侧脑室注射β-淀粉样蛋白制作阿尔茨海默病样大鼠模型

目的 研究侧脑室注射β-淀粉样蛋白(amyloid-beta protein,Aβ)对大鼠学习记忆功能及海马区病理改变的影响,探讨侧脑室注射β-淀粉样蛋白建立阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)样动物模型的可行性.方法 将20只雄性SD大鼠随机分为2组:空白对照组和AD模型组,每组10只.采用侧脑室立体定向注射β淀粉样蛋白(amyloid-beta protein, Aβ)25-35的方法,建立AD的动物模型,通过Morris水迷宫检测大鼠学习、记忆能力,通过HE染色、刚果红染色观察大鼠海马区的病理改变.结果 大鼠经侧脑室立体定向注射10 μmol/L Aβ25-35 5 μl后,(1)AD模型组大鼠Morris水迷宫检测逃避潜伏期第1～3天分别为(42.19±12.29)s、(31.28±20.59)s、(23.91±8.05)s较对照组[分别为(27.35±14.96)s、(13.17±6.79)s、(13.01±6.83)s]明显延长(P＜0.05或P＜0.01);(2)HE染色见对照组大鼠海马神经元排列规则、紧密,形态完整,AD模型组海马区神经元明显疏松,排列紊乱,出现胶质细胞增生;(3)刚果红染色各组未见明显淀粉样斑块沉积,AD模型组于血管壁上见淀粉样物质沉积,这在国内损伤型AD动物模型中少见报道.结论 应用侧脑室内微量注射Aβ的方法建立AD动物模型,在行为学、病理学上均符合AD表现,可以作为一种简易而又经济的AD动物模型.     

脑益康对AD大鼠脑组织炎症损伤的保护作用

目的 探讨脑益康对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习、记忆能力和脑内炎性反应的影响.方法 采用β-淀粉样蛋白1～40(Aβ1～40)右侧海马注射制备AD模型大鼠,脑益康灌胃给药28 d后,采用Y-型迷宫刺激器检测大鼠学习、记忆能力,免疫组织化学方法检测大鼠海马肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的表达情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测皮层白细胞介素-1β(IL-1β)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的蛋白水平.结果 脑益康能改善模型大鼠学习记忆能力,显著降低AD大鼠脑组织的IL-1β、IL-6、TNF-α的含量(P＜0.01),增加TGF-β1的表达(P＜0.01).结论 脑益康对AD模型大鼠学习记忆能力有改善作用,通过降低AD大鼠脑组织的IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,增加TGF-β1的表达,有效抑制海马神经元炎性反应.     

雷公藤内酯醇对AD模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(TP)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组及用药组。模型组给予双侧海马各一次性注射凝聚态Aβ1-40,Morris水迷宫实验判断模型成功与否。对照组大鼠双侧海马注射等量生理盐水。用药组大鼠在模型制作成功后每日腹腔注射TP0.4mg/kg,共15d。应用流式细胞仪、TUNEL染色、透射电镜技术检测各组大鼠海马神经细胞凋亡的变化,免疫组织化学法检测各组大鼠海马神经细胞细胞色素C和Bcl-2蛋白表达的变化。结果用药组大鼠海马神经细胞凋亡率较模型组明显降低(P0.01),TUNEL染色阳性细胞数较模型组明显减少(P0.01);用药组大鼠海马细胞色素C阳性产物数和平均光密度均较模型组明显减少(P0.01),Bcl-2阳性细胞数和平均光密度均较模型组明显增加(P0.01)。结论 TP对AD模型大鼠海马神经细胞凋亡有抑制作用,其机制可能与TP增加AD模型大鼠海马神经细胞Bcl-2蛋白表达、减少细胞色素C的释放有关。     

miR-129对阿尔茨海默病细胞模型的调控作用

目的探究miR-129的表达水平与阿尔茨海默病(AD)的相互关系。方法用β淀粉样蛋白(Aβ)取新生SD大鼠原代海马神经元细胞培养,Aβ处理神经元细胞复制AD模型,将培养的原代细胞分为对照组、模型组、miR-129敲低组、miR-129过表达组、miR-129敲低+Aβ处理组、miR-129过表达+Aβ处理组、淀粉样前体蛋白(APP)siRNA组。Q-PCR和Western印迹检测基因和蛋白水平;膜联蛋白(Annexin)V/碘化丙啶(PI)双染色法检测细胞凋亡,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力。结果与对照组相比,模型组miR-129表达水平显著降低,细胞凋亡率显著增高,细胞活力显著减弱(P0.05);而过表达miR-129能够显著降低凋亡率,增加细胞活力,起到保护神经元细胞的作用,敲低miR-129则起不到保护作用;通过抑制Aβ前体可以有效减少模型组的凋亡率,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-129参与了AD的发病过程,且过表达miR-129可以有效减少对于脑神经元细胞的损伤。     

D-半乳糖、氯化铝中毒阿尔茨海默病模型小鼠脑组织Aβ蓄积原因探讨

目的 探讨D-半乳糖及氯化铝中毒阿尔茨海默病模型小鼠脑组织β淀粉样蛋白(Aβ)蓄积的原因.方法 取42只小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖(90 mg/kg)和三氯化铝制做模拟Aβ代谢异常的阿尔茨海默病小鼠模型(模型组),另取42只小鼠颈背部皮下注射生理盐水,于用药后0、15,30,45、60、75、90d两组分别取6只大鼠行行迷宫试验,观察两组逃避潜伏期;然后处死大鼠取海马组织,采用定量PCR法检测淀粉样前体蛋白(APP)、β分泌酶(BACE1)、胰岛素降解酶(IDE) mRNA表达;Westernblot法检测Aβ、BACE1和IDE蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组逃避潜伏期明显延长;APPmRNA水平无明显变化,Aβ蛋白水平明显升高;BACE1mRNA及蛋白水平均显著升高;IDE mRNA及蛋白水平无明显变化.结论 D-半乳糖及氯化铝中毒阿尔茨海默病模型小鼠脑组织Aβ蓄积的可能为BACE1表达增加所致,而非IDE降解减少或APP表达增加所引起.     

脑缺血对AD模型大鼠脑组织Aβ1-40表达的影响

目的 探讨脑缺血与阿尔茨海默病（AD）的相关性。方法 将40只大鼠随机分为假手术组、AD模型组（AD组）、脑缺血组（CI组）、AD脑缺血组（AD＋CI组），每组10只。AD组、AD＋CI组行AD造模，其后CI组、AD＋CI组行脑缺氧造模。分别于实验前、AD造模后14、21d（即脑缺血后1周）行学习记忆功能测试，采用免疫组化法检测大鼠脑组织β-淀粉样肽（Aβ1-40）阳性细胞数。结果 AD＋CI组在21d时学习记忆功能较假手术组、CI组、AD组明显下降；脑内Aβ1-40阳性细胞数明显增加。结论 脑缺血可加重AD病情，其可能机制为增加AB的神经毒性作用。     

虾青素对大鼠海马神经元细胞的保护作用

目的探讨虾青素对大鼠海马神经元细胞的保护机制。方法取SD大鼠10只,采用0.125%的胰酶分离其海马神经元细胞并进行原代培养。对照组在海马神经元细胞中加入5 mmol/Lβ样淀粉蛋白(Aβ)25-35诱导24h,建立AD模型;治疗组在海马神经元细胞中分别加入虾青素5、10、20μg/μL,然后均加入5 mmol/L的Aβ25-35诱导24 h。采用噻唑蓝比色法检测各组海马神经元细胞的存活情况,RT-PCR、Western blot法分别检测细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶、γ-分泌酶的基因及蛋白表达,半自动生化仪检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)及脂质过氧化物(MDA)。结果随着虾青素浓度升高,海马神经元细胞的存活率、SOD活性明显升高(P<0.05或<0.01),MDA降低(P<0.05),HIF-1α、APP、β-分泌酶、γ-分泌酶mRNA表达及蛋白表达明显降低(P<0.01或<0.05)。结论虾青素通过抑制大鼠海马神经元细胞HIF-1α、β-分泌酶、γ-分泌酶、APP表达,减少Aβ合成,从而对其细胞起到保护作用。     

硒对大鼠高碘性Ⅰ型脱碘酶损伤的干预作用

目的研究高碘性甲状腺损伤的机制并寻求合适的硒干预剂量.方法 50只Wistar大鼠分为5组正常组、高碘组(饮水含碘酸钾48 mg/L)和3个补硒组(饮水含碘酸钾48 mg/L,亚硒酸钠分别为0.5、1.0、2.0 mg/L),共喂养36周.放射免疫法测定甲状腺激素水平,测定肝脏和肾脏组织Ⅰ型脱碘酶(IDI)活性,以RT-PCR测定IDI mRNA水平.结果与正常组比较,高碘组肝、肾IDI活性[(17.1±2.1,2.67±1.10)pmol I·mg-1·min-1vs(13.0±2.9,1.52±0.44)pmol I·mg-1·min-1]、mRNA水平(1.78±0.14,1.55±0.17vs0.90±0.05,0.58±0.12,均P＜0.05)下降(均P＜0.05),而补充0.5mg/L硒组上述指标与正常组差异无统计学意义.结论 IDI活力、mRNA水平下降可能是高碘性甲状腺损伤的机制之一,而补充硒应选择合适的干预剂量.     

黄芩茎叶总黄酮对AD大鼠模型海马神经元超微结构的影响及抗氧化作用

目的 探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对AD大鼠模型学习记忆功能、海马神经元超微结构变化的影响及抗氧化作用.方法　采用Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力,电镜观察海马神经元的超微结构;检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量.结果 模型组大鼠2 min内穿越平台区域的次数较对照组明显减少(P<0.01),在平台象限停留的时间明显减少(P<0.01),给药组大鼠穿越平台区域的次数较模型组明显增多(P<0.05),在平台象限停留的时间较模型组明显延长(P<0.05).对照组海马神经元超微结构正常,模型组损伤严重,给药组较模型组损伤减轻.模型组SOD、CAT、GSH-Px含量较对照组明显降低(P<0.05),给药组较模型组明显升高(P<0.05).结论 SSTF对海马注射Aβ_(25-35)引起大鼠学习记忆能力降低及海马神经元超微结构损伤具有保护作用.其机制可能是增强大鼠体内抗氧化酶活性,从而减少活性氧对神经元的损伤.     

阿尔茨海默病患者脑脊液中胰岛素、β-淀粉样蛋白水平与疾病严重程度的关系

目的 探讨阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)患者脑脊液中胰岛素、β-淀粉样蛋白(amyloidbeta-protein,Aβ)水平及与疾病严重程度的关系.方法 随机选择35例对照组、68例AD患者,将AD按轻、中重度分组后测定脑脊液中胰岛素、Aβ水平,观察其与AD疾病程度是否存在相关性.结果 与对照组比较,AD中重度组胰岛素和Aβ40均升高(均P<0.05),轻度组Aβ42明显升高(P<0.01).结论 AD患者体内存在胰岛素及Aβ代谢异常,其特征与AD的严重程度有关.     

Alzheimer’s病和血清叶酸、VitB12水平的研究

目的了解血叶酸和VitB12水平与Alzheimer's病的关系。方法采用病例-对照研究,选取Alzheimer's病(AD)人83例,正常老年人70例,年龄、性别及文化程度均无显著差异(P>0.05)。吸烟的程度及年份亦予以控制。测定血清叶酸和VitB12浓度,并进行简易智能精神状态量表(MMSE)、社会生活量表(ADL)和韦氏记忆量表(WMS)检查。结果AD组血清叶酸浓度犤17.70(4.62～54.00)nmol/L犦明显低于对照组犤23.00(9.00～55.30)nmol/L犦(P<0.05)。AD组血清VitB12浓度犤260.00(121.40～799.70)pmol/L犦明显低于对照组犤311.00(104.00～996.00)pmol/L犦(P<0.05)。AD组血清叶酸和VitB12浓度低于正常的例数明显多于对照组(P<0.05)。无论AD组还是对照组的血清叶酸、VitB12水平均与MMSE、ADL、WMS评分无关(P>0.05)。结论低叶酸和VitB12水平与Alzheimer's病有一定联系,但血清叶酸、VitB12水平与痴呆的严重程度无联系。     

复方海蛇胶囊治疗阿尔茨海默病的临床疗效及安全性观察

目的观察复方海蛇胶囊治疗阿尔茨海默病患者的临床疗效及安全性。方法共30例经临床检测、量表测定符合AD诊断标准的患者,用复方海蛇胶囊药物治疗3个月,以MMSE、ADAS-COG、BBS和ADL检测分数评定疗效。结果MMSE评分在19~24分之间的患者,复方海蛇胶囊治疗前后MMSE评分分别为21.96±1.876和23±2.949,具有显著性差异(P<0.01)。无1例患者出现肝肾功能及心电图异常。结论复方海蛇胶囊对治疗轻度阿尔茨海默病具有一定作用,且药物安全性高,副作用小。     

冠心病与合并高血压病患者胰岛素抵抗的初步研究

对１７例冠心病（ＣＨＤ）和１５例高血压合并冠心病患者进行口服葡萄糖耐量试验，测定其血胰岛素（ＩＳ）和血糖水平，并与１０例健康人做对照。结果发现，ＣＨＤ和高血压合并冠心病患者都有胰岛素抵抗（ＩＲ），高胰岛素血症（ＨＩＳ）和部分糖耐量减低。高血压合并冠心病组ＩＲ和ＨＩＳ较ＣＨＤ组更为严重，且ＩＳ浓度呈持续增高状态。ＣＨＤ组血清总胆固醇与ＩＳ水平呈正相关，高血压合并冠心病组血清高密度脂蛋白胆固醇与ＩＳ水平呈显著负相关。     

THE EFFECT OF INSULIN ON LUNG METABOLISM IN THE RAT

A new model has been established for the perfused in situ rat lung. During perfusion with glucose at 4 mmol/1, physiological concentrations of insulin (50 mu/1) caused an initial 1.5 fold increase in lactate production; the increase being sustained at 30% for the 4 h of perfusion. The observation that the lung responds to physiological concentrations of insulin could have important implications with respect to whole body carbohydrate metabolism.     

膳食低钙对饲克山病区粮大鼠胰岛素分泌的影响

本实验通过对模拟克山病偏食饲料中补充一定量的钙和硒来观察Wistar大鼠胰岛素(Ins)的变化。结果表明,病区粮组血钙水平最低,仅及常规食(stock)组一半;血清硒(Se),α-VE水平低于Stock组;Ins减少;血清过氧化脂质水平明显高于Stock组;血清GSH-Px活性低,有显著差异。补钙后钙水平升高,Se、α-VE水平变化不大;Ins显著升高。补Se/VE组Se、α-VE水平明显高于EM组。联合补Se/VE和Ca组Se、α-VE水平高于单纯补Se/VE组,有显著差异,Ins升高。补Se/VE、Ca各组可使过氧化脂质水平下降,有显著差异。综合分析结果表明,补Ca各组与EM组比较差异显著,表明膳食钙量对胰岛素影响极大。     

胰岛素分泌的第二细胞调控点作用机制

为探讨胰岛素分泌时β细胞内第二调控位点的作用机制，以小鼠胰岛细胞为材料，用二氮嗪（ｄｉａｚｏｘｉｄｅ）阻断β细胞膜上Ｋ＋－ＡＴＰ通道作用后，研究胰岛素分泌时的ＡＴＰ、二磷酸腺苷（ＡＤＰ）、三磷酸鸟苷（ＧＴＰ）和三磷酸尿苷（ＵＴＰ）代谢变化。在此条件下，胰岛素分泌量依然随葡萄糖浓度增加而增加；与此同时，ＡＴＰ随之增高，ＡＤＰ随之减少，而ＡＴＰ＋ＡＤＰ值则持续上升，ＡＴＰ／ＡＤＰ值与胰岛素分泌量呈高度的线性正相关；此外，ＧＴＰ和ＵＴＰ水平亦随葡萄糖浓度升高而升高。提示β细胞分泌胰岛素时存在着第二细胞调控点，ＡＴＰ／ＡＤＰ值在其作用机制中起重要作用，ＧＴＰ和ＵＴＰ也参与了胰岛素分泌的调控。     

卡托普利对大鼠急性心肌梗塞早期血浆内皮素及血液流变学的影响

本研究观察了大鼠急性心肌梗塞（ＡＭＩ）早期血浆内皮素（ＥＴ）与血液流变学的变化及卡托普利对其影响。结果显示，ＡＭＩ后６ｈ血浆ＥＴ水平显著升高，血液流变学明显异常；卡托普利治疗能明显抑制ＥＴ的增高，改善血液流变性，缩小心肌梗塞范围。提示ＥＴ及血液流变学的早期改变在ＡＭＩ后的病理生理中可能有重要作用，卡托普利降低ＡＭＩ早期血浆ＥＴ水平，改善血液流变性，可能是其治疗ＡＭＩ作用机制之一。     

非胰岛素依赖型糖尿病合并冠心病者的胰岛素抵抗

为了解非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）病人中胰岛素抵抗与冠心病的关系，对４０例ＮＩＤＤＭ合并冠心病的男病人与３６例未合并冠心病的ＮＩＤＤＭ男病人的血糖、胰岛素、胰岛素敏感性指数（ＩＳＩ）、血脂、载脂蛋白等进行比较，并对其与冠心病的关系进行多因素ｌｏｇｉｓｔｉｃ逐步回归分析，结果显示，ＮＩＤＤＭ病人中的ＩＳＩ与冠心病呈显著负相关（ＯＲ０．２３７，９５％可信区间０．０９０９～０．６１６７，Ｐ＝０．００３２），这种相关独立于年龄、肥胖、血压、血脂等心血管危险因素。提示胰岛素抵抗是非胰岛素依赖型糖尿病病人冠心病发病的独立危险因素。     

高蛋白喂饲对实验性肾血管性高血压大鼠血压的影响

观察高蛋白饲料对二肾一夹WKY高血压大鼠血压、血浆及尿游离氨基酸含量的影响。结果表明:高蛋白饲料能降低二肾一夹WKY高血压大鼠的血压,增加血浆游离牛磺酸等的水平,增加尿牛磺酸,尿素等的排出。     

短期和长期热量限制对大鼠胰岛素抗性的影响

研究短期和长期热量限制（caloric restriction,CR）对大鼠胰岛素抗性的影响。结果显示:短期和长期CR鼠显著减轻其肝重、体重;血糖、胰岛素浓度显著低于自由进食（ad libitum,AL）鼠;胰岛素抵抗指数和敏感指数分别显著低于和高于对应的AL鼠。提示短期和长期CR鼠均能适应低浓度的葡萄糖与胰岛素环境,并有效地利用葡萄糖;胰岛素抗性随鼠龄增加而增高,此现象可通过CR而延缓;CR鼠可能由于体脂的减少、运动的增加而增加胰岛素敏感性、降低胰岛素抗性。CR可减轻大鼠的体重,降低血糖、胰岛素浓度,也增强胰岛素敏感性和降低胰岛素抗性。