高糖致内皮细胞粘附分子基因的过度表达以及槟榔碱的调节作用

目的:观察D-葡萄糖(D-glucose)对培养的牛主动脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte che-moattractant protein-1,MCP-1)、细胞间粘附分子-1(in-tercellular adhesive molecule-1,ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesive molecule1-1,VCAM-1)mRNA表达水平的影响,并观察槟榔碱、PPVP、DMH-PPP、辛伐他汀的干预作用,探讨它们在糖尿病血管并发症中的作用机制。方法:通过逆转录-聚合酶链式反应技术,以β2-微球蛋白为内参照检测内皮细胞与不同浓度D-葡萄糖作用不同时间后,以及用槟榔碱、PPVP、DMHPPP、辛伐他汀预孵育20 h后再给予D-葡萄糖时内皮细胞MCP-1I、CAM-1、VCAM-1mRNA表达水平的变化。结果:浓度为10、25和50mmol.L-1的D-葡萄糖孵育牛主动脉内皮细胞16 h,以及浓度为25 mmol.L-1的D-葡萄糖分别孵育8、162、4 h均可使MCP-1I、CAM-1及VCAM-1 mRNA表达显著上调,且上调作用有浓度与时间依赖性。10-5mmol.L-1槟榔碱、PPVP、DMHPPP和辛伐他汀与牛主动脉内皮细胞孵育20 h,再给予终浓度为25mmol.L-1的D-葡萄糖孵育16 h后,与模型组相比,槟榔碱可显著抑制由D-葡萄糖诱导的牛主动脉内皮细胞三个炎性基因MCP-1I、CAM-1、VCAM-1 mRNA表达上调;PPVP可显著抑制MCP-1和ICAM-1 mRNA表达上调;DMHPPP和辛伐他汀可显著抑制MCP-1mRNA表达上调。结论:高浓度D-葡萄糖可诱导牛主动脉内皮细胞MCP-1,ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达水平增加,槟榔碱、PPVP、DMHPPP和辛伐他汀对过量表达的三种炎性因子的抑制作用不同。     

血管内皮细胞活性化合物对同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的保护作用

目的观察同型半胱氨酸(homocyste ine,HCY)对培养的牛主动脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)mRNA表达水平的影响,并观察槟榔碱、PPVP、DMHPPP、辛伐他汀的干预作用,探讨它们在动脉粥样硬化中的作用机制。方法通过RT-PCR技术,以β2-微球蛋白为内参照检测内皮细胞与不同浓度HCY作用不同时间后,以及用槟榔碱、PPVP、DMHPPP、辛伐他汀预孵育20 h后再给予HCY时内皮细胞MCP-1、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达水平的变化。结果终浓度为0.1、0.5和5.0 mmol.L-1的HCY孵育牛主动脉内皮细胞6 h,以及以终浓度为0.1 mmol.L-1的HCY分别孵育3、6、12、24 h均可使MCP-1 mRNA、ICAM-1mRNA及VCAM-1 mRNA表达上调,且上调作用有浓度与时间依赖性。10μmol.L-1槟榔碱、PPVP、DMHPPP和辛伐他汀与牛主动脉内皮细胞孵育20 h,再给予终浓度为0.1 mmol.L-1的HCY孵育6 h后,与模型组相比,槟榔碱、PPVP和辛伐他汀均可抑制由HCY诱导的牛主动脉内皮细胞MCP-1、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达上调;DMHPPP可抑制MCP-1和VCAM-1 mRNA表达上调。结论HCY可诱导牛主动脉内皮细胞MCP-1,ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达水平增加。槟榔碱、PPVP、DMHPPP和辛伐他汀可以减轻其过量表达。     

盐酸埃他卡林对同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的保护作用研究

高浓度同型半胱氨酸具有血管内皮细胞毒性。高血压病理过程中存在血管内皮细胞功能紊乱。盐酸埃他卡林（Iptakalim hydrochloride，Ipt）为新型降血压药物。本实验以逆转录-聚合酶链式反应检测单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）、细胞间粘附分子-1（intercellular adhesive molecule-1，ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesive moleculel-1，VCAM-1）mRNA表达水平，观察埃他卡林对同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）诱导内皮细胞损伤的作用。     

二苯乙烯苷对H_2O_2诱导血管内皮细胞黏附分子表达的影响

目的研究二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)诱导损伤的人脐静脉内皮细胞P-selectin、E-selectin、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为空白对照组、H2O2组、辛伐他汀组、TSG组,运用逆转录聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验分别检测P-selectin、E-selectin、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1 mRNA与蛋白的表达。结果 200μmol·L-1的H2O2作用内皮细胞24 h后,P-selectin、E-selectin、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的mRNA和蛋白表达水平均明显上调;经TSG预处理内皮细胞4 h后,再加200μmol·L-1的H2O2作用内皮细胞24 h,结果显示:TSG能抑制H2O2诱导的内皮细胞P-selnecti、E-se-lectin、ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的mRNA和蛋白的表达。结论 TSG可抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞黏附分子的表达。     

阿托伐他汀对内皮细胞微粒诱导人脐静脉内皮细胞VCAM-1和ICAM-1表达的影响

目的:探讨阿托伐他汀对内皮细胞微粒(EMPs)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达血管细胞粘附分子(VCAM)-1和细胞间粘附分子(ICAM)-1的影响。方法:取生长良好的第4,5代人脐静脉内皮细胞,将细胞分为3大组:对照组、EMPs组、EMPs+阿托伐他汀组。对照组加入培养基,EMPs组以不同浓度的EMPs(0/mL,1×102/mL,1×103/mL,1×104/mL,1×105/mL)与HUVECs共同孵育24 h,EMPs+阿托伐他汀组以不同浓度的阿托伐他汀(0.05,0.1,1.0,10μmol.L-1)与HUVECs作用1 h后,加入105/mL EMPs共同孵育24 h。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测VCAM-1和ICAM-1 mRNA和蛋白的表达。结果:HUVECs受EMPs刺激后,VCAM-1和ICAM-1 mRNA及蛋白表达呈浓度依赖性增加,阿托伐他汀可不同程度上抑制EMPs的作用。结论:阿托伐他汀抗动脉粥样硬化作用可能部分与抑制EMPs诱导的内皮细胞VCAM-1和ICAM-1的表达有关。     

糖皮质激素联合环磷酰胺对人脐静脉内皮细胞增殖及其细胞间黏附分子-1和单核细胞趋化因子-1表达水平的影响

目的：探讨地塞米松、环磷酰胺对人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）细胞增殖及其细胞间粘附分子-1（ICAM-1）和单核细胞趋化因子-1（MCP-1）基因表达的影响。方法：对培养的人脐静脉内皮细胞,在不同时间以不同药物浓度分别加入地塞米松和环磷酰胺进行干预。以MTT法检测药物对脐静脉内皮细胞增殖的影响。计算出两种药物的半数抑制浓度（IC50）。以地塞米松和环磷酰胺半数抑制浓度分别及联合作用血管内皮细胞48h,以RT-PCR的方法比较三组间血管内皮细胞ICAM-1和MCP-1的mRNA表达差异。结果：1、地塞米松、环磷酰胺均呈时间、剂量依赖性地抑制HUVECs细胞的增殖,地塞米松和环磷酰胺IC50分别为0.74 mg/ml、1.87mg/ml。2、脐静脉内皮细胞在地塞米松和环磷酰胺分别及联合孵育下,人脐静脉内皮细胞ICAM-1和MCP-1 mRNA表达水平较对照组显著下降（p〈0.05）,且联合作用组显著低于单个药物组（p〈0.05）。结论：糖皮质激素和环磷酰胺抑制血管内皮细胞增生,并抑制血管内皮细胞ICAM-1和MCP-1 mRNA表达,从而对血管起到保护作用。为临床治疗血管炎提供理论支持。     

依达拉奉对过氧化氢诱导血管内皮细胞ICAM-1及MCP-1表达的影响

目的观察依达拉奉（Edaravone MCI-186）对过氧化氢诱导的血管内皮细胞中ICAM-1及MCP-1表达的影响,探讨依达拉奉在动脉粥样硬化中作用的可能机制。方法用H2O2处理内皮细胞,制造氧化损伤模型。并用依达拉奉及H2O2共孵育内皮细胞,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测不同浓度依达拉奉作用下内皮细胞ICAM-1及MCP-1mRNA的表达。结果逆转录聚合酶链反应结果显示,各组细胞均表达ICAM-1mRNA和MCP-1mRNA,H2O2组内皮细胞表达的ICAM-1和MCP-1mRNA明显高于正常对照组（P〈0.01）,而同时加入MCI-186后其mRNA表达则有下降（P〈0.05及P〈0.01）。结论H2O2能明显诱导内皮细胞中ICAM-1和MCP-1mRNA的表达,MCI-186能够抑制H2O2诱导的内皮细胞ICAM-1及MCP-1的分泌,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

氨氯地平对糖基化低密度脂蛋白诱导的血管内皮功能障碍的修复作用

目的研究氨氯地平(Am)对糖基化低密度脂蛋白(AGE-LDL)诱导的内皮功能障碍的修复作用。方法以AGE-LDL于体外模拟糖尿病合并脂代谢异常环境,将人脐静脉内皮细胞(HEC,来自EA.hy926细胞系)分别在AGE-LDL及AGE-LDL+Am环境中孵育,并以天然LDL(nLDL)孵育组为对照,应用实时PCR检测细胞中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)的基因表达水平变化,应用WesternBlot检测培养液中MCP-1蛋白量的变化。结果与nLDL组细胞相比,AGE-LDL组细胞中MCP-1、VCAM-1基因表达水平明显升高,培养液中MCP-1蛋白含量亦明显增多;在AGE-LDL中加入Am处理后,与AGE-LDL组细胞相比,细胞中MCP-1、VCAM-1基因表达水平明显下降,培养液中MCP-1蛋白含量亦明显减少。结论氨氯地平在糖尿病合并动脉粥样硬化所致内皮细胞功能障碍方面具有修复及保护作用。     

二苯乙烯苷对动脉粥样硬化大鼠主动脉胞间粘附分子1、血管细胞粘附分子1及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法采用高脂饲料喂饲+维生素D37MU·kg-1ip1次制备大鼠AS模型。造模12周后治疗性ig给予TSG30,60和120mg·kg-1·d-1。给药6周后,采用黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸比色法测定血清丙二醛(MDA)含量,Western蛋白印迹法检测主动脉胞间粘附分子1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,逆转录聚合酶链反应法检测主动脉ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达,免疫组织化学法检测主动脉VEGF蛋白的表达。结果与正常组相比,AS模型组大鼠血清SOD活性明显降低,MDA水平明显提高,主动脉ICAM-1,VCAM-1及VEGF mRNA和蛋白表达显著增高。与模型组相比,TSG给药6周能明显提高大鼠血清SOD活性,降低MDA水平,对主动脉ICAM-1,VCAM-1及VEGF mRNA和蛋白表达均有明显抑制作用。结论TSG对大鼠实验性AS具有治疗作用,其机制可能与其抗氧化和调节细胞因子分泌有关。     

芍药苷对缺氧损伤内皮细胞产生NO、eNOS和细胞粘附分子的影响

目的:观察芍药苷对缺氧损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)产生一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和细胞粘附分子(ICAM-1、VCAM-1)的影响。方法:体外培养HUVEC,传至3代后,以不同浓度的芍药苷分别作用于HUVEC,同时进行缺氧处理。以硝酸还原酶法测定培养液上清中的NO,免疫细胞化学法检测内皮细胞eNOS的表达,细胞ELISA法测定细胞表面ICAM-1和VCAM-1的含量。结果:HUVEC在缺氧48h后产生NO的量显著减少(P<0.001),eNOS表达下调,而ICAM-1、VCAM-1表达上调;芍药苷可以剂量依赖性的增加内皮细胞NO生成量,上调eNOS的表达,下调ICAM-1、VCAM-1表达。结论:芍药苷可能通过增加HUVEC eNOS的表达增加NO的释放、抑制ICAM-1及VCAM-1的表达等途径对内皮细胞起保护作用。     

黄芪降低糖尿病大鼠心肌黏附分子表达并保护心肌细胞超微结构

目的观察黄芪对糖尿病大鼠心肌细胞间黏附分子(ICAM)-1、血管黏附分子(VCAM)-1表达的影响。方法链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型。实验分正常对照组(n=8)、糖尿病对照组(n=11)、黄芪组(n=11,4.2g·kg-1·d-1),用药8周。测血糖、体重、糖化血红蛋白(HbA1c)、心脏重量;透射电镜观察心肌细胞超微结构变化;免疫组织化学检测心肌ICAM-1、VCAM-1表达,图像分析软件对其结果进行半定量分析。结果糖尿病组心重指数明显高于正常组(P<0.05);与糖尿病组比较,黄芪组心重指数下降(P<0.05)。正常组大鼠心肌细胞器完好;糖尿病组心肌细胞内线粒体水肿、肌原纤维溶解、肌浆网扩张、肌纤维间水肿等变化;黄芪组大鼠心肌细胞肌原纤维排列整齐,肌节较完整,线粒体量多,偶见肌原纤维断裂及线粒体肿胀。免疫组织化学显示:与正常组比较,糖尿病组心肌ICAM-1、VCAM-1强着色(P<0.05),胞质均呈棕黄色颗粒强,心肌组织间微动脉壁、毛细血管基底膜有棕黄色物质沉积;而黄芪组呈中等度染色,毛细血管基底膜着色,ICAM-1、VCAM-1表达明显下降(P<0.05)。结论黄芪降低糖尿病大鼠心肌ICAM-1、VCAM-1表达,同时保护糖尿病心肌细胞超微结构。     

二苯乙烯苷对ox-LDL诱导的U937细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对ox-LDL诱导的U937细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达的影响,探讨TSG抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法体外培养经PMA处理过的U937细胞,在给予ox-LDL刺激的同时给予不同浓度TSG干预,采用黄嘌呤氧化酶法测定细胞培养液中SOD活力,TBA法测定培养液中MDA含量,蛋白免疫印迹法分析观察各组细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF的蛋白表达,逆转录聚合酶链反应法分析观察各组细胞ICAM-1和VCAM-1的基因表达。结果模型组细胞液总SOD活力较对照组明显降低,TSG高剂量及阳性对照组总SOD活力较模型组明显升高(P<0.05);模型组细胞液MDA水平较对照组明显升高,TSG高中剂量及阳性对照组较模型组明显升高(P<0.05)。蛋白免疫印迹分析显示,模型组ICAM-1、VCAM-1及VEGF的蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05);TSG高剂量和辛伐他汀能明显降低ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达(P<0.05)。逆转录聚合酶链反应分析显示,模型组细胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA水平较正常组明显升高(P<0.01);TSG高剂量和辛伐他汀较模型组能明显降低ICAM-1、VCAM-1mRNA水平(P<0.01)。结论TSG具有抗氧化、抑制单核巨噬细胞黏附分子分泌作用;其作用可能与其抗动脉粥样硬化有关。     

Chemokine production and E-selectin expression in activated endothelial cells are inhibited by p38 MAPK (mitogen activated protein kinase) inhibitor RWJ 67657

Endothelial cells play an important role in inflammatory diseases like rheumatoid arthritis by recruitment of inflammatory cells. The cytokines TNF-alpha and IL-1beta are major inducers of endothelial cell activation and are stimulators of inflammatory signal transduction pathway involving p38 MAPK (mitogen-activated protein kinase). The present study investigated the effects of p38 MAPK inhibition on cell adhesion molecule (CAM) expression and chemokine production by endothelial cells both on mRNA and protein level. Pre-treatment of endothelial cells with the pharmacologically relevant concentration of 1 microM of the p38 MAPK inhibitor RWJ 67657 reduced TNF-alpha and IL-1beta induced mRNA and membrane expression of E-selectin. Moderate inhibitory effects on ICAM-1 and VCAM-1 expression were found. Significant reduction of mRNA expression and protein production of the inflammatory cytokine IL-6 and the chemokines IL-8 and MCP-1 was demonstrated. Treatment with RWJ 67657 could lead to reduced leukocyte infiltration by the reduction of E-selectin expression and chemokine production.     

Anti-atherosclerotic Activity of Platycodin D Derived from Roots of <i>Platycodon grandiflorum</i> in Human Endothelial Cells

This study examined the effects of platycodin D (PD), a triterpene saponin from the the root of Platycodon grandiflorum A.DC on human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) in vitro, which were pre-treated with PD (0.01, 0.15, 0.25?mg/mL), respectively, and treated with 50?mg/L oxidized low-density lipoprotein (oxLDL). The levels of nitric oxide (NO) and malonaldehyde (MAD) in the culture medium, vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) and intercellular cell adhesion molecule-1 (ICAM-1) mRNA expression in endothelium cells and the adhesion of monocytes to endothelial cells were measured. The results showed that PD increased NO concentration and decreased MDA level induced by oxLDL in the medium of endothelial cells. Moreover, PD significantly inhibited the oxLDL-induced increase in monocyte adhesion to endothelial cells as well as decreasing mRNA expression levels of VCAM-1 and ICAM-1 on these cells. Based on these results, it is suggested that PD is a promising anti-atherosclerotic activity, which is at least in part the result of its increasing NO concentration, reducing the oxLDL-induced cell adhesion molecule expression in endothelial cells and the endothelial adhesion to monocytes.