低于米氏常数底物浓度下酶动力学参数的测定

目的：联用设定底物浓度下初速度（initial velocity,Vi）和过程分析法所得酶最大反应速度（maximal reaction rate,Vm）与米氏常数（Michaelis-Menten constant,Km）比值（Vm/Km）,据米氏方程推算酶的Km和Vm。方法：以苛求芽孢杆菌尿酸酶（Bacillus fastidious uricase,BFU）及其突变体（A1R,A1R/V144A ）、牛小肠碱性磷酸酶（calf intestinal alkaline phosphatase,CIAP）及大肠杆菌碱性磷酸酶突变体R168K为模型。用A293 nm记录尿酸酶反应曲线、A450 nm记录碱性磷酸酶水解4-硝基-1-萘基磷酸酯（4-ni－tro-1-naphthyl phosphate,4NNPP）反应曲线;以反应时间为自变量、用积分速度方程拟合不超过10% Km初始底物浓度下酶反应曲线测定Vm/Km,分析设定底物浓度下初速度反应数据确定初速度Vi;据相同酶量Vi和Vm/Km按米氏方程计算Km;据所得Vm/Km和Km推算Vm。结果：以E-H（Eadie-Hofstee）法分析50%~200% Km底物浓度下Vi所得Km均值为其参考值;联用策略测定Vi所设定的底物浓度越高,则所得Km相对偏差越小;测定Vi所设定的底物浓度从35% Km逐渐升高到120% Km,所得Km趋于稳定且相对偏差不超过20%。据此联用策略发现,苛求芽孢杆菌尿酸酶在生理pH下活性降低的原因不是其Km明显升高,而是其Vm下降。结论：当底物溶解度低于Km时,这种联用策略更适合测定酶的Km和Vm。     

单底物酶的Km测定方法学研究

作者将由米氏方程改写的线性回归方程略加分解,用袖珍计算器测算Km 和 Vmax 值,取得了准确又简便的效果。并用此法研究底物浓度对米氏方程的服从性。发现在[S]》[E]的广阔范围内,不同梯度浓度组测得的 Km 或 Vmax 相差很大。运用相关系数(r)反映线性从而证明底物浓适度对米氏方程的服从性的原理,寻找到最适底物浓度的范围。为使 Km 测定达到规范化,作者提出两点建议与同道研讨。(1)实验设计的底物范围要宽广,浓度梯度不少于12个,并能测出最大的初速度。(2)选择实验测得的最大初速度及其1/2之间的底物浓度来计算 Km 和 Vmax值。文章通过实例分析,认为下述建议是合理的。     

酵母蔗糖酶Km值的测定

Ｋｍ值是酶的特征性常数，测定Ｋｍ值是研究酶动力学的一种重要方法。故“Ｋｍ值的测定”是医学院校本科生、研究生生物化学实验课的重要内容。多年来，在给学生开设碱性磷酸酶Ｋｍ值的测定或酵母蔗糖酶Ｋｍ值的测定中，我们发现原实验［１］存在一些问题。对此，我们作了...     

兔肌乳酸脱酶米氏常数[Km（NADH）]的测定

本实验以兔肌乳酸脱氢酶为受试对象，在ＰＨ７．０，２５℃，１０１．３ｋＰａ条件下，采用不同配对的底物浓度方式，测定了不同时间的光吸收值，并计算出ＮＡＤＨ在Ａ３４０ｎｍ每分钟减少的平均差值。用二次作图法求出了ＬＤＨ的ｋｍ（ＮＡＤＨ）值为１．０６＊１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ，此结果与文献报道接近。     

ELISA酶底物邻苯二胺-过氧化氢系统最适浓度的选择

用棋盘滴定法对ELISA中酶底物邻苯二胺-过氧化氢的最适浓度进行了研究。发现邻苯二胺的最适浓度为14.8 mmol/L;过氧化氢的最适浓度为1.7mmol/L。使用最适底物浓度可明显提高FLISA的敏感性。     

胰酶谱分析在急性胰腺炎诊断中的价值

急性胰腺炎是临床急腹症中发作凶险疾病之一 ,因而早期、快速诊断意义重大。急性胰腺炎是由各种原因引起胰腺消化酶对胰腺自身消化所致的急性化学性炎症 ,临床诊断依据典型临床表现 (刀割样腹痛并向背部放射、恶心、呕吐、腹膜刺激征等 )。Ｂ超、ＣＴ影像学检查可见胰腺弥漫性肿大、密度不均、边界模糊等。而实验室胰酶谱分析 (淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶原 - 2等 )在急性胰腺炎诊断中起重要作用。1　淀粉酶及同工酶淀粉酶 (ＡＭＳ)测定是诊断急性胰腺炎的特异方法 ,同工酶分为Ｓ型、Ｐ型。血淀粉酶于发病后 3- 12小时开始升高 ,2 4 - 4 8小…     

血清α_1——抗胰蛋白酶在原发性肝癌诊断中的意义

作者采用火箭免疫电泳方法(ELA)分别对200例正常健康人、32例原发性肝癌及105例肝炎,肝硬化病例作了血清α_1—抗胰蛋白酶(α_1AT)定量测定。正常健康人及肝癌病人含量分别为2.510±0.280g/L(250.96±28.02mg/dl)、3.210±0.403g/L(321.01±40.26mg/dl),二者有显著性差异(P<0.01);3例αFP阴性的肝癌病例,α_1AT含量均高于正常,提示α_1AT对原发性肝癌的诊断有一定意义,尤其是α_1FP阴性病例。     

定标血清在酶催化浓度测定中的应用

目的:应用定标血清校正酶催化浓度的结果,观察采用国产试剂测定酶催化浓度的准确性.方法:采用国产试剂来测定定标血清和定值质控血清的GPT、GOT、CK、ALP、γ-GT、HBDH的浓度值及校正因数(K值).结果:用国产试剂测定定标血清和定值质控血清的六项酶的浓度,经K值校正后的结果靠近靶值.结论:应用酶标准物,可有效地保证酶催化浓度测定结果的准确性.     

酶的自杀底物及其在医药中的应用

目的探讨酶的自杀底物在医学领域的应用。方法通过对酶的自杀底物作用机制的回顾分析,讨论其在医学中的应用。结果酶的自杀底物在作为抗菌药物、治疗癫痫、治疗高血压和治疗肿瘤方面有重要作用。结论随着科学技术的发展和研究的深入,越来越多的用于疾病治疗的酶的自杀底物将应用于临床,为人类征服各类疾病服务。     

凝血酶底物发色肽的化学合成

本文报道了凝血酶废物发色肽苯甲酰苯丙氨酰缬氨酰精氨酰对硝基苯胺（Bz－Phe－Val－Ars－PNA）的人工合成．本法是根据液相合成法的原理和操作，用碳二亚胺作为肽键合成的激活剂，由作者设计其合成的技术线路和总流程。合成产品经红外光谱、紫外光谱鉴定，与标准品具有同样特征的吸收光谱，并从酶促水解反应，410nm波长处吸光度的增加，证明该产品与标准品一样，其精氨酸羧基的肽键被凝血酶水解释出黄色产物。     

D-二聚体及凝血指标在肝癌诊治中的意义

目的:本文通过对肝癌患者凝血及血浆D-二聚体定量测定,以探讨上述指标在肝癌病程变化中的意义.方法:肝癌患者115例,其中原发性肝癌84例,继发性肝癌31例:对照组30例.检测指标为凝血常规及D-二聚体定量:凝血常规包括血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB).结果:原发性肝痛患者PT、APTT、TT均明显延长,FIB明显下降,D-二聚体明显增高,与对照组比较均差异显著(P＜0.01);继发性肝癌患者PT、APTT均明显延长,D-二聚体明显增高,与对照组比较均差异显著(P＜0.01),TT延长,FIB明显增高,与对照组比较差异显著(P＜0.05).绪论:肝癌患者均有不同程度凝血及纤溶异常,相关指标对肝癌的转移及疾病的预后均有重要的辅助诊断价值.     

MTT法检测在不同浓度的氢化可的松下肾小管上皮细胞的活性

目的研究氢化可的松对体外培养的肾小管上皮细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法采用MTT比色法,观察氢化可的松对体外培养的肾小管上皮细胞增殖的影响。结果一定浓度下的氢化可的松能够促进体外培养的肾小管上皮纠胞增殖,但是随着浓度的增加(0·1g·L-1),氢化可的松对其增殖作用会下降。结论不同浓度下的氢化可的松对体外培养的肾小管上皮细胞的活性是不同的。     

MTT法检测在不同浓度的氢化可的松下肾小管上皮细胞的活性

目的研究氢化可的松对体外培养的肾小管上皮细胞增殖的影响,探讨其作用机制.方法采用MTT比色法,观察氢化可的松对体外培养的肾小管上皮细胞增殖的影响.结果一定浓度下的氢化可的松能够促进体外培养的肾小管上皮纠胞增殖,但是随着浓度的增加(0.1 g·L-1),氢化可的松对其增殖作用会下降.结论不同浓度下的氢化可的松对体外培养的肾小管上皮细胞的活性是不同的.     

反相高效液相色谱法测定三唑仑的血药浓度

目的 :建立三唑仑血药浓度的反相高效液相色谱测定方法。方法 :采用 Kromasil C1 8柱 (5μm,4 .6 mm× 2 5 0 mm ) ;流动相为甲醇—水 (6 5∶ 35 ) ;流速 :1 ml/m in;柱温 :4 0℃ ;检测波长 :2 2 0 nm;灵敏度 :1 .0 0 AUFS。结果 :三唑仑在 0 .0 2～ 1 8.3μg/ml范围内线性良好 ,平均回收率为 (99.8± 4 .1 ) %。日内 RSD≤ 4 % ;日间 RSD≤ 9%。结论 :该方法简便、快速、准确、灵敏度高 ,可用于三唑仑的血药浓度测定及药动学研究     

胰酶消化对不同抗体在石蜡切片中免疫酶标记的影响

采用27种抗体在200例各种类型的肿瘤和正常组织中进行免疫组化染色,显示石蜡切片经胰蛋白酶消化后,一部分抗体的免疫反应有所增强。但也有一部分抗体没有变化,甚至一部分抗体可转为阴性结果。说明胰蛋白酶消化要根据各种抗体,以及其厂家、批号的不同,经多次试验来决定是否需要。     

NKCF检测在疾病诊断中的应用

报告用MIT比色法观察了恶性肿瘤、SLE、哮喘等疾病患者的NKCF活性,并与经PHA刺激的淋巴细胞~3H—TdR 掺入量(cpm)和刺激指数(SI)对比。结果;(1)三类恶性肿瘤患者的NKCF 活性比正常值明显降低,而他们的淋巴细胞cpm 和SI 则与正常值无显著差异;(2)SLE 组NKCF 活性显著下降,而淋巴细胞cpm 和SI 有所上升;(3)哮喘患者的NKCF 活性无明显改变,而淋巴细胞cpm 和SI 升高。结果表明,NKCF 活性检测对恶性肿瘤和SLE 有辅助诊断价值。     

二维扫描单光子骨密度仪的性能分析

目的：测定二维扫描单光子骨密度仪的性能。方法：采用二维扫描,经数据处理系统将通过骨的放射性转换为图像。根据骨图像所显示的骨的形态特征,测定感兴趣区的BMC和BMD。结果：仪器准确度：BMC和BMD测定,偏差不超过1．5％。精密度：干桡尺骨标本BMC和BMD的CV不超过2％,受试人桡尺骨BMC和BMD的CV不超过3％,仪器线性及稳定性良好。结论：本仪器准确度高,精密度好,为测定桡骨超远端的BMC和BMD提供可靠的方法。     

T细胞检测和荧光PCR检测在结核分枝杆菌检测中的比较

目的：比较T细胞检测和荧光PCR检测两种方法对结核分枝杆菌检测的敏感性、特异性,及在基层结核病防治工作中的应用前景。方法应用结核分枝杆菌荧光PCR检测2013年10月1日—2014年10月1日采集的194份疑似或确诊活动性肺结核空腹痰标本,并与血液T细胞检测结果进行比较。结果荧光PCR法与T细胞检测对结核分枝杆菌检测的阳性率为12.9％和7.7%,确诊率分别为56%和93.3%。结论结核分枝杆菌T细胞检测相比荧光PCR检测的特异性较高,而敏感性相对较差,在临床实践中由于各种干扰因素的存在,两者结合应用可提高结核病的早期诊断率。