巢式PCR检测血清中烟曲霉基因的实验研究

目的评价巢式PCR在烟曲霉侵袭性感染早期病原学诊断中的应用价值。方法构建烟曲霉播散性感染动物模型,收集不同感染时段动物血液标本20份,分别进行巢式PCR检测和真菌培养,并对感染动物多次进行影像学检查;测定25例临床诊断为侵袭性曲霉病患者的45份血清样本,并与血清半乳甘露聚糖（GM）测定结果进行比较。结果巢式PCR检测疾病模型动物血清曲霉特异基因,标本阳性率为80%（16/20）,最早在感染后的第二天即可检出;而在整个感染过程中,血培养结果均为阴性,影像学检查则在感染后期才提示真菌感染的存在。临床标本的检测结果显示,巢式PCR敏感性和特异度分别为64%和100%。结论巢式PCR具有较好的敏感性及特异度,可用于曲霉深部感染的早期诊断,与血清GM测定联合应用诊断意义更大。     

巢式PCR技术检测生殖道致病性支原体的临床应用

目的探讨巢式酶链聚合反应（PCR）技术快速检测泌尿生殖道致病性支原体在临床上的应用。方法以支原体16S~23S保守区域基因为扩增靶序列设计通用引物,采用巢式PCR方法扩增微小脲原体（Up）、解脲脲原体（Uu）、生殖支原体（Mg）和人型支原体（Mh）4种支原体。结果巢式PCR检测灵敏度高于一步PCR（2χ=5.857,P〈0.05）,巢式PCR扩增出4种支原体的标准株,对1份生物样品可同时检测出4种致病性支原体,避免了误诊、漏诊,提高诊治效率。结论巢式PCR技术能快速、敏感、准确检测出Up、Uu、Mg和Mh引起的单一感染和混合感染,对于临床感染性尿道炎的早期诊断有重要意义。     

半巢式PCR和PCR RFLP法诊断耐青霉素肺炎链球菌的比较

目的 评价半巢式PCR和PCR-RFLP法用于诊断肺炎链球菌青霉素耐药性的价值.方法 收集130株肺炎链球菌临床分离株和50株健康人定植株,琼脂稀释法测定青霉素最低抑菌浓度(MIC),半巢式PCR、PCR-RFLP法测定对青霉素耐药性.结果 健康人定植株均对青霉素敏感,临床分离株青霉素敏感率、中介率、耐药率分别为25....     

16S rRNA PCR基因测序鉴定临床标本军团菌

目的建立军团菌PCR基因测序鉴定方法,探讨广东地区非典型性肺炎患者军团菌感染状况。方法 2008年7月至2009年6月对广东地区各社区医院采集的100例非典型性肺炎痰液标本,采用军团菌16S rRNA基因片段作PCR试验,基因测序法对PCR结果进行鉴定。结果 100例非典型性肺炎患者痰液16S rRNA PCR试验阳性13例,其中12例经测序鉴定为嗜肺军团菌,1例测序结果阴性,结果表明PCR试验敏感性100%,特异性98.86%。结论 16S rRNA PCR基因测序不仪可以提高阳性率,而且可以排除假阳性。本研究结果显示,广东地区各社区医院内非典型性肺炎患者的军团菌感染率为1 2%。     

应用巢式PCR检测孕妇血浆中cffDNA RHD基因型的研究

目的建立巢式PCR技术检测RhD阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA(cffDNA)的RHD基因型,以预测胎儿RhD血型。方法采用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取32例RhD阴性孕妇血浆游离DNA,针对RHD外显子7和10分别设计外侧、内侧2组特异性引物,巢式PCR方法检测孕妇血浆游离胎儿DNA的RHD型,测序验证PCR产物的序列特异性。结果孕妇血浆游离DNA经巢式PCR扩增后,有27例成功扩增出RHD外显子7、10特异性条带,5例未检测到RHD基因特异性扩增,32例中有30例胎儿RHD型与出生后血型相符,检测准确率为93.1%。结论采用巢式PCR技术检测RhD阴性孕妇血浆游离胎儿DNA来判定胎儿RHD型,具有良好的准确性、敏感性和特异性,为RhD新生儿溶血病的早期诊断提供了一种新的、可靠的检测手段。     

多种临床标本中结核杆菌PCR检测的比较

本文作者目的在于提供一种操作简单,灵敏度、特异性较高的结核杆菌PCR检测法,并系统评价优化PCR试验后多种临床标本中结核杆菌检出的效果。材料与方法标本来自新加坡两家综合医院。收集怀疑为活动性肺结核、有结核史或有结核接触史的293位病人的疾、肺泡灌洗液（BALF）、胸水（PF）、胃引流液、组织、脑脊液、尿、脓液等398份临床标本。同时进行涂片镜检、细菌培养和PCR检测。PCR主要对DNA释放方法和循环条件进行了改进。（1）PCR标本制备：痰根据标准N-乙酰-L-半胱氨酸-NaOH法进行去污处理,痰和其它体液标本的沉淀重悬浮于2…     

应用PCR法对临床血标本中人微小病毒B19的检测分析

目的探讨PCR法检测临床血标本中人微小病毒B19(HPV B19)的应用价值。方法根据序列比对结果,在HPV B19核苷酸相对保守区设计引物进行PCR扩增。应用双脱氧链末端终止法对HPV B19阳性PCR产物进行克隆测序。结果应用该法最终检出HPV B19的血清稀释度为10^3。序列比较表明,用本法检出的1株HPV B19阳性标本与标准株(Au株)核苷酸序列同源性为92％。检测肝癌和肝硬化患者血清标本各14例,结果HPV B19阳性分别为8例和5例。结论本法可用于HPV B19的临床诊断和流行病学调查。     

PCR法测定临床标本的结核分枝杆菌

传统的结核分枝杆菌（TB）测定方法是抗酸染色法和培养法，前者缺乏灵敏度和特异性，而培养法则耗时。某些难得的肺外感染标本镜值和培养都很困难；故这些标本常需接种豚民作动物试验。PCR法可直接用临床标本鉴定TB。为此，本文作者对TB的镜检法、培养法和PCR法进行了对比分析。标本由Leeuwarden和Enschede公共卫生实验室收集怀疑患有TB病人的标本，同一病人标本分成两份。一份作镜检和培养；另一份作PCR检查。PCR法按照KO0k推荐的方法；疚、欣等标本用10倍量液化剂液化，15000xg离。心15min。尿、脑香液等直接15000xg离心工smin…     

多重RT—PCR技术检测儿童呼吸道标本中的常见病毒

目的 建立多重RT-PCR技术检测儿科呼吸道标本中常见病毒的方法.方法 参照病毒核酸序列设计多重RT-PCR引物,并检索NCBI数据库初步验证其特异性,以实验室阳性株验证引物特异性,优化多重RT-PCR反应条件.并对2008年61份儿童呼吸道标本进行检测,阳性片段测序验证扩增片段特异性.结果 采用多重RT-PCR引物对流感病毒A型(IVA)、流感病毒B型(IVB)、副流感病毒1型(PIV1)、副流感病毒3型(PIV3)、呼吸道合胞病毒(RSV)和鼻病毒(RHV)等6种病毒进行扩增,均无非特异性扩增条带,分别获得171,489,307,585,155,501 bp片段,与设计相符;对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果,61份儿童呼吸道标本多重RT-PCR扩增,阳性率为50.82%(31/61),核酸序列与经NCBI数据库Blast比对同源性高.结论 实验证明,所建立的多重RT-PCR技术检测儿童呼吸道标本中常见病毒的方法,敏感度、特异度和可重复性均较好,为常见呼吸道病毒检测提供了一种方便易行的方法.     

半巢式PCR和PCR-RFLP法诊断耐青霉素肺炎链球菌的比较

目的评价半巢式PCR和PCR-RFLP法用于诊断肺炎链球菌青霉素耐药性的价值。方法收集130株肺炎链球菌临床分离株和50株健康人定植株,琼脂稀释法测定青霉素最低抑菌浓度(MIC),半巢式PCR、PCR-RFLP法测定对青霉素耐药性。结果健康人定植株均对青霉素敏感,临床分离株青霉素敏感率、中介率、耐药率分别为25.4%、23.1%和51.5%;当MIC为0.25～0.5μg/ml时,半巢式PCR法检测青霉素耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为86.7%、98.6%、86.7%和98.6%;当MIC≥1μg/ml时,对应值分别为96.2%、97.6%、97.4%和96.4%。而PCR-RFLP法诊断中介株的敏感性仅34.2%;诊断耐药株的阳性预测值仅67.5%。结论半巢式PCR法优于PCR-RFLP法,可用于对耐青霉素肺炎链球菌的快速检测;PCR-RFLP敏感性不高,可用于分子流行病学分析。     

运用PCR检测巨细胞病毒DNA试验中尿标本处理方案的改进

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR 是检测特异性核酸片段的最敏感的方法,现已用于临床多种组织和体液标本的检测.但临床标本常需作适当的处理,如抽提DNA 等,才有利于PCR 检出.我们在进行PCR 检测人巨细胞病毒(HumanCytomegalovirus,HCMV)DNA 的研究中,改进了尿标本处理方案,取得良好效果.常规尿标本处理方案为:1～2ml 尿液中加10%SDS,使终浓度为0.1%,37℃水浴30min,继之先     

巢式聚合酶链式反应检测脑脊液标本中病原体的方法评价

目的 探讨巢式聚合酶链式反应(PCR)检测脑脊液标本中病原体的可行性,为疾病的快速临床诊断提供参考.方法 源自细菌16S rRNA基因序列设计的巢式PCR技术方法,包括2对引物,2次PCR扩增,第1对引物首次PCR扩增脑脊液标本提取的核酸DNA,第2对引物再次PCR扩增,其DNA模板为第1轮PCR扩增产物.将第2轮PC...     

半巢式PCR检测胃黏膜幽门螺杆菌与其它四种方法的比较

目的:建立一种半巢式PCR方法检测幽门螺杆菌(helicobacterpylori,HP)感染。方法:利用半巢式PCR方法(heminestedPCRassay)扩增磷酸葡萄糖胺变位酶基因(phosphogluco-saminemutasegene)内部片段,从而特异性地检测临床消化道标本中低拷贝数的幽门螺杆菌。并对其特异性和敏感性进行了分析,同时与临床常用的快速尿素酶试验、涂片镜检、14C尿素呼气试验和细菌培养4种方法进行了比较。结果:半巢式PCR方法敏感性和特异性分别为98.2%and96.0%,采用半巢式PCR方法、快速尿素酶试验、涂片镜检、14C尿素呼气试验、细菌培养检测HP的阳性率分别为69.5%,61.0%,53.7%,67.1%,48.8%。结论:半巢式PCR是一种简便、高敏感性和特异性检测HP的方法。     

应用半巢式PCR检测滤泡性淋巴瘤患者骨髓与外周血bcl-2／JH基因重排的临床意义

为探讨非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）患者骨髓与外周血ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排的临床意义，应用半巢式多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测１０例滤泡性淋巴瘤（ＦＬ）患者骨髓与外周血标本ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排。结果检出６例存在ｂｃｌ－２／ＪＨ融合基因。骨髓细胞形态学检查发现的２例淋巴瘤细胞浸润者均检出该融合基因，另８例骨髓细胞形态学检查正常者中４例ＰＣＲ检查阳性，其中临床分期为Ⅱ期者１例，Ⅲ期者１例。因此，检测ＦＬ患者ｂｃｌ－２／ＪＨ融合基因能够早期发现骨髓淋巴瘤细胞侵犯，对临床分期、预后及微小残留病灶检测都非常重要。动态观察３例发病初期ＰＣＲ阳性患者，发现化疗后即使骨髓细胞形态学检查转为正常，但仍能检出该融合基因，提示常规化疗不能消除ｂｃｌ－２／ＪＨ阳性克隆。     

巢式PCR法检测健康人群人类细小病毒B19感染的研究

目的：探讨肇庆地区健康人群人类细小病毒Ｂ１９感染状况，方法：采用巢式聚合物酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术包括对４１１名新生儿，１８６名婴幼儿童，３７４名成人，６８９名孕妇的健康人１６６２名的脐血或指端，静脉血检测Ｂ１９ＤＮＡ。结果：１６６２名Ｂ１９阳性检出率为８．７２％，无性别差异，其中正常新生的Ｂ１９阳性检出率１０．７１％接近孕妇１０．２７％，均高于正常成人的５．０８％，（Ｐ〈０．０１），     

PCR在结核病不同临床标本检测中应用效果的比较

本文应用PCR技术对结核病人的各种临床标本（包括疾、气管洗液、励香液、胸水、胃液、脓以及新鲜的或石蜡包理的组织）检测的敏感性和特异性进行了系统的比较，从293例患者中获得398价标本，其敏感性各种标本均为100％．而特异性则疾为95％，气管洗液和胸水为88％，非呼吸道标本为85％。作者认为应用这种简化的PCR，其敏感性和特异性已可满足临床各种标本的实际需要。PCR在结核病不同临床标本检测中应用效果的比较     

PCR检验技术在性病临床标本实验诊断中应用价值的研究关键探索

目的观察在临床性病标本的诊断当中,PCR检验技术的应用效果。方法选择我院2018年1月-10月收治的51例性病患者为对象,采集患者相应的标本组织进行诊断,分别选择常规培养法与PCR检验法进行操作,对两种方式的性病检出情况进行分析。结果PCR检验技术的性病检出率要高于传统的培养法,相应数据对比后差异存在统计学意义(P<0.05)。结论针对临床性病标本的检验诊断,选择应用PCR检验技术的情况较好,该方法值得在临床中推广。     

969例呼吸道感染儿童中人博卡病毒的感染情况与临床特征分析

目的 了解遵义地区儿童急性呼吸道感染中人博卡病毒（HBoV）的感染情况,为儿童呼吸道感染的临床诊疗提供参考。方法 收集2019年5月至7月遵义市第一人民医院急性呼吸道感染儿童鼻咽拭子标本969例,采用PCR-荧光探针法检测HBoV核酸,对PCR产物进行Sanger法测序,并收集感染患儿临床资料进行临床特征分析。结果 在969例鼻咽拭子标本中,共检出45例阳性标本,阳性率为4.6%。其中男性患儿多于女性,两者检出率比较,差异无统计学意义（P>0.05）;阳性病例主要集中在36月以内患儿（77.7%）,不同年龄段检出率比较,差异有统计学意义（P<0.05）;不同年龄段阳性患儿的临床特征有所差异,其中各年龄段出现发热、扁桃体肿大、CRP增高的比例比较,差异有统计学意义（P<0.05）;阳性患儿的临床诊断以社区获得性肺炎最多见（51.1%）;单纯HBoV感染率为37.8%,混合感染比例高达62.2%。结论 HBoV是2019年5至7月遵义地区儿童急性呼吸道感染的重要病原体,及时准确的检测和分析HBoV感染,对临床诊疗具有重要意义。