肾动、静脉45 min再放开恢复血流24 h,造成急性缺血再灌注肾损伤模型(2周前已切除右肾);再灌注前3 d及缺血前1 h以埃他卡林溶液灌胃;应用放免法检测血清内皮素(ET)-1水平,应用RT-PCR法观察ET-1 mRNA在肾组织的表达。结果缺血再灌注导致明显的肾脏功能与结构损伤。组织病理示肾小管上皮细胞变性,核浓缩、破碎,刷状缘坏死脱落,管腔内有细胞及蛋白管型,间质充血、水肿;血清ET-1水平升高,肾组织ET-1 mRNA表达升高。与缺血再灌注组比较,埃他卡林能明显降低血清尿素氮和肌酐水平,改善上述病理变化,降低血清ET-1水平,降低肾组织ET-1 mRNA的高表达。结论埃他卡林对大鼠肾脏缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。     

盐酸埃他卡林对麻醉正常血压犬血流动力学的影响

目的:评价盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride,Ipt)对麻醉正常血压犬血流动力学的影响。方法:Ipt设置0.125,0.25,0.5mg·kg~(-1)三个剂量组,以吡那地尔(pinacidil,Pin)为阳性对照药,生理氯化钠溶液为阴性对照,观察麻醉正常血压犬血流动力学的变化。结果:Ipt0.125,0.25,0.5mg·kg~(-1)静脉注射可轻度降低血压,平均动脉压(MAP)分别下降0.80,1.07和1.33kPa,收缩压(SBP)与舒张压(DBP)下降幅度基本相当。与Pin相比,Ipt降压起效较慢,但作用平稳。Ipt0.125和0.25mg·kg~(-1)静注在降低血压的同时,对心率、心脏收缩、舒张和泵血功能无明显影响,对心脑血流量也无明显影响;对总外周阻力和心电图均无显著影响,但Ipt0.25和0.5mg·kg~(-1)对心脏泵血功能有轻微抑制作用。Pin加快心率且明显抑制心脏舒张功能。结论:Ipt对戊巴比妥钠麻醉正常血压狗有轻度的降低血压作用,对心脏泵血功能有轻微抑制作用。     

褪黑素增强内皮细胞抗LPS损伤能力的研究

目的探讨褪黑素对体外培养的内皮细胞抗内毒素损伤的影响。方法体外培养内皮细胞,加入5mg/L脂多糖(LPS)和(或)褪黑素(0.1mmol/L)干预培养24h后,检测细胞乳酸脱氢酶释放率、丙二醛含量;应用RT-PCR检测各组细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)转录水平的改变;噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率。结果 LPS刺激24h后,TNF-αmRNA表达量显著升高,细胞存活率下降、而丙二醛含量和乳酸脱氢酶释放率均增高(P<0.05);加用褪黑素后,TNF-αmRNA表达量下降,细胞存活率提高、丙二醛含量和乳酸脱氢酶释放率下降。结论褪黑素可增强体外培养内皮细胞的抗LPS损伤能力     

辛伐他汀对CD40L介导的ECV-304细胞E选择素表达及粘附功能的影响

目的研究在人脐静脉内皮细胞中3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶对CD40/CD40L系统介导的粘附分子表达的影响,及对淋巴细胞与内皮细胞的粘附功能的影响。方法采用人脐静脉内皮细胞株ECV-304,CD40L干预,使之与其表面的CD40作用,用不同浓度辛伐他汀或辛伐他汀(5μmol.L-1)+甲羟戊酸干预,流式细胞术和RT-PCR检测干预前后E选择素(E-Selectin)的表达,流式细胞术检测CD40L介导的淋巴细胞与内皮细胞的粘附功能。结果不同浓度辛伐他汀可下调CD40L介导的E-Selectin的表达,并呈一定的剂量依赖性。甲羟戊酸(400μmol.L-1)抑制了辛伐他汀(5μmol.L-1)对E-Selectin表达的下调作用。辛伐他汀可降低CD40L介导的淋巴细胞与内皮细胞的粘附功能。结论他汀类药物的抗炎作用与抑制CD40-CD40L系统有关,其机制是通过抑制HMG-CoA还原酶而发挥作用的。