内源性一氧化氮对致敏大鼠淋巴细胞凋亡的影响

观察致敏大鼠支气管肺组织Ｆａｓ抗原表达、支气管肺泡灌洗液中淋巴细胞及脾Ｔ淋巴细胞凋亡的情况及左旋精氨酸 (Ｌ ａｒｇ)、硝基左旋精氨酸甲酯 (Ｌ ＮＡＭＥ)对其影响。探讨哮喘炎症发生不易被消除的原因与淋巴细胞凋亡情况及与内源性ＮＯ的关系。材料与方法仪器与试剂 :流式细胞仪为美国ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ产品 ,免疫组化ｓＡＢＣ法检测支气管肺组织Ｆａｓ抗原试剂盒购于武汉博士德生物工程公司。体内实验 :雄性ＳＤ大鼠 2 4只 ,体重 2 0 0± 50ｇ ,由同济医科大学实验动物中心提供 ,随机分为 4组 ,每组 6只 ,Ａ组为正常对…     

一氧化氮与细胞凋亡

一氧化氮是具有很强生物活性的介质，广泛分布于各种组织器官中。除公认的细胞毒性、抑制血小板聚集、参与神经内分泌活动、加重脑缺血性损伤等作用外，还发现ＮＯ参与细胞凋亡过程，但诸多报道意见不一，反映了其作用的复杂性。     

低氧对神经干细胞增殖与凋亡的影响

神经干细胞是具有高度自我更新能力和多项分化潜能的神经前体细胞。研究表明,低氧状态下可激活神经干细胞,从而促使其增殖,但近年来尚有试验证明,在低氧环境下,神经干细胞表现为增殖的同时也伴随着部分细胞凋亡的发生。本文即综述了低氧环境下神经干细胞增殖与凋亡最新的可能发生机制。     

CGRP通过NOS/NO通路抑制低氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡

目的研究降钙素基因相关肽(CGRP)是否通过调节一氧化氮(NO)抑制低氧心肌细胞的凋亡。方法选用H9c2细胞建立低氧损伤模型,CGRP和/或一氧化氮合酶(NOS)抑制剂(L-NAME)预处理细胞,检测低氧后细胞存活率,NOS、NO和凋亡相关蛋白表达水平。结果低氧使心肌细胞存活率降低(P0.05),诱导性一氧化氮合酶(i NOS)表达明显增加(P0.001),内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-e NOS)表达降低(P0.001),NO释放减少(P0.05),P53、caspase-3和细胞色素C(cytochrome C)表达升高(P0.05);CGRP预处理后,心肌细胞存活率升高(P0.001),i NOS表达减少(P0.05),e NOS和p-e NOS表达增加(P0.05),NO的释放进一步降低(P0.05),凋亡相关蛋白活性下降(P0.001);L-NAME处理后,i NOS(P0.05)和P53(P0.001)表达降低;L-NAME与CGRP共处理,与CGRP单处理比较,细胞存活率下降(P0.05),NOS表达降低(P0.05),P53、caspase-3和cyto C表达升高(P0.05)。结论 NOS/NO可能介导CGRP对低氧心肌细胞抗凋亡的调控作用。     

一氧化氮对大鼠睾丸生殖细胞凋亡作用的研究

目的：探讨一氧化氮（NO）对大鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响。方法 采用MTT法观察NO对细胞增殖的抑制作用，透射电镜分析细胞结构变化，末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的原位末端标记法（TUNEL）及琼脂糖凝胶电泳检测生殖细胞DNA变化以进一步分析细胞凋亡的特征。结果：MTT法及DNA末端标记法检测表明，NO可抑制细胞增殖，诱导生殖细胞的凋亡，并呈剂量及时间依赖性，NO组细胞凋亡率明显高于对照组（P〈0．01）。透射电镜观察NO处理20h后的生殖细胞，其核染色质凝集、附着于核边缘呈新月形，核固缩、碎裂形成凋亡小体，符合凋亡细胞特征性改变。结论：一氧化氮具有促使生殖细胞凋亡形成的作用，这对不育症的研究有重要的价值。     

大鼠肺纤维化形成中内源性一氧化氮对肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的:研究大鼠肺纤维化形成过程中异常增多的肺内源性一氧化氮对肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法:气管内滴注博莱霉素,用硝酸还原法检测出肺血NO₂^-/NO₃^-含量;TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和透射电镜观察肺泡上皮细胞凋亡。分别观察注BLMA₅后14 d和30 d以及用氨基胍(AG)阻断iNOS合成NO后上述指标的变化。结果:(1)注BLMA₅后14 d,出肺血NO₂^-/NO₃^-含量分别高于正常对照组和注BLMA₅后30 d组(均P<0.01);凋亡的肺泡上皮细胞数亦分别多于正常对照和注BLMA₅后30 d组(均P<0.01)。(2)AG阻止出肺血NO₂^-/NO₃^-含量增高的同时,亦抑制了肺泡上皮细胞的凋亡。结论:在肺纤维化形成过程中,内源性NO的增多,有诱导肺泡上皮细胞凋亡的作用。     

一氧化氮介导的细胞凋亡

一氧化氮能够介导细胞凋亡，其机制有如下三点：（１）影响细胞的能量代谢，损害其能量状态从而导致细胞死亡。（２）作为一种活泼的氧化剂，破坏细胞氧化抗氧化的平衡状态。（３）ＤＮＡ损伤及突变作用     

慢性低氧对大鼠肺血管L-精氨酸

目的:探讨慢性低氧对大鼠肺血管L-精氨酸/一氧化氮(L-Arg/NO)途径的影响。方法:采用慢性低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺血管孵育,测定慢性HPH对大鼠肺动脉L-Arg转运,一氧化氮合酶(NOS)活性和NO生成释放的影响。结果:(1)低氧4周大鼠肺动脉平均压(mPAP)比对照组高33.7%(P＜0.01),右心室(RV)和左室加室间隔(LV+S)重量比值(RV/LV+S)高44.2%(P＜0.01)。(2)低氧对血浆L-Arg含量无明显影响。(3)低氧大鼠离体孵育的肺动脉摄取低浓度(0.2mmol/L)和高浓度(5.0mmol/L)[³H]-L-Arg分别低于对照组15.8%(P＜0.05)和27.2%(P＜0.01)。(4)低氧大鼠肺动脉tNOS、iNOS和cNOS活性较对照组高38.0%、32.8%和53.0%(P＜0.01)。(5)低氧大鼠血浆NO含量低于对照组,与mPAP和RV/LV+S呈负相关(P＜0.01)。结论:慢性HPH时NOS活性代偿性增强,但L-Arg转运受损使血浆NO生成仍减少,说明L-Arg转运是NO生成的重要限速步骤。     

细胞性一氧化氮供体的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应

目的一氧化氮（ＮＯ）供体细胞系的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应研究。方法采用３Ｈ－胍氨酸转换法进行ＮＯ合成酶（ＮＯＳ）活性测定；亚硝酸盐检测；ＤＮＡ片段的提取及凝胶电泳分析；凋亡细胞的ＤＡＰＩ染色观察；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析。结果将ｉＮＯＳ真核表达质粒、ｐＣＭＶ／ｉＮＯＳ转染至Ｓｐ２／０骨髓瘤的变异株中，并获得能稳定表达ｉＮＯＳ和合成ＮＯ的重组细胞系（ＳＰｍｔ／ｉＮＯＳ），表达ｉＮＯＳ的效率为每升培养物含４００μｇ蛋白。利用该细胞作ＮＯ细胞性供体，成功地证实ＮＯ能诱导Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞发生凋亡。结论所建细胞性ＮＯ供体应用于ＮＯ的生物学功能研究具有ＮＯ合成稳定；更能模拟体内细胞间ＮＯ的信息传递过程；不需任何外源刺激即可合成ＮＯ等独特优点。所建ＮＯ供体细胞可以用于肿瘤细胞凋亡的研究。     

慢性低O2高CO2大鼠神经细胞凋亡与脑MDA、NOS的水平变化

目的：探讨慢性低O₂高CO₂脑神经细胞凋亡与MDA、NOS关系。方法：将SD大鼠分为正常对照组（C组）和低O₂高CO₂4周组（E组），采用原位末端标记（TUNEL）、流式细胞技术检测凋亡细胞，并测脑组织MDA、NOS水平。结果：①E组脑MDA、NOS水平高于C组（P<0.01）；②E组大脑皮质、海马、丘脑等部位见神经细胞凋亡；神经细胞凋亡百分率为11.51%，并与MDA和NOS水平呈正相关（r=0.652, P<0.05和r=0.716, P<0.05）。结论：慢性低O₂高CO₂时氧自由基和一氧化氮生成增加是神经细胞凋亡形成的重要机制之一。     

低氧对肺动脉内皮细胞分泌一氧化氮的影响

以内皮细胞合成了一氧化氮（ＥＤＮＯ）的代谢产物ＮＯ＾－２为指标，观察了低氧条件下猪肺动脉内皮细胞合成分泌ＥＤＮＯ及细胞内Ｃａ＾２＋浓度的变化，发现低氧时内皮细胞合成分泌的ＥＤＮＯ明显增加，但随着低氧时间延长，增加的幅度减小，内皮细胞的（Ｃａ２＋）ｉ显著增加。而低氧培养时间的长短对（Ｃａ＾２＋）ｉ没有明显的影响。结果表明，低氧条件下内皮细胞（Ｃａ＾２＋）ｉ的增加是ＥＤＮＯ合成分泌增加的重要原因之一。     

一氧化氮和caspase-3在多巴胺诱导PC12细胞

目的：探讨一氧化氮（NO）和半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）在多巴胺诱导PC12细胞凋亡中的可能作用。方法：流式细胞仪定量检测PC12细胞的凋亡率,原位末端标记法（TUNEL）观察凋亡细胞的形态,Griess法测定NO₂^-的浓度,荧光分光光度计法检测caspase-3的活力,半定量RT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达水平。结果：多巴胺（0.15-0.60 mmol/L）可剂量依赖性地诱导PC12细胞凋亡,表现为凋亡细胞的TUNEL染色阳性;iNOS mRNA的表达、NO的合成及caspase-3的活力均有明显的增加（P<0.01）;特异性的iNOS抑制剂aminoguanidine和caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO通过减少NO的生成和抑制caspase-3的激活阻断PC12细胞凋亡。结论：NO的生成可能是多巴胺诱导PC12细胞凋亡的触发因子,caspase-3的激活是其中的效应因子。     

一氧化氮对慢性缺氧高二氧化碳大鼠肺血管尾加压素Ⅱ的影响

目的： 探讨一氧化氮/L-精氨酸（NO/L-Arg）系统和尾加压素Ⅱ（UⅡ）在大鼠慢性缺氧（O2）高二氧化碳（CO2）肺动脉高压病理过程的作用及关系。 方法： 40只大鼠随机分成4组（每组各10只）：正常对照组（A组）、慢性缺O2高CO2 加生理盐水4周组（B组）、慢性缺O2高CO2 加L-Arg脂质体4周组（C组）、慢性缺O2高CO2 加N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）4周组（D组）。免疫组化法和组织原位杂交法检测肺小动脉UⅡ和UⅡ mRNA、UⅡ受体（UT）mRNA的表达，并观察肺小动脉显微结构的变化。 结果： （1）肺动脉平均压(mPAP)、右心室(RV)和左心室+室间隔(LV+S)重量比值［RV/(LV+S)］:Ｂ组高于A组（均P<0.05）；C组低于B组（均P<0.01）；D组两指标不仅高于A组（P<0.01和<0.05），且mPAP也高于B组（P<0.01）。（2）肺小动脉管壁面积/管总面积（WA/TA）和中膜厚度（PAMT）：B组显著大于A组（P<0.05）；C组与B组的差异也有显著性（P<0.01）；而D组WA/TA也显著高于A组。（3）肺小动脉UⅡ、UⅡ mRNA、UT mRNA表达：同A组比较，Ｂ组、D组各指标都显著增高（均P<0.01）；C组UⅡ、UⅡ mRNA的表达较Ｂ组明显下调（P<0.01），同A组比较，其UⅡ表达下调但UT mRNA表达增加（均P<0.01）；D组UⅡ表达较Ｂ组低，而UT mRNA表达较Ｂ组高（均P<0.01）。 结论： 慢性缺O2高CO2肺动脉高压的发生发展可能与UⅡ的异常表达增加有关，而外源性NO可能有抑制UⅡ的作用。     

低氧对人脐静脉内皮细胞一氧化氮和内皮素-1的生成及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的：通过观察低氧对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌一氧化氮(NO）、内皮素-1(ET-1)以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA 表达的影响，探讨低氧性肺动脉高压(HPH)形成的机制。 方法： 在离体培养人脐静脉内皮细胞基础上，采用硝酸还原酶和放射免疫分析方法检测了低氧（3％O2）培养6 h、12 h和24 h人脐静脉内皮细胞分泌NO和ET-1的变化，同时运用半定量RT-PCR对iNOS mRNA表达情况进行分析。 结果： 低氧组各时点培养液中NO2-/NO3-和ET-1水平显著高于常氧组(P<0.01)，同时观察到iNOS基因mRNA的表达也相应增高(P<0.01)。 结论： 低氧能刺激人脐静脉内皮细胞生成释放NO和ET-1, NO生成增多与低氧正调iNOS基因mRNA的表达有关。     

叶酸对去卵巢大鼠抗氧化酶、一氧化氮合酶和一氧化氮的影响

 目的: 观察叶酸对去卵巢大鼠抗氧化酶、一氧化氮合酶和一氧化氮的影响。方法: 40只3月龄健康雌性SD大鼠,随机分成5组:假手术组、去卵巢组、二乙基己烯雌酚(0.03 mg·kg^-1·d^-1)组、低剂量(5 mg·kg^-1·d^-1)叶酸组和高剂量(20 mg·kg^-1·d^-1)叶酸组。各组大鼠于术后1周开始灌胃给药,假手术组和去卵巢组给予蒸馏水,10周后,取L₅椎体和右股骨行骨密度(BMD)检测;测定血浆和骨匀浆总抗氧化能力(TAC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)水平。结果: 与假手术组比较,去卵巢组大鼠L₅椎体和股骨BMD显著降低(P < 0.01),血浆GSH-Px、NO和骨匀浆TAC、GSH-Px、NOS及NO水平明显降低(P < 0.01),MDA浓度升高显著(P < 0.01);与去卵巢组大鼠比较,高剂量叶酸组大鼠L₅椎体和股骨BMD增加(P < 0.01),骨匀浆TAC、GSH-Px、NOS和NO水平升高(P < 0.01),MDA浓度降低(P < 0.01),血浆GSH-Px和NO水平升高。结论: 去卵巢大鼠体内抗氧化酶、NOS和NO水平降低,氧化应激参与了去卵巢大鼠骨质疏松的发生;高剂量叶酸能提升去卵巢大鼠腰椎和股骨BMD,提高其体内抗氧化酶、NOS和NO水平,改善氧化应激,这可能是高剂量叶酸防治去卵巢大鼠骨质疏松的机制之一。     

地尔硫(艹卓)对肺动脉高压大鼠血红素氧合酶1和一氧化氮合酶的影响

目的 :　探讨钙离子拮抗剂地尔硫 艹卓(商品名合心爽 )对大鼠缺氧性肺动脉高压模型肺小动脉 (SPA)血红素氧合酶 (HO) - 1、一氧化氮合酶 (NOS)表达的影响。方法 :常压缺氧 [(10 %± 1% )O2 ]6周复制大鼠肺动脉高压模型。缺氧 2周后随机分为模型组和地尔硫 艹卓 治疗组。检测右室收缩压 (RVSP)、右心肥大指数 (RVHI) ,用光镜和透射电镜观察肺的病理改变 ,并进行形态学定量。用免疫组化和Westernblot法观察肺内HO - 1、内皮型和诱生型NOS(eNOS和iNOS)的表达和分布。放免法检测肺组织环 -磷酸鸟苷 (cGMP)含量。结果 :地尔硫 艹卓 明显降低缺氧大鼠的RVSP和RVHI,减轻肺小动脉中膜肥厚 ,促进eNOS及抑制iNOS表达 ,但对缺氧引起的HO - 1表达增高和内皮超微结构损伤无显著影响。结论 :地尔硫 艹卓 能明显减轻肺动脉高压性结构重塑 ,这种作用可能部分通过抑制iNOS、促进eNOS ,而不减少HO - 1的表达等环节来实现。     

一氧化氮合酶抑制剂口服两周治疗对肝硬化大鼠高动力循环状态的影响

目的:观察小剂量一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)连续2周治疗对肝硬化大鼠高动力循环状态的影响。方法:用60%四氯化碳油性溶液皮下注射SD大鼠制造肝硬化大鼠模型。对肝硬化大鼠,用L-NAME(0.5mg·kg^-1·d^-1)胃管内注入连续治疗2周。用57Co同位素微球技术分别测定L-NAME治疗组、未治疗组及正常对照组的平均动脉压(MAP)、门静脉压(PP)、心输出量(CO)、心脏指数(CI)、内脏血管阻力(SVR)及内脏器官血流量(SBF)。用荧光法测定各组大鼠血清亚硝酸盐含量。结果:未治疗组MAP、SVR显著低于正常对照组,而PP、CO、CI、SBF及亚硝酸盐含量则显著高于正常对照组(P值均小于0.01)。在治疗组,L-NAME显著缓解了CO、CI、SBF及亚硝酸盐浓度的增加和MA、SVR的下降。与未治疗组比较,治疗组血清亚硝酸盐浓度明显减少[(1.471±0.907)μmol/Lvs(4.204±1.253)μmol/L,P<0.01]。结论:内源性NO在肝硬化血流动力学改变中可能起重要作用。小剂量L-NAME连续2周口服治疗可以缓解肝硬化大鼠的高动力循环状态。