纺锤体毒剂诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究

目的 研究纺锤体毒剂长春新碱和秋水仙碱对小鼠淋巴瘤L5178Y3．2．7c-tk^ /-细胞tk基因突变的影响。方法 使用长春新碱和秋水仙素对L5178Y细胞进行梯度染毒，再分别进行细胞毒性，细胞接种效率，相对存活率，相对悬浮生长率和突变频率测定。结果 随着长春新碱和秋水仙素剂量的增加，L5178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率均明显下降。在长春新碱0．5～2．5ng／ml，秋水仙素10～50ng/ml范围内可以诱导细胞tk基因的突变率达到自发突变率的1～3倍。结论 长春新碱和秋水仙素对L5178Y细胞具有明显的细胞毒性，并可以诱导tk基因突变。     

硫芥诱导L5178Y细胞tk基因突变的研究

目的检测硫芥对小鼠淋巴瘤L5178Y3.7.2c-tk 1-细胞的诱变性.方法采用96孔微孔板接种法检测平板接种效率和突变频率.结果硫芥可诱导L5178Y3.7.2c-tk 1-细胞tk位点的突变,诱发突变是自发突变的2～15倍.在tk位点诱发了大克隆和小克隆两种不同表型的突变集落,以小克隆为主.结论硫芥有明确的致突变性和较强的细胞毒性,产生了大范围的DNA损伤.     

硝酸羟胺诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因杂合性缺失分析

目的探讨tk基因分子突变的类型,对不同剂量硝酸羟胺诱导小鼠淋巴瘤L5178Y3.2.7c-tk+/-细胞tk基因突变的杂合缺失进行分析。方法使用硝酸羟胺50～500mg/L剂量对L5178Y细胞进行梯度染毒,分别测定细胞毒性,细胞接种效率,相对悬浮生长率和突变频率。挑选经硝酸羟胺诱导的tk基因突变子(tk-/-)和自发突变体,提取基因组DNA,经等位基因特异性PCR扩增,杂合性缺失(LOH)分析等技术,分析其杂合性缺失的发生。结果大集落和小集落诱导突变体tk基因LOH发生率分别为62.2%和98.9%。由LOH分析的实验结果显示,诱导突变体的LOH在LC与SC之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论功能性等位基因缺失是HAN诱导tk基因分子突变的重要形式之一,在不同集落类型之间可能具有不同的突变机制。     

3%苦参碱水剂致突变作用研究

目的 :检测3%苦参碱水剂的致突变作用。方法 :应用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验),小鼠骨髓多染红细胞微核试验,哺乳动物细胞基因(TK位点)突变试验,哺乳动物细胞染色体畸变试验进行3%苦参碱水剂的致突变作用研究。结果 :Ames试验中,3%苦参碱水剂各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照组回变菌落数的2倍;与相应对照组比较,各剂量组3%苦参碱水剂小鼠骨髓多染红细胞微核率未明显增加,未见哺乳动物细胞基因(TK位点)的致突变效应及对哺乳动物细胞染色体畸变作用,差异均无显著性。结论 :在本实验条件下,3%苦参碱水剂未见明显致突变作用。     

藤黄酸诱导Burkitt淋巴瘤细胞株凋亡及增殖抑制的分子学机制

[目的]研究藤黄酸对Burkitt淋巴瘤细胞株Namalva细胞增殖与凋亡的影响及其分子学机制,探讨藤黄酸治疗Burkitt淋巴瘤的潜在应用价值.[方法]用不同剂量藤黄酸处理细胞,采用MTS法对淋巴瘤细胞进行细胞活力及增殖抑制测定;0.25、0.5、0.75μmol/L藤黄酸分别处理细胞24 h,0.75μmol/L藤黄酸分别处理细胞6、12、24h后收集细胞,采用Annexin V-FTIC/PI流式细胞术检测藤黄酸剂量依赖性细胞凋亡情况;利用Western blot方法检测凋亡相关蛋白和细胞增殖信号通路相关蛋白剂量与时间依赖的变化情况.[结果]藤黄酸明显抑制Namalva细胞的增殖,诱导Namalva细胞发生凋亡.随藤黄酸浓度升高与作用时间延长,细胞中PARP,caspase 8出现切割,Bax表达上调,Pro-caspase 3,Pro-caspase 9,Bcl-2表达下调.增殖通路蛋白STAT5、p-STAT5、ERK、p-ERK的表达受到明显抑制.[结论]藤黄酸通过影响Burkitt淋巴瘤细胞株Namalva细胞凋亡相关蛋白的表达,促进细胞凋亡;通过抑制JAKs/STATs、MEK/ERK信号转导通路的活化,抑制Burkitt淋巴瘤细胞的增殖.     

大黄酸对糖尿病大鼠肾脏系膜细胞炎症因子的调控

目的观察大黄酸(Rheic acid)对高糖(30mmol/L)诱导的大鼠肾脏系膜细胞(MsC)转化生长因子β1(TGF-β1)及单核细胞趋化因子(MCP-1)表达的影响,探讨其肾脏保护的可能机制。方法大黄酸作用于高糖诱导的MsC,运用MTS检测细胞存活率,ELISA法测定细胞上清TGF-β1、MCP-1含量,RT-PCR法检测MCP-1、TGF-β1 m RNA表达量。结果与模型组(高糖30mmol/L)比较,大黄酸(62.5、125、250μg/mL)干预组Ms C细胞存活率明显上升(59%、75%、84%比53%,P0.05)。高糖(30mmol/L)作用于Ms C细胞后,TGF-β1、MCP-1表达被激活,与正常组比较,差异有统计学意义(P0.05)。大黄酸(62.5、125、250μg/mL)干预后,TGF-β1及MCP-1活性均被抑制,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论大黄酸可以通过调控MCP-1和TGF-β1表达,从而减少高糖诱导的MsC炎症反应。     

芍药苷对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞PCNA及Caspase-3表达的影响

目的探讨芍药苷对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法MTT法测定细胞存活率,细胞免疫化学技术检测细胞细胞核增殖抗原(PCNA)、Caspase-3的表达。结果 0.87mmol/L H2O2可使细胞存活率降低,PCNA的表达减少,Caspase-3的表达增加。经过39μg/mL和62.5μg/mL浓度的芍药苷处理后,H2O2诱导的SH-SY5Y细胞存活率明显升高,PCNA的表达明显增加,同时抑制Caspase-3的表达。结论芍药苷可抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与其增加细胞PCNA的表达,减少Caspase-3的表达有关。     

破壁灵芝孢子粉对小鼠T细胞淋巴瘤细胞抑制作用

目的 研究灵芝孢子粉在体内、外对小鼠T细胞淋巴瘤细胞生长的抑制作用.方法 运用噻唑蓝（MTT）法研究灵芝孢子粉在体外对EL-4细胞的抑制作用;建立MNU诱导小鼠胸腺T细胞淋巴瘤的裸鼠移植瘤模型,利用裸鼠移植瘤研究灵芝孢子粉对胸腺T细胞淋巴瘤细胞的抑制作用,HE染色观察淋巴瘤组织结构的改变.结果 灵芝孢子粉对EL-4细胞的IC50值随作用时间增加而减小,72 h达到最低,为4.76 g/L.体内抑瘤试验显示,灵芝孢子粉剂量为4 g/kg时,抑制率为45.8％,镜下观察,灵芝孢子粉高剂量治疗组肿瘤坏死区域较大,核碎屑、细胞固缩较多.结论 高浓度及高剂量的灵芝孢子粉具有抑制肿瘤细胞生长的作用.     

EGCG活化线粒体途径诱导人胃癌细胞凋亡

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)通过活化线粒体途径诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的作用机制.方法 MTT法检测EGCG对BGC823细胞生长的影响;PI染色流式细胞术(FCM)分析测定细胞凋亡率;细胞线粒体跨膜电位(△(Ψ)m)用荧光染料罗丹明123染色FCM分析测定;Westem blot检测线粒体凋亡信号传导通路相关蛋白的表达.结果 EGCG对BGC823细胞生长有显著抑制作用,呈时间和剂量依赖性.EGCG以剂量依赖方式诱导BGC823细胞凋亡.EGCG(20μg/mL、40 μg/mL、80μg/mL)作用48 h后,BGC823细胞中△(Ψ)m降低,细胞色素c(Cyt c)释放增加,caspase-9蛋白表达增加,呈剂量依赖性.结论 EGCG通过活化线粒体信号传导途径诱导BGC823细胞凋亡.     

Rho在二氧化硅诱导的人支气管上皮细胞α平滑肌肌动蛋白表达中的作用（英文）

目的：探讨Rho在二氧化硅（SiO2）诱导人支气管上皮细胞（HBECs）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达中的作用。方法：以SiO2处理的HBE细胞为研究对象,免疫细胞化学及Western印迹检测α-SMA表达;GST pull down分析Rho的活化情况;干预实验中用Rho抑制剂Y27632处理细胞后,West-ern印迹检测SiO2对α-SMA表达的影响。结果：SiO2（0,50,100,200,300μg/mL）分别作用HBECs细胞72h后,α-SMA表达增强,其中以200μg/mL SiO2组α-SMA表达最强,为对照组的（5.09±1.98）倍（P〈0.01）;用200μg/mL SiO2分别作用HBECs细胞1,2,6,12,24h后,Rho明显活化（P〈0.01）;Rho抑制剂Y27632明显抑制了SiO2诱导的α-SMA表达,20和30μmol/L的Y27632抑制率分别为68%和75%（P〈0.01）。结论：Rho参与介导SiO2诱导的HBECs中α-SMA的表达。     

黄芪甲甙干预小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的研究

目的:观察黄芪甲甙(AST)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的影响。方法:从Balb/c小鼠股骨骨髓中提取BMSCs并鉴定,加入阿霉素(ADR)(10μg/L)诱导BMSCs凋亡,同时加入不同剂量的MR与BMSCs共培养24h,实验共分6组,即空白对照组,ADR组、ADR+AST(4μg/L、40μg/L、400μg/L)组、MR400μg/L组。采用TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡的情况。结果:TUNEL和流式结果表明黄芪甲甙有抑制BMSCs凋亡的作用,40μg/L组作用较强,与ADR组比较差异有显著性,增加浓度抑制凋亡的作用增加不明显,ADR+AST(40μg/L、400μg/L)两组,细胞凋亡率差异无显著性。结论:黄芪甲甙具有抑制阿霉素诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的作用,无剂量依赖性。     

人参益智片对神经细胞的保护和修复机制

目的 研究人参益智片(RYT)对神经细胞保护和修复的机理,开发人参益智片为辅助改善记忆的保健食品提供依据.方法 采用MTT法测定Aβ25-35、冈田酸、过氧化氢致细胞损伤的IC50,并观察人参益智片对SH-SY5Y细胞的保护修复.结果 人参益智片与SH-SY5Y细胞共同孵育24 h情况下,在11.72~187.5μg/mL浓度范围内具有促进增殖作用;细胞存活率与冈田酸浓度相关,冈田酸浓度增大,细胞存活率降低,并通过拟合曲线计算IC50为80 nmol/L;人参益智片在一定浓度范围内对SH-SY5Y有保护作用,浓度超过187.5μg/mL时则诱导细胞凋亡,出现细胞毒样作用.结论 人参益智片对SH-SY5Y的正常细胞有保护作用,对由OKA损伤的SH-SY5Y细胞有修复作用.     

氟铃脲致突变性测定

目的:测定氟铃脲的致突变性,预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性.方法:分别采用Ames试验(剂量分别为31.25 μg/板、62.50μg/板、125.00μg/板、250.00μg/板和500.00μg/板)、小鼠骨髓细胞染色体畸变试验(剂量分别为50 mg/kg、250 mg/kg、500 mg/kg和1 000mg/kg)、小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验(剂量分别为1 250 mg/kg、2 500 mg/kg和5 000 mg/kg)测定氟铃脲的致突变性.结果:氟铃脲各剂量组Ames试验结果均为阴性.氟铃脲各剂量组的小鼠骨髓细胞染色体畸变率与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).氟铃脲各剂量组的小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变细胞率、常染色体单价体发生率和性染色体单价体发生率与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:在本试验条件下,未观察到氟铃脲的致突变性.     

莱菔硫烷抑制LPS诱导的小鼠星形胶质细胞增殖

目的 探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞(astrocyte,AST)增殖的影响及其机制.方法 体外培养小鼠原代星形胶质细胞,给予0.1 μg/mL LPS刺激星形胶质细胞活化增殖;同时分别给予不同浓度的莱菔硫烷(10、15、20 μmol/L)处理星形胶质细胞24 h后,CCK8法检测细胞增殖情况;选取20 μmoL/L作为干预剂量行GFAP、Ki67双标免疫荧光染色及流式细胞仪细胞周期检测,进一步验证莱菔硫烷对LPS诱导星形胶质增殖的作用;Western blot检测细胞周期相关蛋白P27kip1、CyclinD1、PCNA的表达情况.结果 CCK8法检测显示0.1μg/mL LPS能显著促进星形胶质细胞增殖(P＜0.01),而加入20μmol/L莱菔硫烷能显著抑制LPS诱导的星形胶质细胞增殖(P＜0.01),并能减少LPS刺激下的Ki67阳性细胞(P＜0.05);细胞周期分析提示20 μmol/L莱菔硫烷可减少LPS诱导下的星形胶质细胞S期比例,增加G1期细胞比例(P＜0.05);Western blot提示20 μmol/L莱菔硫烷能下调LPS刺激下PCNA、CyclinD1的表达,上调P27kip1表达(P＜0.05).结论 莱菔硫烷可以通过调控星形胶质细胞细胞周期,抑制体外LPS诱导的星形胶质细胞增殖.     

苯并(a)芘、预热及其联合作用对人胚肺细胞HSP70合成的影响

用Western blot方法探讨苯并(a)芘、预热及其联合作用对人胚肺(HEL)二倍体细胞热应激蛋白70(HSP70)合成的影响.结果表明未经S9活化的HEL细胞,在不同剂量的BaP处理后,可轻度诱导HSP70的表达;经S9活化的BaP作用HEL细胞3 h,HSP70表达抑制,呈剂量-反应关系在较高浓度染毒时抑制作用表现明显(P＜0.05);预热应激的HEL细胞HSP70表达增加,但BaP染毒3 h后HSP70表达并不规律,具体表现为低剂量(10～50)μmol/L诱导,而高剂量(50～200)μmol/L呈抑制趋势.结果提示,体外未经代谢活化的BaP可以作为应激原诱导热休克反应;HSP70表达降低可能是BaP代谢活化产物作用的结果,预热诱导HSP70表达增加很可能掩盖了低浓度时BaP对HSP70合成的抑制作用.     

藏药结血蒿水提物的免疫抑制作用研究

目的研究结血蒿水提取物（AV-ext）对小鼠免疫反应的抑制作用。方法运用淋巴细胞增殖反应、混合淋巴细胞反应观察AV-ext体外应用和口服给药对小鼠脾细胞增殖的影响;运用小鼠脾细胞增殖试验,观察AV-ext体外应用对小鼠活化脾细胞分泌IL-2的影响;用明胶酶谱法和粘附分析法,观察AV-ext对小鼠活化T淋巴细胞移动和粘附能力的影响。结果AV-ext在1μg／mL-100μg／mL剂量范围内对脾细胞无明显的细胞毒性,但对刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠脾细胞增殖反应、混合淋巴细胞反应具有明显的抑制作用,对小鼠活化脾细胞分泌IL-2、小鼠活化T淋巴细胞分泌基质金属蛋白酶9（MMP-9）及粘附能力有显著的抑制作用;连续7d每日口服给予150mg／kg和300mg／kg的AV-ext,能明显抑制小鼠脾细胞增殖及活化脾细胞分泌MMP-9。结论AV-ext能显著抑制小鼠的细胞免疫反应。     

牛膝总皂苷对IL-1β诱导髓核细胞的凋亡及炎性损伤的影响

目的 通过观察髓核细胞（nucleus pulposus cell, NPC）的凋亡、炎症及细胞外基质（extracellular matrix, ECM）代谢研究不同浓度牛膝总皂苷（achyranthes bidentata saponin, ABS）对白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)诱导人源NPC损伤的保护作用。方法 通过IL-1β诱导建立NPC退变模型,随机将细胞分为正常组、模型组（10 ng/mL IL-1β）、ABS低剂量组（10 ng/mL IL-1β+3μg/mL ABS）、ABS中剂量组（10 ng/mL IL-1β+10μg/mL ABS）及ABS高剂量组（10 ng/mL IL-1β+30μg/mL ABS）,干预24 h。CCK-8法检测细胞活力,采用Tunel法和流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（B-cell lymphoma-2-associated X protein, Bax）、天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3...     

大黄酸对过氧化氢致心肌细胞线粒体损伤的保护作用机制

目的 探讨大黄酸是否通过调节线粒体功能保护过氧化氢(H₂O₂)诱导的心肌细胞损伤。方法 应用H₂O₂建立心肌细胞损伤模型,实验分为3组：对照组(不用H₂O₂处理)、H₂O₂组(以H₂O₂诱导心肌细胞H9c2损伤)、大黄酸组(H₂O₂刺激心肌细胞H9c2造模,1μg/mL大黄酸干预)。采用噻唑蓝法检测细胞活力,电镜检测线粒体超微结构,JC-1检测线粒体膜电位,Western blot检测蛋白p-Drp1、Drp1、OPA1、Bax、Bcl-2及Caspase 3表达水平。结果 与对照组相比,H₂O₂组能明显抑制细胞活力(P<0.05),大黄酸组中3个浓度均能显著增加细胞活力,大黄酸浓度为1μg/mL细胞活力最显著(P<0.01)。对照组线粒体轮廓完整,棱嵴清晰;H_...     

大黄的生化学研究ⅩⅩⅪ.波叶大黄多糖对免疫功能的促进作用

从波叶大黄中提取、分离得到波叶大黄多糖(Rheum hotaoense polysaccharide, RHP),ig RHP 100和200 mg/kg能明显增加小鼠脾脏和胸腺重量,与对照组相比,脾指数分别增加30%和38%,200 mg/kg的剂量使胸腺指数增加25%;能促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,吞噬百分数分别比对照组增加38%和61%。200 mg/kg的剂量可使吞噬指数增加155%;能促进小鼠碳粒廓清速率,K值分别比对照组增加48%和217%;能促进SRBC致敏小鼠血清溶血素形成,HC_(50)分别比对照组增加11%和57%;能促进小鼠抗体形成细胞的生成,QHS分别比对照组增加63%和126%。RHP还可明显促进受ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞DNA的合成,最适浓度为20μg/ml,刺激指数为1.61;对ConA活化的脾淋巴细胞蛋白质合成也有明显促进作用,刺激指数为1.56;对ConA诱导的淋巴细胞IL-2产生有明显增强作用。     

大黄酸通过非活性氧依赖性内质网应激通路诱导L-02细胞凋亡

研究大黄酸对人正常肝细胞L-02的凋亡作用及探讨其机制。应用MTT法评价大黄酸对L-02细胞的活性抑制作用;流式细胞术检测大黄酸诱导L-02细胞的凋亡;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot技术检测细胞内质网应激相关基因和蛋白的表达变化;并探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对内质网应激蛋白及caspase-4、caspase-3的影响。实验结果显示:大黄酸能够呈剂量和时间依赖性抑制L-02细胞活性,增加L-02细胞凋亡率;诱导细胞ROS水平增高,NAC预给药可显著降低其水平;大黄酸能显著上调L-02细胞内的葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)、活化转录因子4(ATF-4)和C/EBP同源蛋白(CHOP)基因的mRNA水平;显著增加GRP 78,磷酸化c-jun 氨基末端激酶(p-JNK),CHOP蛋白表达;NAC不能抑制大黄酸诱导的GRP 78,p-JNK,CHOP蛋白表达上调,亦不能抑制大黄酸诱导的caspase-4及caspase-3活性增加。表明大黄酸能够诱导L-02细胞凋亡,其作用机制与非活性氧依赖性的内质网应激通路有关。