NGFIB-β在大鼠视网膜发育过程中的表达变化及与PCNA的相关关系

目的:观察NGFIB-β(nerve growth factor-induced gene B-β,Nurr1)在大鼠视网膜神经细胞发育过程中蛋白表达的动态变化及与PCNA的相关关系,探讨NGFIB-β在视网膜发育过程中的表达意义。方法:石蜡包埋组织切片,免疫组织化学双重染色及Western blot。结果:NGFIB-β在视网膜发育过程中的表达呈现了显著的动态变化,NGFIB-β从E18 d开始在大鼠视网膜组织出现少量表达,阳性表达主要在内核层内缘,随着发育的进行阳性细胞数目明显增多,P3～7 d达到高峰,之后随着细胞的成熟阳性表达又逐渐减少,成熟的视网膜组织内仅见少量阳性细胞,与PCNA的对比观察发现,两者表达在不同部位和不同细胞中,NGFIB-β主要表达在已分化的幼稚神经细胞中,在增殖细胞中不表达;PCNA蛋白从E14 d到P7 d为强阳性表达,P9 d时阳性细胞的数目明显减少,成熟的组织中未见阳性表达。结论:NGFIB-β在大鼠视网膜神经细胞从幼稚到成熟的分化过程中可能有重要调控作用。     

核受体相关因子1在大鼠脑发育过程中的表达研究

目的 观察孤儿核受体相关因子1( Nurr1)在大鼠脑发育过程中蛋白表达的动态变化及其与增殖细胞核抗原(PCNA)的相关关系,探讨 Nurr1表达在神经细胞分化迁移中的意义. 方法 采用石蜡包埋组织切片,免疫组织化学染色及免疫组织化学双重染色. 结果 Nurr1从胚胎12d开始在侧脑室周围出现少量表达,随着发育阳性细胞数目明显增多,而且呈现向脑室远侧分化、迁移的趋势;生后侧脑室周围的阳性细胞明显减少,高量表达出现在生后1～5d的大脑皮层,随着细胞的分化成熟阳性表达又明显减少,成熟的大脑皮层仅见少量阳性表达,与PCNA的对比观察表明,两者表达在不同的部位和不同的细胞中,Nurr1 主要表达在分化、迁移的幼稚神经细胞中,在增殖细胞中不表达. 结论 Nurr1 可能在大鼠脑神经细胞从幼稚到成熟的分化、迁移过程中有调控作用.     

NGFIB-β在大鼠脊髓神经细胞迁移分化中的表达研究

目的:观察孤儿核受体神经生长诱导基因B-β(nerve growth factor-induced gene B-β,NGFIB-β)在大鼠脊髓发育过程中蛋白表达的动态变化及与增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的相关关系,探讨NGFIB-β在神经细胞迁移分化中的表达意义。方法:采用石蜡包埋组织切片,免疫组织化学染色及免疫组织化学双重染色。结果:NGFIB-β阳性表达在脊髓的发育过程中呈现出显著的动态变化,NGFIB-β阳性细胞显示已经分化的形态。NGFIB-β首先在胚胎13天(E13)脊髓组织的背侧出现阳性细胞,E15可清楚观察到阳性细胞呈"扶梯"样迁移方式从背侧向腹侧迁移,随着发育和细胞的成熟,阳性表达明显减少,成熟脊髓组织中未见阳性表达,与PCNA的对比观察表明,两种蛋白分别表达在不同的细胞中,NGFIB-β表达在迁移分化的幼稚神经细胞中,而在有增殖能力的细胞中不表达。结论:NGFIB-β可能在大鼠脊髓神经细胞从幼稚到成熟的迁移分化过程中具有调控作用。     

RA诱导P19细胞神经分化过程中相关蛋白分子的表达变化

目的:研究维甲酸(retinoic acid,RA)诱导P19细胞神经分化过程中与增殖、分化及凋亡相关分子表达变化情况。方法:P19细胞经RA处理4 d后进行分化培养,对分化培养细胞用MAP2抗体进行免疫组织化学染色。在P19细胞分化前、后不同时间点,Western Blot检测细胞周期蛋白(Cyclin D、Cyclin E、Cyclin A、p-CDK2)、生长分化相关蛋白(E2F1、PCNA、GAP43)、MAGE家族蛋白(Necdin、MAGE D1、MAGE H1)及凋亡效应分子(激活型Caspase 3)表达变化情况。结果:RA可诱导P19细胞向神经元分化;Necdin、GAP43和MAGE D1在RA处理后明显上调并在分化过程中保持高水平表达。E2F1、Cyclin D和Cyclin E表达随分化进程呈现逐步升高趋势,而Cyclin A、p-CDK2表达逐步下调。MAGE H1在分化第4 d到达顶峰后下降。PCNA在RA处理4 d时表达下降至最低,在分化早期渐上调后又降至低水平。RA处理后激活型Caspase 3表达明显上调,但在随后分化过程中又下调至对照组水平。结论:RA诱导P19细胞向神经元分化过程中,与细胞生长、分化、增殖及凋亡相关蛋白呈现动态表达变化,为进一步研究这些分子在神经分化中的作用奠定了基础。     

饮酒对小鼠睾丸生精小管一氧化氮合酶、增殖细胞核抗原表达及细胞凋亡影响的研究

目的　探讨酒精对小鼠睾丸的组织结构、内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)、增殖细胞核抗原 (PCNA)及细胞凋亡的影响。　方法　用 5 %、10 %及 15 % 3种不同浓度的酒精作用于 2 2d龄小鼠 ,取睾丸做石蜡切片、HE染色 ;用免疫组织化学方法检测睾丸eNOS、细胞增殖的变化 ;TUNEL法检测细胞凋亡的变化 ,并进行统计学分析。　结果　随着酒精浓度的增大 ,睾丸组织结构发生明显改变 ,生精小管的直径逐渐减小 ,eNOS阳性细胞面积密度逐渐增大 ,单位面积内PCNA阳性细胞和凋亡细胞数目增加 ,高浓度酒精组与其他组差异极显著 (P <0 0 1)。　结论　酒精可使生精小管的直径变小 ,eNOS及PCNA表达增强 ,凋亡细胞增加并随酒精浓度的增大而变化加重。这可能是过量饮酒导致生精细胞减少 ,生殖能力降低的重要因素。     

小鼠出生后肾脏发育过程中的细胞增殖与凋亡

目的：观察小鼠出生后肾脏发育过程中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及细胞凋亡的特征,探讨出生后小鼠肾脏发育过程中细胞增殖与凋亡的规律及其关系。方法：应用免疫组织化学技术和原位末端标记法(TUNEL法)分别检测小鼠出生后1～70d肾脏中PCNA阳性的细胞和凋亡细胞。结果：小鼠出生后1～70d,皮质中的肾小体、肾小管、髓放线以及髓质中的肾小管和集合管的细胞,早期增殖活跃,随着肾脏发育成熟而表达逐渐减弱。同时,也存在着细胞凋亡现象,且凋亡高峰一般出现在增殖高峰之后。结论：细胞增殖与凋亡在小鼠生后肾脏发育的整个过程中普遍存在,生后1～7d细胞增殖旺盛,增殖高峰之后出现凋亡高峰,生后28～70d两者活动均减弱。     

Expression of apoptosis protein caspase 3 in developing mouse cerebellum

目的:观察C57/BL6小鼠小脑发生发育过程中的凋亡蛋白caspase 3表达变化,探讨小脑发生发育的可能机制.方法:应用免疫组织化学技术、免疫印迹对胚龄(E)12、14、16、18、20 d和生后(P)1、3、7、14、21、28 d的仔鼠及生后2、3、6、15个月的C57/BL6小鼠小脑的形态变化及caspase 3的分布进行系统观察和定量分析.结果:免疫组织化学结果显示,E12 d～P21 d,caspase 3在小鼠小脑中均有阳性表达,主要分布在神经元的细胞质和细胞核中.E12 d～P7d,caspase 3表达逐渐增多,P14 d～P21 d逐渐减少.免疫印迹分析表明,E18 d～3个月,caspase 3蛋白表达先逐渐增加后逐渐减少,P7d达高峰,3个月后维持在较低水平.结论:小鼠小脑的片层化结构主要形成于胚胎期,出生后片层化结构逐渐发育成熟,小脑得以迅速发育长大.此外,在小脑发育中存在着大量的细胞凋亡现象,其可能在小脑的塑形中发挥重要的作用.     

幽门螺杆菌感染与胃黏膜增殖及与胃癌预后的关系

目的 :探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)在幽门螺杆菌 (HP)感染的不同胃黏膜增殖性病变演进中的表达情况及其相互关系 ,并着重探讨HP感染对胃癌预后的意义。方法 :对 14 5例经病理证实的不同胃黏膜病变用免疫组化方法检测PCNA标记指数 (LI) ,Warthin Starry(W S)法检测HP感染。结果 :在浅表性胃炎 (CSG)、萎缩肠化性胃炎 (CAG +IM)、异型增生 (DYS)、早期胃癌和进展期胃癌中 ,PCNA LI为 2 4 0 0± 17 88,4 6 5 9± 18 15 ,6 0 5 9± 2 0 2 6 ,5 7 92± 15 15 ,71 0 8± 2 1 2 5。在IM、DYS、胃癌组织均高于CSG(P <0 0 5 )。PCNA阳性表达与胃癌组织类型、浆膜浸润和淋巴结转移密切相关 ,而且Bor rmannIV高于早期胃癌 (P <0 0 5 )。PCNA阳性表达与肠型胃癌HP感染有关。CAG +IM、DYS和GC组PCNA阳性表达中HP感染者高于阴性者。胃癌HP阳性者 5年存期短于HP阴性者。结论 :PCNA基因表达与胃黏膜增殖和恶化有关。HP感染和胃黏膜增殖和恶化有关 ,HP感染与胃癌预后有关。     

小鼠胚胎食管和肠上皮细胞增殖与凋亡

目的：研究小鼠胚胎食管和肠上皮细胞的增殖与凋亡。方法：体视学方法观测E11-17d ICR胎鼠食管、十二指肠和结肠上皮的增殖与凋亡,免疫组化法显示Bcl-2、P153、Bax在三段消化管上皮中的表达。结果：三段消化管的上皮细胞密度与凋亡小体密度和分裂细胞密度间未见一致的相关性。凋亡小体分布食管上皮各层,而肠上皮中主要在游离面。Bcl-2和p53在食管、小肠、结肠上皮细胞中表达峰值分别在E11d—13d和E11d～14d,Bax的表达峰值分别为E11d、E14d、E15d。结论：上皮细胞密度对上皮细胞分裂和凋亡的影响不明显。食管和肠上皮中凋亡小体分布的不同可能与形态发生方式不同有关。Bax和Bcl-2可能分别具有促进和抑制肠上皮细胞凋亡的作用;p53与上皮细胞凋亡的关系不密切。     

Hyper-IL-6重组腺病毒治疗大鼠急性肝衰竭的实验研究

目的 探讨重组腺病毒介导的超级白细胞介素6(Hyper-IL-6)对大鼠急性肝衰竭的治疗作用及机制.方法 80只急性肝衰竭模型大鼠随机分为:未感染组、AdO组、AdlL-6组、AdHIL-6组,分别予腹腔注射生理盐水、AdO、AdIL-6、AdHIL-6,后进行肝功能指标、肝脏病理学及肝细胞原位凋亡检测,并观察增殖细胞核抗原(PCNA)、caspase-3在肝组织中的表达情况及大鼠14 d存活率.结果 AdHIL-6组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TB)含量及凋亡指数明显降低,而肝组织PCNA表达明显增高(P<0.01),肝组织病变减轻,caspase-3表达阳性,14 d存活率较高.结论 Hyper-IL-6对急性肝衰竭大鼠有明显的促肝细胞增殖及抗肝细胞凋亡效应,能有效改善肝功能及肝组织学状况,提高肝衰竭大鼠存活率.     

四逆汤对兔球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的: 观察四逆汤(SND)对兔腹主动脉球囊拉伤后血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响,探讨VSMCs增殖和凋亡在动脉损伤后再狭窄(RS)中的作用及SND预防PCI术后RS的可行性。方法: 建立兔腹主动脉球囊拉伤模型,用SND进行干预,电镜观察中膜和内膜增殖和凋亡的VSMCs超微结构特征。用α-actin标记VSMCs并检测其增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期素E(cyclin E)的表达;Tunel法检测凋亡细胞,计算增殖和凋亡指数。84 d亚组行腹主动脉造影观察损伤段血管的狭窄程度。结果: SND治疗组中膜内膜VSMCs增殖程度明显轻于对照组,凋亡指数明显高于对照组(P<0.05),而且细胞凋亡持续的时间较长,到术后14 d才达高峰,以后才逐渐下降。术后84 d亚组血管造影显示治疗组损伤段腹主动脉狭窄程度明显小于对照组(P<0.05)。结论: 四逆汤能有效抑制VSMCs增殖,诱导其凋亡,减轻血管损伤后的狭窄程度。     

人胎视网膜细胞凋亡与小白蛋白免疫阳性神经元的发育

目的：观察人胎视网膜细胞凋亡与小白蛋白Parvalbumin,PV)免疫阳性神经元的分布与发育。方法：不同孕龄的人胎16例,TUNEL法标记凋亡细胞,ABC免疫细胞化学方法观察PV免疫阳性神经元的发育。结果：（1）细胞凋亡观察：12周人胎视网膜未见凋亡细胞;15周、17周凋亡细胞较多,大小不一,分布于视网膜的全局;20周凋亡细胞主要集中在内核层,数量减少;28周凋亡细胞仅见于内核层,呈指环样外观,着色较深,数量较20周减少明显。（2）PV免疫阳性神经元发育：12周人胎视网膜未见PV免疫阳性神经元;15周、17周视网膜节细胞层和内核层有弱阳性的PV免疫阳性神经元的分布与20周相似,但内核层的数量减少,呈整齐的带状排列,着色增强。结论：在胚胎28周视网膜神经元之间的突触联系已基本建立,而PV免疫阳性神经元发育和细胞凋亡在时间和数量变化上的一致性提示Ca^2 在视网膜的发育中起重要作用。     

自然流产患者绒毛滋养层细胞PCNA和caspase-3的表达

目的从细胞增殖与细胞凋亡的角度探讨自然流产的发生机制。方法取正常早孕流产和自然流产病例各20例的绒毛组织,光镜观察绒毛形态学变化;免疫组织化学SP法检测增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡蛋白酶caspase-3在滋养层细胞中的表达。结果自然流产绒毛组织均出现不同程度的退行性改变,细胞滋养层的增殖指数较对照组降低,而细胞滋养层、合体滋养层的凋亡指数却明显升高。结论凋亡蛋白酶caspase-3可能参与自然流产的发生机制。     

碱性成纤维细胞生长因子对兔晶体上皮细胞的增殖作用

观察碱性纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF)对兔晶体上皮细胞（rabbit lens epithelial cells,RLECs)的促增殖作用,以及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,用第2－3代培养细胞,用MTT法测定细胞增殖,用免疫组织化学法观察PCNA的表达,流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果显示bFGF可促进兔晶体上皮细胞的增殖,尤其是浓度为10μg/L作用最明显;正常细胞组PCNA表达呈阴性,添加bFGF组PCNA表达呈强阳性;并显示进入S期的细胞明显增加,提示bFGF是促进兔晶体上皮细胞增殖的重要因素。     

X线照射致胚胎大鼠皮质内结构异常

目的探讨胚胎期X线照射引起大鼠皮质内异常结构的形成机理。方法选取妊娠14日(E14)大鼠接受X线(剂量为1.0Gy)照射。采用HE染色、Fluoro Jade B染色及增殖细胞核抗原(PCNA)抗体免疫组化染色观察胚脑的皮质构筑。结果HE染色观察到E14大鼠接受X线照射后大量细胞脱落入侧脑室并在2日后完全清除,Fluoro Jade B染色显示此脱落细胞为阳性。E16及E18的皮质内出现玫瑰环样结构及脑室区的凹陷,且PCNA阳性细胞表达于玫瑰环样结构及脑室区凹陷的细胞株。结论E14大鼠受X线照射可引起广泛的大脑皮质细胞构筑异常和细胞增殖。     

N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜感光细胞损伤模型中Müller细胞增殖和细胞因子分泌的变化

目的:建立N-甲基-N-亚硝脲(N-methyl-N nitrosourea,MNU)损伤视网膜的模型,研究视网膜神经元凋亡对Müller细胞生物学特性的影响及神经营养因子的表达变化。方法:腹腔注射MNU建立视网膜损伤模型,免疫荧光染色方法研究感光细胞缺失对Müller细胞的生物学特性的影响,并检测主要神经营养因子表达的变化。结果:TUNEL法显示,腹腔注射MNU后2 d,视网膜外核层细胞凋亡现象明显。核增殖抗原(PCNA)及细胞周期素CyclinD_1的表达明显增高。与此同时,Müller细胞也开始表达神经干细胞抗原巢蛋白(nestin);RT-PCR显示胰岛素样生长因子(IGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和肝细胞生长因子(HGF)mRNA的表达均升高。结论:在视网膜受到损伤时,Müller细胞增殖、去分化呈现出干细胞的特性。而视网膜中IGF、bFGF和HGF等细胞因子的表达明显增高,提示视网膜损伤后可能通过大量分泌细胞生长因子,促进Müller细胞的增殖。     

内皮型一氧化氮合酶和神经型一氧化氮合酶在胚胎小鼠肾发育过程中的表达

目的:观察内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和神经型一氧化氮合酶(nNOS)在胚胎小鼠肾发育过程中的时空性表达,探讨它们在小鼠发育早期肾组织中的作用.方法:选取胚龄(E)13、14、15、16、18d及新生组(P)0d小鼠,应用免疫组织化学方法显色进行图像分析;用免疫印迹法测定各组小鼠肾组织中的eNOS以及nNOS的含量.结果:免疫组织化学显色显示,eNOS阳性表达最早出现于E14d的生肾区;E16d时在生肾区表达减弱,近端小管呈强阳性;P0d时远端小管可见弱表达,集合管也有一定程度表达,致密斑无表达.nNOS在E13d时即表达于皮质输尿管芽;E16d时近端小管弱表达,远端小管强表达;P0d时在远端小管和致密斑强表达,近端小管弱表达,集合管无表达.图像分析和免疫印迹法结果显示,eNOS和nNOS在E14d含量较少,随后逐渐增多,至P0d达到高峰.结论:在胚胎小鼠肾发育过程中,eNOS和nNOS的表达有一定的时空顺序,它们对肾组织的发育及形成起一定的作用.     

淀粉样β蛋白42在正常大鼠视网膜节细胞中的发育及表达

目的:探讨淀粉样β蛋白42(Aβ42)在正常大鼠视网膜节细胞巾的发育及表达.方法:SD大鼠分为正常见光组和避光饲养组.眼球做冷冻切片和视网膜裱片,采用免疫细胞化学方法检测Aβ42的表达.结果:出生后3、6、13 d组大鼠视网膜节细胞未见Aβ42表达,15 d(见光后)以后开始有表达,并逐渐增多,90 d组表达最多.其中15 d和25 d组在避光饲养下未见表达.结论:Aβ42在正常大鼠出生后第15日开始表达,并逐渐上调;在15 d后避光饲养动物的视网膜节细胞中未见表达,提示该蛋白在视网膜视觉功能的发育中可能发挥了重要作用.     

肺鳞癌及癌前病变PCNA、p16、p21、p53表达及细胞凋亡观察

目的 :观察肺癌癌变过程中细胞增殖与凋亡活性的改变 ,分析它们在肺癌发生发展过程中的意义并探讨其调控基因的作用。方法 :收集 86例支气管黏膜活检标本 ,采用免疫酶标法对各组病例进行PCNA、p5 3、p2 1、p16蛋白表达检测 ,用 3′ OH末端DNA原位标记技术进行凋亡细胞检测。结果 :在正常与鳞化组 ,PCNA只在极个别细胞中表达 ,p2 1、p5 3未见表达 ,p16阳性表达率分别为 10 0 %、93 3% ,凋亡细胞阳性率为 (2 9± 5 6 ) %、(2 4± 4 7) %。轻、中度非典型增生组 ,PCNA也只在少数细胞中表达 ,p2 1、p5 3没有表达或极少数细胞表达 ,p16表达率分别为 91 7%、83 3% ,凋亡细胞阳性率分别为 (2 2 0± 4 3) %和 (18 5± 3 7) %。在重度非典型增生与高分化鳞癌组织中PCNA阳性率显著增加 ,而凋亡细胞阳性率却明显减少 ,p2 1、p5 3表达增加 ,p16显著下降。结论 :支气管黏膜癌变是一个由量变到质变的过程 ,而中到重度非典型增生是这一过程中的关键性阶段 ,不仅增殖活性增加 ,而且凋亡活性下降 ,它们的调控基因p16、p2 1、p5 3也发生了显著的变化 ,可能起着重要的调节作用。     

精索内动静脉高位结扎iNOS的表达与睾丸生精细胞增殖和凋亡的关系

目的：探讨精索内动静脉高位结扎术后，诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase．iNOS）的表达与生精细胞增殖和凋亡的关系。方法：免疫组化结合计算机图像分析系统检测iNOS阳性细胞光密度值；免疫组化方法检测并计算PCNA增殖指数（PCNA-Labeling index，PI）；原位末端标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick-endlabeling method，TUNEL）检测生精细胞凋亡指数（apoptosis index，AI）。分析iNOS的表达与增殖、凋亡的相关性。结果：iNOS在术后3-15d表达增强，第7d呈强阳性表达。结扎组生精细胞PCNA增殖指数（PI）明显低于对照组（P〈0．01），凋亡细胞指数（AI）明显高于对照组（P〈0．01）。结论：精索内动静脉高位结扎，iNOS的表达与生精细胞PCNA增殖指数呈负相关，与生精细胞凋亡指数呈正相关。iNOS基因表达增强是生精细胞增殖减少和凋亡增加的重要原因。