革兰阴性杆菌中质粒介导AmpC耐药基因的检测与分析

作为医院感染的重要致病菌,革兰阴性杆菌对第三代头孢菌素耐药的主要原因是由于细菌产生AmpC β-内酰胺酶（Ampicillin beta-lactamases,简称“AmpC酶”）和质粒介导的超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrum beta-lactamases,ESBLs）。革兰阴性杆菌不仅产生染色体介导的AmpC酶,而且还产生质粒介导的AmpC酶,国外已发现数十种质粒介导的AmpC酶的耐药基因型,国内对质粒介导AmpC酶的报道尚少见。本实验运用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术对耐药基因扩增并测序,同时用转化试验确证耐药基因是否通过质粒传播,     

革兰阴性杆菌临床分离株质粒介导喹诺酮类耐药研究

目的了解质粒介导耐药机制在革兰阴性杆菌临床株对喹诺酮类抗菌药耐药性形成中的作用。方法以PCR方法筛选541株连续分离的所有环丙沙星耐药或中介革兰阴性杆菌中的耐药基因qnrA;以接合试验了解喹诺酮耐药的可转移性;对qnrA阳性株测定氨基糖苷乙酰化酶aac(6′)-Ib-cr基因,分析了gyrA和parC基因的喹诺酮耐药决定区的变异。结果541株革兰阴性杆菌中,7株肠杆菌科细菌qnrA检测阳性,其中4株为阴沟肠杆菌,在不发酵糖菌中未检出qnrA基因。在7株qnrA阳性菌中,4株喹诺酮耐药性可通过质粒转移,接合子对环丙沙星的MIC较受体菌上升12～125倍。4个接合子中环丙沙星MIC较高的2个结合子携带aac(6′)-Ib-cr,7株qnrA阳性临床分离菌中5株耐药决定区gyrA、parC有变异。结论qnrA在肠杆菌属临床分离株中的检出率较高,aac(6′)-Ib-cr基因及靶位改变与qnrA同时存在可能使细菌对喹诺酮类的耐药性进一步上升。     

多重聚合酶链反应检测革兰阴性杆菌中质粒介导ampC基因

目的运用多重聚合酶链反应(PCR)检测革兰阴性杆菌的质粒ampC基因,了解该基因在我院的流行情况。方法采用头孢西丁初筛试验筛选出符合头孢菌素酶(AmpC)表型筛选条件的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌共50株,通过热裂解法进行DNA抽提,采用6组ampC特异引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳区分PCR产物,进一步DNA测序确定其基因型。结果50株试验菌中有8株为阳性,分别为肺炎克雷伯菌5株,大肠埃希菌3株,基因型为CIT型1株,DHA型4株,EBC型3株。结论我院质粒介导ampC基因型主要为DHA型、EBC型和CIT型。多重PCR是特异性高、简便检测质粒ampC基因型的分子生物学方法。     

多重聚合酶链反应检测革兰阴性杆菌中质粒介导ampC基因

目的运用多重聚合酶链反应（PCR）检测革兰阴性杆菌的质粒ampC基因,了解该基因在我院的流行情况。方法采用头孢西丁初筛试验筛选出符合头孢菌素酶（AmpC）表型筛选条件的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌共50株,通过热裂解法进行DNA抽提,采用6组ampC特异引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳区分PCR产物,进一步DNA测序确定其基因型。结果50株试验菌中有8株为阳性,分别为肺炎克雷伯菌5株,大肠埃希菌3株,基因型为CIT型1株,DHA型4株,EBC型3株。结论我院质粒介导ampC基因型主要为DHA型、EBC型和CIT型。多重PCR是特异性高、简便检测质粒ampC基因型的分子生物学方法。     

革兰阴性杆菌中质粒ampC基因的检测与分析

目的运用多重聚合酶链反应(PCR)检测革兰阴性杆菌的质粒ampC基因.方法通过热裂解获得DNA模板,用6组引物进行多重PCR扩增,用琼脂糖凝胶电泳区分PCR产物.结果 200株临床分离的革兰阴性杆菌中有6株为质粒ampC基因阳性.结论用多重PCR技术能简单、快速地检测革兰阴性杆菌质粒ampC基因,且特异性高.     

革兰阴性杆菌中质粒ampC基因的检测与分析

目的　运用多重聚合酶链反应 (PCR)检测革兰阴性杆菌的质粒ampC基因。 方法　通过热裂解获得DNA模板 ,用 6组引物进行多重PCR扩增 ,用琼脂糖凝胶电泳区分PCR产物。结果　 2 0 0株临床分离的革兰阴性杆菌中有 6株为质粒ampC基因阳性。 结论　用多重PCR技术能简单、快速地检测革兰阴性杆菌质粒ampC基因 ,且特异性高。     

多重耐药革兰阴性杆菌耐药谱及其抗消毒剂基因检测

目的了解临床感染标本分离的多重耐药革兰阴性杆菌对临床常用抗菌药物耐药谱及其抗消毒剂基因携带状况。方法采用K-B试验法和聚合酶链反应检测法,对临床分离的多重耐药革兰阴性杆菌进行了药敏试验和qacE△1-sul1基因检测。结果临床分离的252株革兰阴性杆菌对常用抗生素耐药率普遍较高,且耐药谱广。在252株革兰阴性杆菌中,有197株qacE△1-sul1基因检测阳性,总阳性率为78.71%。结论临床感染标本分离的多重耐药革兰阴性杆菌qacE△1-sul1基因携带率比较高,对临床常用抗生素普遍耐药,应加强防范。     

我院革兰阴性杆菌耐药情况分析

目的对我院常见革兰阴性杆菌感染菌种分布和耐药性特点进行分析,以指导临床合理使用抗菌药物,减少细菌的耐药性。方法分析2003年1月至2006年10月我院检验科细菌室分离出的革兰阴性杆菌菌种及其对相应抗菌药物敏感试验结果,用Whonet5．3软件统计分析。结果抗菌药物的总耐药率≥50％者10种,占抗菌药物总数近1／3,总耐药率在30％～50％的抗菌药物有11种,某些抗菌药物的总耐药率不高,但个别革兰阴性菌高度耐药。结论临床上在使用抗菌药物时,根据药敏结果,个体化给药和合理联合用药是治疗革兰阴性杆菌感染、控制耐药株产生和播散的较好选择。     

聊城地区革兰阴性杆菌耐药谱分析

目的分析本院2004—2006年革兰阴性杆菌的菌群分布和耐药现状，指导临床合理使用抗生素。方法3年中从各类标本中分离革兰阴性杆菌2282株，细菌鉴定采用法国生物梅里埃公司VITEK32鉴定仪，用K—B法进行细菌的耐药监测，并加以分析。结果2282株革兰阴性杆菌中，分离率占第1位和第2位的分别为大肠埃希菌（30．8％）、铜绿假单胞菌（27．9％）；亚胺培南对所有革兰阴性杆菌有最好的抗菌活性，其余细菌对抗生素耐药率都有升高趋势；产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）细菌分离率为60．0％。结论加强对细菌耐药性的监测，及时向临床反馈公布，为临床医师合理使用抗生素提供依据。     

非发酵革兰阴性杆菌的耐药分析

<正>近年来,随着各种先进的诊疗技术及抗生素的应用,非发酵革兰阴性杆菌感染发生率明显增加,其耐药的问题引起广泛关注[l]。现对非发酵革兰阴性杆菌分离率和耐药性进行分析,为临床合理使用抗生素提供实     

Plasmid-mediated fosfomycin resistance is due to enzymatic modification of the antibiotic.

The molecular mechanism of plasmid-mediated resistance to fosfomycin is described. The antibiotic was inactivated intracellularly and remained inside the cells. Modification was also obtained from cell extracts and was not energy dependent. The modifying enzyme seems to have sulfhydryl groups in its active center.     

医院感染的革兰阴性杆菌的耐药变迁

目的 了解本院医院感染的肠杆菌科细菌和非发酵菌的感染情况及对常用药物的耐药性,指导临床合理使用抗生素.方法 参照《全国临床检验操作规程》,对医院微生物室近3年检出阳性标本进行分析、统计.结果 肠杆菌科细菌576株,非发酵菌属474株,肠杆菌科细菌中大肠埃希菌、产气肠杆菌、泉居沙雷菌,戴氏西地西菌对先锋必、氧哌嗪耐药率达83.33%以上,泉居沙雷菌对丁胺卡那的耐药率为66.67%,而大肠埃希菌、产气肠杆菌、戴氏西地西菌对丁胺卡那的耐药率则在16.67%以下,非发酵菌属中短黄杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、铜绿假单胞菌对头孢噻肟的耐药率均达100%,对先锋必、氧哌嗪耐药率也很高,为80%以上,而对丁胺卡那的耐药率为27.27%以下.结论 在常用药物中,丁胺卡那对肠道杆菌和非发酵菌的作用很强,而先锋必、氧哌嗪作用较弱.     

临床常见革兰阴性杆菌感染的耐药性分析

目的了解医院革兰阴性杆菌的耐药情况,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法细菌鉴定和药敏分析采用迪尔生物Bact-IST半自动微生物分析系统进行鉴定,药敏试剂为同厂家配套产品。结果共分离出革兰阴性杆菌693株,以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌为主。5种主要革兰阴性杆菌对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南、美罗培南耐药率最低;对氨苄西林、复方磺胺甲噁唑、庆大霉素耐药率最高。结论革兰阴性杆菌是医院感染常见的病原菌,近年来耐药情况日益严峻,应引起临床医生的高度重视。     

医院感染革兰阴性杆菌产AmpC酶状况及耐药性检测分析

目的 探讨产头孢菌素酶(AmpC酶)革兰阴性杆菌医院内感染现状及对药物敏感性的影响.方法 对临床标本进行分离鉴定,采用K-B法对常规药物进行耐药性检测,采用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的三维法检测AmpC酶.结果 在331株革兰阴性杆菌中检出产AmpC酶109株,产酶率为18.4%,产酶菌株对第3代头孢菌素、头霉素类、环丙沙星及含酶抑制剂复合物药物敏感率下降明显,对亚胺培南、头孢吡肟、丁胺卡那耐药率较低,分别为3.28%(2/61)、44.26%(27/61)、31.1%(19/61),产酶菌株对抗菌药物的耐药率明显高于非产酶菌株.结论 革兰阴性杆菌耐药与产AmpC酶有关,治疗该菌感染应选用亚胺培南、第4代头孢菌素等.     

2002-2003年中国革兰阴性细菌耐药性监测研究

目的监测我国不同地区14家医院31个研究病房的医院获得感染(HAI)与社区获得感染(CAI)患者中分离的革兰阴性细菌耐药状况。方法按原设计方案对14家医院从2002年7月1日至2003年6月30日分离的1091株革兰阴性菌，采用国际标准平皿二倍稀释法进行体外敏感试验，测得MIC50、MIC90表示抗菌药物的抗菌活性，并按2002年美国临床实验标准委员会(NCCLS)指导原则的标准计算细菌对抗菌药物的耐药率(R)％、中介率(I)％和敏感率(S)％。结果碳青霉烯类仍是对革兰阴性杆菌(除外嗜麦芽窄食单胞菌与黄杆菌，该2种非发酵阴性杆菌对碳青霉烯类高度耐药)抗菌作用最强的一类抗生素。头孢哌酮／舒巴坦、哌拉西林／他唑巴坦、头孢吡肟和新氟喹诺酮类，如加替沙星、莫西沙星、左氧沙星对革兰阴性杆菌亦有很好的抗菌活性，但仍有50％-60％的大肠埃希菌对氟喹诺酮类耐药。从HAI患者分离的革兰阴性杆菌耐药率比从CAI患者分离的相应阴性杆菌的耐药率要高1．5倍以上。结论头孢哌酮／舒巴坦、哌拉西林／他佐巴坦和加替沙星对非发酵阴性杆菌的抗菌谱较广，抗菌作用也较好，是值得注意的抗非发酵菌抗菌药物。我们从2002-2003年度所得的监测结果与2000-2001年度的监测结果及国际监测项目报道的结果基本一致。     

重症监护治疗病房革兰阴性杆菌耐药性监测

目的了解本院重症监护治疗病房(ICU)革兰阴性杆菌的分布及药物敏感(药敏)结果,以指导临床抗生素的合理使用。方法2000年起,连续4年每年采用EpsilometertestE试条测定法(Etest法)对连续100株以上革兰阴性杆菌进行细菌药敏监测,同时用Whonet5.1软件进行药敏结果分析。结果亚胺培南在ICU分离细菌中的敏感率最高,达90.8%,敏感率居前的抗生素分别为头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、丁胺卡那、头孢他啶,而第三代头孢菌素中头孢噻肟、头孢曲松的敏感率只有42.8%,均不到50.0%。大肠埃希菌超广谱β内酰胺酶(ESBLs)产生率达36.0%,肺炎克雷伯菌ESBLs产生率达25.0%。ESBLs阳性与阴性菌株中除亚胺培南耐药率为0外,其他抗生素间的耐药率差异均有显著性(P均<0.005)。结论ICU的细菌对抗生素耐药性十分严重,必须加强抗生素的耐药监测,同时限制性使用第三代头孢菌素。     

Plasmid-mediated quinolone resistance

The first plasmid-mediated gene involved in quinolone resistance (qnrA1) was reported in 1998. It codes for a pentapeptide-repeat protein that protects type II topoisomerases from quinolones. Additional related plasmid-mediated genes (qnrB, qnrS and qnrC) and chromosomal homologs of them have also been discovered. Two other plasmid-mediated resistance mechanisms were later reported: modification of quinolones with a piperazinyl substituent by the acetyltransferase Aac(6´)-Ib-cr and active efflux by QepA, a pump related to the major facilitator superfamily transporters. These genes have a wide geographical distribution (essentially in enterobacteria), although their real prevalence is only partially known because of the difficulty of phenotypic detection of this type of resistance. Although these mechanism cause low-level resistance, they favor and complement the selection of additional mechanisms of resistance.     

Plasmid-mediated quinolone resistance

The first plasmid-mediated gene involved in quinolone resistance (qnrA1) was reported in 1998. It codes for a pentapeptide-repeat protein that protects type II topoisomerases from quinolones. Additional related plasmid-mediated genes (qnrB, qnrS and qnrC) and chromosomal homologs of them have also been discovered. Two other plasmid-mediated resistance mechanisms were later reported: modification of quinolones with a piperazinyl substituent by the acetyltransferase Aac(6)-Ib-cr and active efflux by QepA, a pump related to the major facilitator superfamily transporters. These genes have a wide geographical distribution (essentially in enterobacteria), although their real prevalence is only partially known because of the difficulty of phenotypic detection of this type of resistance. Although these mechanism cause low-level resistance, they favor and complement the selection of additional mechanisms of resistance.