槲皮素对乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

槲皮素具有广泛的生理及药理活性 [1] ,因其扩张冠脉、调血脂、降低血管通透性被作为心血管药物而在临床广泛应用。已有文献报道槲皮素在体外对肿瘤的化学预防和治疗作用及其机制[2 ,3 ] 。此前 ,已对槲皮素抑制 DMBA (二甲基苯并蒽 )诱导的 SD大鼠乳腺癌的发生及增殖进行了研究并探讨机制 [4,5]。本实验采用 ER(雌激素受体 )阳性的乳腺癌细胞株 MCF- 7,初步观察槲皮素在体外对该细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响 ,为进一步探讨其作用机制及其应用于临床治疗乳腺癌提供部分依据。1　材料与方法1 .1　药物与细胞系 :Quercetin (槲皮素 ,…     

槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用

目的:探索槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响.方法:槲皮素体外孵育人乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法检测MCF-7细胞增殖,FCM法测定细胞周期,AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡.结果:槲皮素明显抑制MCF-7细胞增殖,高浓度时(≥50μM)促进细胞凋亡,低浓度时(≤20μM)阻滞MCF-7细胞于S期.结论:槲皮素具有抗人乳腺癌MCF-7细胞的生物学活性.     

NP方案联合不同间隔时间放疗对乳腺癌MCF-7细胞辐射敏感性的影响

目的：研究化疗方案顺铂（DDP）＋盖诺（NVB）联合不同间隔时间放射治疗对人乳腺癌MCF-7细胞辐射敏感性的影响。方法：采用细胞集落形成方法观察DDP＋NVB方案联合不同问隔时间放疗对细胞的杀伤作用。结果：MCF-7细胞化放间隔不同时间后细胞SF值差异随照射剂量增加而逐渐明显,8Gy时12h组最低,0h组居中,48、72h组最高。结论：NP不同时机顺序联合放疗对MCF-7细胞辐射敏感性有一定影响．这种差鼻同NP作用后不同时间细胞周期分布、凋亡等作用有美．值得讲一步探讨．     

自噬在槲皮素诱导人乳腺癌MCF-7细胞死亡中的作用

目的研究自噬在槲皮素诱导的人乳腺癌MCF-7细胞死亡中的作用。方法用不同浓度的槲皮素处理人乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法测定槲皮素对MCF-7细胞增殖的抑制作用;应用MDC荧光染色观察给药后MCF-7细胞的自噬征象;应用JC-1荧光染色观察给药后MCF-7细胞的线粒体变化;检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率以观察用自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）阻断自噬后槲皮素抑瘤作用的变化。结果槲皮素对MCF-7细胞增长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间、剂量依赖性;槲皮素给药后早期可诱导MCF-7细胞发生自噬及线粒体变化;在槲皮素给药前和给药后阻断自噬,槲皮素对MCF-7细胞的细胞毒性作用均增强。结论槲皮素能明显抑制MCF-7细胞的生长,并诱导其发生自噬,伴随线粒体发生变化。由槲皮素引发的自噬能够明显保护MCF-7细胞,减少因槲皮素导致的细胞死亡。     

槲皮素烃基化衍生物的合成及其促MCF-7细胞凋亡作用的研究

【目的】 槲皮素具有一定的抗肿瘤活性并且毒性较低,具有良好的应用前景,但因溶解性差,不易吸收,影响了其开发和利用。本研究以槲皮素为原料,合成一系列烃基化衍生物,并考察这些衍生物对人乳腺癌细胞MCF-7的促凋亡作用及可能的机制。 【方法】 将槲皮素进行乙酰化保护,在乙腈中以不同试剂烃基化,产物经重结晶和柱层析法纯化,以MS、¹HNMR、¹³CNMR、NOESY进行产物分子量测定及结构表征。测定各产物在DMEM培养基中的溶解度,选取溶解度较好的产物,以MTT法测定其对MCF-7 细胞增殖率的影响,以HPLC法测定其在MCF-7细胞中浓度随时间的变化。选取IC50较小的产物,分别以AV-PI双染-流式细胞术、DAPI染色、DNA片段化分析考察其对MCF-7细胞的促凋亡作用。分别经DCFH-DA染色和JC-1染色测定衍生物对MCF-7细胞中ROS生成量及线粒体膜电位的影响,MTT法测定ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸及广谱caspase抑制剂Z-VAD-FMK对衍生物促凋亡作用的影响,以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白在MCF-7细胞中的表达。 【结果】 对槲皮素烃基化得到了7种衍生物,其中,7-O-丁基槲皮素(BQ)和 7-O-香叶基槲皮素(GQ)在DMEM中的溶解度均大于100 μmol/L,对MCF-7细胞的IC50分别为(22.6±2.2) μmol/L、(43.5±2.1) μmol/L。BQ及GQ在MCF-7细胞中的蓄积浓度比高于槲皮素数倍,且在细胞中停留的时间更长,对MCF-7的促凋亡作用明显强于槲皮素。作用机制研究表明,BQ及GQ对MCF-7细胞的促凋亡作用是由AIF及Endonuclease G引起的caspase非依赖性凋亡导致的。 【结论】 以槲皮素为原料获得的烃基化衍生物BQ和GQ显示出较好的溶解性和对MCF-7细胞的促凋亡活性,为槲皮素衍生物的研究开发奠定了基础。     

敲低膜联蛋白A7对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的：：观察靶向敲低人乳腺癌MCF-7细胞膜联蛋白A7(AXNA7)的表达对MCF-7细胞凋亡的影响。方法：实验分为3组,以靶向ANXA7的siRNA转染MCF-7细胞为siRNA干扰组,另设阴性对照组、空白对照组,采用RT-PCR法和Western blot法检测转染后MCF-7细胞ANXA7的表达情况,应用流式细胞术检测ANXA7低表达对MCF-7细胞凋亡的影响。结果：转染后,siRNA干扰组细胞ANXA7的表达明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05);敲低ANXA7后,MCF-7细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。结论：ANXA7低表达可促进乳腺癌细胞MCF-7凋亡。     

吉西他滨诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的 研究吉西他滨诱导人乳腺癌细胞系MCF-7细胞产生凋亡。方法 应用MTT法、DNA电泳技术及流式细胞术观察吉西他滨诱导人MCF-7细胞凋亡。结果 吉西他滨作用后，MTT结果显示细胞生长抑制率随药物浓度的增加而逐渐增大；DNA断裂电泳可见典型的梯形DNA条带，大小约180～200bp的整倍数递增，随吉西他滨作用时间延长和浓度的增加而逐渐增强；流式细胞术分析，吉西他滨1．0μg／ml和10．0μg／ml作用24h后，凋亡细胞比例分别为8％和14％；作用48h后分别增加到15％和29％。结论 吉西他滨可以诱导乳腺癌细胞产生凋亡，呈时间和剂量依赖性。     

Hiwi基因靶向沉默对乳腺癌MCF-7/ADM细胞化疗敏感性的影响

目的：探讨耐阿霉素乳腺癌MCF-7/ADM细胞应用Hiwi基因靶向沉默技术后对阿霉素敏感性的变化,阐明Hiwi基因在乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药机制中的作用。方法：MCF-7/ADM细胞分为对照组、Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组,分别转染Hiwi control、Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2 3种不同载体,应用实时定量PCR和Western blotting法检测Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平,判断转染效率。转染后各组乳腺癌MCF-7/ADM细胞加入不同浓度阿霉素（0、0.1、0.5和1.0mg·L^-1）,0mg·L^-1阿霉素组为对照组,采用MTT法检测各组MCF-7/ADM细胞的存活率,即耐药敏感性。结果：与对照组比较,转染后Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2组细胞中Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）。与对照组比较,经不同浓度阿霉素作用后,Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组细胞存活率明显降低（P<0.01）,阿霉素浓度为1.0 mg·L^-1时,2组细胞存活率分别为（48.15±6.28）%和（41.73±6.17）%,对阿霉素的敏感性明显增强。结论：Hiwi基因在MCF-7/ADM细胞中具有高效的靶向沉默,Hiwi基因沉默后的MCF-7/ADM细胞对阿霉素恢复敏感性。     

姜黄素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的研究姜黄素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的条件及机理。方法用MTT法测定姜黄素抑制MCF-7细胞增殖的IC50值;流式细胞仪测定姜黄素处理后MCF-7细胞周期分布变化与凋亡量;光镜观察MCF-7细胞形态学变化;RT-PCR技术测定MCF-7细胞bcl-2、Bax mRNA表达量变化。结果姜黄素抑制MCF-7细胞增殖的IC50值为18.5μM;在IC50值条件下,MCF-7细胞凋亡率为8.9%,可见明显的核固缩与胞浆浓缩,bcl-2mRNA表达明显降低(P<0.01),Bax mRNA表达明显增高(P<0.01)。结论姜黄素可通过抑制bcl-2、促进Bax mRNA表达诱导MCF-7细胞凋亡,并有效抑制其增殖。     

番茄红素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响

目的 观察番茄红素对体外培养的雌激素受体阳性(ER )乳腺癌细胞MCF-7和雌激素受体阴性(ER-)乳腺癌细胞MDA-MB-231的存活率、细胞周期及凋亡的影响.方法 采用MTT法和H3-TdR 掺入法观察番茄红素对两种细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化.结果 番茄红素抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖和DNA合成,具有剂量效应关系,随着时间延长,抑制作用增强,最大抑制率分别为52.6%、61.9%.流式细胞仪结果显示,番茄红素作用24 h后,MCF-7、MDA-MB-231细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞增多,而S期和G2/M期细胞减少,同时可诱发MDA-MB-231细胞凋亡.结论 番茄红素通过阻滞MCF-7细胞于G1期而抑制该细胞的增殖,而对MDA-MB-231细胞增殖的抑制除可通过阻滞细胞周期进程外,还与诱导凋亡有关.     

槲皮素对人乳腺癌裸鼠移植瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的　观察槲皮素 ( Quercetin)对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法　以 MCF- 7细胞复制裸鼠异种移植瘤模型 ,2 4只荷瘤鼠随机分组用药 :对照组、槲皮素组、5 - Fu组、槲皮素 + 5 - Fu组。用药 15 d收集肿瘤标本 ,采用光镜、电镜观察 ,Tunel法行原位凋亡检测 ,免疫组化分析 Ki67、Bcl- 2的表达。结果　 1槲皮素组、5 - Fu组、槲皮素 + 5 - Fu组瘤重明显低于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;2 Ki67免疫组化显示 :槲皮素组、5 - Fu组、槲皮素 + 5 - Fu组 Ki67指数 ( Ki67- L I)明显低于对照组 ,差异有显著性 ( P<0 .0 1) ;Bcl- 2免疫组化显示 :槲皮素组、5 - Fu组、槲皮素 + 5 - Fu组与对照组差异有显著性 ( P<0 .0 5 ) ;3原位凋亡检测显示 :槲皮素组、5 -Fu组、槲皮素 + 5 - Fu组凋亡指数 ( AI)高于对照组 ( P<0 .0 1) ,槲皮素 + 5 - Fu组高于槲皮素组、5 - Fu组 ,差异有显著性意义 ( P<0 .0 5 )。结论　槲皮素可抑制人乳腺癌细胞 MCF- 7移植瘤生长     

塞来昔布联合多柔比星（ADM）对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的初步探讨塞来昔布联合多柔比星（ADM）对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡的影响,及其可能机制。方法用不同浓度的塞来昔布溶液、ADM溶液及二者联合用药（简称3药）分别与MCF-7细胞共育24h、48h、72h后,MTT法测定其对细胞的抑制作用。分别用3药作用MCF-7细胞48h后,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果10mg／L多柔比星、50μmol／L塞来昔布溶液分别与MCF-7细胞共育24h后,对MCF一7细胞的生长均有明显抑制作用（P〈0．01）。联合用药组的抑制作用更为显著。流式细胞术检测发现,给药细胞48h后,G0／G1期细胞比例升高,S期和G2／M期比例下降,3个给药组细胞均形成明显的凋亡峰,实验组各组与对照组的凋亡率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论①塞来昔布和多柔比星均有抑制乳腺癌MCF-7细胞的作用,并呈时间和剂量依赖性;②塞来昔布能诱导MCF-7细胞凋亡,可能与阻止细胞周期进展有关;③塞来昔布与多柔比星联合应用可起到协同抗肿瘤的作用。     

乳腺癌MCF-7细胞Alu甲基化水平的MSRE-qPCR法检测

目的:寻找简单?可靠?经济并适合大批量检测肿瘤组织标本和肿瘤细胞系中Alu甲基化水平的实验方法?方法:用对甲基化敏感的限制性内切酶联合定量PCR(methylation-sensitive restriction endonuclease digestion and quantitative PCR,MSRE-qPCR)法检测乳腺癌细胞系MCF-7中Alu序列的甲基化水平,并与常用的亚硫酸氢盐修饰结合测序法(bisulfite-sequencing PCR,BSP)进行比较?结果:MSRE-qPCR显示Alu甲基化水平在BstUⅠ酶切位点约为33.7%,在HpaⅡ酶切位点约为56.1%,与BSP法比较,两种方法都显示BstUⅠ位点甲基化水平较低,而HpaⅡ位点甲基化水平较高,趋势一致,并提示MCF-7细胞的Alu甲基化水平明显低于正常细胞(84.6%或者更高)?结论:MSRE-qPCR法简单?可靠?经济,适合用于大批量检测Alu甲基化水平?     

Hesperidin as a preventive resistance agent in MCF-7 breast cancer cells line resistance to doxorubicin

Objective

To evaluate of hesperidin to overcome resistance of doxorubicin in MCF-7 resistant doxorubicin cells (MCF-7/Dox) in cytotoxicity apoptosis and P-glycoprotein (Pgp) expression in combination with doxorubicin.

Methods

The cytotoxic properties, 50% inhibition concentration (IC₅₀) and its combination with doxorubicin in MCF-7 cell lines resistant to doxorubicin (MCF-7/Dox) cells were determined using MTT assay. Apoptosis induction was examined by double staining assay using ethidium bromide-acridine orange. Immunocytochemistry assay was performed to determine the level and localization of Pgp.

Results

Single treatment of hesperidin showed cytotoxic activity on MCF-7/Dox cells with IC₅₀ value of 11 µmol/L. Thus, combination treatment from hesperidin and doxorubicin showed addictive and antagonist effect (CI>1.0). Hesperidin did not increase the apoptotic induction, but decreased the Pgp expressions level when combined with doxorubicin in low concentration.

Conclusions

Hesperidin has cytotoxic effect on MCF-7/Dox cells with IC₅₀ of 11 µmol/L. Hesperidin did not increased the apoptotic induction combined with doxorubicin. Co-chemotherapy application of doxorubicin and hesperidin on MCF-7/Dox cells showed synergism effect through inhibition of Pgp expression.     

miR let-7b抑制乳腺癌MCF-7细胞迁移及其机制

目的： 观察miR let-7b对乳腺癌MCF-7细胞迁移能力的影响并探讨其作用机制。方法： 合成miR let-7b并转染乳腺癌MCF-7细胞,以miR-control作参照。通过划痕实验观察转染前后细胞迁移能力的变化,运用 PCR和蛋白质印迹法检测转染miR let-7b前后MCF-7细胞内IL-6表达水平的变化。最后通过信息生物学软件及双荧光酶素报告基因方法验证miR let-7b与IL-6结合。结果： 与对照组比较,转染miR let-7b的MCF-7细胞迁移能力明显降低,而anti-miR let-7b明显促进细胞迁移。转染miR let-7b的乳腺癌MCF-7细胞中IL-6的表达水平较对照组明显降低,而转染anti-miR let-7b的细胞内IL-6的表达水平明显提高。信息生物学软件和双荧光酶素报告基因证实miR let-7b与IL-6结合。结论： miR let-7b在转录水平抑制乳腺癌MCF-7细胞IL-6的表达从而抑制MCF-7细胞的迁移。     

姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞抗增殖作用的研究

目的 研究姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期分布及基因表达情况的影响.方法 MTT法测定姜黄素生物活性及姜黄素抗增殖效应、FCM分析细胞周期分布,RT-PCR技术测定bcl-2、bax、PCNA mRNA表达.结果 姜黄素对MCF-7细胞的IC50值为18.5 μmol/L.各实验组的姜黄素对MCF-7细胞的生长均有抑制作用,这种抑制作用呈时间-剂量依赖方式.FCM检测结果:姜黄素20 μmol/L及40μmol/L作用于MCF-7细胞24 h,可阻滞细胞周期于G0/G1期,并诱导部分细胞凋亡.RT-PCR测定结果:姜黄素0～80 μmol/L作用MCF-7细胞24 h,bcl-2、PCNA mRNA表达水平降低、bax mRNA表达水平增加.结论 姜黄素可抑制MCF-7细胞生长、阻滞细胞周期于G0/G1期,对MCF-7细胞有抗增殖作用,并能诱导部分细胞凋亡,其机制可能与姜黄素抑制bcl-2、PCNA mRNA表达,促进bax mRNA表达有关.     

蛇床子素对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

【目的】观察蛇床子素对体外培养乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。【方法】雌激素依赖性MCF-7细胞在DMEM培养液中采用开放式单层贴壁培养，用3种不同浓度蛇床子素进行药物干预，采用活细胞计数法和MTT法测定乳腺癌细胞的增殖情况。【结果】MCF-7细胞经蛇床子素1×10^-8mol／L和雌酚酮处理后1、2d和3d，与空白对照组相比，增殖速度均加快（P〈0．05），3d差异最为显著。【结论】1×10^-8mol／L蛇床子素对MCF-7细胞有明显促增殖作用。     

膜型基质金属蛋白酶-1增强乳腺癌细胞系MCF-7的恶性表型

目的：探讨膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)蛋白酶-1表达对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生物学行为的影响及MT1-MMP催化亚单位在其中的作用。方法：应用脂质体转染法将携带MT1-MMP及其突变体基因MT1-MMP-E240A的pcDNA3.1载体分别稳定导入MCF-7细胞，通过超微结构观察及体外生长、迁移实验检测MCF-7细胞生物学行为的变化。结果：转染后的细胞经RT-PCR证实MT1-MMP mRNA的表达与对照组比较明显增强；免疫荧光细胞化学染色显示MT1-MMP蛋白呈强阳性表达，阳性颗粒分布于肿瘤细胞的胞浆和胞膜。透射电子显微镜观察显示pcDNA3.1组和MCF-7组细胞未见异常，而MT1-MMP组与MT1-MMP-E240A组细胞与对照组相比出现较多处于分裂期的细胞和瘤巨细胞，部分细胞胞浆内出现糖原池和髓样小体样溶酶体。细胞增殖周期、细胞生长曲线测定结果显示，MT1-MMP组与MT1-MMP-E240A组处于G₂M期的细胞比率明显高于对照组（P＜0.01），提示转染组细胞的增殖能力增强。转染组细胞在Matrigel和FN上的迁移能力较对照组明显增强（P＜0.05）。结论：MT1-MMP能够促进肿瘤细胞的增殖、迁移，在一定程度上增加其恶性表型；MT1-MMP催化亚单位在其中不发挥主要作用。     

DHRS7对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响及其在乳腺癌组织中的表达

［摘 要］目的：探究 DHRS7基因过表达和DHRS7特异性短发夹RNA(shRNA)重组质粒对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响及DHRS7与乳腺癌浸润癌的关系,阐明DHRS7在乳腺癌发生、发展中的作用。方法：利用RT-PCR技术将DHRS7基因全长克隆入真核表达载体pcDNA3.1( + )质粒中,构建pcDNA3.1-DHRS7重组真核表达质粒。实验分为pcDNA3.1-DHRS7组、阴性对照组(pcDNA3.1组)、空白对照组和DHRS7-shRNA-pGenesil组,用Fugene HD转染试剂将各种质粒转染MCF-7细胞,采用RT-PCR和Western blotting法检测各组MCF-7细胞中DHRS7的表达情况,流式细胞术分析细胞周期变化,免疫组织化学SP法检测乳腺原位癌和乳腺浸润癌组织中DHRS7蛋白的表达情况。结果：成功构建pcDNA3.1-DHRS7重组表达质粒。PCR和Western blotting结果显示,pcRNA-DHRS7组蛋白的表达量高于空白对照组（P<0.05）,DHRS7-shRNA-pGenesil组蛋白的表达量低于空白对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术显示,DHRS7表达上调使MCF-7细胞S期细胞增多（P<0.05）,DHRS7的表达下调使处于G2期的细胞增多（P<0.05）。免疫组织化学染色显示,DHRS7蛋白在原位癌中高表达,阳性表达率为100%（37/37）;在乳腺浸润癌的表达明显降低,阳性率为18.9%（7/37）,两者比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：DHRS7基因参与了MCF-7细胞细胞周期的调控过程,可以抑制细胞增殖,DHRS7蛋白的表达丢失可能促进乳腺癌浸润。