人胆囊组织蛋白质表达谱的建立

目的:建立胆固醇结石病人与正常人胆囊组织的蛋白质表达谱,用于比较胆囊组织的蛋白质组学研究,为阐明胆石成因提供实验依据。方法:提取胆固醇结石病人及正常人的胆囊壁组织总蛋白,构建相应的双向电泳表达图谱,应用ImageMaster图像分析软件对双向电泳图谱进行图像分析。结果:两组样本均获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,胆固醇结石组与正常组病人组内蛋白质平均匹配点数分别为632±61和606±64,各匹配率分别为73.46%和71.49%。组间蛋白质平均匹配点为474,匹配率为70.64%。胆固醇结石病人的28个蛋白点表达上调,7个点表达下调,与正常人间蛋白表达差异明显(P0.05)。结论:初步建立了胆固醇结石病人与正常人胆囊组织的差异蛋白质表达谱,分析两者间差异蛋白点,为胆石成因研究提供实验基础。     

胆固醇结石病人与正常人胆囊胆汁的蛋白质表达谱比较分析

目的 比较分析胆日同醇结石病人与正常人胆囊胆汁蛋白表达谱的差异,为阐明胆石成因提供实验依据.方法 提取胆固醇结石病人和正常人胆囊胆汁总蛋白,构建相应的双向电泳蛋白质表达谱,应用lmageMaster图像分析软件获得差异蛋白点信息.结果 胆固醇结石病人与正常人胆囊胆汁总蛋白浓度分别为(6.4824±0.3403)mg/ml和(2.3156±0.3064)mg/ml(P<0.01).两组组内蛋白质平均匹配点数分别为465±71和407±85,平均匹配率为71.70%和68.38%,组间269个蛋白质点相互匹配,匹配率为61.70%.胆固醇结石组蛋白表达谱显著差异点34个,16个表达上调,18个表达下调.结论 初步建立了胆固醇结石病人和正常人胆囊胆汁蛋白表达谱.发现两者存在差异蛋白质点,为筛选胆石形成关键调控子提供基础.     

运甲状腺素蛋白在胆固醇结石胆囊组织中的表达及其促成核作用研究

目的 探讨运甲状腺素蛋白（transthyretin,TTR）基因及其蛋白在胆固醇结石患者胆囊组织中的表达情况,以及其在胆固醇结石形成中的促成核作用。方法 收集笔者所在的两所医院施行择期胆囊切除术的25例胆固醇结石患者和9例肝移植供体的正常胆囊组织,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术及Western blot法检测2组患者胆囊组织中TTR基因及其蛋白的表达。构建Small和综合模拟胆汁体系,分别加入TTR和白蛋白（ALB）,再通过Holan成核时间法和Holzbach法分别检测成核时间和成核活性。结果 胆固醇结石组TTR mRNA及其蛋白的表达水平分别为1.51±0.78和3.95±0.09,均高于正常对照组的0.85±0.63和1.53±0.08 （P＜0.05）。在Small模拟胆汁体系中,观察至21 d时,TTR组的成核时间为（14.5±1.3） d,ALB组为（18.0±0.8） d,TTR的成核活性为0.81;在综合模拟胆汁体系中,TTR组的成核时间为（13.5±0.6） d,ALB组为（18.5±1.3） d,TTR的成核活性为0.73。TTR组的成核时间均较短（P＜0.01）。结论 TTR在胆固醇结石患者胆囊组织中的表达上调,并在体外模拟胆汁体系中表现出促成核活性,提示其参与了胆固醇结石的发生和发展过程。     

钙网蛋白在胆固醇结石患者胆囊中的表达及意义

目的 探讨钙网蛋白(calreticulin,CRT)在胆固醇结石患者胆囊组织和胆汁中表达及临床意义.方法 利用生物质谱技术鉴定胆固醇结石患者与正常对照组胆囊胆汁的差异表达的蛋白质,通过免疫组织化学和Western blotting验证CRT在胆固醇结石患者胆囊组织和胆汁中表达结果.结果 比较蛋白质组学结果显示胆固醇结石患者组CRT表达上调,免疫组织化学和免疫印迹法进一步证实了CRT在胆囊组织及胆汁中高表达.结论 CRT在胆固醇结石患者组的高表达,可能与胆固醇结石的发生、发展及预后有关.     

尿毒症患者血清蛋白质组份的双向凝胶电泳-飞行时间串联质谱分析研究

目的建立和比较尿毒症患者及正常人的血清蛋白质双向电泳图谱，寻找和鉴定尿毒症患者差异表达的血清蛋白质谱。方法以固相pH梯度（IPG）等电聚焦（IEF）为第一向和垂直十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）为第二向，分别对尿毒症患者和正常者血清蛋白质样品进行二维双向电泳，经银染显色和ImageMaster2D5、0软件分析凝胶图像，对有差异性表达的尿毒症者的蛋白质用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱进行鉴定。结果成功获得了重复性较好的双向电泳银染图谱。尿毒症患者血清蛋白质表达谱发生了改变。将其中26个明显差异性表达的蛋白质点进行肽质指纹图谱和串联质谱分析，在International Protein Index（IPI）human数据库中检索，鉴定出其中20个蛋白。结论固相pH梯度双向凝胶电泳分离尿毒症患者血清总蛋白获得重复性较好的结果。尿毒症患者血清蛋白质表达谱发生了明显改变，基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱分析鉴定的结果为尿毒症蛋白质毒素的研究提供了依据。     

胆囊良恶性组织中蛋白质组差异表达及膜联蛋白A3的功能

目的 分离并鉴定胆囊癌和胆囊良性组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断胆囊癌的肿瘤标志物.观察RNA干扰沉默膜联蛋白A3(AnnexinA3)基因对胆囊癌细胞增殖及周期的影响.方法 提取人胆囊癌和胆囊良性组织的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择差异表达超过2倍的蛋白点进行MALDI-TOF/TOF质谱和生物学分析.miRNA干扰胆囊癌细胞株中AnnexinA3的表达后,通过噻唑蓝(MTT)实验及流式细胞仪观察癌细胞增殖能力及细胞周期的变化.结果 筛选出在胆囊癌组织中明显差异表达的46个蛋白点,共有17个蛋白质被成功鉴定,其中在胆囊癌组织中高表达的为9个,低表达的为8个,包括AnnexinA3、TTR蛋白等.RNA干扰胆囊癌细胞株AnnexinA3蛋白的表达后,MTT显示干扰后细胞增殖明显下降效率为44.14%(P<0.05).流式细胞仪观察显示干扰后G1期增加(P<0.05),S期减少(P<0.05).结论 胆囊癌组织相对于胆囊良性组织蛋白存在明显差异.干扰AnnexinA3蛋白的表达可以改善胆囊癌细胞的某些恶性生物学行为.     

增生性瘢痕表皮细胞差异蛋白的初步分析

目的检测并鉴定增生性瘢痕角质形成细胞（HK）较正常者差异表达的蛋白质，揭示HK在增生性瘢痕（HS）形成过程中的作用。方法利用消化法分离5例HS（均位于四肢、处在增生期）组织HK，提取其中总蛋白质，利用双向电泳技术展示蛋白质分子的差异表达，并对差异蛋白进行质谱分析。结果初步建立了〉600个点的在体HK双向电泳图谱，筛选差异蛋白质点24个，其中HK较正常高表达点8个，低表达点9个，极低表达4个，新发现的蛋白质点3个；对2个点质谱鉴定结果为Maspin前体与Zinc finger protein 226。结论消化分离法获得在体HK并建立其2-D图谱的方法可行，为HS相关蛋白质组研究奠定了一定基础。初步筛选的24个差异蛋白质点及质谱分析所得结果提示HK蛋白表达存在异常，可能与HS的形成有关。     

大鼠脊髓横断后蛋白质的双向电泳分析及质谱鉴定

目的建立急性脊髓损伤双向电泳图，分析损伤后脊髓内蛋白质的差异表达。方法使用裂解液提取脊髓蛋白，以双向电泳技术分离蛋白质，凝胶染色、图象分析后选取蛋白点，通过质谱技术获取肽质量指纹谱，在蛋白质数据库中查询蛋白质。结果成功建立重复性较好的脊髓蛋白质组双向电泳图，找出13个表达明显变化的蛋白点并获得这些蛋白质的肽质量指纹谱，成功鉴定出11个蛋白质。结论成功构建大鼠正常脊髓与损伤脊髓双向电泳图，用质谱技术鉴定了部分蛋白质。这些蛋白质的有些功能最近才被人们认识。相信在脊髓损伤后的继发性损伤中这些蛋白质可能会起到重要的作用。     

结肠腺癌与腺瘤的蛋白质组表达差异

目的 通过比较结肠腺癌与结肠腺瘤组织的蛋白质组表达差异,寻找结肠腺癌相关的蛋白质,筛选结肠癌早期诊断的分子标志物.方法 应用蛋白质组学技术,对8例结肠腺癌组织和8例结肠腺瘤组织进行胶内差异双向电泳(2-D),选择差异表达超过2倍的蛋白点进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析.结果 成功建立结肠腺癌和结肠腺瘤的双向凝胶电泳图谱,结肠腺癌和腺瘤组织凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3289和2986,其中表达差异超过2倍的斑点共有31个,质谱分析和数据库检索共鉴定出18个蛋白质,包括keratin 8、S100A6、protein disulfide isomerase等.结论 蛋白质组学可提示结肠腺癌与腺瘤组织间的蛋白质表达差异,而对相关差异表达蛋白的研究有可能为结肠癌的早期诊断和治疗提供新的分子标记物.     

家族性胆固醇结石病人SCP2基因表达的研究

目的 研究具有家族性胆囊胆固醇结石病人、非家族性胆囊胆固醇结石病人和非结石病人肝组织SCP2基因的表达情况.方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术,研究了28例具有家族遗传性胆囊胆固醇结石病人、30例非家族性胆囊胆固醇结石病人和32例非胆固醇结石病人肝组织SCP2 mRNA的表达水平;同时应用Western blotting法分别检测三组病人肝组织中SCP2蛋白含量变化;并采用生化技术行胆汁脂质分析,计算成石指数.结果 家族遗传性和非家族遗传性胆固醇结石组SCP2 mRNA表达水平较非胆固醇结石升高,差异有显著性;家族遗传性胆固醇结石SCp2 mRNA表达水平较非家族性胆固醇结石升高,差异有显著性;SCP2蛋白水平的变化与SCP2mRNA变化一致,差异有显著性.结论 胆囊胆固醇结石病人肝组织SCP2 mRNA表达水平升高,SCP2基因表达上调可能是胆囊胆固醇结石形成的重要原因;SCP2基因表达水平上调则可能在遗传中起一定作用.     

CD68在胆囊壁中的表达及意义

目的观察CD68在胆囊壁中的表达和分布,探讨其与胆囊壁的脂质转运、胆固醇结石发病之间的关系。方法PV-9000免疫组化方法检测CD68在34例胆固醇结石病人、19例非胆囊结石病人及15例对照组胆囊壁标本中的表达。结果CD68表达主要分布在胆囊粘膜上皮细胞顶侧,胆固醇结石病人、非胆囊结石病人胆囊壁CD68的表达显著高于对照组,其差异有统计学意义（P〈0．05）。结论胆囊壁中CD68在胆囊胆固醇结石病人和非胆囊结石病人的表达上调,反映了胆囊壁对脂质的吸收和转运功能,与胆固醇结石的形成密切相关。     

特发性高草酸尿症大鼠肝脏差异蛋白质的筛选

目的 寻找特发性高草酸尿症大鼠肝脏组织差异表达的蛋白质.方法 取3只雄性特发性高革酸尿症大鼠和3只正常对照雄性大鼠,分别取其肝脏组织约300 mg后提取其中的总蛋白.以荧光差异显示凝胶电泳(DIGE)技术分离肝脏中的全部蛋白质,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)和DeCyderTM v6.5软件进行蛋白质的分析和鉴定.结果 总共筛选出21个差异表达蛋白质点,其中11个蛋白质点在特发性高草酸尿症组表达上调,10个蛋白质点下调.最终有18个差异蛋白质点被鉴定确认.结论 筛选出的这些差异蛋白质可能与特发性高草酸尿症有关.     

死精子症精子相关蛋白的蛋白质组学研究

目的:运用双向电泳(2-DE)和质谱技术比较1例死精子症患者和正常人精子的蛋白质组成差异。方法:用2-DE分离了10例正常生育者30份精子标本和1例死精子症3份精子标本的蛋白质,分别获得其参考图谱并进行比较,用质谱技术鉴定其中部分差异蛋白点。结果:在正常精子图谱和死精子症患者精子图谱分别分离出(905±57)和(792±28)个蛋白质点,死精子症患者精子图谱上有178个点未能匹配。对其中6个在患者图谱中缺失的蛋白质点进行了鉴定。结论:死精子症患者图谱上缺失的6个蛋白,可能与死精子症的形成有关。     

SR-BI在胆固醇结石病人胆囊粘膜上皮中的表达

目的探讨SR-BI在胆囊胆固醇结石病人胆囊粘膜中的表达和分布,了解其与胆固醇结石发病之间的关系。方法应用免疫组化方法检测SR-BI在22例胆固醇结石病人胆囊粘膜(结石组)和13例非胆囊疾病病人胆囊粘膜(对照组)标本中的表达。结果SR-BI表达于胆囊粘膜上皮细胞顶侧,结石组的SR-BI表达显著低于对照组,其差异具有统计学意义。结论胆固醇结石病人胆囊粘膜上皮细胞中SR-BI表达减弱,可能在胆固醇结石发病机制中起一定作用。     

正常人胆囊组织基因表达谱的研究

目的：建立正常人胆囊组织基因表达目录。方法：采用含17000cDNA克隆的基因微矩阵与2例正常胆囊之cDNA杂交，取基因表达平均值，分析胆囊的基因表达谱。结果：正常胆囊有11047条基因表达，其前10位高表达基因与平滑肌收缩及物质转运有关。在前200位高表达的基因中，离子通道和转运蛋白、蛋白翻译和合成类以及发育相关类基因占多数。在胆囊所有表达的基因中，12、2、21号染色体表达的数目最多。另外，21条胆石病候选基因在胆囊中有表达，其中主要为脂类代谢相关基因。两条胆囊特异性表达基因：NPC1L1、SLC17A2。结论：胆囊高表达的基因可能与胆囊收缩和胆汁深缩有关，胆囊不仅参与机体的消化功能，还参与调节脂类代谢平衡。     

蛋白质组技术在胃癌相关标志物筛查中的应用

目的 建立胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，鉴定差异表达蛋白，从中发现有意义的胃癌相关标志物。方法 采用双向凝胶电泳（2-DE）分离胃癌组织和正常胃组织总蛋白，银染显色，PDQuest软件分析，从中选取差异表达蛋白质点，通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）或MALDI-TOF-TOF-MS鉴定差异表达的蛋白质。结果 获得重复性和分辨率较好的胃组织双向凝胶电泳图谱；发现23个差异表达蛋白质，其中15个得到鉴定，在肿瘤组织中高表达的有10个，其余5个在肿瘤组织中低表达。结论 建立了胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，并应用质谱技术鉴定了15个差异表达蛋白质。