穿琥宁注射液对大鼠CYP1A2亚型的影响

目的 通过体内、体外试验,观察穿琥宁注射液对大鼠CYP1A2亚型的影响.方法 大鼠尾静脉注射给予不同浓度的穿琥宁注射液(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg)或生理盐水,连续给药7d,第8d给予探针药物咖啡因灌胃,6h后断头取全血,用HPLC法测定空白对照组和各试验组全血中咖啡因的代谢率,利用Western blot技术测定穿琥宁注射液对大鼠CYP1A2亚型蛋白表达的影响;在肝微粒体温孵体系中,加入探针药物非那西丁,通过HPLC法测定大鼠肝微粒体中非那西丁的代谢物对乙酰氨基酚的生成速率的影响.结果 穿琥宁注射液低、中、高剂量组的咖啡因代谢率分别为(72.82±17.90)%、(81.31±19.21)%和(77.11±14.71)%,空白对照组代谢率为(67.12±15.13)%,各试验组与空白对照组的咖啡因代谢率无显著性差异(P>0.05),CYP1A2蛋白表达无显著性差异.肝微粒体温孵试验低、中、高3个剂量组和空白对照组的对乙酰氨基酚生成速率分别为(0.53±0.18) pmol/(min·gp)、(0.50±0.14) pmol/(min·gp)、(0.35±0.14)pmol/(min·gp)和(0.49±0.16) pmol/(min·gp),各试验组与空白对照组比较对乙酰氨基酚的生成速率均无显著性差异(P>0.05).结论 体内、体外试验结果均表明穿琥宁注射液对大鼠CYP1A2亚型无诱导或抑制作用.     

应用大鼠肝微粒体筛选对细胞色素P4502D6有抑制作用的中药

目的从17种中药(单体、提取物和注射液)中快速筛选出对细胞色素P4502D6(CYP2D6)亚型有抑制作用的中药,建立高通量筛选对CYP2D6有抑制作用中药的技术平台。方法取大鼠空白肝微粒体,分别加入17种中药,HPLC法测定大鼠肝微粒体中CYP2D6的探针药物右美沙芬(DM)的代谢率,通过代谢率降低的现象初步筛选出能抑制肝微粒体中CYP2D6代谢的药物。结果槲皮素、黄芩苷、厚朴提取物、清开灵注射液、盐酸川芎嗪注射液可明显降低DM的代谢率(P<0.01)。结论初步筛选出槲皮素、黄芩苷、厚朴提取物、清开灵注射液、盐酸川芎嗪注射液这5种中药可抑制肝微粒体CYP2D6酶活性。此方法可作为高通量筛选对CYP2D6活性有抑制作用中药的技术平台。     

盐酸雷诺嗪在大鼠肝微粒体内代谢的性别差异

目的:用大鼠肝微粒体研究盐酸雷诺嗪代谢的性别差异及选择性CYP抑制剂对其代谢的影响。方法:盐酸雷诺嗪分别与雌性或雄性大鼠的肝微粒体温孵,抑制试验是在微粒体中先加入选择性抑制剂温孵30 min后,再加入盐酸雷诺嗪温孵。温孵后的样品中加入内标咖啡因,碱化后乙醚提取,取上清液水浴挥干,流动相溶解后采用梯度洗脱进行HPLC测定。结果:盐酸雷诺嗪在大鼠肝微粒体内被迅速代谢为6个Ⅰ相代谢产物,雄性大鼠微粒体酶的代谢能力强于雌性大鼠。CYP3A特异性抑制剂酮康唑(Ket)、CYP1A2特异性抑制剂α-萘磺酮(-αNaph)和CYP2D2特异性抑制剂奎尼丁(Qui)可以明显地抑制肝微粒体中盐酸雷诺嗪的代谢,其中Ket的抑制能力最强;而二乙二硫氨基甲酸酯(DDC)和磺胺苯吡唑(Sul)对盐酸雷诺嗪的代谢无明显影响。结论:研究提示盐酸雷诺嗪在雌雄大鼠肝微粒体内的代谢有极其显著性差异,其主要原因是CYP3A酶在大鼠肝微粒体中具有性别差异性。     

银杏叶提取物对大鼠肝微粒体细胞色素P4502D6活性的影响

目的：观察银杏叶提取物（GBE）对大鼠肝细胞色素P450酶系统中CYP2D6活性的影响。方法：HPLC法测定大鼠尿液和肝微粒体中探针药物右美沙芬的含量。对照组和实验组大鼠分别经口给予生理盐水和银杏叶提取物两周,差速离心分离肝微粒体,HPLC法测定大鼠尿液和肝微粒体中CYP2D6探针药物的代谢率。观察银杏叶提取物对CYP2D6活性的影响。结果：实验组大鼠给予银杏叶提取物（100mg/kg）,其尿样中右美沙芬的代谢率与对照组相比没有明显差别（P〉0.05）;实验组大鼠肝微粒体中加入右美沙芬（0.324mmol/L）,其右美沙芬的代谢率与对照组相比没有明显差别（P〉0.05）;银杏叶提取物没有明显降低右美沙芬的代谢率（P〉0.05）。结论：银杏叶提取物对CYP2D6酶无明显影响。     

白花蛇舌草水提取物对大鼠细胞色素P450 1A2 亚型的影响

目的 观察白花蛇舌草水提取物对大鼠细胞色素P450 IA2亚型(CYP IA2)的影响.方法 实验组(高、中、低剂量组)大鼠分别给予白花蛇舌草水提取物5.84g/kg、8.26g/kg、11.68/kg,对照组给予生理盐水,用蛋白印迹方法测定大鼠CYP 1A2的蛋白表达.通过高效液相色谱(FmLC)法测定全血中咖啡因的代谢率,研究白花蛇舌草水提取物对大鼠肝脏CYP 1A2的影响;用HPLC法测定非那西丁的代谢率,确定白花蛇舌草水提取物对大鼠肝微粒体CYP 1A2活性的影响.结果 蛋白印迹分析结果表明,白花蛇舌草水提取物对CYP 1A2蛋白表达没有影响.给予高、中、低剂量白花蛇草水提物的大鼠咖啡因代谢率分别为(33.62±5.08)%、(32.19±4.87)%、(31.05±4.93)%;对照组大鼠咖啡因代谢率为(so.73±5.40)%,实验组间及与对照组比较均无显著性差异(P>O.0S).肝微粒体体外温孵实验中,实验各剂量组和对照组非那西丁代谢率分别为(3.76±O.83)%、(3.61 4-0.79)%、(3.844-0.86)%、(3.81±0.82)%,实验组间及与对照组比较均无显著性差异(P>0.05).结论 体内、体外实验结果均表明,白花蛇舌草水提取物对大鼠肝脏CYP 1A2没有抑制作用.     

菟丝子水煎液对大鼠肝微粒体细胞色素P450亚型酶活性的影响

目的 观察菟丝子对大鼠肝细胞色素P450酶系统中CYP1A2,2D6以及3A4 3种亚型活性的影响.方法 对照组和实验组大鼠分别经口给予生理盐水和菟丝子水煎液2周,差速离心分离肝微粒体,HPLC法分别测定大鼠肝微粒体中CYP1A2,2D6以及3A4探针药物的代谢率;通过Western blot测定大鼠肝微粒体中CYP1A2,2D6以及3A4蛋白的相对含量.结果 ①实验组探针药物非那西丁代谢率高于对照组(P＜0.05),Western blot分析显示实验组CYP1A2蛋白表达略高于对照组;②实验组探针药物右美沙芬的代谢率明显高于对照组(P＜0.05),CYP2D6蛋白表达亦明显高手对照组;③两组间探针药物咪哒唑仑代谢率及CYP3A4蛋白表达无明显差异.结论 中药菟丝子水煎液可诱导大鼠肝微粒体中的CYP2D6和CYP1A2,而对CYP3A4无影响.     

慈菇对异烟肼和利福平致大鼠肝损伤中细胞色素P450的影响

目的探讨慈菇对异烟肼(INH)和利福平(RFP)合用致大鼠肝损伤过程中细胞色素P450(CYP450)的影响。方法选取雄性Wistar大鼠,随机分成5组:正常对照组,模型组,慈菇低、中、高剂量组,每组8只。除正常对照组外其余4组每天同时灌胃INH(50 mg/kg)和RFP(50 mg/kg),2h后5组大鼠分别灌胃蒸馏水,低剂量(5 g/kg)、中剂量(10 g/kg)和高剂量(15 g/kg)慈菇,每次灌胃20 mL/kg,每天1次,连续灌胃28 d,计算体重增加率,末次灌胃16 h后,取大鼠血和肝组织,测定血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)含量、肝匀浆中一氧化氮(NO)的含量,肝微粒中CYP450及其亚型2E1(CYP2E1)的活性。结果与模型组比较,高剂量慈菇组大鼠的体重明显增加,血清ALT和AST的活性明显降低,肝匀浆中的NO含量明显降低,CYP450和CYP2E1活性明显降低,并均有统计学差异。结论慈菇对INH和RFP合用致大鼠肝损伤的保护作用可能与抑制CYP450和CYP2E1活性及调节NO水平有关。     

LC-MS/MS法研究苯环喹溴铵对大鼠肝微粒体CYP450酶的抑制作用

建立同时测定大鼠肝微粒体中7种特异性底物对应代谢产物（对乙酰氨基酚、4″-羟基美芬妥英、右啡烷、4-羟基甲苯磺丁脲、6-羟基氯唑沙宗、1-羟基咪达唑仑和6β-羟基睾酮）的LC-MS/MS法,并应用探针底物法研究苯环喹溴铵对大鼠肝微粒体CYP450酶的抑制作用。将CYP450酶6种亚型的7种特异性探针底物非那西丁（CYP1A2）、S-美芬妥英（CYP2C11）、右美沙芬（CYP2D1/2）、甲苯磺丁脲（CYP2C6）、氯唑沙宗（CYP2E1）、咪达唑仑（CYP3A1/2）和睾酮（CYP3A1/2）分别与大鼠肝微粒体及系列浓度的苯环喹溴铵溶液进行温孵反应,合并处理后的微粒体溶液,采用LC-MS/MS法同时测定对应底物代谢产物的含量,计算相应的IC₅₀,评价是否有抑制作用。并应用已知抑制剂对所建立的探针底物法进行验证。在大鼠肝微粒体温孵体系中,苯环喹溴铵对CYP1A2,CYP2C11,CYP2C6,CYP2E1和CYP3A1/2的IC₅₀均大于100 μmol/L,对CYP2D1/2的IC₅₀为（2.16±0.22）μmol/L。结果表明,苯环喹溴铵对CYP2D1/2可能有抑制作用,对CYP450酶的其他亚型无抑制作用。     

冬虫夏草浸出液合用硫唑嘌呤对大鼠肝移植后免疫调节的影响

目的 观察冬虫夏草浸出液合用硫唑嘌呤对大鼠减体积1/2肝脏移植后免疫调节功能的影响.方法 80只大鼠,随机分为空白对照组、模型组、硫唑嘌呤组、冬虫夏草组,采用改良双袖套法进行1/2大鼠同种异体减体积原位肝脏移植,术后硫唑嘌呤组用硫唑嘌呤稀释溶液灌胃1.0 mg/(kg·d)、冬虫夏草组用6％冬虫夏草浸出液(10 mL/kg)加硫唑嘌呤1.0 mg/(kg·d)灌胃.于治疗21 d后,测定肝微粒体细胞色素P450亚型酶(CYPIA2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4)活性,血清总蛋白、白蛋白、血红蛋白,静脉血红细胞、白细胞、T淋巴细胞、单核细胞数量,受体大鼠感染率.结果 冬虫夏草浸出液明显抑制存活受体大鼠P450亚型酶CYPIA2(0.68±0.09)、CYP3A4酶的活性(4.92±0.27),降低静脉血红细胞(6.71±0.87)、白细胞数量(10.36±0.09),提高血清总蛋白(19.39±4.93)、白蛋白(14.27±4.45)及血红蛋白含量(19.39±4.973),明显降低受体大鼠感染率40.87％.与硫唑嘌呤组比较,P＜0.05.对T淋巴细胞及单核细胞数量无明显影响,与硫唑嘌呤组比较,P＞0.05.结论 冬虫夏草浸出液在不影响硫唑嘌呤抑制肝移植排斥反应的同时,改善肝脏移植后低蛋白血症,提高体液免疫,对细胞免疫功能无明显影响,具有双向免疫调节作用.     

西咪替丁对非酒精性脂肪性肝炎大鼠细胞色素P450的抑制作用

目的：研究西咪替丁对大鼠肝微粒体细胞色素P450（CYP450）表达的影响。方法：应用高脂饲料诱导的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠模型，给予3种不同剂量的两咪替丁灌胃，紫外分光光度计测量CYP450及同工酶CYP2E1含量，放免法测定血清透明质酸（HA）含量，生化分析仪测定转氨酶等指标，观察肝组织学特点。结果：与NASH组比较，高、中剂量西咪替丁组大鼠的CYP450及同工酶CYP2E1含量均下降，谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）、HA水平也下降，低剂量西咪替丁组各指标略有降低，但差异无显著性。结论：西咪替丁能抑制NASH大鼠肝微粒体CYP450、CYP2E1表达，降低血清中HA含量，改善肝功能，减轻肝损害。     

甘草和五味子对大鼠丙咪嗪药代动力学的影响

以丙咪嗪为探针药物,采用体内代谢的方法研究甘草和五味子对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)的影响。将大鼠随机分为甘草、五味子、生理盐水(空白对照)、苯巴比妥(阳性对照)组,测定各组CYP450的质量摩尔浓度。并于末次给药次日,进行大鼠右侧颈静脉插管手术。手术后第2天静脉给予丙咪嗪,定点取血,HPLC法测定丙咪嗪体内代谢变化。结果:各中草药组CYP450的水平均被显著诱导,丙咪嗪的体内代谢发生了明显改变。研究显示甘草和五味子对大鼠CYP450有诱导作用,且与剂量及诱导时间有关;被诱导的大鼠丙咪嗪的体内代谢加快,甘草和五味子与丙咪嗪合用时药代动力学发生改变。     

“Cocktail”体外探针法评价补骨脂素对人肝微粒体P450酶亚型活性的影响

[目的]利用Cocktail体外探针法,测定补骨脂有效成分补骨脂素对人肝微粒体多种P450酶亚型活性的影响,为补骨脂临床联合用药安全提供参考。[方法]建立液质联用方法,同时测定人肝微粒体P450酶中各探针代谢产物6α-OH紫杉醇、α-OH咪达唑仑、4-OH甲苯磺丁脲、去甲基右美沙芬、7-OH香豆素、对乙酰氨基酚和6-OH氯唑沙宗的含量。通过Cocktail体外探针实验中补骨脂素对人肝微粒体P450酶各亚型的影响,证明补骨脂对人体肝脏的代谢有影响作用。[结果]所建立的液质联用方法精密可靠,符合生物样品测定要求,可用于人肝微粒体中各P450酶探针的代谢产物的定量分析。与对照组相比,补骨脂素组各底物的转化率均下降,其中香豆素的转化率下降最为显著,补骨脂素对其转化的抑制率为95.84%,而紫杉醇的转化的抑制最不明显,仅为10.39%。补骨脂素对其他几种底物的转化抑制率均在82%～91%之间。[结论]补骨脂素对人肝微粒体的CYP1A2、2A6、2C8、2C9、2D6、2E1和3A4亚型均有抑制,其中对CYP2A6、1A2和2D6 3种亚型的影响较为显著,表明补骨脂素对人肝微粒体P450酶不同亚型影响差异显著,长期给药补骨脂应关注药物联合用药安全。     

曲马多对大鼠CYP450及其肝功能的影响

目的 考察曲马多依赖性大鼠模型肝脏CYP450酶活力及肝功能指标的变化。 方法 将30只SD大鼠分为空白组、阳性对照组和实验组,每组10只,各组分别以生理盐水、80 mg/(kg·d)苯巴比妥和60 mg/(kg·d)曲马多灌胃给药,建立曲马多依赖性大鼠模型;采用Cocktail体外孵育法结合液质联用(LC-MS)技术测定大鼠肝脏中CYP1A2、CYP2B1、CYP2C11、CYP2D2、CYP2E1、CYP3A1各同工酶酶活性;RT-qPCR技术对上述同工酶的mRNA表达水平进行检测;血生化仪分析肝功指标。 结果 ①与空白组相比,阳性对照组CYP1A2、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP3A1酶活性分别为(190.15±33.58)、(98.02±36.00)、(1 348.79±40.76)、(3 214.66±133.51)、(292.76±33.32)μg/ml,显著高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);②与空白组相比,阳性对照组CYP1A2、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP3A1 mRNA表达显著上调,分别上调(89.88±14.22)%、(95.12±16.00)%、(351.25±32.33)%、(556.85±42.88)%、(52.56±11.12)%,差异有统计学意义,CYP2D2 mRNA无明显变化。实验组CYP1A2、CYP2B1、CYP2E1、CYP2D2 mRNA表达分别上调(75.12±21.45)%、(66.32±18.14)%、(81.35±23.55)%、(382.74±33.25)%,差异有统计学意义,CYP2C11、CYP3A1 mRNA表达无明显变化。③在肝脏生化指标水平上,与空白组相比,阳性对照组和实验组ALT、AST、LDH含量均明显上升,差异有统计学意义。 结论 曲马多滥用会诱导大鼠CYP1A2、CYP2B1、CYP2E1和CYP2D2酶活性升高和肝脏损伤。      

氟化钠对小鼠肝脏细胞色素P4501A1酶活性的影响

目的：研究高氟对细胞色素P4501A1酶活性的影响,为探讨高氟地区肿瘤的发生发展提供实验依据。方法：昆明种雄性小鼠120只,分3个实验组和1个对照组,每组30只;实验组分别饮用50 mg/L、200 mg/L、400 mg/L NaF水溶液,于2周、5周、8周后,分别用氟离子选择电极法和分光光度法测定小鼠骨氟含量与肝微粒体中CYP1A1酶的活性。结果：实验组与对照组相比CYP1A1酶活性受到诱导,诱导率为2.1%~121%,但各剂量组之间无显著性差异,8周与2周相比酶活性显著增强。结论：NaF可不同程度地诱导CYP1A1的酶活性,摄入过量氟对肿瘤的发生发展具有一定的影响。     

溴氰菊酯致大鼠慢性中毒的肝组织形态学观察

目的探讨溴氰菊酯对大鼠肝组织结构的慢性损伤作用。方法选取大鼠32只,随机分为空白对照组(Ⅰ组)、橄榄油对照组(Ⅱ组)、溴氰菊酯1.56 mg/kg组(Ⅲ组)、溴氰菊酯6.25 mg/kg组(Ⅳ组),每组8只。Ⅲ、Ⅳ组连续6个月经口灌胃染毒,Ⅱ组只给予相当剂量的橄榄油,观察大鼠染毒期间行为学变化,测定肝脏器系数,肝组织切片经苏木精-伊红染色和PAS染色,观察肝细胞形态学变化和肝细胞糖原含量的变化。结果染毒组大鼠出现流涎、大汗、立毛等中毒症状。苏木精-伊红染色显示Ⅲ、Ⅳ组肝细胞胞浆疏松,内可见脂滴,肝血窦淤血。染毒组大鼠肝细胞的糖原含量有不同程度降低,Ⅳ组与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组相比,Ⅲ组和Ⅰ组相比差异有统计学意义(F=9.015,q=3.675~10.058,P<0.05);但Ⅲ组与Ⅱ组比较,差异无统计学意义(q=0.672,P>0.05)。Ⅲ、Ⅳ组肝脏器系数与其他各组比较,差异均有统计学意义(F=10.737,q=3.945~9.968,P<0.05)。结论长期低剂量摄入溴氰菊酯可造成大鼠肝组织的慢性损伤,并具有剂量-效应关系。     

CYP450含量及CYP2C、GST活性在DAB诱导大鼠肝癌形成过程中的变化

目的：研究肝脏的细胞色素P450（CYP45）的含量,反映CYP2C活性的氨基比林－N－去甲基化酶（ANDM）及谷胱苷肽－S－转移酶（GST）的活性水平在诱导原发性肝癌过程中的变化。方法：用观察肝脏的CYP450的含量,二甲基氨基偶氮苯（DAB）作为诱导剂,喂养Wistar雄性大鼠,ANDM和GST的活性水平。结果：与对照组相比,诱癌组CYP450含量及GST,ANDM的活性在2周时无显性差异,CYP450含量及ANDM的活性在第12,30周时明显降低,GST在12周时明显增高,而在30周时与对照组无差别,在形成肝癌的大鼠肝脏中,肝组织中的CYP450含量水平依次是：癌组织＜癌旁组织＜正常组织。结论：DAB诱导的原发性大鼠肝癌形成过程中肝脏的CYP450的含量有下降的趋势,DAB不能诱导ANDN活性,但能诱导增强GST的活性水平。     

Cocktail探针药物评价姜黄对肝细胞色素P_(450)酶的影响

用Cocktail探针药物法 ,研究姜黄对大鼠肝细胞P4 50 (CYP4 50 )的影响。将SD雄性大鼠分组 ,给予姜黄的水提物 ,以生理盐水组为空白对照 ,以苯巴比妥组为阳性对照 ,通过HPLC检测Cocktail探针药物的代谢率来评价各组的CYP4 50 。结果 :给予姜黄组的大鼠CYP1A2和CYP2E1的水平显著低于对照组 ,CYP3A4的水平没有显著变化。表明 :姜黄对大鼠CYP1A2和CYP2E1有抑制作用 ,但对大鼠CYP3A4的影响不显著。     

姜黄和乙醇对染苯小鼠CYP2E1活性及血液学毒性的影响

目的 观察染苯小鼠CYP2E1活性改变及血液学毒性的影响,继之研究乙醇、姜黄对苯毒性的干预作用.方法 昆明种小鼠80只,每组20只,随机分为4组,A组为生理盐水对照组,B组为单纯染苯组(苯中毒模型),即皮下注射苯制剂2 ml/kg;C组为乙醇干预组,即在B组处理的基础上,自由饮用10%乙醇;D组为姜黄干预组,即在给苯前,腹腔注射姜黄提取液.结果 (1)B组与A组比较,外周血及骨髓红细胞微核率上升出现高峰,同时外周血白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)等指标明显低[(2.6±1.0)×109/L、(93±11)g/L、(593±81)×109/L],达到了苯中毒模型的标准.(2)C组与B组比较,外周血WBC、Hb、PLT等指标均低(均P<0.05);CYP2E1活性上升显著;骨髓嗜多染红细胞微核率高于B组,且差异有统计学意义[(8.8±1.8)‰比(6.5±1.0)‰,P<0.01].(3)D组与B组比较,外周血WBC、Hb、PLT数值均高(均P<0.01),但未达到正常水平;CYP2E1活性低于B组(P<0.01).结论 (1)对照比较CYP2E1活性改变后,染苯小鼠血液学毒性发生了变化;(2)乙醇诱导了CYP2E1活性,从而在体内增加了苯的血液学毒性;(3)姜黄在体内降低CYP2E1活性,一定程度上减轻了苯的血液学毒性.姜黄作为一种中药在防治苯中毒、抗炎、抗氧化、护肝及护胃等方面有着广泛的生物活性.