多克隆抗体免疫荧光法检测大鼠卡氏肺孢子虫的研究

采用特异多克隆抗卡氏肺孢子虫囊壁抗体检测大鼠支气管肺泡灌洗液和肺组织中卡氏肺孢子虫，被荧光抗体标记的肺胞子虫呈圆形或卵圆形，直径约3～6μm，为特异的苹果绿荧光色的囊壁。受检标本经PronaseE溶解包裹在肺孢子虫包囊外的糖蛋白等物质，其检出效果优于不用PronaseE方法者，亦优于传统的Grocott和Giemsa染色法。本方法具有高度的敏感性和特异性，与白色念珠菌、新型隐球菌无交叉反应。     

卡氏肺孢子虫标本染色方法的改进

①目的改进卡氏肺孢子虫标本的染色方法，以便准确诊断卡氏肺孢子虫肺炎和制作教学标本。②方法采用吉姆萨-瑞特染色法。③结果染色后卡氏肺孢子虫包囊囊内小体细胞核呈紫红色，细胞质呈蓝色，囊壁呈淡蓝色，各部分结构清晰可辨。滋养体包核为紫红色，胞质为蓝色。④结论吉姆萨-瑞特染色法操作简便、快速，卡氏肺孢子虫标本着色清晰，是临床诊断和教学中值得推广和应用的染色方法。     

小鼠卡氏肺孢子虫性肺炎病原和病理学观察

目的：观察小鼠卡氏肺孢子虫性肺炎（ＰＣＰ）病原和病理学改变。方法：昆明小鼠皮下注射醋酸考的松诱发ＰＣＰ。肺印片Ｇｉｅｍｓａ染色检查卡氏肺孢子虫包囊；常规石蜡切片，ＨＥ梁色、ＰＡＳ染色及ＧＭＳ染色观察病理学改变。结果：自用药第５周肺印片即可检出卡氏肺孢子虫包囊，第８周包囊检出率达８１．８２％；ＨＥ染色切片早期呈以淋巴细胞、单核细胞渗出为主的间质性肺炎；晚期间质性肺炎加重，肺泡腔内出现泡沫样渗出物；ＰＡＳ染色切片泡沫样渗出物呈桃红色阳性反应；ＧＭＳ染色切片可见染成黑色的包囊。结论：本研究为建立ＰＣＰ动物模型提供了病原形态学和病理学依据；同时所显示的ＰＣＰ病理变化对临床病理工作者有较好的诊断参考价值     

卡氏肺孢子虫DNA的PCR检测

探讨卡氏肺孢子虫的检测方法及感染状况。方法 收取病人痰液，肺组织及支气管灌洗液，常规方法提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应技术检测卡氏肺隐孢子虫ＤＮＡ，并与吉氏染色结果进行比较。３．结果８６例住院病人，卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ检出率为４１．９％，卡氏肺孢子虫囊吉氏染色法的检出率为１４．９％，两种方法的检出率比较，差异有显著性。     

卡氏肺孢子虫发育增殖过程的超微结构研究

目的：研究卡氏肺孢子虫发育增殖过程的超微结构。方法：用地塞米松诱导大鼠卡氏肺孢子虫肺炎，取肺组织制成透射电镜标本，观察肺内虫体的超微结构和发育增殖过程。结果：肺内卡氏肺孢予虫有滋养体、囊前期和包囊三个发育阶段。滋养体的生殖方式有二分裂、外出芽、内出芽及接合生殖，并见到囊前期和包囊内的囊内小体的分裂增殖过程。此外，虫体内有丰富的线粒体，且随虫体的发育和分裂，线粒体的数量、大小和形状也发生明显的变化。严重感染时虫体以滋养体为主。结论：卡氏肺孢子虫的生活史由滋养体、囊前期和包囊三个发育阶段构成，生殖方式包括有性生殖和无性生殖两种类型。     

机会致病寄生原虫的系列研究

本课题包括：①对机会致病寄生虫，包括弓形虫、卡氏肺孢子虫及隐孢子虫动物模型的建立，虫体的分离及提纯；②弓形虫感染的循环抗原（ＣＡ）和抗体（ＩｇＧ、ＩｇＭ），用竞争抑制酶联免疫吸附试验（ＩＥＬＩＳＡ）、金葡菌Ａ蛋白酶联免疫吸附试验（ＳＰＡＥＬＩＳＡ）、直接捕获法酶联免疫吸附试验（ＤＥＬＩＳＡ）进行检测；③用地高辛标记探针及聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测核酸，自由引物ＰＣＲ鉴别弓形虫株以及生物特性；④用流式细胞仪对卡氏肺孢子虫及弓形虫的ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质含量的动力学进行了分析；⑤用激光微束系统对含８个子孢子成熟包囊施行手术，切除４个或２个子孢子后，包囊仍具有感染力。     

双氢青蒿素治疗实验大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的透射电镜观察

目的 观察双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫超微结构的影响。方法 Wastar大鼠皮下注射地塞米松磷酸钠7周诱导建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型，用双氢青蒿素治疗大鼠，并用透射电镜观察大鼠肺切片中卡氏肺孢子虫的超微结构变化。结果 双氢青蒿素治疗后，卡氏肺孢子虫胞质内出现大量空泡，线粒体、内质网肿胀，核膜破裂。结论 双氢青蒿素主要破坏卡氏肺孢子虫的膜系结构。     

快速鉴定卡氏肺孢子虫

本方法是一种检测卡氏肺孢子虫快速简便的方法,有利于卡氏肺孢子虫肺炎的诊断和治疗。采用过碘酸钠、GMS工作液染色,将经典的六亚甲基四胺银染色步骤简化为二步,染色时间缩短到几分钟,染色效果良好,卡氏肺孢子虫囊壁上的特征性括弧样结构很易察见。     

AIDS患者血清中卡氏肺孢子虫的检测

卡氏肺孢子虫是ＡＩＤＳ患者发生机会性感染常见的病原体 ,能引起肺部感染 ,称为卡氏肺孢子虫肺炎 (ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓｃａｒｉｎｉｉｐｎｅｕｍｏｎｉａ ,ＰＣＰ) ,是一种严重的呼吸系统机会性感染疾病 ,早期有 75 %患者感染上ＰＣＰ ,常成为ＡＩＤＳ诊断的首先表现。ＰＣＰ患者临床可表现为气喘、干咳多、肺部音少 ,胸片可示弥漫性小斑片浸润、肺间质改变、肺纹理增多伴小点片状渗出[1] 。虽然ＰＣＰ患者的临床表现比较明显 ,但ＰＣＰ的临床诊断十分困难。因此 ,需要一种方法敏感特异的检测标本 ,及时、准确诊断出卡氏肺孢子虫。…     

肺孢子虫分类学的研究进展：虫株的遗传多样性

肺孢子虫分类学的研究进展──虫株的遗传多样性寄生虫学教研室叶彬，综述传染病寄生虫病研究所陈雅棠，审校中国分类号Ｒ３８２．３卡氏肺孢子虫（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓｃａｒｉｎｉｉ，Ｐｃ）是引起肺孢子虫肺炎（ＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓｃａｒｉｎｉｉＰｎｅｕ－...     

卡氏肺孢子虫病动物模型建立和虫体形态观察

采用醋酸可的松诱发Wistar大鼠、BALB/C小鼠和家兔感染卡氏肺孢子虫,比较不同动物对卡氏肺孢子虫的易感性。经姬氏染色法、哥氏银染色法等染色后进行虫体形态观察,结果显示,Wistar大鼠卡氏肺孢子虫惑染率最高(100%),虫体量多。不同给药方式对Wistar大鼠卡氏肺孢子虫的感染率无显著性意义。各种染色法可显示肺组织印片或切片的滋养体或包囊。姬氏染色法是显示印片中虫体的可靠方法。改良哥氏银染色法和快速焦油紫法是显示肺组织石蜡切片中包囊的可靠方法。伦氏荧光桃红——肼黄法能良好地显示切片中的滋养体和囊内小体。     

支气管肺泡灌洗液中卡氏肺孢子虫的分离纯化

支气管肺泡灌洗液中卡氏肺孢子虫的分离纯化瞿介明何礼贤李锡莹（上海医科大学中山医院肺科２０００３２）卡氏肺孢子虫（ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓｃａｒｉｎｉ，ＰＣ）已成为器官移植、肿瘤化疗、艾滋病患者并发肺部感染最常见的病原体之一。精确研究该虫体的代谢、吞噬...     

卡氏肺孢子虫感染大鼠模型的建立及表面糖蛋白基因的克隆

目的：建立卡氏肺孢子虫感染大鼠模型并对卡氏肺孢子虫表面糖蛋白基因进行克隆，为进一步对该基因进行表面作前期准备，方法：以地塞米松对大鼠进行免疫抑制，2周后喂予感染卡氏肺孢子虫的大鼠肺组织匀浆，再免疫抑制4周，诱导鼠模产生，经光镜及PCR检测证实阳性后，用PCR法扩增出卡氏肺孢子虫的表面糖蛋白基因并亚克隆入T载体，转化JM109大肠杆菌，结果：经光镜和PCR检测证实实验组大鼠均感染了卡氏肺孢子虫；PCR产物经琼脂糖电泳后，扩增片段的长度为319bp，结论：通过地塞米松免疫抑制和一次性喂予病原体可以建立卡氏肺孢子虫感染大鼠模型。     

用半巢居PCR检测无创性标本诊断卡氏肺孢子虫肺炎的实验研究

目的 无创性诊断卡氏肺孢子虫肺炎。方法 采用一对半引物半巢居DHFR-PCR检测实验大鼠无创性标本-支气管液、血液及活检标本-肺及肝脏组织中的卡氏肺孢子虫DNA。结果 从59只经病理学检查证实的卡氏肺孢子虫肺炎大鼠中采集到的上述四种标本,卡氏肺孢子虫DNA的半巢居DHFR-FCR检出率分别为72．7％(32／44)、37．3％(22／59)、94．9％(56／59)和36．4％(8／22),而DHFR-PCR的检出率则仅为25％、13．6％、71．2％和9．1％。12只低感染度(0-1级)PEP大鼠的无刨性标本中卡氏肺孢子虫DNA的检出率由0提高至41．7％。正常鼠标本及各种病原体对照的半巢居DHFR-PER均为阴性。结论 用半巢居DHFR-PCR无创性地诊断大鼠卡氏肺孢子虫肺炎具有敏感、特异、省时、省力等优点;本研究在血和肝脏中检出卡氏肺孢子虫DNA,揭示在卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型中存在虫血症和肺外卡氏肺孢子虫感染。     

肺癌癌周组织酷似卡氏肺孢子虫感染的炎症反应

目的探讨肺癌病人癌周组织中酷似卡氏肺孢子虫肺炎(pcp)的出现与肺癌病理组织学类型及癌转移的关系，为临床提供治疗和预防的依据。方法肺癌切除标本50例，分别切取肺癌肿块、癌周组织及各组淋巴结，行HE、姬姆萨和改良果氏染色。结果癌周组织中酷似卡氏肺孢子虫肺炎的炎症反应在各肺癌病理组织学类型中均可检出；其炎症反应的病理特点与卡氏肺孢子虫肺炎非常相似，伴发酷似卡氏肺孢子虫肺炎的肺癌出现淋巴结转移的概率大。结论正确区分癌周组织中这种酷似卡氏肺孢子虫肺炎的炎症反应与真正的卡氏肺孢子虫肺炎，同时治疗这种炎症反应，提高病人临床存活率。     

三种保守蛋白系统树支持卡氏肺孢子虫作为古子囊菌的分类地位

目的卡氏肺孢子虫作为肺炎的病原物，其分类地位一直存在争议。近二十年来，关于卡氏肺孢子虫的分子生物学证据多支持其为真菌的观点，但卡氏肺孢子虫在真菌内部的分类地位需要确定。方法本研究在swissprot数据库中搜集真菌和卡氏肺孢子虫中的肌动蛋白、仅微管蛋白和钙调素这三种保守蛋白的氨基酸序列。使用phylip3．6a软件中的邻接法构建三种保守蛋白的系统树，从而探讨卡氏肺孢子虫的分类地位。结果三种蛋白的分子系统树都支持了将卡氏肺孢子虫作为子囊菌的早期分支古子囊菌的分类观点。结论古子囊菌可能并不是一个单起源群。     

机会致病寄生原虫的系列研究

本课题包括：（１）对机会致病寄生虫，包括弓形虫，卡氏肺孢子虫有隐孢子虫动物模型的建立，虫体的分离及提纯；（２）弓形虫感染的循环抗原（ＣＡ）和抗体，用免疫抑制酶联免疫吸附试验（Ｉ－ＥＬＩＳＡ）进行检测；（３）用地高辛标记探针及聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测核酸，自由引物ＰＣＲ鉴别弓形虫株以及生物特性；（４）用流式细胞仪对卡氏肺孢子虫及弓形虫的ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质含量的动力学进行了分析；（５）用激光微束     

大鼠肺微血管内皮细胞的G蛋白亚型鉴定

本实验拟在体外培养大鼠肺微血管内皮细胞 (ＲＰＭＶＥＣｓ)的基础上 ,用免疫细胞化学Ｓ Ｐ法和免疫荧光细胞化学间接法检测ＲＰＭＶＥＣｓ膜Ｇ蛋白亚型。1　材料和方法1.1　材料　　ＤＭＥＭ培养干粉 (美国ＧＩＢＩＣＯ公司 ) ;荧光 (ＦＩＴＣ)结合的羊抗兔抗体、兔抗大鼠ＩｇＧ抗体免疫血清 (北京中山公司 ) ;Ｇｓα、Ｇｉα和Ｇｑα兔抗大鼠抗体 (ＩｇＧ) (ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ .Ｉｎｃ)。1.2　检测ＲＰＭＶＥＣｓＧ蛋白亚型方法1.2 .1　免疫细胞化学Ｓ Ｐ法　　ＲＰＭＶＥＣｓ经 4%多聚甲醛固定 ,3 %Ｈ2 Ｏ2 …     

卡氏肺孢子虫DNA的PCR检测

①目的探讨卡氏肺孢子虫的检测方法及感染状况。②方法收取病人痰液、肺组织及支气管灌洗液，常规方法提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测卡氏肺孢子虫ＤＮＡ，并与吉氏染色结果进行比较。③结果８６例住院病人，卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ检出率为４１．９％，卡氏肺孢子虫包囊吉氏染色法的检出率为１４．９％，两种方法的检出率比较，差异有显著性（ｕ＝６．６３８，Ｐ＜０．０５）。尿毒症、肺癌、血液病和肺部炎症病人卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ检出率分别为３７．５％，６１．５％，５０．０％和２０．８％，差异有显著性（χ２＝９．０１，Ｐ＜０．０５）。痰液、肺组织和支气管灌洗液标本，卡氏肺孢子虫ＤＮＡＰＣＲ的检出率分别为２８．６％，６１．９％和７７．８％，差异有极显著意义（χ２＝１２．３０，Ｐ＜０．０１）。吉氏染色法检测出的１０份卡氏肺孢子虫包囊阳性标本，ＰＣＲ检测皆为阳性；５７份阴性标本，ＰＣＲ检测出１５份为阳性。４份结核标本ＰＣＲ检测皆为阴性。④结论ＰＣＲ技术检测肺组织和支气管灌洗液标本中的卡氏肺孢子虫ＤＮＡ，具有较高的敏感性和特异性     

卡氏肺孢子虫小鼠动物模型的研究

目的：建立卡氏肺孢子虫小鼠动物模型。方法：昆明小鼠１６只，每次皮下注射醋酸可的松１～２ｍｇ，每周２次，诱发小鼠卡氏肺孢子虫肺炎模型。结果：用药５周肺印片即可检出卡氏肺孢子虫包囊，８周后大部分小鼠可检出，总检出率为６８．７５％。姬氏染色肺印片可查见成熟包囊、未成熟包囊，形态典型，是显示肺印片中包囊的可靠方法。ＧＭＳ染色是显示肺组织石蜡切片中包囊的可靠方法。结论：提示小鼠可能是建立卡氏肺孢子虫动物模型的理想动物