海洋真菌多糖YCP的酶法降解及其产物分析

目的： 研究海洋真菌多糖YCP经酶法降解后理化性质及免疫活性的改变,探讨其结构和活性之间的关系。 方法： 采用人唾液α-淀粉酶降解海洋真菌多糖YCP,经凝胶色谱分离纯化;通过HPLC、红外光谱以及薄层色谱等对其理化性质进行分析;通过小鼠腹腔巨噬细胞NO诱生实验,中性红吞噬实验以及与巨噬细胞表面YCP相关受体竞争性结合实验分析其免疫活性的改变。 结果： 海洋真菌多糖YCP经人唾液α-淀粉酶降解后得到相对分子质量约为6.6×10³的单一组分,该组分的单糖组成以及红外光谱特征与YCP相同,对巨噬细胞分泌NO以及吞噬中性红的能力没有显著的促进作用,对YCP与巨噬细胞表面相关受体的结合几乎不产生抑制作用。 结论： 海洋真菌多糖YCP经人唾液α-淀粉酶部分降解后免疫活性显著降低,说明YCP的完整分子可能对维持YCP的免疫活性具有重要作用。     

注射用海洋真菌多糖YCP血管刺激性、过敏性研究

目的探索注射用海洋真菌多糖YCP在静脉给药后产生的血管刺激性以及豚鼠的全身主动过敏反应,为临床用药安全提供依据。方法血管刺激性试验：实验兔耳缘静脉给予18mg／10（mL·kg）海洋真菌多糖YCP,每日1次,连续3d,末次给药后48h取兔耳进行病理组织学观察。全身主动过敏试验：豚鼠分别腹腔注射给予高、低剂量海洋真菌多糖YCP．隔131次,共3次,末次致敏14d后进行抗原激发,并观察豚鼠的全身过敏反应。结果血管刺激性试验期间各组兔耳注射部位未见异常改变;病理组织学检查未见异常。全身主动过敏试验致敏期间和激发后给药组和阴性组豚鼠无异常症状。阳性组豚鼠出现明显过敏症状。结论注射用海洋真菌多糖YCP无血管刺激性,全身主动过敏试验结果为阴性。     

海洋真菌多糖YCP结合的免疫细胞类型的体外筛选

目的:体外筛选海洋真菌多糖(YCP)结合的免疫细胞类型。方法:采用化学偶联的方法将荧光胺(FLA)和YCP结合,制备荧光探针YCP-FLA。分离不同的免疫细胞(巨噬细胞、单核细胞、Kupffer细胞等)与YCP-FLA共孵育,荧光显微镜观察以及流式细胞仪检测YCP-FLA和不同免疫细胞结合特性。结果和结论:YCP-FLA可以直接与单核巨噬细胞(腹腔巨噬细胞、脾巨噬细胞、肝Kupffer细胞和人外周血单核细胞)结合,推测YCP可能是通过单核/巨噬细胞表面的受体,调节免疫活性。     

海洋真菌多糖YCP对荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响

目的研究海洋真菌多糖(YCP)对荷瘤小鼠的抑瘤作用及对其免疫功能的影响。方法采用小鼠L ew is肺癌移植瘤和裸小鼠人肺癌A-549移植瘤模型,检测YCP对荷瘤小鼠的瘤质量、体重的影响及其相对肿瘤增殖率T/C。以M TT法检测YCP对L ew is肺癌细胞体外增殖的影响。以荷瘤小鼠的吞噬指数(k)及吞噬系数(α)值、自然杀伤细胞(NK)活性和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性为指标,观察YCP对免疫功能的影响。结果YCP(9、3 m g/kg)iv给药可显著抑制小鼠L ew is肺癌移植瘤的生长(P<0.01),但对裸小鼠人肺癌A-549移植瘤生长无抑制作用。YCP对L ew is肺癌细胞体外增殖无抑制作用。YCP(9、3 m g/kg)iv给药可显著提高S180荷瘤小鼠的k值(P<0.01、0.05)。YCP(9、3 m g/kg)iv给药可明显提高L ew is肺癌小鼠NK细胞和CTL细胞的杀伤活性(P<0.01、0.05)。结论YCP可显著提高荷瘤小鼠的免疫功能,对小鼠L ew is肺癌移植瘤的生长有显著抑制作用。     

海洋真菌多糖YCP对巨噬细胞免疫功能的影响

目的:研究海洋真菌多糖(YCP)促进巨噬细胞的免疫调节作用,探讨其抗肿瘤作用的机理.方法:在体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中加入不同浓度的YCP后,观察其对巨噬细胞一氧化氮(NO)、IL-1的合成及吞噬功能的影响.结果:YCP多糖能促进巨噬细胞NO、IL-1的合成,并能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用.结论:YCP能增强小鼠腹腔巨噬细胞的免疫作用,这可能是其抗肿瘤作用的机理之一.     

~(125)I人血型糖蛋白A的制备

血型糖蛋白A(Glycophorin A简称GPA)是人红细胞膜上的重要唾液酸糖蛋白,由131个氨基酸残基和16个寡糖单位组成,分子量3.1万,它具有受体作用和MN血型抗原活性,并与恶性疟原虫裂殖子入侵红细胞有密切的关系。     

流感疫苗脂质体冻干粉的制备及其免疫原性

目的： 制备流感疫苗脂质体冻干粉,并考察其粒径分布、包封率及免疫原性。方法： 以大豆卵磷脂、胆固醇为原料,采用薄膜蒸发法,加入纯化流感病毒裂解疫苗制备脂质体,加入冻干保护剂冻干。在光学显微镜下观察其形态,并在透射电镜下测定其平均粒径和粒径分布,以Lowry法测定其包封率。小鼠肺部给药后血凝抑制法测定抗体滴度以考察其免疫原性。结果： 所制备的流感疫苗脂质体冻干粉复溶后呈圆形和椭圆形,粒度分布均匀,平均粒径约为2.14 μm,包封率大于80%。肺部免疫后抗体滴度较腹腔免疫高。结论： 所制备的流感疫苗脂质体包封率高,粒度分布均匀,小鼠肺部免疫效果好。流感疫苗脂质体肺部免疫是一种很有潜力的免疫途径,有待进一步研究。     

细脚拟青霉多糖I的化学结构

目的　研究细脚拟青霉多糖 的分离纯化方法、相对分子量、单糖组成及其结合方式。方法　室温下水提取出粗多糖 ,采用 Sephadex G- 10 0柱层析纯化。经过酸全水解 ,利用阴离子交换柱测定单糖的组成。甲基化分析测定单糖的结合方式。IR以及 NMR光谱的研究确定糖苷键的类型。结果　经高效液相色谱检测为均一性组成 ,从以后的 GC- MS及 NMR图谱也获得证明。结论　细脚拟青霉多糖 为α- (1→ 6 )连结的葡聚糖 ,相对分子量为 2 .0 5×10 4u。     

HSV-1糖蛋白B和糖蛋白D的T细胞表位重组核酸疫苗的构建及其免疫原性

目的 构建Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)糖蛋白B(gB)和糖蛋白D(gD)的T细胞表位重组核酸疫苗,并研究其作为核酸疫苗的免疫原性.方法 登录免疫表位数据库(IEDB),查阅已发表的无症状表位,联合运用SYFPEITHI、IEDB等生物信息学软件,预测潜在的HSV-1 gB和gD的T细胞表位.将已知表位和预测表位串联,...     

玉米芯多糖及其硫酸酯抗凝血活性及其机制

目的：研究玉米芯多糖及其硫酸酯抗凝血活性的作用,探讨玉米芯多糖及其硫酸酯抗凝血机制,为玉米芯抗凝的临床应用奠定基础。方法：采用酸提法提取玉米芯粗多糖(ACC),并对其分级、纯化及硫酸酯化;以生理盐水为对照组,将ACC、玉米芯纯化多糖(ACP)及其玉米芯硫酸酯化多糖(ACS)分别按低、中、高浓度分为3组,分别检测小鼠全凝血时间（CT）、出血时间（BT）及对人混合血浆的活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）和凝血酶原时间（PT）。结果：每1000 g玉米芯中可提取ACC 12.5 g,提取率为1.25%,总糖含量为59%,气相色谱法分析其单糖组成为葡萄糖(Glc)、木糖(Xyl)和半乳糖(Gal),其摩尔比为15.36∶2.67∶1.00;纯化后多糖的总糖含量为90.2%,气相色谱法分析其单糖组成为Glc、Xyl和Gal,摩尔比为3.90∶2.12∶1.00;离子色谱法分析ACS的硫酸根含量9.86%;与对照组比较,除ACC低、中浓度组外,其余各组小鼠的CT和BT均明显延长（P<0.05或P<0.01）,人混合血浆的APTT和TT明显延长（P<0.05　或P<0.01）,呈现浓度依赖性, PT无变化。结论：ACC具有抗凝血活性,并通过内源性凝血途径和共同凝血途径来实现抗凝血作用。     

SARS-CoV基因疫苗的构建及免疫原性初步研究

目的构建SARS病毒E、M、N基因疫苗,研究其免疫原性。方法通过PCR扩增获得SARS-CoVE、M、N基因片断,将其分别克隆入真核表达载体pVAX1,将所得真核表达质粒pVAX1-E、pVAX1-M和pVAX1-N分别肌肉注射小鼠和兔子,用ELISA法检测血清抗体,观察实验期间动物的体重变化,处死后对重要脏器进行病理检查。结果pVAX1-E、pVAX1-M和pVAX1-N基因测序结果与基因库中公布的一致。3种基因疫苗肌肉注射免疫小鼠和兔子后均能诱导产生特异性抗SARS-CoV抗体;动物一般状况和体重变化与对照组差异无显著性;重要脏器无明显病理改变。结论pVAX1-E、pVAX1-M和pVAX1-N疫苗能够诱导机体产生特异的体液免疫应答,具有较好的免疫原性和安全性,为SARS疫苗的研制奠定了良好基础。     

石杉碱甲人工抗原的合成、鉴定及免疫原性分析

目的 制备乙酰胆碱脂酶抑制活性成分石杉碱甲(huperzine A,HupA)的人工抗原及抗血清.方法 将HupA与戊二醛、载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)反应偶联,制得半抗原-载体蛋白复合物后,用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定其中结合的半抗原数目;以此抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,并通过ELISA法检测其抗体效价和特异性.结果 合成的人工抗原HupA-GA-BSA中HupA与BSA的结合比约为8:1;免疫小鼠得到特异针对HupA的抗血清,HupA抗体的效价为1:62 500.结论 成功地合成了HupA的人工抗原,且该抗原有较好的免疫原性.     

模式抗原破伤风毒素C蛋白的克隆、表达条件优化及免疫原性初步分析

目的 获得高纯度、高免疫原性的破伤风毒素C片段(TTC)蛋白.方法 以PCR从破伤风杆菌质粒DNA中扩增TTC基因片段,将其插入载体pET43.1a( )并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达.用Ni2 NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白,经凝血酶酶切,再用Ni2 -NTA琼脂糖柱分离目的 蛋白.SDS-PAGE和免疫印迹分析目的 蛋白的相对分子质量和抗原性,动物免疫实验鉴定其免疫原性.结果 获得1373 bp的TrC基因片段,构建成重组表达载体pET43.1a( )-TTC并在大肠杆菌中表达.TTC-Nus融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的22％,酶切后TTC蛋白可与载体蛋白有效分离,获得纯度为95.5％的TTC蛋白,该蛋白可被破伤风抗毒素识别;将TTC蛋白免疫小鼠后,免疫血清可与破伤风毒素特异性结合,三次免疫后其抗体效价可达1:25 600.结论 所获TTC蛋白纯度高,免疫原性好,为研究体内外抗原提呈、免疫应答提供了良好的模式抗原.     

黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响

目的观察黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响。方法以黄芪多糖低、中、高浓度给小鼠连续灌胃7 d后,处死测定小鼠体重、脾脏及胸腺重量,计算脾指数与胸腺指数,观察小鼠免疫器官重量的变化;采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验测试黄芪多糖对小鼠非特异性免疫的影响;采用溶血空斑形成实验测试黄芪多糖对小鼠体液免疫的影响。结果黄芪多糖能够增加小鼠免疫器官重量,提高巨噬细胞吞噬功能及增加B细胞产生抗体能力。结论黄芪多糖具有调节免疫功能,对非特异性免疫和体液免疫均有一定的增强作用。     

链霉菌多糖的免疫学活性研究

目的 研究链霉菌多糖(SMP)对正常小鼠和免疫抑制模型小鼠的免疫调节活性.方法 通过混合淋巴细胞培养方法检测SMP对正常小鼠脾脏淋巴细胞增殖作用的影响,用酸性α-醋酸萘酯酶染色法观察免疫抑制小鼠模型外周血中T淋巴细胞的变化,以及流式细胞仪检测免疫抑制模型小鼠脾细胞中T细胞亚群Lyt2 和L3T4 的比例变化.结果 SMP可以明显促进混合淋巴细胞的增殖,并对免疫抑制模型小鼠T淋巴细胞的抑制有保护作用,还可以调节模型小鼠CD4 /CD8 的比值至正常水平.结论 SMP具有调节免疫功能的作用.