PCM和TAT双修饰脂质体的制备及心肌靶向性的初步评价

目的 研究心肌特异性靶向肽PCM和穿膜肽TAT双修饰的载荧光探针香豆素-6脂质体的制备工艺,并初步考察其心肌靶向性.方法 采用薄膜分散-超声法,以PCM和TAT为靶头,制备以大豆磷脂、胆固醇、DSPE-mPEG2000为载体材料的载香豆素-6的双修饰脂质体;优化香豆素-6用量、靶头连接方法及靶头用量,以形态、粒径分布、电位、包封率及体外稳定性对脂质体进行表征;考察心肌细胞H9C2对双修饰脂质体的摄取能力,表征其心肌靶向性.结果 PCM和TAT通过插入法连接,当PCM的用量为脂质的3％、TAT的用量为脂质的1％、香豆素-6的用量为20 μg时,所制得的双修饰脂质体的形态圆整,粒径分布为115.7 ±2.91 nm,Zeta电位为-13.1 ±1.81 mV,包封率为83.2％±3.1％,具有良好的体外稳定性,双修饰脂质体的心肌细胞摄取率明显高于未修饰和单修饰的脂质体.结论 双修饰脂质体的制备工艺简单,PCM和TAT双修饰可提高脂质体的心肌细胞靶向性.     

T7/A7R肽修饰的替莫唑胺脂质体制备与表征

摘要：目的:制备由T7、A7R肽双重修饰的替莫唑胺脂质体,并进行初步的体外表征。方法:分别将T7、A7R与DSPE-PEG2000-Mal反应生成DSPE-PEG2000-T7和DSPE-PEG2000-A7R,逆相蒸发法制备双肽修饰的脂质体（T7/A7R-LP）,并进行相应的体外表征。结果:制备的脂质体近球形,粒径均匀,平均粒径（96.6±6.5） nm, zeta电位为-（5.15±1.03） mV,包封率（36.38±3.95）%;在4～8℃条件下放置30 d,粒径和zeta电位无显著变化,体外6 h释药完毕;细胞摄取试验表明T7/A7R-LP具有较好的脑部靶向递送能力。结论:制备的T7/A7R肽修饰的脂质体理化特性良好,性质较为稳定,具有一定的脑部药物递送前景。     

葡萄糖受体靶向的钆喷酸葡胺长循环脂质体的肿瘤细胞靶向研究

目的：制备葡萄糖受体靶向的钆喷酸葡胺（GdDTPA）长循环脂质体，并研究其对高表达葡萄糖受体肿瘤细胞的靶向性。方法：合成新型含葡萄糖表面活性剂（N-棕榈酰葡萄糖胺），利用逆向蒸发法制备Gd—DTPA脂质体、PEG修饰Gd—DTPA脂质体、葡萄糖修饰Gd-DTPA脂质体以及葡萄糖PEG修饰GdDTPA脂质体。将4种脂质体分别与前列腺癌细胞一起培养，用MRI检测前列腺癌细胞摄取的Gd-DTPA浓度。结果：成功合成新型含葡萄糖表面活性荆（N棕榈酰葡萄糖胺），以及制备4种Gd-DTPA脂质体。前列腺癌细胞对4种脂质体都有摄取，每种脂质体MRI检测的SBTIW信号值分别为Gd-DTPA脂质体362、PEG修饰Gd-DTPA脂质体299、葡萄糖修饰GdDTPA脂质体397、葡萄糖PEG修饰GdDTPA脂质体377。结论：葡萄糖的修饰有利于脂质体对肿瘤细胞的靶向。     

可断裂聚乙二醇和穿膜肽共修饰脂质体肿瘤靶向作用初步研究

目的探讨可断裂药用聚乙二醇(PEG)和穿膜肽(TAT)共修饰脂质体用于肿瘤靶向的效果及机制。方法使用薄膜分散-超声法制备可断裂PEG和TAT共修饰脂质体,并观察其对体外培养肝癌细胞株和正常肝细胞株的穿膜效果、细胞靶向性及对细胞活性的影响。结果由质谱鉴定结果可见,合成的共修饰脂质体杂质较少,相对分子质量约为3 622.4,纯度约为96.1%,图像表现为主峰峰面积较高;白色光、荧光及重叠后,观察组均可见胞内红色细胞大量分布,且集中于胞质内;不同质量浓度的共修饰脂质体对SMMC-7721细胞生物学活性与对照组比较,无明显差异。结论可断裂PEG和TAT共修饰脂质体的稳定性较高,制备工艺便捷,具备良好的药物承载性和安全性,且存在良好的细胞内外传递潜能,肿瘤靶向性极佳,具有巨大的临床应用前景,值得进一步研究。     

RVG29修饰脂质体对脑胶质瘤靶向性的初步研究

目的 研究一种新型配体RVG29修饰脂质体后,对体外脑胶质瘤的靶向性.方法 采用有机相合成法制备DSPE-PEG2000-RVG29 PPP(D-RVG29)材料,按照薄膜分散法制备脂质体,通过C6细胞和Hela细胞的细胞摄取考察D-RVG29修饰脂质体后,对体外脑胶质瘤的靶向性.结果 在脂质体处方中加入DSPE-PEG2000-OME(D-OME)可使D-RVG29修饰脂质体具有更好的粒径和分布范围,C6细胞对D-RVG29修饰脂质体的摄取强于未修饰D-RVG29的脂质体,Hela细胞对两种脂质体的摄取强度无明显区别.结论 D-OME可以提高D-RVG29修饰脂质体的稳定性,D-RVG29修饰脂质体具有体外脑胶质瘤细胞的靶向性.     

RGD修饰载紫杉醇脂质体用于抗脑胶质瘤的体外研究

目的制备RGD修饰载紫杉醇脂质体并考察其体外抗脑胶质瘤治疗效果。方法采用薄膜分散法制备RGD修饰载紫杉醇脂质体（RGD—LP-PTX）,考察其理化性质。用鼠源性脑胶质瘤c6细胞考察肿瘤细胞对脂质体的摄取效率。MTT实验考察脂质体对肿瘤细胞的增殖抑制率。结果制备得到的RGD—LP粒径在120nm左右,PD,〈0.3。C6细胞对RGD．LP的摄取能力显著〉LP;RGD-LP-PTX对C6细胞的生长的抑制作用显著强于LP。结论经过RGD修饰后,脂质体具有良好的脑胶质瘤细胞靶向性,且能够显著增强栽药脂质体对脑胶质瘤细胞的增殖抑制作用。     

双配体修饰的阿霉素脂质体靶向于脑胶质瘤的体外研究

目的筛选和优化转铁蛋白、叶酸共同修饰的阿霉素脂质体的处方及制备工艺,以期得到具有良好的脑胶质瘤靶向治疗作用的给药系统。方法采用薄膜分散和硫酸铵梯度法制备阿霉素脂质体。将叶酸连接至二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000-NH2)得到DSPE-PEG2000-Folic,考察不同磷脂种类、药脂比、水化介质和载药时间,对脂质体粒径、包封率和稳定性的影响,确定脂质体的处方工艺。以大鼠的脑毛细血管内皮细胞(bEnd3)和星形胶质细胞组成体外血脑屏障(blood-brain barrier,BBB),并结合大鼠胶质瘤C6细胞,构建体外模拟胶质瘤靶向治疗的复合BBB模型。考察阿霉素脂质体在bEnd3细胞中的摄取机制和透过BBB的转运速率及对C6细胞的毒性。结果确定了DSPC作为主要磷脂组分,并以120 mmol.L 1的硫酸铵作为水化介质,药脂比为1∶1 5,载药时间选择60 min,成功制备了高包封率和稳定性的双配体脂质体。其在bEnd3细胞中摄取远大于普通脂质体(P<0.05),摄取过程受网格蛋白和小窝内陷介导的细胞内吞作用,并受转铁蛋白和叶酸的影响;同时其在BBB模型中的药物透过速率、及其进一步透过BBB后对下层C6细胞的毒性,均显著高于其他脂质体组。结论转铁蛋白和叶酸共同修饰的阿霉素脂质体具有较好的体外脑胶质瘤靶向治疗作用。     

双重修饰的主动靶向脂质体研究进展

主动靶向脂质体是靶向递药体系的一个重要角色。由于传统的单一基团修饰的主动靶向脂质体存在靶向效率不高、细胞摄取率不高等缺点,人们不断探索采用两种或多种不同识别分子或其他协同分子共同修饰脂质体。本文拟针对双重修饰脂质体技术的研究进展进行综述。通过对两种特异性配体或抗体共同修饰、特异性配体与细胞穿透肽共同修饰、两种细胞穿透肽共同修饰等不同类型的双重修饰脂质体的综述分析,我们发现双重修饰技术具有提高靶向准确性和靶向效率,提高药物摄取,提高对靶点的黏附能力和血流稳定性等优势,尤其在跨膜穿越屏障系统的应用中凸显作用。     

大豆糖苷修饰阳离子脂质体的体外肝细胞靶向性

目的研究肝靶向物质大豆糖苷(soybean-derived sterylglucoside,SG)的加入对阳离子脂质体肝细胞靶向性的影响。方法以荧光素钠(FS)为模型药物，采用HepG₂ 2.2.15细胞模型和SD雄性大鼠，检测SG，SG/Brij-35(卞泽-35)和SG/PEG-DSPE(polyethylene glycol-distearoylphosphatidylethanolamine)修饰的阳离子脂质体的物理化学性质，在细胞培养水平和离体肝脏水平考察阳离子脂质体的转染和肝细胞选择性。结果未修饰以及SG，SG/Brij-35和SG/PEG-DSPE修饰的FS阳离子脂质体在中性溶液中的包封率分别为91.74%，88.46%，89.70%和83.12%，粒径分别为124.4，113.7，110.8和93.0 nm，空白脂质体在溶液中表面电荷为正。细胞培养和肝脏灌流结果说明，阳离子脂质体的转染率显著高于中性脂质体，SG单独修饰后的阳离子脂质体的细胞转染率较未修饰有显著提高，SG/Brij-35修饰的阳离子脂质体则表现出肝实质细胞选择性。结论阳离子脂质体可以促进FS进入肝脏细胞，具有较高的肝细胞摄取率，而SG/Brij-35的修饰可以提高脂质体的肝细胞选择性。     

T7肽修饰共载多柔比星与miRNA脂质体的制备及其对结肠癌细胞的增殖抑制作用

目的 制备T7肽修饰共载多柔比星(DOX)与MIFsiRNA脂质体(T7-LPs-DOX/RNA),研究其对人源结肠癌细胞(RKO)的靶向抑制作用.方法 薄膜分散法制备脂质体,透射电镜观察其形态.流式细胞仪检测RKO细胞对不同脂质体的摄取效率和摄取机制.细胞克隆形成实验检测不同脂质体对RKO细胞存活率的影响.构建RKO细胞肿瘤球模型,观察T7-LPs-DOX/RNA对实体肿瘤球的穿透能力.结果 RKO细胞对T7-LPs的摄取效率显著强于普通脂质体,T7-LPs-DOX/RNA对RKO细胞增殖抑制作用强于其他脂质体(P＜0.05).经过T7肽修饰后,脂质体对肿瘤球的穿透能力显著增强.结论 T7-LPs-DOX/RNA是一种有效的结肠癌靶向给药系统.     

复方舒郁健脑脑靶向脂质体的制备及其在大鼠体内组织分布

目的：利用Angiopep修饰复方舒郁健脑脂质体,研究复方舒郁健脑脑靶向脂质体的制备方法并考察其在大鼠体内的组织分布,为复方舒郁健脑脑靶向脂质体治疗失眠等脑部疾病提供依据。方法：采用乙醇注入法制备复方舒郁健脑脂质体,将Angiopep通过马来酰化端基聚乙二醇（PEG—MAL）与复方脂质体连接,得到脑靶向脂质体;以脑内茯苓酸含量作为检测指标,研究脂质体的脑靶向性。结果：在所选工艺条件下,复方舒郁健脑脑靶向脂质体平均粒径约500nm;与普通脂质体相比,复方舒郁健脑脑靶向脂质体在主要靶器官脑部的药物浓度显著增高（P〈0．05）。结论：用多肽Angiopep修饰所得脑靶向脂质体可使药物透过血脑屏障（BBB）,其作为脑靶向药物递送载体具有良好的应用前景。     

葡萄糖修饰的不同PEG作为桥联脂质体的体外特性研究

目的 制备用葡萄糖修饰以不同聚合度的PEG作为桥联的脂质体,并考察其体外特性.方法 以香豆素6为荧光探针,用薄膜分散法制备葡萄糖修饰的以PFG400、PEG800、PEG2000作为桥联的载香豆素6脂质体,用激发光散射粒度测定仪测定其粒径;用凝胶柱层析法测定其包封率;在含10%胎牛血清的磷酸盐缓冲液（PBS）中考察其稳定性;以大鼠脑毛细血管内皮细胞（BCECs）为受试细胞,对载香豆素6的不同类型脂质体进行细胞摄取的定量分析.结果 葡萄糖修饰的以PEG400、PEG800、PEG2000作为桥联的脂质体的粒径分别为（81.5±6.3）、（100.0±5.0）、（104.9±8.7）nm,多分散系数（PDI）分别为（0.252±0.016）、（0.265±0.032）、（0.289±0.013）;其包封率均〉80%;在含10%胎牛血清的PBS中具有较好的稳定性;葡萄糖修饰的以PEG800、PEG2000作为桥联的脂质体在BCECs中的细胞摄取率均高于普通脂质体.结论 本研究成功制备了葡萄糖修饰的以PEG400、PEG800、PEG2000作为桥联的脂质体,研究初步显示以PEG800、PEG2000为桥联的脂质体有一定脑靶向潜力.     

基于胆固醇上不同连接方式修饰的穿膜肽脂质体的对比研究

目的对比研究胆固醇上以酯键、醚键的不同连接方式修饰穿膜肽TAT(源于Tat蛋白碱性结构域的短肽)脂质体的体内外特性。方法以Rho-PE为荧光标记物,制备在胆固醇上以酯键、醚键的不同连接方式修饰穿膜肽TAT的脂质体,用激发光散射粒度仪测定其粒径;在小鼠血清中考察两种衍生物材料72 h稳定性;以HUVEC、C6、C26细胞为受试细胞,对标记Rho-PE的两种脂质体进行细胞摄取的定量分析;以DID为荧光标记物,以荷瘤小鼠(C26)为受试动物,考察肿瘤部位定量摄取。结果以酯键、醚键不同连接方式的胆固醇上修饰/未修饰有穿膜肽TAT的脂质体的粒径分别为114.50±12.31、113.80±6.74、103.10±1.91、105.10±2.06 nm;多分散系数(PDI)分别为0.227±0.029、0.207±0.039、0.203±0.009、0.216±0.016;小鼠血清中以醚键连接的胆固醇衍生物材料具有良好的稳定性。胆固醇上以不同连接方式修饰的TAT脂质体中,以醚键连接方式制备的脂质体的体外细胞摄取以及体内肿瘤摄取均优于酯键连接方式制备的脂质体。结论醚键修饰的胆固醇衍生物材料所制备的连接TAT的脂质体相较于酯键连接者,有较好的体内外摄取效果。     

RGD修饰的多柔比星脂质体的制备及荷瘤动物活体成像研究

目的制备精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环状三肽(arginine-glycin-aspartic acid,RGD)序列修饰的多柔比星(doxorubicin,DOX)脂质体(RGD-DOX-LP),考察其粒径、zeta电位、包封率,并探究其肿瘤细胞摄取率及在荷瘤裸鼠中的靶向分布情况。方法采用薄膜分散法制备RGD-DOX-LP及多柔比星脂质体(DOX-LP)。荧光分光光度法研究SUP-M2细胞对RGD-DOX-LP,DOX-LP及DOX溶液的摄取效率。以Cyp790为染料,采用近红外小动物活体成像仪研究比较Cyp靶向脂质体(Cyp-RGDDOXLP)与Cyp常规脂质体(Cyp-DOX-LP)在荷瘤裸鼠体内的分布情况。结果 RGD-DOX-LP粒径为(117±1.8)nm,zeta电位为(-12.46±0.86)mv。细胞摄取实验结果显示,SUP-M2细胞对RGDDOXLP的摄取率是DOX-LP的2.8倍,差异有统计学意义(P<0.05)。在荷瘤裸鼠中,Cyp-RGDDOXLP组在肿瘤部位的荧光强度显著高于Cyp-DOX-LP组,荧光持续时间也显著延长。结论 RGD修饰载多柔比星的脂质体能够高效、靶向性地富集于肿瘤组织,是一种有效的抗肿瘤给药系统。     

复方舒郁健脑脑靶向脂质体的制备及其在大鼠体内组织分布

摘 要 目的: 利用Angiopep修饰复方舒郁健脑脂质体,研究复方舒郁健脑脑靶向脂质体的制备方法并考察其在大鼠体内的组织分布,为复方舒郁健脑脑靶向脂质体治疗失眠等脑部疾病提供依据。方法: 采用乙醇注入法制备复方舒郁健脑脂质体,将Angiopep通过马来酰化端基聚乙二醇(PEGMAL)与复方脂质体连接,得到脑靶向脂质体;以脑内茯苓酸含量作为检测指标,研究脂质体的脑靶向性。结果:在所选工艺条件下,复方舒郁健脑脑靶向脂质体平均粒径约500 nm;与普通脂质体相比,复方舒郁健脑脑靶向脂质体在主要靶器官脑部的药物浓度显著增高(P<0.05)。结论:用多肽Angiopep修饰所得脑靶向脂质体可使药物透过血脑屏障(BBB),其作为脑靶向药物递送载体具有良好的应用前景。     

肿瘤转移靶向肽修饰的阿霉素脂质体对高转移性乳腺癌细胞的靶向特异性研究

肿瘤转移日渐成为肿瘤治疗的重要靶标。本研究采用肿瘤转移靶向肽（TMT）与脂质材料（PEG-DSPE）偶联获得靶向化合物（TMT-PEG-DSPE）,用以构建靶向阿霉素脂质体（TMT-LS-DOX）。结果表明,TMT-LS-DOX呈现出良好的药剂学性质。选用高转移性乳腺癌细胞（MDA-MB-435S和MDA-MB-231）对该转移特异性递送系统进行评价,采用非转移性乳腺癌细胞（MCF-7）作为对照。游离TMT多肽浓度达100μg/mL时仍未显示出细胞毒性。与MCF-7相比,MDA-MB-435S及MDA-MB-231细胞对TMT-LS-DOX摄取增加,并经受体竞争性实验证明该促进作用由TMT介导。因此,TMT修饰的纳米载体可能成为增加化疗药物对高转移性乳腺癌特异性的一种新策略。     

表面修饰的LPC纳米粒介导的siRNA肿瘤靶向递送(英文)

本研究构建了能够靶向肿瘤的新型纳米粒(脂质体-鱼精蛋白-硫酸软骨素纳米粒,LPC-NP)。该纳米粒粒径约90 nm,zata电位约+35 mV。采用后插法对LPC纳米粒进行DSPE-PEG_(2000)或DSPE-PEG_(2000)-T7修饰。T7是与转铁蛋白功能类似的七肽,能够靶向转铁蛋白受体过度表达的乳腺癌细胞MCF-7。PEG修饰可显著降低血清对LPC纳米粒的聚集作用,T7修饰的纳米粒显著提高siRNA的细胞摄取和基因沉默效率。体外细胞毒实验表明抗EGFR siRNA显著抑制MCF-7细胞生长。实验结果表明经T7肽修饰的LPC纳米粒有望成为RNA干扰肿瘤治疗的递送载体。     

pH敏感多肽修饰载紫杉醇脂质体的制备及评价

目的制备p H敏感多肽修饰载紫杉醇脂质体(p HS-LP-PTX),并评价其体外性质。方法采用薄膜分散法制备PHS-LP-PTX,MTT实验考察脂质体对MCF-7细胞和Hep G2细胞的毒性,通过细胞摄取实验考察脂质体与肿瘤细胞的结合能力。结果所制备的p HS-LP-PTX在p H6.4时平均粒径为125.5±13.4 nm,Zeta电位为10.47±2.53 m V,24 h内具有良好的血清稳定性。MTT结果显示:p H6.4时,p HS-LP-PTX的细胞毒性优于各对照组。体外细胞摄取实验表明:p H6.4时,MCF-7细胞和Hep G2细胞对p HS-LP-PTX的摄取效率优于p H7.4时和普通脂质体。结论紫杉醇脂质体经过p H敏感多肽修饰后,能增强脂质体在酸性环境下的细胞穿透能力,是一种良好的p H敏感型肿瘤靶向给药系统。     

叶酸受体靶向两亲性嵌段共聚物修饰多烯紫杉醇脂质体的制备及体外性质考察

以合成的两亲性嵌段共聚物叶酸-聚乙二醇-聚胆固醇氰基丙烯酸脂(FA-PEG-PCHL)为靶向长循环膜修饰材料,采用有机溶剂注入法制备FA-PEG-PCHL修饰的多烯紫杉醇脂质体(FA-PDCT-L),利用星点设计-效应面优化法筛选最优处方,并通过FT-IR、1H NMR对合成产物进行结构确证;采用超滤法、透射电镜、粒径zeta电位测定仪以及荧光偏振法等考察FA-PDCT-L理化性质。结果显示,所制备FA-PDCT-L呈球形或类球形,粒径在111.6～126.9 nm内,zeta电位在6.54～14.13 mV内,包封率可达97.8%,各指标实测值与预测值偏差较小。FA-PEG-PCHL可以降低脂质双分子膜的流动性,膜流动性与FA-PEG-PCHL中PEG分子量呈正相关。FA-PDCT-L在体外具有明显的缓释效果,无突释现象,随着PEG分子量的降低,24 h累计释放率分别为31.1%、27.2%及19.5%,且稳定性良好。该研究为进一步研究叶酸受体靶向的长循环膜修饰脂质体在肿瘤疾病治疗中的应用打下了基础。