福建省耐多药结核分枝杆菌相关耐药基因突变特征分析

目的分析福建省耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因rpoB、katG和rpsL的突变特征,为建立快速分子药敏方法提供科学依据。方法收集监测点的痰培养分离菌株进行菌种鉴定、药物敏感性试验。选取46株耐多药结核分枝杆菌和15株全敏感株,扩增rpoB、katG和rpsL的基因片段,测序,比对分析。结果全敏感株rpoB和rpsL基因未检测到突变。耐多药菌株rpoB、katG和rpsL基因的突变率分别为91.30%,80.43%,30.43%。耐多药菌株三个基因的突变率均高于全敏感株的突变率,差异均有统计学意义(χ2值分别为46.67,4.29和11.58,P均<0.05)。katG、rpoB基因同时存在突变的耐多药菌株占80.43%,三个耐药基因均有突变的耐多药菌株占30.43%。结论福建省耐多药结核分枝杆菌的常见突变位点为rpoB531和rpoB526,katG315,rpsL43。     

合肥地区异烟肼耐药结核分枝杆菌KatG基因突变的分子特征

目的 了解合肥地区结核分枝杆菌异烟肼(Isoniazid,INH)耐药株katG基因突变特点.方法 应用PCR-直接测序法对合肥地区肺结核病人痰液中分离的86株结核分枝杆菌的katG基因731bp序列进行测定分析.结果 86株结核分枝杆菌中67株对INH耐药,19株对INH敏感;67株耐INH临床分离株中PCR成功扩增61株,其中56株发生katG基因突变,突变率为91.8％ (56/61);katG基因发生联合突变的有30株,突变率为49.2％ (30/61),26株发生katG基因单位点突变,突变率为42.6％ (26/61).突变位点主要集中在463位精氨酸和315位丝氨酸,突变率分别为93.4％(57/61)和42.6％ (26/61).而在19株INH敏感株中发现有78.9％ (15/19)株存在Arg4631eu突变,突变形式与INH耐药株相同.结论 在合肥地区,KatG基因315位密码子突变是菌株INH表型耐药的重要分子基础,以Ser315Thr错义突变为主.KatG基因463位密码子突变与INH耐药表型没有相关性,不是结核杆菌INH耐药的分子标志.该位点突变可能是基因多态性,与结核菌治疗带来的选择性压力无关.     

乌鲁木齐市耐多药结核分枝杆菌基因突变特征分析

目的 了解耐四种一线抗结核药物结核分枝杆菌的有关基因突变特征。方法 对19例耐多药结核病患者和254例全敏结核病患者痰液标本中分离的结核分枝杆菌进行药物敏感性试验,提取其DNA进行PCR扩增,对扩增产物测序并与标准株H37Rv进行比对。结果 19株耐多药结核杆菌和254株全敏结核杆菌均未检测到耐异烟肼基因inhA突变;耐多药组突变率最高的为耐异烟肼katG基因,突变位点为315;耐利福平的突变基因是rpoB,耐药位点为526和531,531位点突变率高于526位点;耐乙胺丁醇的突变基因是embB,耐药位点为206;耐链霉素的突变基因是rpsL和rrs,耐药位点分别为43和1401,rpsL基因的突变率高于rrs基因。结论 耐多药结核分枝杆菌耐异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素的突变基因分别为katG、rpoB、embB、rpsL和rrs,这对今后乌鲁木齐市耐多药结核病的快速诊断和控制提供了理论依据。     

乙胺丁醇耐药表型与耐药基因embB突变的关系

目的:探讨乙胺丁醇(Ethambutol,EMB)耐药基因embB点突变与耐药表型间的关系,分析点突变与耐多药、耐药种类数的关系以及Met306突变检出耐多药结核。方法:对来自7省市的301株结核分枝杆菌临床分离株进行比例法药敏试验,并对embB、katG、rpoB耐药决定区进行扩增测序检测基因突变位点。结果:Met306突变率在EMB耐药株(48.5%)与EMB敏感株(39.1%)间差异无统计学意义,而在耐多药组(47.1%)与非耐多药组(9.4%)间差异有统计学意义,且随耐药种类数增加突变率增加。对耐多药株,rpoB突变与耐多药表型符合率为80%,增加Met306突变检测后与表型符合率提高至93.3%,katGSer315突变与耐多药表型符合率为80%,增加Met306突变检测后符合率提高至86.7%,而三个耐药基因联合能检测出97.8%的耐多药株。结论:embBMet306突变作为EMB耐药的分子标志值得商榷,但其突变能作为耐多药结核检测的分子标志,与公认的耐多药株分子标志-rpoB联合能提高耐多药株的检出率。     

重庆市结核病人耐药结核杆菌katG315分子突变特征研究

目的 了解重庆结核分支杆菌的katG315突变特征,评价其作为诊断异烟肼(Isoniazide,INH)耐药结核杆菌分子标记物的临床应用价值.方法 采用DNA测序方法 .分析重庆市结核病人痰中分离的97株INH耐药、敏感结核杆菌菌株间的katG基因突变特征,与传统药敏实验进行诊断学试验评价katG315突变作为INH耐药株分子标记物的临床应用价值.结果 49株INH耐药结核杆菌中katG315突变率为75.5%,而48株INH敏感结核杆菌中未见katG315突变;INH高度耐药菌株中katG315的突变率为88.5%,显著高于INH低度耐药株的60.9%(P＜0.01);耐多药结核杆菌中katG315突变率为89.7%,显著高于单耐INH的结核杆菌的55.0%(P＜0.05),耐2种药物及以上药物的结核杆菌中的katG315突变率均显著高于单耐INH菌株(P＜0.05);来自复治病例的耐INH菌株中的katG315突变率为95%,显著高于来自初治病例的INH耐药菌株的62.1%(P＜0.05);katG315突变诊断INH耐药菌株的诊断学试验评价主要指标为:灵敏度=75.5%;特异度=100%;准确度=87.6%;Youde指数=75.5%.结论 katG315突变是重庆地区结核杆菌产生INH耐药性的主要分子机制,且与耐药程度和耐药数量呈显著有关,其作为INH耐药菌株诊断的分子标记物具有良好的临床应用价值.     

江苏省结核分枝杆菌耐药相关基因突变特征研究

目的探讨江苏省结核分枝杆菌耐药相关基因的基因型特点及其与耐药表型的关系,为开展耐药结核病快速诊断提供依据。方法通过基因测序技术,分析结核分枝杆菌利福平(rifampin,RFP)耐药相关基因rpoB和异烟肼(isoniazid,INH)耐药相关基因katG不同位点的突变频率,探讨基因型与耐药表型的关系。结果共收集新登记涂阳病人菌株283株,其中255株结核分枝杆菌成功测序,包括38株RFP耐药株,50株INH耐药株,48株链霉素耐药菌株,21株乙胺丁醇耐药株,34株耐多药菌株。28株(11.0%)在rpoB 81bp的基因核心区发生了点突变,21株出现单个位点突变外,7株出现两位点突变,突变形式主要为rpoB531 TCG→TTG单个位点突变。30株(11.8%)发生了katG基因区的突变,所有突变形式为katG315AGC→ACC。rpoB基因突变全部发生于RFP耐药菌株中,katG基因突变全部发生于INH耐药菌株中。结论检测rpoB与katG基因位点的突变对判断江苏省地区耐药结核以及耐多药结核有重要的价值,可以为开展耐药结核病早期诊断提供科学依据。     

结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特征研究

目的了解郑州市结核分枝杆菌耐利福平临床分离株的相关耐药rpoB基因突变特征。方法应用PCR方法对40株结核分枝杆菌利福平耐药、40株结核分枝杆菌利福平敏感临床分离株及1株H37Rv结核分枝杆菌标准株中包含"利福平耐药决定区(RRDR)"在内的rpoB基因片段(385bp)进行扩增,并将扩增产物进行测序,以H37Rv结核分枝杆菌标准株的DNA序列作为参比序列,分析结核分枝杆菌临床分离株的突变特征。结果 40株结核分枝杆菌利福平敏感临床分离株及1株H37Rv结核分枝杆菌标准株均未检测到突变,结核分枝杆菌耐利福平临床分离株中有36株检测到突变,突变率92.3%,且突变均位于RRDR区域内;突变位点为8个,共有8个突变类型;最常见的突变热点依次为531位点,该位点突变率为64.1%;526位点,其突变率为12.8%和516位点,其突变率为10.3%。结论 rpoB基因是郑州市结核分枝杆菌对利福平耐药的最相关基因,其中在RRDR内的531位点基因突变率最高,并可通过对rpoB基因的突变检测,对耐多药结核病进行预测。     

95株耐多药结核分枝杆菌katG基因序列分析

目的分析广州地区耐多药结核分枝杆菌katG基因突变的分子特征。方法应用PCR-测序法对来自广州地区100株耐多药结核分枝杆菌株katG基因的261～330位密码子长度约210 bp目的片段进行序列测定,并与结核分枝杆菌标准株H37Rv菌株katG基因序列(GenBank:X68081.1,1-4810)进行对比,并应用DNASTAR软件推测氨基酸突变情况。在PCR和基因序列测定中,引物设计相同,上、下游引物分别为5'-GAAACAGCGGCGCTGATCGT-3和5'-GTTGTC-CCATTTCGTCGGGG-3'。结果 100株耐多药结核分枝杆菌菌株中,95株成功扩增出katG基因,95株中有70株呈现katG基因突变(73.68%);基因突变类型均为点突变,突变均发生于315位点,未见插入或缺失型基因突变;氨基酸突变包括3种类型,其中:66株发生AGC(Ser)→ACC(Thr)突变即S315T(94.28%),2株发生AGC(Ser)→ATC(Ile)突变即S315I(2.86%),2株发生AGC(Ser)→AAC(Asn)突变即S315N(2.86%)。结论在所测菌株范围内,广州地区耐多药结核分枝杆菌katG基因突变率和突变类型具有其特点。     

福建省耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因突变特征

目的初步分析福建耐多药结核病(multi-resistant tuberculosis,MDR-TB)临床分离结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药相关基因突变情况。方法自福建福州肺科医院收集耐多药结核分枝杆菌临床分离菌株,采用PCR测序技术测定利福平和异烟肼耐药相关基因,包括rpoB、katG、inhA和mabA-inhA,并与标准菌株基因序列比对,分析基因突变特点。结果共对67株MDR-TB菌株进行了分析,91.04%的菌株在rpoB81 bp RRDR区发生突变,其中,88.06%(59/67)的MDR-TB菌株在rpoB531、526和516位发生突变;79.10%的菌株在katG、inhA或mabA-inhA上发生突变,59.70%(40/67)的菌株在katG315或者mabA-inhA(-15)位发生突变,没有检测到同时在inhA结构基因和基因调节区发生突变的菌株。结论 PCR-DNA测序分析技术可以用于检测MDR-TB临床分离菌株对RFP和INH的药物敏感性。     

耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpsL基因特征分析

目的阐明宁波地区耐多药结核分枝杆菌rps L基因突变特征,为本地区耐多药结核病的有效预防控制提供科学依据。方法从宁波市疾病预防控制中心共收集67例耐多药结核分枝杆菌临床分离株,包括耐链霉素(SM)菌株40株和SM敏感菌株27株。采用PCR直接测序法分析rps L基因的分子突变特征。结果 40株耐SM菌株中有31株rps L发生突变,突变率为77.50%,突变类型主要为Lys43Arg和Lys88Arg;27株SM敏感菌株中有4株发生突变,突变率为14.81%,突变类型主要为Ala119Gly。耐多药结核分枝杆菌中SM耐药株rps L基因突变率明显高于SM敏感株,两者之间差异有统计学意义(χ~2=25.387,P0.05)。结论宁波地区耐多药结核分枝杆菌rps L基因突变与链霉素耐药高度相关,其中Lys43Arg突变是主要突变类型,耐药基因突变类型存在地区差异。     

浙江地区耐多药结核分枝杆菌基因突变特征分析

目的 分析浙江地区耐多药结核分枝杆菌(M.tuberculosis complex,MTBC)异烟肼(isoniazid,INH)和利福平(rifampicin,RIF)耐药相关基因突变特征.方法 对患者痰标本阳性培养物进行菌种鉴定,提取耐多药菌株DNA,应用PCR法对inhA、katG和rpoB RRDR区进行扩增,...     

Molecular snapshot of drug-resistant and drug-susceptible Mycobacterium tuberculosis strains circulating in Bulgaria

We report results of the first study on the molecular basis of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis strains currently circulating in Bulgaria. The study panel consisted of 133 (including 37 drug-resistant) isolates recovered from newly diagnosed, adult pulmonary TB patients from different regions of Bulgaria in 2005-2006. Three types of the rpoB mutations were found in 20 of 27 RIF-resistant isolates; rpoB S531L was the most frequent. Eleven (48%) of 23 INH-resistant isolates had katG S315T mutation. inhA -15C>T mutation was detected in one INH-resistant isolate (that also had katG315 mutation) and three INH-susceptible isolates. A mutation in embB306 was found in 7 of 11 EMB-resistant isolates. Comparison with spoligotyping and 24-VNTR locus typing data suggested that emergence and spread of drug-resistant and MDR-TB in Bulgaria are not associated with any specific spoligotype or MIRU-VNTR genotype.     

New insight into the molecular characterization of isoniazid and rifampicin resistant Mycobacterium tuberculosis strains from Saudi Arabia

Data on the genetic variation of isolates of Mycobacterium tuberculosis and spectrum of mutations determining resistance to principal anti-tuberculosis drugs isoniazid (INH) and rifampicin (RIF) have not yet been studied in Saudi Arabia. One hundred and fifty-one clinical isolates of M. tuberculosis from different regions in the country showing resistance to RIF and INH were subjected to drug susceptibility testing, characterization of mutations conferring drug resistance and genotyping. Phenotypically 17 (11.3%) isolates were resistance to RIF, 75 (49.6%) were resistant to INH and 59 (39.1%) were resistant to both RIF and INH, respectively. Sixteen (10.6%), 74 (49%) and 56 (37.1%) were determined as resistant to RIF, INH and to both by line probe assay. High frequency of rpoB 531 mutations (67.1%) in RIF resistant strains and katG 315 mutations (65.2%) in INH resistant strains were found. Mutations responsible for INH resistance, katG 315 (P value<0.001, odds ratio: 1.81, 95% CI [1.51, 2.18]) and inhA-15 (P value - 0.004, odds ratio: 1.48, 95% CI [1.22, 1.8]) were predominant among the newly diagnosed cases. Beijing strains were significantly associated with multi drug resistance and mutations in combination of rpoB531 and katG315 (P value - <0.001, odds ratio: 6.83, 95% CI [2.65, 17.58]). In addition multi drug resistance was significantly associated with treatment history (P value<0.001, odds ratio: 3.16, 95% CI [2.14, 4.67]). Furthermore, a higher rate (39.3%) of clustering among the multidrug resistant strains particularly with Beijing family (52.9%) was observed. Saudi Arabia harbors highly diverse drug resistant M. tuberculosis population with an ongoing transmission which needs to be immediately managed.     

福建省复治肺结核患者耐药现况与其影响因素分析

摘要:目的　了解福建省复治涂阳肺结核患者耐药现状,探讨其耐药的影响因素。方法　采用统一的患者信息表收集30个监测点复治涂阳患者的社会经济和既往临床诊疗信息。培养阳性菌株采用比例法进行异烟肼（H）、利福平（R）、乙胺丁醇（E）、链霉素（S）、卡那霉素（Km）、氧氟沙星（Ofx）的耐药性测定。对硝基苯甲酸（PNB）培养法鉴定结核分枝杆菌复合群。采用比值比（OR）评估耐药结核病患者和耐多药（MDR）患者的危险因素。结果　复治患者男性居多（占84.15%）,总耐药率为37.32%,MDR率为15.89%,广泛耐药（XDR）率为0.35%;任一耐药顺位依次为:R（25.00%）,H（21.48%）,S（16.55%）,E（15.49%）,Ofx（7.75%）和Km（4.23%）;耐多药结核病（MDR-TB）耐药谱有10种,其中同时对S、H、R和E 耐药占46.67%;多耐药谱有14种,以耐二联药物为主（占68.00%）;治疗2次以上的患者耐药率和MDR率均明显高于治疗1次的患者OR分别为2.43,3.38;P值分别为0.005,0.001。结论　福建省复治结核病患者的耐药及MDR-TB问题仍然严重,反复多次治疗是复治患者耐药及MDR-TB的主要危险因素。     

某院结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因特征

目的了解某院结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药相关基因rpo B及异烟肼耐药相关基因kat G、inh A的突变特征,为耐药结核病的预防和治疗提供科学依据。方法收集83例结核病患者痰标本,分离培养MTB,采用BD960液体法检测利福平、异烟肼耐药性,提取菌株DNA,采用聚合酶链反应扩增rpo B、kat G、inh A全基因,对扩增产物进行测序分析。结果 83株样本中,39株对利福平耐药,51株对异烟肼耐药。耐利福平菌株rpo B基因突变率为97.44%(38/39),531位点突变率60.53%(23/38),526位点突变率23.68%(9/38),32株出现多位点联合突变。耐异烟肼菌株kat G基因突变率为98.04%(50/51),共发现16种突变类型,其中以kat G 315位点突变为主,占70.00%(35/50),1株为kat G与inh A联合突变。结论该院耐多药MTB产生耐药性与rpo B和kat G基因突变相关,检测MTB耐多药相关基因突变可为早期快速诊断耐药结核病提供参考依据。     

华东农村地区利福平耐药结核病的 分子流行病学特征研究

目的 描述华东农村地区利福平耐药结核分枝杆菌(结核菌)的耐药相关分子特征和成簇性规律.方法 以浙江省和江苏省两个农业县结核病防治所一年内所有登记的结核菌检测阳性肺结核病例为研究对象,收集痰标本、培养分离菌株,并进行问卷调查;对培养获得的结核菌株采用比例法进行药敏试验.对获得的65株利福平耐药结核菌株进行rpoB基因利福平耐药决定区和katG基因异烟肼耐药相关热点区测序,采用间隔区寡核苷酸分型(spoligotyping)方法识别北京株,采用IS6110限制性内切酶多态指纹技术(RFLP)对分离株进行基因分型和成簇性分析.结果 92%(60/65)的利福平耐药菌株在利福平耐药决定区531位(57%)、526位(29%)或516位(11%)发生突变,82%(49/60)的rpoB基因突变菌株为耐多药结核菌(MDR-TB);spoligotyping识别H{54株(83%)北京家族菌株;IS6110-RFLP发现共有24株(37%)利福平耐药菌株成簇,形成11个簇,提示簇中病例的结核菌近期传播.所有成簇菌株都为MDR-TB.共有7个簇,簇内菌株具有不完全相同的利福平耐药相关的rpoB基因突变.分析可能与成簇性相关的因素,初治病例在菌株成簇患者中的比例高于在菌株非成簇患者中所占的比例(初治/复治:OR=3.342,95%CI:1.081～10.32).结论 在其他耐药结核菌(如异烟肼耐药结核菌)中进一步产生对利福平的选择性耐药和生长,很有可能是利福平耐药结核病流行的基础,而既往较长的不规则治疗史也为利福平耐药的发生和传播提供条件.