Rap1与胃癌多药耐药的相关性

目的探讨Rap1与胃癌多药耐药的相关性。方法采用免疫荧光技术和Westernblot方法检测胃癌细胞SGC7901、多药耐药胃癌细胞SGC7901／VCR和SGC7901／ADR中Rapl的表达。结果胃癌细胞SGC7901、多药耐药胃癌细胞SGC7901／VCR和SGC7901／ADR胞核和胞浆均有Rap1阳性染色,多药耐药胃癌细胞中Rap1表达明显高于亲本细胞SGC7901。结论Rap1与胃癌多药耐药相关。     

贝母素乙逆转SGC7901/VCR细胞株多药耐药的初步研究

目的研究贝母素乙对胃癌耐药细胞SGC7901/VCR的逆转及诱导凋亡作用。方法采用四甲基唑蓝法(MTT)检测贝母素乙的细胞毒性及耐药逆转效果;采用流式细胞仪检测细胞内阿霉素(ADR)蓄积以及细胞凋亡率的变化。结果贝母素乙可剂量依赖性的的抑制亲本细胞系SGC7901和耐药细胞系SGC7901/VCR的细胞增殖,20μg/mL贝母素乙能够显著提高SGC7901/VCR细胞对化疗药(长春新碱、阿霉素、顺铂和5-氟尿嘧啶)的敏感性及细胞内ADR的浓度,贝母素乙和5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合用药后能诱导细胞凋亡,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而逐渐增加,处理48h后的凋亡率最高达44.5%。结论贝母素乙能够作为胃癌多药耐药逆转剂逆转MDR,其机制可能与减少药物外排和诱导细胞凋亡相关。     

MiRNA-106a通过作用RUNX3基因诱导胃癌细胞多药耐受

目的：探讨胃癌细胞中人类相关转录因子3（RUNX3）对miRNA‐106a（miR‐106a）表达的影响以及与多药耐药的关系。方法采用免疫印迹法及细胞凋亡检测来观察miR‐106a在两个人类胃癌细胞多药耐药细胞系上的表达情况。运用免疫印迹及多聚酶链式反应检测miR‐106a的表达来观察癌细胞对抗癌药物的敏感性。通过荧光素酶活性测定观察miR‐106a与RU NX3的关系。结果 miR‐106a在多药耐药胃癌细胞中表达增加,并抑制胃癌细胞对抗癌药物的敏感性;通过作用于RUNX3调节多药耐药。结论通过作用于RUNX3基因,miR‐106a诱导胃癌多药耐药性。     

乳浆大戟抑制原代人胃癌多药耐药细胞增殖和诱导凋亡研究

目的:研究乳浆大戟抑制原代培养多药耐药人胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。方法:制备人胃癌多药耐药原代培养细胞,用不同稀释度的乳浆大戟提取液处理人胃癌多药耐药原代培养细胞,MTT实验观察细胞生长抑制现象,吖啶橙染色荧光显微镜观察凋亡细胞的核形态改变并测定凋亡指数,流式细胞术检测细胞凋亡率;以不加乳浆大戟提取液的细胞作对照。结果:乳浆大戟对人胃癌多药耐药原代培养细胞有增殖抑制作用,该作用有时间和浓度依赖性。乳浆大戟处理后的人胃癌多药耐药原代培养细胞,荧光显微镜下观察可见细胞核固缩、染色不均匀和核碎片等细胞凋亡的形态学改变,凋亡形态显示的凋亡指数和流式细胞术显示的凋亡率均明显上升,均有时间和浓度依赖性;以上作用与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:乳浆大戟提取液具有抑制人胃癌多药耐药原代培养细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤模型的建立及耐药性检测

目的建立人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤模型,并检测其多药耐药性,为进行肿瘤多药耐药逆转剂的筛选和体内实验研究奠定基础。方法采用皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;观察裸鼠生长状况;移植瘤生长情况;进行瘤重及瘤体积比较;移植瘤P-gp耐药蛋白表达;原代培养细胞,检测移植瘤模型多药耐药性。结果人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤组织病理学检查为低分化腺癌,移植瘤组织原代细胞培养后,P-gp表达强阳性+++,具有多药耐药性,模型建立成功。结论成功建立了人胃癌SGC7901/VCR裸鼠多药耐药移植瘤模型,为胃癌耐药研究提供了较理想的动物模型。     

缺氧通过HIF-1依赖的MGr1—Ag介导胃癌多药耐药的机制研究

我们前期的研究结果发现缺氧诱导因子（hypoxia—inducible factor-1,HIF-1）能够促进胃癌的多药耐药表型。MGr1—Ag／37LRP是本实验室前期发现的一个新的耐药相关新分子。基于前期的研究,我们提出假设：MGr1—Ag／37LRP参与了缺氧条件下HIF-1依赖的胃癌多药耐药表型。首先,MTT和流式细胞仪检测凋亡结果显示利用siRNA抑制MGr1—Ag／37LRP的表达能够显著逆转缺氧诱导的胃癌多药耐药。     

TRAIL抑制胃癌多药耐药基因MDR1/P-gp的表达

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR多药耐药基因MDR1及其编码P-gp蛋白表达的影响,探讨以TRAIL为靶点逆转胃癌多药耐药的机制。方法 SGC-7901/VCR细胞株经不同浓度的TRAIL处理48 h后,RT-PCR检测各组胃癌细胞株中多药耐药MDR1 mRNA的表达情况,同时用ELISA法检测各组胃癌细胞株中P-gp表达的含量。结果不同浓度TRAIL(50、100、200、400μg/L)作用于细胞后,胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR的MDR1/P-gp表达受不同程度抑制,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。400μg/L与200μg/L组相比其MDR1/P-gp抑制程度并不明显,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRAIL可抑制SGC-7901/VCR MDR1/P-gp的表达,且呈量效关系。TRAIL可能通过降低耐药基因MDR1的表达逆转胃癌的多药耐药。     

P-糖蛋白和谷胱甘肽硫转移酶在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的观察谷胱甘肽硫转移酶(GST)和多药耐药基因产物P-糖蛋白(P-gp)在胃癌中的表达,探讨两者与胃癌化疗耐药之间的关系。方法应用免疫组化方法定量分析P-gp和GST在75例胃癌标本中的表达,分析两者是否有相关性。结果P-gp和GST在75例胃癌组织中阳性表达率分别为43%和63%,化疗耐药组P-gp和GST阳性表达率与不耐药组比较,差别有显著性意义(P<0·05)。P-gp与GST表达水平呈正相关(r=0·378,P<0·05)。结论P-gp和GST-参与胃癌化疗耐药的机制,可作为多药耐药的标志物。     

苦参碱逆转人胃癌细胞株SGC7901/VCR耐药性实验研究

目的 研究苦参碱(Matrine)对人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药的逆转效应及其机制.方法 以长春新碱(VCR)诱导的人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR为研究对象,MTT法研究苦参碱对体外培养的人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR细胞增殖的影响及逆转效应、用间接免疫荧光法经流式细胞仪检测MRP的表达并分析其机制.结果 MTT法显示苦参碱在0.5、1.0、2.0 mg·mL-1浓度下处理SGC7901/VCR细胞72 h后,其生长抑制率依次为10%、15%、32%,且可以逆转SGC7901/VCR对VCR的耐药,呈剂量依赖性,逆转倍数分别为9.4、13.4、24.5倍.0.5 mg·mL-1苦参碱与SGC7901/VCR细胞共同培养24 h后,SGC7901/VCR细胞的MRP表达从(36.00±4.32)%降低至(25.00±3.85)%(P<0.01).结论 苦参碱可以体外逆转人胃癌细胞多药耐药细胞SGC7901/VCR的耐药性,其逆转机制与降低MRP的表达有关.     

多药耐药相关蛋白与胃癌的研究

多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein,MRP）是1992年发现的耐药基因,它的高表达与多种实体瘤的多药耐药有关,有研究认为MRP的高表达也反映肿瘤侵袭转移的生物学行为[1].现就多药耐药相关蛋白在胃癌中的研究进行综述.     

Bax基因对人胃癌耐药细胞多药耐药性的逆转作用

目的　研究凋亡相关基因Bax对胃癌多药耐药性的逆转作用.方法　构建含有人BaxcDNA全长的真核表达载体pBK-Bax.经脂质体导入缺乏Bax蛋白表达的人胃癌多药耐药细胞系SGC7901/VCR中.Western印迹观察Bax基因在转导细胞中的表达,MTT法检测Bax转导细胞与空载体转导细胞对化疗药物的敏感性.结果　成功构建了Bax的真核表达载体,Bax转导细胞能稳定表达Bax蛋白,与空载体转导细胞相比,Bax转导细胞对长春新碱(P<0.01).结论　Bax基因转导对胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR的多药耐药性具有逆转作用Bax基因对人胃癌耐药细胞多药耐药性的逆转作…     

五味子乙素逆转膀胱肿瘤多药耐药的实验研究

目的研究五味子乙素对膀胱肿瘤T24/ADM细胞多药耐药的逆转作用。方法 MTT法测定半数抑制浓度IC50和逆转倍数RI,流式细胞仪测定细胞内罗丹明的浓度。结果五味子乙素可以明显增加阿霉素对膀胱肿瘤T24/ADM细胞的细胞毒作用（P〈0.05）,逆转指数为4.11,五味子乙素明显抑制了细胞内罗丹明的外排（P〈0.05）。结论五味子乙素明显抑制了膀胱肿瘤细胞的多药耐药,其机制可能与其抑制P-gp蛋白的外排有关。     

P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白在胃癌的表达与化疗敏感性的相关性研究

目的：探讨胃癌组织中P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gP）、多药耐药相关蛋白（muhidrug resistance-associated protein,MRP）的表达及对胃癌原代细胞培养体外化疗药物敏感性的影响。方法：应用免疫组化法检测P-gP及MRP在48例胃癌及癌旁组织的表达,同时通过胃癌原代细胞培养MTT药敏试验,检测胃癌对7种临床常用化疗药物的敏感性及耐药性,进一步分析药敏试验结果与P-gp、MRP表达的相关性。结果：在48例胃癌中,P-gP及MRP阳性率分别为41．7％、29．2％,共同表达率为25．0％。癌旁组织与癌组织的P-gP、MRP阳性表达率无显著差异。在顺铂（DDP）、丝裂霉素（MMC）、阿霉素（ADM）、鬼臼乙叉甙（VP-16）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、羟基喜树碱（HCVF）、甲氨蝶呤（MTX）中,ADM、VP-16、HCVF耐药组P-gP、MRP阳性表达及共表达率较敏感组显著升高。结论：胃癌组织P-gp、MRP表达可导致胃癌原发性耐药。P-gP、MRP介导的MDR是ADM、VP-16、HCPT耐药的重要因素．     

顺铂、阿霉素和VP—16在胃癌细胞系中药物敏感性的研究

目的:探讨化疗药物在胃癌细胞系中的药物敏感性。方法：应用MTT方法在胃癌细胞系HSC－39,MKN28,MKN45及MKN74中对化疗药物顺铂,阿霉素及VP－16的药物敏感性进行检测。结果：胃癌细胞存在自主多药耐药机制,胃癌细胞系MKN1对化疗药物顺铂、阿霉系和VP－16比MKN28,MKN45,MKN74有更好的药物敏感性。结论：胃癌细胞在最初化学治疗前已经存在原发性多药耐药机制。     

核仁素调控多药耐药基因MDR1参与胃癌顺铂耐药

目的:探讨核仁素(Nucleolin,NCL)与胃癌顺铂耐药的关系,为胃癌的耐药机制研究和治疗提供新的基因靶点。方法:通过Western blot检测胃癌细胞SGC7901和胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP中NCL的表达量;通过转染siRNA干扰NCL的表达量,MTT实验检测敲低NCL表达对胃癌细胞耐药性的影响;通过转染GFP-NCL真核表达质粒,过表达NCL并检测多药耐药基因MDR1的表达变化。结果:Western blot结果表明NCL在耐药细胞SGC7901/DDP中表达量明显升高;MTT实验结果表明,干扰NCL的表达后,胃癌细胞对顺铂DDP的敏感性明显增高;荧光显微镜显示GFP-NCL定位在核仁区域,Western blot显示,NCL过表达能够明显促进MDR1的表达。结论:核仁素NCL通过调控多药耐药基因MDR1的表达参与胃癌细胞顺铂耐药。     

癌蛋白CIP2A在胃癌顺铂耐药中的表达及机制研究

目的:本文旨在探讨蛋白磷酸酶2A (cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)在顺铂(cisplatin,DDP)耐药的胃癌细胞中的表达及机制。方法:实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blotting检测患者胃癌组织及细胞中CIP2A表达情况;CIP2A过表达质粒和siRNA分别转染SGC7901和SGC7901/DDP细胞,通过MTT法检测细胞对DDP的敏感性;流式细胞术用于检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR、Western blotting检测多药耐药相关蛋白的表达。结果:与DDP敏感型患者相比,CIP2A在DDP耐药胃癌患者中表达较高,而CIP2A高表达的DDP耐药胃癌患者的总体生存率低于CIP2A低表达的患者。在DDP耐药的胃癌细胞中敲低CIP2A能够抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,并且也可以提高DDP耐药细胞对DDP的敏感性,反之,CIP2A过表达则导致DDP耐药细胞对DDP的敏感性降低,以上作用是通过CIP2A影响多药耐药相关蛋白在胃癌细胞中的表达实现的。结论:CIP2A在胃癌顺铂耐药的发生中发挥着关键作用,有望成为DDP耐药胃癌患者的一种新型治疗靶点。     

胃癌中GsT——Pi、ToPo——Ⅱ、PgP和LRP耐药基因的表达及意义

目的探讨胃癌中GsT-Pi、ToPo-Ⅱ、PgP和LRP耐药基因的表达及生物学意义。方法采用即用型免疫组织化学微波加热，对60例胃癌进行GsT—Pi、ToPo-Ⅱ、PgP和LRP耐药基因检测分析。结果1．60例胃癌中GsT—Pi、ToPo-Ⅱ、PgP和LRP的阳性表达率分别为81．66％、63．33％、45．00％和90、00％。2．GsT—Pi、ToPo—Ⅱ、PgP和LRP与胃癌的分化程度、年龄、肿瘤的分期有一定的相关性。结论1．部分胃癌病人的体内存在多药耐药基因，或癌细胞内原发存在对GsT—Pi、ToPo—Ⅱ、PgP和LRP所介导的抗癌药物的耐药基因。2．对胃癌病人在化疗前进行多药耐药检测，有助于临床合理选择治疗方案及预后判断。     

DBC1在胃癌耐药中的作用和机制初探

目的 初步探讨乳腺癌缺失基因1(deleted in breast cancer 1,DBC1)在胃癌耐药中的作用和可能机制。方法 选取对化疗敏感和化疗耐药的胃癌患者,利用免疫组织化学染色法检测DBC1表达差异;在SGC7901胃癌细胞系中通过DBC1-shRNA载体下调DBC1的表达,利用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium, MTT)、流式细胞术观察胃癌细胞对顺铂(cisplatin, CDDP)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)等化疗药物的敏感性;利用Western blot检测多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein, MRP)的表达变化,初步揭示可能的分子机制。结果 在化疗耐药的胃癌患者中,DBC1表达明显高于化疗敏感的胃癌患者;在SGC7901胃癌细胞,下调DBC1表达可以提高胃癌细胞对CDDP和5-FU的敏感性、降低半抑制浓度(half maximal inhibitory c...     

胃癌细胞SGC7901/ADR耐药相关蛋白质分子的差异展示

[目的]应用蛋白质组学技术寻找新的胃癌多药耐药相关蛋白分子,探讨胃癌多药耐药机制。[方法]以胃癌细胞SGC7901和阿霉素诱导的耐药胃癌细胞SGC7901/ADR为研究对象,用固相pH梯度等点聚焦二维聚丙烯酰胺电泳技术展示两种细胞表达的全蛋白,凝胶考马斯亮蓝染色,Image Master 2D Melanie5.0凝胶分析软件分析并比较差异表达的蛋白分子。[结果]SGC7901中检测到414个蛋白点,SGC7901/ADR检测到553个蛋白点,两者匹配点386个,差异点71个,其中SGC7901/ADR蛋白质表达明显上调蛋白26个点,明显下调蛋白点45个。[结论]SGC7901/ADR细胞中差异蛋白分子可能与胃癌阿霉素耐药机制有关。     

肿瘤细胞耐药基因表达的意义及其逆转新策略

一、肿瘤细胞耐药基因表达及其临床意义肿瘤细胞对多种化疗药物产生交叉耐药性,称多药耐药(Multidrug resistance,MDR)是造成肿瘤化疗失败的主要原因,有关资料统计,肿瘤年死亡率中,属内在性多药耐药(intrinsic MDR)的肿瘤,包括消化器官的胃癌、肠癌、肝癌等,呼吸系统的肺癌,泌尿