ELISA法检测HIV抗体弱阳性外部对照室内质控血清的制备和保存

目的 制备ELISA法检测HIV抗体室内质控血清并探讨其保存方式.方法 对HIV抗体阳性混合血清进行倍比稀释,选S/CO值2～3之间的稀释度制备室内质控,分装后分别保存于4℃和-20℃冰箱中备用.结果 两种保存方式的质控血清连续测定3mo并绘制质控图,-20℃冻存质控品结果稳定,4℃保存质控品,第一月稳定,第二、三月出现明显失控.结论 自制HIV抗体弱阳性血清作为室内质控是可行的.     

影响抗-HIV弱阳性质控血清稳定性的几种因素探讨

目的探讨影响自制HIV抗体弱阳性质控血清稳定性的因素。方法用3种ELISA试剂检测不同条件处理的HIV抗体弱阳性质控血清。结果反复冻融10次对HIV质控血清的稳定性没有影响;长时间-20℃保存,PBS(含10%BSA,0.5mg/ml庆大霉素)稀释对稳定性无影响,阴性血清(含0.1%的叠氮钠)稀释在12个月后有沉淀物析出,稳定性受影响。结论PBS(含10%BSA,0.5mg/ml庆大霉素)稀释液配制的HIV抗体弱阳性质控血清能更长时间保持稳定。     

自制人类免疫缺陷病毒抗体等质控血清及室内质控方法建立研究

目的用人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体阴性血清梯度稀释HIV抗体酶联免疫试剂盒中阳性对照,制备室内质控血清。建立艾滋病酶联免疫检测的室内质控方法。进行方法可靠性和质控血清稳定性的评价,同时比较两个厂家生产的HIV抗体试剂盒进行自制质控血清室内质控结果以及自制丙型肝炎抗体、乙型肝炎表面抗原血清的室内质控结果的评价。方法将自制的HIV质控品与卫生部HIV质控品按照HIV抗体检测的SOP文件用HIV抗体试剂随患者进行检测,每天测定吸光度,计算S/CO値。连续检测20次计算S/CO值和s,以x±2s为控制限,以x±3s为失控限绘制质量控制框架图。每天随患者标本各加入1份自制质控品和1份卫生部购质控品进行质控将其各自的S/CO描在质控图上,应用多规则质量控制原则分析以发现当天测定批的误差以及误差原因。控制每批次检测的重复性,观察试剂盒间的差异进行两种质控血清质控结果的比对研究。结果自制HIV抗体质控血清方法科学可靠,减少了基质效应,能确保结果的准确性和可靠性。结论稀释阳性对照制备质控品,建立酶联免疫室内质控方法也适用于乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎抗体等其他免疫项目的酶联免疫室内质控。不同厂家试剂用自制质控品进行质控结果无差异。     

巨细胞病毒IgM抗体自制室内质控血清的应用及评价

目的自制巨细胞病毒IgM抗体(HCMV-IgM)弱阳性外部对照质控血清,评价其临床应用的可行性。方法收集我院HCMV-IgM抗体阳性血清分别与健康人血清混合进行倍比稀释,选择S/CO在1.5~3之间稀释度制备室内质控血清,连续检测20批次,采用"即刻法"分析检测结果,20批次后结果绘制Levey-Jennings质控图,监测室内质控动态。结果自制HCMV-IgM质控血清与北京贝尔有限公司提供的质控血清,两者结果进行对比,CV值比较无统计学差异(P0.05),自制HCMV-IgM质控血清变异系数(CV)均小于20%,稳定性符合国家质控物要求。结论自制HCMV-IgM质控血清有很好的稳定性和精密度,可作为实验室检测HCMV-IgM抗体的室内质控血清。     

HIV抗体外部对照质控血清的制备及评估

目的 制备HIV抗体弱阳性外部对照质控血清并进行评估.方法 利用HIV抗体试剂盒中的阳性对照与正常人血清按一定比例混合,制备质控血清.ELISA法进行质控效果和稳定性检验.结果 ①在室内质控方面:自制质控血清与万泰公司质控血清有相似的效果.②稳定性检验:质控血清在4℃保存至少稳定2 mo,室温保存稳定1 mo,-20℃冻存至少稳定1 y.③反复冻融和加入硫柳汞对检测结果没有影响.结论 质控血清制备方法简便,易于保存,从质控效果和稳定性两方面评估符合国家质控物要求,可用于HIV抗体检测的室内质控.     

HIV合并TP/HCV/HBV感染者结果分析

目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)合并梅毒螺旋体(TP)、丙型肝炎病毒(HCV)、乙型肝炎病毒(HBV)感染的情况。方法选择2012年6月1日至2016年12月31日到曲靖市第二人民医院就诊的364例HIV感染者,全部患者经酶联免疫吸附试验(ELISA)进行初筛,HIV抗体初筛检测阳性者抽取血样后送往曲靖市疾病预防控制中心(CDC)确证实验室进行确证检测;同时检进行梅毒螺旋体凝集试验(TPPA)、HCV抗体(ELISA检测)、HBV血清抗原抗体标志物(HBs Ag,HBs Ab,HBeAg,HBe Ab,HBcAb)检测,并对检测结果进行统计分析。结果 364例HIV感染者中混合感染共93例,男性71例,女性22例;感染TP、HCV、HBV者分别为43例(11.8%)、32例(8.8%)、7例(1.9%);HIV与TP和HCV共同感染者7例(1.9%);HIV与TP和HBV共同感染者2例(0.5%)。结论 HIV感染者存在一定比例合并TP、HCV、HBV的混合感染情况,且HIV单纯合并TP或HCV的混合感染者感染率高,同时也存在HIV与TP和HCV、HIV与TP和HBV共同感染者。建议对HIV感染者同时进行TP、HCV、HBV检测。     

自制HIV抗体外部对照质控血清探讨与评估

目的:自制HIV抗体质控血清并评估.方法:利用HIV抗体试剂的阳性对照与正常人血清按比例混合制备质控血清.ELISA法进行质控效果和稳定性检验.结果:与万泰公司质控血清有相似的效果.结论:质控血清制备方法简便,易于保存,质控效果和稳定性评估符合国家要求,可用于HIV抗体检测的室内质控.     

初筛实验室抗-HIV临界值质控血清的制备及应用

目的掌握抗-HIV弱阳性外部对照质控血清(临界值质控血清)的制备方法。方法用抗-HIV抗体阴性的血清倍比稀释试剂盒中的抗-HIV阳性对照血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各稀释度血清,计算s/A值。依据所需外部对照质控血清的抗-HIV强弱来确定某一稀释度为配制稀释度,按配制稀释度的年需求量来配制抗-HIV弱阳性外部对照质控血清。结果采用倍比稀释法可获得均匀、无菌、稳定的抗-HIV弱阳性外部对照质控血清。结论倍比稀释法是制备抗-HIV弱阳性外部对照质控血清质控物经济方便、快捷、可靠的方法。     

4项目复合ELISA室内质控品制备方法的建立和评估

目的探讨临界值多项目复合ELISA质控品的制备方法,以控制本实验室ELISA检测的精密度,使实验结果更好地满足血液安全的需要。方法利用乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、梅毒抗体和人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)各单项阳性血浆进行混合,自制临界值4项目复合质控品随每批献血者标本同时检测进行室内质控。结果制备的室内质控品放置-30℃保存1年后,检测结果差异无统计学意义。采用同一厂家、同一批号的各诊断试剂对室内质控品检测,结果差异无统计学意义。不同厂家的诊断试剂进行检测,结果差异无无统计学意义。结论通过多年的实践证明,自制临界值4项目复合质控品进行室内质控,是实验室内部观察精密度敏感的窗口,也是实验结果可靠的保证。     

酶联免疫吸附试验0.5倍临界值阴性质控物的自制与评价

目的 配制酶联免疫吸附试验(ELISA)测定的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、人类免疫缺陷病毒抗体(抗HIV)、梅毒螺旋体抗体(抗TP)、丙型肝炎病毒抗体(抗H CV)0.5倍临界值左右的阴性质控物,并对其均一性和稳定性进行评价.方法 对弱阳性质控物进行倍比稀释,取吸光度值/临界值(S/CO值)在0.5倍临界值左右的稀释水平作为阴性质控物的目标水平,以此制作阴性质控物.阴性质控物均一性评价:每批次抽检20个质控物,均分为两组,对其S/CO值进行单因子方差分析.稳定性评价:将分装的自制质控物置于-70℃以下冰箱冻存1、3、6个月,按期随机取出10份进行检测,将其S/CO值与均一性评价结果进行比较.结果 阴性质控物的目标水平分别为HbsAg 0.06 IU/mL、HbsAb 5 mIU/mL、HBeAg 0.3 NCU/mL、抗HCV 0.1 NCU/mL、抗HIV 0.05 NCU/mL、抗TP 0.7 mIU/mL.均一性评价:两组6项阴性质控物检测数据比较,差异无统计学意义(P>0.05),均一性评价通过.稳定性评价:6项阴性质控物第1、3、6个月的S/CO值与均一性评价结果比较,第1、6个月的差异无统计学意义(P>0.05),第3个月的差异有统计学意义(P<0.05),稳定性符合要求.结论 自制的HbsAg、HbsAb、HBeAg、抗HCV、抗HIV、抗TP阴性质控物的均一性和稳定性均符合ISO15189:2012质量管理体系CNAS-CL02-A004《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验领域的应用说明》要求,可用于临床实验室的质量控制.     

D-二聚体质控品的制备及性能评价

目的研制一种D-二聚体质控品,并对其稳定性进行评价。方法采用无传染标志[人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体、丙型肝炎病毒(HCV)抗体、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、梅毒抗体等均为阴性]混合血浆制备质控品,并对其精密度、稳定性进行评价。结果自制的质控品批内及批间不精密度结果分别为1.83%、3.02%,均符合1/4CLIA′88及1/3CLIA′88可接受性能指标规定。于-20℃条件下保存12个月,偏移结果和瓶间均一性(变异系数)均符合1/2CLIA′88可接受性能指标规定。结论自制质控品的均一性和稳定性良好,可用于D-二聚体检测室内质量控制。     

抗链球菌溶血素O抗体及类风湿因子试验中液态弱阳性质控血清的研制

目的　研制抗链球菌溶血素 O抗体 ( Antistreptolysin- O antibody,ASO)、类风湿因子 ( Rheuma-toid factor,RF)胶乳凝集试验中液态弱阳性质控血清。方法　根据试验选定 ASO、RF胶乳凝集试验中液态弱阳性质控血清的稀释滴度 ,乙二醇防冻的最终浓度。用统计学处理 ,观察液态弱阳性质控血清的瓶间差。结果　 ASO、RF阳性血清稀释度分别为 1∶ 4和 1∶ 1 6,乙二醇防冻的最终浓度为 2 0 % ( v/v) ;室温、4℃、- 2 0℃存放时间分别为 2 mo、6mo和 1 y;各瓶间测定结果无显著性差异 ( P>0 .0 5 )。结论　建立了ASO、RF胶乳凝集试验中室内质量控制用液态弱阳性质控血清的制备方法 ,同时按设计的方法制备不同浓度的质控血清可应用到室间质量评价活动 ,具有推广应用的前景。     

乙肝表面抗原室内弱阳性质控物的制备及其应用评价

目的制备长期使用且稳定性好的HBsAg室内弱阳性质控血清。方法以小牛血清磷酸盐缓冲液按不同稀释倍数1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32等比例梯度稀释HBsAg阳性血清;以2种厂家提供不同批号的检测试剂,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法对HBsAg阳性质控血清进行连续6个月检测,以此对HBsAg阳性质控血清稳定性进行评价。结果以吸光度值/临界值(S/CO)1.0~3.0为参考标准,确定该实验室HBsAg阳性质控血清的最佳稀释度为1∶8[其S/CO值为2.42,变异系数(CV)为4.72];且该质控血清在不同试剂使用稳定性较好(其S/CO范围为2.41~2.82,CV范围为4.24%~8.68%);HBsAg阳性质控血清连续6个月检测结果CV范围为8.71%~9.86%(CV10%)。结论自制HBsAg质控血清具有很好的稳定性和精密度,可作为临床常规HBsAg检测中的室内质控血清。     

不规则抗体筛查室内质控品的制备及初步应用

目的自制不规则抗体筛查室内质控品并进行初步应用。方法选择商品化单克隆Ig G类抗D原液作为强阳性质控品,其稀释液作为弱阳性质控品,不规则抗体阴性的献血员AB型血浆作为阴性质控品。将强阳性、阴性质控品连续测定20次,确定其靶值;将单克隆Ig G类抗D倍比稀释,确定红细胞凝集强度达到2+的最高稀释倍数作为弱阳性质控品的最佳稀释度,连续测定20次。质控品与待检标本同时按标准操作规程进行测定,每天测定1次,共6个月。结果强阳性质控品靶值为4+,弱阳性质控品靶值为2+,最佳稀释度为1∶500,其质控范围为1~3+。弱阳性质控品在6个月的使用过程中出控4次,强阳性、阴性质控品检测结果均在控。结论实验室自制不规则抗体筛查室内质控品可行,功能上能够完全满足对检测项目的质量控制要求。     

HIV抗体弱阳性外部对照质控血清的制备及应用

获得性免疫缺陷综合征（AIDS）是一种由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的传染性疾病。随着AIDS患者的不断增多，国家对AIDS的监测越来越重视。为加强全国HIV抗体检测工作的质量控制，确保检测结果的准确性和可靠性，按照全国AIDS检测技术规范，每次试验必须包含内部对照质控血清和外部对照质控血清，以外部对照质控血清进行室内质量控制。外部对照质控血清价格昂贵，基层医院又很难得到HIV抗体阳性标本而自制。我们根据工作中的实际情况，利用HIV抗体试剂盒中的阳性对照制备了HIV抗体弱阳性外部对照质控血清，经过2年的应用，效果满意。     

自制HBsAg弱阳性外部对照质控血清的应用

目的 制备一种能长期使用的比较稳定的HBsAg弱阳性质控血清.方法 用HBsAg试剂盒中剩余的阳性血清进行稀释,选取合适的稀释倍数稀释一定量的血清,与购买的质控血清同时用于试验中,分别收集20d的质控数据,进行分析比较.结果 自制血清有很好的稳定性、精密度.结论 自制血清能作为日常HBsAg检测中的质控血清.     

即刻法室内质控的应用

“即刻法”室内质控因简单、实用而被免疫实验室广泛采用。但本站在应用”即刻法”室内质控的过程中 ,发现一些很少出现但对实际工作有一定影响的问题 ,现报告如下。材料与方法1　材料1.1　所用试剂均为通过“批批检定”的国产ELISA (HBsAg、抗 HCV、抗 HIV)试剂。1.2　自制弱阳性临界值质控血清 ,S/CO值控制在 1.5～ 3.0 (S为质控品双孔测定值的均值 ,CO为阈值 )。1.3　CS 5 0 0 0酶标仪 (北京航天 )。2　方法　依照即刻性室内质控方法 ,当检测完 3次数值后 ,将测定值从小到大排列 :X1、X2 、X3 ………Xn(X1为最小值 ,Xn 为…     

血液安全筛查联合检测系统检测献血前血液的可行性

目的分析用血液安全筛查联合检测系统进行献血者献血前血液检测的可行性。方法收集308份无偿献血者的献血前血液标本,同时采用献血前快速筛查方法、联合检测系统和献血后常规检测技术进行检测并判断是否合格,包括血型(ABO、Rh D)、血红蛋白(Hb)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)、丙型肝炎病毒抗体(抗HCV)、人类免疫缺陷病毒抗体(抗HIV)和梅毒螺旋体抗体(抗TP)检测。以常规检测结果为标准,对联合检测系统和快速筛查结果进行比较。结果联合检测系统鉴定的ABO/Rh D血型结果和HBs Ag阳性率与快速筛查和常规检测方法一致。联合检测系统检出的ALT和Hb不合格率分别为9.74%和1.30%,与快速筛查和常规检测方法相比差异均无统计学意义(P均0.05)。以常规方法为参考标准,联合检测系统的一致率分别为血型100%、ALT 99.35%、Hb 100%、HBs Ag 100%。联合检测系统检出3例抗HCV、1例抗HIV、5例抗TP阳性,经常规ELISA检测证明1例抗TP为假阳性。结论联合检测系统用于献血者献血前血液筛查是可行的,有助于提高血液的合格率。     

无偿献血300ml与200ml献血反应的比较分析

ELISA检测室内质控与临床化学测定的质控方法相比有其特殊性 ,由于 ELISA试剂盒的有效期短 ,批号更换频繁 ,短时间内难以积累最佳条件下 2 0次质控物的检测结果。而采用“即刻法”质控统计方法 ,只需连续测 3次 ,即可对第 3次检验结果进行质控。笔者在免疫实验室 ELISA检测室内质控中采用了即刻法取得了良好的效果 ,现以检测HBs Ag室内质控为例 ,简述如下。材料与方法1　材料　 1 ng HBs Ag质控血清 (由卫生部临床检验中心提供 ) ;酶标仪 (美国伯乐 5 5 0 ) ;洗板机 (美国伯乐 1 5 75 ) ;40～ 2 0 0 μl加样枪 (芬兰产 ) ;检测HBs…     

血站实验室HBsAg检验方法和程序分析性能验证与比对

目的探讨血站实验室HBs Ag检验方法、程序分析性能验证,及比对方法。方法对全自动酶免分析仪进行HBs Ag性能验证,采用的指标与方法包括:1)利用批内重复试验和室内质控结果,进行批内和批间精密度评价;2)采用标准血清盘的结果进行符合率验证;3)采用对已知含量的室内质控品连续稀释后做检测的方法进行检出限验证;4)选择检验科100例HBs Ag阴性和100例HBs Ag阳性标本,统计Cut-off值为0.8和Cut-off值为1.2的例数占总例数的比例,以此Cut-off重复性验证;5)选择10份HBs Ag阴性和10份HBs Ag阳性标本进行仪器与人员比对。结果 1)批内、批间精密度分别为3.92%和14.36%;2)血清盘检测符合率均为100%;3)HBs Ag检出限为0.02 IU/m L;4)Cut-off值为0.8和Cut-off值为1.2的例数占总例数的比例≤5%,验证通过;5)仪器和人员比对的一致性均为100%。结论 HBs Ag检验方法、程序分析性能符合试剂说明书的要求;仪器和人员比对均符合验证要求。