免疫组化方法简介(光镜与电镜结合的PAP法)

<正> 免疫组化技术是现代形态学科的重要研究工具之一。虽然40年代初出现了荧光抗体技术,但其标本不能用电镜观察。后来建立了酶标抗体法,特别是Sternberger(1979)的非酶标记抗体法(PAP),才使免疫电镜技术得到长足的发展。酶标抗体法是把酶(常用辣根过氧化物酶,简称HRP)标记在第一抗体(直接法)或第二抗体(间接法)上,     

循环甲状腺自身抗体产生细胞的表面标志和功能

外周血单个核细胞(MNC)体外免疫球蛋白合成的研究是一种评价人体体液免疫反应的有用方法.近来该法已应用于甲状腺自身抗体合成的研究.作者发展了一种敏感而定量的放射免疫测定法(IRMA)并用它     

单链抗体制备技术及应用的研究进展

抗体是机体在抗原物质刺激下所形成的能与抗原特异性结合的一类血清活性成分,它可以识别和排除抗原性异物,对于维护体内的生理平衡和稳定起着至关重要的作用.随着免疫学技术研究的不断深入,杂交瘤单克隆抗体(mAb)技术于20世纪70年代问世,它的出现使人们大量生产特异性强、纯度高的抗体成为可能,但是由于杂交瘤细胞制备技术较为复杂,可能会在长期培养的过程中丢失抗体基因,而且应用于人体后容易产生人抗鼠抗体(human anti-mouse antibody,HAMA)等不足之处[1],其应用受到一定的限制.这促使人们继续努力,探索更为理想的抗体生产技术.近年来,基因工程技术迅速发展,人们将免疫学与现代分子生物学技术结合,生产出重组抗体,为生物学和医学研究开辟了新的领域.其中单链抗体(single-chain antibody,scFv)以其在研究和应用过程中表现出的各方面优势,正在越来越多的被人们研究和关注.     

1型糖尿病患者甲状腺自身抗体检测的临床意义

1型糖尿病为器官特异性自身免疫性疾病,常合并自身免疫性甲状腺疾病[1],本研究检测血清谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛素自身抗体(IAA)和胰岛细胞抗体(ICA)、血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺微粒体抗体(TMAb)及甲状腺功能,并探讨其临床意义.     

HIV-1 p15(Gag)基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

目的 为了研究HIV-1 p15(Gag)的生物学活性,制备HIV-1 p15(Gag)蛋白及其特异性抗体.方法 用PCR的方法扩增编码p15(Gag)基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a( )中表达HIV-1 p15蛋白,分别用His抗体和HIV阳性血清做western blot鉴定目的 蛋白.以纯化目的 蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性.结果 原核表达载体pET28 a( )-p15(Gag)成功构建,可在大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约20000的p15(Gag)蛋白经western blot鉴定正确.纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性.结论 得到纯化的HIV-1 p15蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15(Gag),为进一步研究HIV-1奠定了实验基础.     

噬菌体抗体微阵列的研究策略

抗体微阵列技术是近年来发展起来的一项蛋白质组学研究技术,广泛应用于蛋白质组学研究、医学基础与临床诊断等研究领域.抗体微阵列构建过程中的关键技术为高通量抗体制备技术及抗体固定技术.噬菌体抗体微阵列技术能很好地解决抗体来源问题及抗体固定问题,是抗体微阵列的发展方向.本文简要介绍了噬菌体抗体微阵列技术的研究策略及研究进展情况.     

自身抗体联合检测对系统性红斑狼疮的诊断价值

研究抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(ds-DNA)抗体、抗Smith(Sm)抗体、抗核小体抗体(AnuA)和抗核糖体P蛋白抗体(ARPA)5种自身抗体单项及联合检测系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的价值.测定了66例SLE患者和50例其他疾病患者(对照组)血清中的自身抗体.以间接免疫荧光法测定ANA;免疫印迹法测定抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体、AnuA和ARPA.结果显示,在66例SLE患者中ANA、抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体、AnuA和ARPA的阳性率分别为92.4%、27.2%、42.4%、71.2%和16.6%,均明显高于对照组(32%、2%、2%、4%和2%)(P＜0.01);ANA、AnuA的敏感性明显高于其他3种抗体(P＜0.01);ANA、抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体、AnuA和ARPA的特异性分别为68.0%、98.0%、98.0%、96.0%和98.0%.结论:抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体、AnuA和ARPA等4种自身抗体对SLE的检测有很高的特异性,且有明显的互补作用,联合检测能提高对SLE检测的敏感性.     

多发性骨髓瘤的个体型阳性细胞检查及意义

近年来抗个体型抗体(antiidiotypeantibodies,抗Id抗体)的理论研究及应用有了迅速地发展,已成为免疫学研究中活跃领域之一。个体型是指在同一个体内,不同的抗体形成细胞所产生的免疫球蛋白(Ig)有各自不同的抗原特异性。决定个体型抗原特异性的部位在抗体可变区的超可变区,是针对超可变区某些抗原决定簇的抗体。在     

基于抗原-抗体共表达的细菌展示技术的优化

目的 建立细菌周质内抗原抗体共表达系统.方法 将人白介素-1β(hIL-lβ)基因和抗人白介素1β单链抗体(antihIL-1β scFv)基因分别插入到细菌展示载体pBFD的pelB前导肽(游离型前导肽)和NlpA前导肽(锚定型前导肽)下游构建出重组载体pBFD-Ab-Ag.将pBFD-Ab-Ag转入到E.coli DH5α中诱导表达,抗原和抗体蛋白相互结合而被锚定到细菌内膜外侧,破除细菌外壁(原生质球制备)后与适当浓度的FITC标记的小鼠抗hIL-1β抗体进行孵育,最后经流式细胞仪检测荧光信号,根据荧光信号强弱分析抗原抗体表达和相互作用情况.结果 pBFD-Ab-Ag E.coli DH5α具有很强的荧光信号,阳性率获得了大大的提高.结论 成功建立了建立细菌周质内抗原抗体共表达系统,实现了抗体和抗原细菌周质内的正确折叠和相互识别.简化了现有的抗体筛选的流程,为蛋白质相互作用的研究提供了新的技术手段.     

156例早期自然流产五种抗体测定

妊娠早期自然流产是孕期常见的并发症之一.其病因较为复杂,除与遗传基因缺陷、外界不良因素影响、解剖、内分泌、感染因素有关外,免疫因素在本病中占有重要的地位.近年来大量基础及临床对早期自然流产的研究发现,抗心磷脂抗体(ACA)在早期自然流产患者中占有较高的比例 ,但抗精子抗体(ASA)和抗子宫内膜抗体(EMA)以及抗HCG抗体(AH A),抗卵巢抗体(AOA)是否与流产有关没有统一的说法,为此,我们检测了早期自然流产患者血清5种抗体,现报告如下.     

自身免疫性肝炎发病机制研究进展

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis, AIH)是一种累及肝脏实质的慢性进展性炎症性疾病,临床上以血清氨基转移酶增高、高免疫球蛋白G血症、血清中可检测到非器官特异性和肝脏特异性的自身抗体为特征.此病女性多见(男女比例为1∶3.6),任何年龄均可发病.典型病理组织学特征为界面性肝炎,如未给予有效治疗,可逐渐发展为肝硬化,最终导致肝功能失代偿引起死亡或需要进行肝脏移植.目前免疫抑制剂的治疗对阻止病情进展显示了一定疗效.基于血清免疫学的进展,目前认为AIH分为两个型:1型AIH(AIH-1)是最常见的疾病类型,与抗核抗体(ANA)、平滑肌抗体(SMA)、抗中性粒细胞胞浆抗体核周型(p-ANCA)和/或抗可溶性肝抗原/肝胰抗体(抗SLA/LP)相关;2型AIH(AIH-2)以抗肝/肾微粒体抗体1型(抗LKM-1)为特点[1].无论何种类型的AIH,病因及其发病机制均不清楚,目前仍是研究的热点之一.本文就AIH发病机制作一简要概述.     

外周血EBV IgA-VCA抗体和组织LMP-1与鼻咽癌诊断及类型的关系研究

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的发生、发展与EpsteinBarr病毒(EBV)感染密切相关[1].本文通过检测患者外周血EBV-IgA/VCA抗体与组织中LMP-1,研究EBV-IgA/VCA抗体和组织中LMP-1与NPC的诊断、病理类型、治疗的关系.     

芬兰携带HTLV-Ⅲ抗体同性恋者的免疫功能

获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是主要在同性恋中流行的一种免疫功能异常性疾病,由Ⅲ型人类T细胞白血病病毒(HT-LV-Ⅲ)特异性感染所致.为了研究HTLVⅢ感染病人的免疫抑制性质,作者检查了175例生活在芬兰的同性恋志愿者的HTLVⅢ抗体、外周血淋巴细胞对有丝分裂原(PHA、PWM)及特异抗原PPD的增殖反应.用荧光标记的单克隆抗体分析淋巴细胞亚群.用商用的EIA试剂检查乙型肝炎表面抗原、核心抗体和表面抗体、甲型肝炎总抗体.用免疫荧光及免疫酶法检查EB病毒(巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒(HSV-1.2)的IgG抗体.以70例年龄相似的男性供     

抗体微阵列构建过程中抗体定位固定技术研究进展

抗体微阵列是蛋白组学研究的一个重要技术平台,可以高通量并行检测多种蛋白质。抗体微阵列制备技术中存在许多关键问题,其中,将抗体高通量、牢固地固定在微阵列基质上,且保证抗体不失去活性,成为问题的关键。在DNA微阵列基础上,根据抗体结构的特点,研究人员设计了多种抗体固定化方法。本文中介绍了近年来抗体微阵列制备技术中抗体定位固定(site-specific immobilization)技术的研究发展情况。     

对化学制剂氨甲蝶呤单克隆抗体的制备、特性及其与多克隆抗体的比较

氨甲蝶呤(MTX)不仅是有用的抗赘生物因子,作者们已发展了对它的免疫试验.而且它在葡萄球菌蛋白A和IgG的相互作用中也是很有用的半抗原.因为和以往研究中使用的常规抗体相反,单抗在化学性和功能上都是均一的.因此作者研制了对MTX的单抗,研究了它的特性及其与常规多克隆抗体的比较.作者把MTX共价结合     

间接免疫荧光法测定抗人肾脏集合管细胞抗体

<正>越来越多的研究表明不少远端肾小管性酸中毒(dRTA)可继发于自身免疫性疾病,如临床上发现某些甲状腺疾病患者可伴发dRTA,这可能是抗甲状腺球蛋白抗体(TG)及抗甲状腺微粒体抗体(TM)与集合管细胞存在交叉反应.因此测定体内抗集合管抗体,对于研究和诊治dRTA具有较大价值.为此,我们用培养的人集合管细胞作为载体.运用间接免疫荧光法建立了测定血清中抗集合管细胞抗体的检测方法.1 材料和方法1.1人肾脏集合管细胞株H_5培养于载玻片.H_5细胞为法国Tenon医院肾脏实验室赠送.1.2对象阳性对照:小鼠抗人集合管细胞单克隆抗体(McAb).阴性对照:正常人血清.测定对象:两例甲亢病例,同时伴有典型dRTA,且血清抗甲状腺球蛋白抗体及抗甲状腺微粒体抗体阳性.1.3FITC标记的羊抗人IgG抗体及羊抗小鼠IgG抗体(华美生物工程公司).     

B细胞激活机理解析

抗体,作为最早发现的免疫物质,一直是免疫学研究的中心课题.虽然对于抗体本身,在分子水平和基因水平上,都已有了比较充分的了解,但是,对于抗体产生的细胞水平,即B细胞(BC)如何被刺激物激活而成为抗体产生细胞这一基本过程,却仍未完全认识.按照克隆选择学说,抗原与BC膜免疫球蛋白(mIg)受体的反应导致了BC的增殖、成熟并分泌抗体.但是,以后的事实证明,问题远非如此简单.第一,仅仅抗原与mIg受体的反应并不足以诱导抗体     

061 抗dsDNA抗体的研究进展

系统性红斑狼疮(SLE)的特征为体内产生多种自身抗体.其中抗dsDNA抗体是目前公认的SLE高度特异性抗体,对临床诊断SLE和治疗监控极为重要.有关抗dsDNA抗体的研究正逐渐受到临床的重视.     

抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体在诊断类风湿性关节炎中的意义

目的 探讨抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(anti-mutated citrullinated vimentin antibody,Anti-MCV)在诊断类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中的价值.方法 选取确诊的RA患者51例(RA组)、非RA自身免疫性疾病患者36例(疾病对照组)和健康查体者30例(对照组)作为研究对象.根据临床资料计算DAS28评分,将RA组分为活动组和稳定组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中的抗MCV抗体、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)及白细胞介素-6(IL-6)水平,采用免疫比浊法检测血清中C-反应蛋白(CRP)的浓度水平,并进行比较.结果 RA组抗MCV抗体的浓度水平显著高于非RA组和对照组(P均＜0.01);活动组抗MCV抗体的浓度水平显著高于稳定组和对照组(P均＜0.01);经Spearmau相关性分析,抗MCV抗体的浓度水平与CRP及IL-6呈正相关,而与DAS28无相关性;抗MCV抗体与抗CCP抗体的诊断效率无显著差异,但是灵敏度高于抗CCP抗体.结论 抗MCV抗体具有较高的灵敏度和特异性,并且能提示RA病情的活动情况,可以成为新的辅助RA诊断的血清学指标.     

人源性抗乙酰胆碱受体自身抗体的构建及特异性鉴定

目的 用人抗乙酰胆碱受体(AchR)自身抗体的抗原结合片段(Fab)构建完整的抗人AchR自身抗体,为重症肌无力(MG)的实验研究提供人源性抗体材料. 方法 应用PCR技术从分离自MG患者胸腺的Fab637扩增重链Fd片段基因和轻链基因,并克隆至含有免疫球蛋白(IgG1)基因的载体pIgG1上,构建人源性抗AchR自身抗体哺乳类细胞表达的重组载体pIgG1-637.将pIgG1-637转染CHO-k1细胞,细胞培养上清液经斑点杂交试验检测抗体的表达,以放射免疫测定法测定表达的抗体与特异性人AchR结合的活性.结果 细胞培养24 h后能检测到抗体的分泌,表达的抗体能特异性地与抗原结合,且结合活性很高.结论 已成功地构建了具有与抗原特异性结合的人源性IgG1类抗人AchR自身抗体IgG1-637.